Translate Jurnal AURhjytK

8/18/2019 Translate Jurnal AURhjytK

1/25

Aurora kinase A dan B diregulasi oleh Myc dan esensial untuk

pemeliharaan keadaan maligna

Pendahuluan

Myc Oncogene (C-Myc, N-Myc, dan L-Mic) diekspresikan pada sekitar 70% tumor,

berdasarkan sifat kormosom atau translokasi, atau melalui jalur mutasi yan normalnya

membatasi ekspresi Myc. !nkoprotein Myc berfunsi sebaai faktor transkripsi basic/helix-

loop-helix/leucine zipper yan biasanya menkoordinasikan pertumbu"an sel (massa) dan

metabolisme denan pembela"an sel# $enan demukuan, ketika ekspresi onkoprotein

mempercepat pertumbu"an sel dan memblokir diferensiasi terminal dan keluar dari siklus sel, "al

ini jua mencetus mirasi sel dan metastasis sel tumor dan memicu anioenesis tumor#

c-Myc mempercepat transit melalui fase & dan ' siklus sel denan meninduksi transkripsi

siklin $ dan Cdk, dan kompleks 'iklin-$-Cdk kemudian menakti*asi komplesks siklin +-

Cdk denan eksekusi uni*ersal Cdk in"ibitor p7ip 'elanjutnya, Myc menakti*asi

transkripsi +f&, faktor transkripsi yan meninduksi siklin +# kti*asi kompleks siklin +-Cdk

kemudian memfosforilasi p7ip& pada treonin-&.7, suatu modifikasi yan dikenali melalui /-bo

komponen protein 'kp dari kompleks 'C/'kp yan menubikuitilasi p7ip& dan menaretkan

"al tersebut untuk deradasi melalui proteasome# 'elain itu, Myc meninduksi ekspresi 'kp dan

reulator alostretik Cks& untuk meninkatkan le*el kompleks 'C/'kip, dan respon ini jua

dibutu"kan untuk menekan p7ip 1ada ak"irnya, reduksi kadar p7kip& yan dipicu ole" Myc,

berpasanan denan induksi siklin 2&, meninkatkan akti*itas komplek-Cdk& yan mendoron

sel masuk kedalam melalui mitosis#

urora kinase , 2, dan C (urka, urkb, dan urkc) merupakan serin3treonin yan sanat

dijaa yan memean peranan esensial dan istime4a dalam proses mitosis# "ususnya, urka

yan dibutu"kan untuk perakitan poros mitosis, dimana "al ini terakumulasi didalam sentrosom

di kutub selama profase "ina metafase#

$enan demikan, "ilannya trier urka memicu kematian embrionik a4al pada tikus#

'ebaliknya, urkb dibutu"kan untuk perkembanan mitosis dan sitokinesis dan diterjema"kan

bersama denan inner centromer protein dan sur*i*in, di sentromer dan 5ona tena" kutub

selama transisi metafase ke anafase#


2/25

urka dan urkb tela" dilibatkan dalam tumorenesis6 dan sebaai kinase, mereka merupakan

taret terapi yan atraktif# 'ebaai conto", 8 diperkuat dalam suatu *ariasi kanker pada

manusia, dan peninkatan kadar urkb tela" dilaporkan terjadi pada keanasan yan aresif#

'elanjutnya, urka dan urkb meninkatkan transformasi yan diinduksi ole" 8as# Meskipun,

urka jua terli"at menekan turmoenesis, sebaaimana urka "etero5iot meninkatkan

anka perkembanan tumor6 dan tidak adanya p9:, in"ibisi urka dapat memberikan

pertumbu"an yan menuntunkan#

'aat ini, urka terli"at menstabilkan protein N-Myc pada neuroblastoma, denan menara"kan

. menjadi ;:3&& menanti ubikuitilasinya melalui +: ubi


3/25

C$&A-Micro2eads, sesuai denan instruksi pabrik (Miltenyi 2iotec) dan 8N dan protein

disiapkan#

Plasmid dan Antibodi

urka dan urkb c$Ns pada p+/1-C& disiapkan denan baik ole" +ric" Ni (Martisried,

erman)# $etil klonin mereka kedalam *ektor ekspresi p2abe-1uro dan mutaenesisnya

(BuickC"ane it6 'trataene) disediakan sesuai denan permintaan# ntuk men"asilkan

promoter urka dan urkb reporter plasmid, urutan "ulu &9::-bp dari situs > urka dan

urutan "ulu 0:7-bp situs > urkb, adala" reaksi berantai polimerase (1C8) yan diperkuat

dari enom $N tikus primer diperli"atkan didalam >abel & (tersedia di eb site 2lood6 li"at

link Material >amba"an di baian palin atas artikel online), dicerna dan diklone kedalam pL:

(1romea)#

Dnformasi berkaitan denan semua antibodi yan diunakan didalam penelitian kami tersedia

pada >able

Kultur Sel

'el 1A:-; disediakan denan baik ole" # 2ornkamm (munic", erman) dan dikulture dan

diobati denan tetrasiklin ('ima-ldric") sebaaimana dijelaskan sebelumnya# 'el 2 limfoma

tikus +u-Myc didapatkan dari suspensi sel-tunal tumor yan timbul pada +u-Myc tikus

melalui kultur serial# aris limfoma yan menjaa tipe liar atau mutan p9: diunakan didalam

penelitian ini# +u-Myc sel limfoma atau sel ND=-:>: ($'ME) diinfeksi denan retro*irus

(p22+-puro, p22+-urka, p22+-urkb, M'CF-Myc-+>M-D8+'-puro, M'CF-c-Myc-

D8+'-/1 Gift of C# 'c"mitt, 2erlin, ermanyH atau *ektor kontrol M'CF-D8+'-/1) dan

penobatan puromisin (. u3mL) atau reen fluorescent protein (/1)- diurutkan denan flo4

cytometry untuk lebi" dari A.% sel /1I# +u-Myc sel limfoma diinfeksi denan lenti*irus

didapatkan menunakan ketersedian komersil sistem ekspresi Mission-s"8N ('ima-ldric")

untuk menjatu"kan murin urka dan urkb menunakan s"8N spesifik menurut instruksi


4/25

pabrik# >ransfeksi sementara sel ND=-:>: dilakukan menunakan Lipofectamin 000 sesuai

denan instruksi pabrik (Dn*itoen)#

Viabilitas sel dan apoptosis assays

Fiabiltias3 proliferasi sel dinilai menunakan Cell>Dter A; Non8adioacti*e 'ell 1roliferation

ssay sesuai denan instruksi pabrik (1romea)# 'inkatnya &09 sel ditempatkan kedalam A;-

4ell plate dan penobatan sebaaimana ditunjukan didalam ambar dan kepadanan optik yan

ditentukan (A0 nm)# ntuk menilai apoptosis, 9 &09 sel di4arnai denan propidium iodida (1D)

dan annein F-fluorescein isot"iocyanate (nnein-F-/luos it, 8oc"e pplied 'cience)#

'etela" inkubasi, sel dicuci, diresuspensi didalam p"ospat-buffered saline, dan dianalisa

menunakan flo4 sitometri# $istribusi apoptosis dan siklus sel diukur denan melisis sel

selama :0 menit pada sus"u :7oC didalam larutan Findelo* dan 0,&% N10 "ina p= .,0)

diikuti analasis konten $N didalam c"annel /L (linear mode, siklus sel) atau c"annel /L :

(mode loaritma, apoptosis)# 'el denan satu satu lo kuran dan diatas konten $N dianap

sebaai apoptosis (sub-&)#

Preparasi DNA dan Analsis

+kspresi profil dilakukan menunakan data ffymetri yan didapat sebelumnya (suplemental

data)# ntuk reserve transcriptase (8>) 1C8 kuantitatif, 8N disiapkan dari kultur sel atau

tumor menunakan 8neasy it (BD+N)# c$N disiapkan dari &u 8N menunakan

i'cript c$N sintesis kit (2io-8ad)# 8>-1C8 kuantitatif dipersiapkan menunakan suatu mesin

iCycler (2io-8ad) dan i>ac 'J28 reen kit (2io-8ad)# $etil analasis data dilakukan melalui

nilai perbandunan KKC& denan sampel kontrol set sebaai & dan lanjutan primer diberikan

dalam suplemental >abel

Immunoblotting

+kstrak protein (0u atau 90u per lane) secara elektroforesis dipisa"kan didalam sodium

dodecyl sulfate-polyacrylamide el elektroforesis el, ditransfer ke membran (1rotan, 'c"leic"er


5/25

'c"uell), dan di"apuskan denan spesifik antibodi (suplemental >abel &)# 1e4arnaan 1onceau

8ed dari membran nitroselulosa setela" transfer jua menkonfirmasi loadin protein yan

sebandin#

Aurka and Aurkb promoter uci!erase reporter assays

sel ND=-:>: ditranseksi denan pL:-urka, atau pL: firefly luciferase reporter plasmid

bersama denan p8L-'F0 ( Renilla luciferase)# kti*itas luciferase dilakukan menurut instruksi

pabrik (1romea)# kti*itas luciferase relatif dilakukan denan kalkulasi rasio dari firefly

ter"adap kontrasfeksi akti*itas luciferase Renilla#

Analisis "hiP

2alb3c-:>: fibroblas tikus menekspresikan Myc tikus berfusi pada reseptor estroen (Myc-+8)

dikulture selama . jam dalam 0,% serum dan kemudian distimulasi selama ; jam denan atau

tanpa -"ydroytamoifen (=>6uM)# kromatin dari :&07 'el3kondisi di cross-link, diisolasi,

disonikasi, dan re*erse cross linked# 1rotein Myc adala" imunopresipitat dari sonikasi kromatin

menunakan anti-c-Myc polyclonal antibodi kelinci (suplemental >abel &) dan manetic protein

beads (cti*e Motif)# & &00 *olume kromatin diproses tanpa antibodi dan diunakan sebaai

total input kontrol untuk 1C8 kuantitatif# 1C8 kuantitatif berjalan dalam imunopresipitat dan

kromatin kontrol menunakan rancanan primer untuk mendeteksi +-boes didalam ene

urka dan urkb tikus (suplemental >able &)# ontrol primer dirancan untuk menuatkan

kromatin yan tidak menandun urutan +-boes# =en carbomoyl-p"ospate synt"etase tikus

(Cad), suatu ketetapan lansun en taret Myc, diunakan sebaai kontrol positif untuk Myc

C"i1# >otal presentase kromatin imunopresipitat dikalkulasikan menunakan rumus % total

Ct input Ct C"D1 % input diunakan untuk kromatin imunopresipitat (C"i1)#

#istologi dan imunohistokimia

?arinan oran sampel diperole" dari lymp"oma-bearin tikus# 1otonan 9-; um dipoton dari

sedian formalin, jarinan paraffin-embedded di deparafinisasi dan di4arnai denan "ematoyin


6/25

dan eosin ($ako), dikerinkan dan kemudian ditutup denan co*erslip# ultur sel limfoma

dikumpulkan denan sitospin dan per4arnaan denan iemsa-May-run4ald# ntuk

imuno"istokimia potonan um dideparafinisasi# ntien retrie*al dilakukan denan pemasakan

bertekanan didalan buffer sitrat (p= ;) selama 7 menit# ntibodi primer (suplemental >able &)

diinkubasi semalaman pada su"u oC# deteksi antibodi dilakukan menunakan analsa operatot

independen $ako 8+L (n:) pembesaran tini (0) dari n9 sampel dari 2L atau Mantle sell

lymp"oma (MCL)#

P$T

'ebelum administrasi radiotracer G&./Hdeoylucose (/$6 departemen radiofarmasi, >

munc"en, Munc"en erman), semua tikus dianestesi denan % isoflurane (bbott mb=)

menunakan suatu sistem anestesi *eteran (Fetland Medeical sales and ser*ices)# 'elama

positron emission tomorap"y (1+>), dosis diturunkan "inna &,9% isoflurane# 1encitraan

dinamik denan G&./H/$-1+> dilakukan menunakan sistem 1+> binatan kecil (Micro1+>

/ocus &0, 'iemens 1reclinical 'olutions)6 :,7 O 7, M2< G&./H/$3mosues di injeksi secara

intra*ena# $ata didapatkan selama ;0 menit# 'emua akuisisi dilakukan dalam format mode list

dan "istroram kedalam frame sinoram# 'inoram direkonstruksi kedalam ambar *oel

berukuran &.&.A9 menunakan metode filtered back-projection denan cut off difrekuensi ny


7/25

#ASI

Myc meregulasi ekspresi dari aurora kinase

Myc meninduksi ekspresi sejumla" besar en yan termasuk kedalam siklus sel masuk dan

transit, dan kebanyakan berperan dalam fase transisi &-'# ntuk menilai "al ini secara in *i*o,

maka dinilai kadar m8N dalam sel 2 prekanker (usia -;minu) pada tikus transenic +u-

Myc, sebua" model limfoma sel 2 pada manusia# $an kemudian "asilnya dibandinkan denan

kadar yan muncul pada 4ild-type sel 2 dalam splenic 20I# $ua nilai m8N yan meninkat

pada sel 2 +u-Myc menyandikan urora kinase (urka) dan urora kinase 2 (urkb6 ambar

&), yan keduanya esensial untuk proses mitosis# 1eninkatab reulasi dari m8N urka dan

urkb pada sel 2 +u-Myc dikonfirmasi denan 8>-1C8 secara kuantitatif# 'elanjutnya, teknik

immunoblottin menunjukan kadar protein urka dan urkb jua ditandai denan peninkatansel 2 +u-Myc premalinan *s sel 2 4ild-type (ambar &b)# k"irnya, pada sel 2 +u-Myc

premalinan terdapat kadar p'&0-==: yan lebi" tini, membentuk substrat urkb# +kspresi

Myc secara in *i*o menara"kan pada peninkatan kadar dan aktifitas aurora kinase#

1eninkatan reulasi dari kadar dan aktifitas aurka dan aurkb pada sel 2 +u-Myc premalinan

dapat menambarkan ba"4a persentase kadar sel 2 yan lebi" tini akan beredar dan terjadi

mitosis transit# ntuk meneta"ui peninkatan reulasi aurka dan aurkb dalam responnya

ter"adap c-Myc, kami menunakan sel 2 1A:-; manusia yan proliferasinya dapatdikendalikan tetracycline-off reulated c-Myc transene# 'esuai denan yan di"arapkan,

pen"ilanan tetrasiklin menyebabkan peninkatan kadar m8N dan protein C-Myc,dan diikuti

denan peninkata m8N serta protein urka dan urkb# 'erta peninkatan p'&0-==: selama

proliferasi tertunda# kti*asi dan ekspresi berlebi"an dari Myc menyebabkan peninkatan kadar

dan aktifitas urka dan urkb baik dalam keadaan in *i*o maupun e *i*o#

ntuk meneta"ui apaka" aurka dan aurkb diinduksi ole"Myc secara transkripsi, kami menilai

reulasi penaru"nya denan Myc# rea reulasi dari aurka dan aurkb pada murine dan manusiamenandun Myc-responsi*e CC>C, CC>, C>C>, dan sekuensi +-bo C>>#

ami melakukan klonin dari sekuens promoter murine autka dan aurkb ke pL: luciferase

reporter plasmid# umpulan sel ND=-:>: yan menekspreikan Myc-/1 atau /1 saja

kemudian ditransfeksikan denan reporter plasmid dan lusiferase# /ibroblas !*er ekspresi dari


8/25

Myc denan -: umpalan meninkatkan akti*itas promoter aurka, sedankan :0 umpalan akan

meninkatkan akti*itas promoter aurkb dibandinkan denan sel kontrol /1-epressin#

ambar Myc meninkatkan reulasi epresi aurka dan aurk# () analisis real-time 1C8 'J28

reen kuantitatif pada le*el transkrip urka dan urkb dalam sumsum tulan dan spleen sel 2

20I dari 4ild type berusia minu atau +u-Myc tikus# >inkatan m8N distandarkan

denan ekspresi dari bi


9/25

atau +u-Myc transenik tikus# (C) nalisa kuantitatif dari ekspresi 8N 8>-1C8 Myc, urka,

dan aurkb di 1A:-; sel 2 manusia yan menandun en Myc tetracycline-reulated# 'el

diberikan tetrasiklin pada 4aktu yan diindikasikan, dicuci, dan dikultur dalam media bebas

tetrasiklin# Le*el dari m8N disesuaikan denan ekspresi ubiet menindikasikan tetrasiklin#

ntuk menilai apaka" aurka dan aurkb direulasi lansun ole" Myc, kami meninfeksikan

fibroblas ND=-:>: denan retro*irus Myc-+8>M, sebua" fusi protein dimana Myc dapat

diakto*asi dena tamoifen# ?ika satu en diakti*asi den*an tamoifen dalam sel Myc-+8

epressin pada saat terjadi sintesis protein in"ibitor siklo"eksimid, en dapat menjadi taret

lansun dari Myc# Menariknya,meskipun promeoter aurka pada tikus diinduksi secara lema"

ole" Myc dibandinkan denan Myc-mediated reulator pada aurkb promoter, m8N aurka

diinduksi seperti taret lansun Myc, Ld"a# sedankan induksi dari m8na aurkb terantun

pada sintesis protein deno*o (ambar 2)#

'elanjutnya kami menuji apaka" protein Myc dapat menikat area promoter- reulatory secara

endoen pada urka dan aurkb tikus dan manusia denan C"D1 assay (ambar c, ambar

tamba"an )# romatin diisolasi dari sel 2alb3c-:>: yan menekspresikan Myc-+8, dikultur

denan atau tanpa tamoifen dan diendapkan denan antibody Myc# romatin dari en aurka

tikus yan menandun +-bo berlokasi diatas eon & (&, , dan :) terpenu"i srcara

spesifik setela" akti*asi Myc-+8 (I=>)# =al ini menyatakan ba"4a Myc menikat baik sala"

satu ataupu kedua +-bo yan ada di en aurka tikus# $enan menunakan kontras, Myc tidak

terpenu"i pada +-bo yan lainnya pada aurka atau aurkb# $ata ini menunjukan ba"4a Myc

secara lansun mereulasi transkripsi dari aurka dan secara tidak lansun mereulasi

transkripsi aurkb pada tikus# Menariknya, meskipun en aurka manusia menandun +-boes,

en ini tidak seperti pada tikus, dan kami tidak mendeteksi adanya interaksi antara myc denan

en manusia lainnya denan C"ip assay # $ata ini menindikasikan ba"4a peninakatan reulasi

dari murine dan transkripsi aurka serta aurkb manusia ole" myc memiliki komponen direk dan

indirek#


10/25


11/25

ambar # urka sebaai taret lansun en Myc, sedankan urkb direulasi secara tidak

lansun ole" Myc# () panel atas# nalisa immunoblot dari sel ND=->:> yan terinfeksi Myc

atau kontrol retro*irus /1# aris *ertikal disisipkan untuk menindikasikan el yan direposisi#

1anel ba4a" sel ND=->:> ditransfeksikan secara transien denan luciferase promotor-reporter

dan dinilai akti*itas relatifnya# 1lasmid renilla luciferase ditransfeksikan untuk menormalkan

efisiensi transfeksi# rafik batan merepresentasikan rata-rata I '+M dari : eksperimen

independen# P1 Q0,9# (2) 1anel kanan analisa immunoblot dari sel ND=-:>: yan terinfeksi

ole" retro*irus M'CF-Myc-+8-D8+'-1uro# 1anel kiri setela" seleksi puromisin, sel dikultur

dalam jam untuk menakti*asi Myc-+8# $iunakan etanol untuk =># 'el dipanen dan 8N

disiapkan untuk penilaian 8>-1C8 kuantitatif yan secara primer berla4anan denan

urka#,urkb, Ld"a, dan bi dan sampel I=> #


12/25

ambar :# 1eninkatan urka dan urkb sebaai tanda limfoma Myc-dri*en#nalisa 8>-1C8 kuantitatif dari urka dan urkb pada &0 +u-Myc limfoma *s 4ild-type pada

spleen (4t) sel 2 20I # (2) analisa immunoblot dari protein pada control 4ild type sel 2

20I *s +u-Myc limfoma# (c) nalisa 8>-1C8 kuantitatif dari m8N aurka dan aurkb pada ;

sample 2L manusia dibandinkan denan control sel 2 C$&AI # ($) analisa immunoc"emical

dari ekpresi aurka dan aurkb pada 2L,MCL, dan jarinan control (tonsil)# 1anel atas


13/25

Menambarkan sample renda" ( perbesaran asli 00), dan tini ( perbesaran asli ;:0 )#

1erole"an ambar mikroskop Eeiss ioplan ;:R30#A9 numeric aperture (N) 1lan-Neofluar

air objecti*e ("i"-po4er *ie4s), 030#9 N 1lan-Neofluar air objecti*e (lo4-po4er *ie4s)6

Eeiss iocam M8c 9 camera6 io*ision 8el #; scannin soft4are # 1anel ba4a" persentasi

dari sel denan stain positif untuk aurka dan aurkb# $iunakan rid ocular objecti*e untuk

men"itun 00 sel dal : lapan pandan# rafik batan menunjukkan rata-rata persentasi dari

sel yan positif dari 9 sampel 2L dan 9MCL I '$ # 1erbedaan sinifikan (pQ0#9)

%&er ekspresi Aurka dan Aurkb merupakan tanda dari lim!oma sel B yg diinduksi Myc

meninkatnya ekspresi aurka dan aurkb pada sel 2 +u-Myc premalina, kami beralasan ba"4a

keduanya akan diekspresikan denan tini pada limfoma Myc-dri*en yan meninkat pada

transenik +u-Myc tikus dan manusia# +kspresi dari analisis microarray menunjukan ba"4a

beberapa en ber"ubunan denan mitosis meninkat pada sel 2 +u-Myc premalina

dibandinkan denan sel 2 4ild-type dan respon ini bertamba" pada limfoma yan meninkat

dalam transenik +u-Myc# Nilai kuantitatif 8>-1C8 dan analisa 4estern blot menkonfirmasi

ba"4a m8N dan kadar protein aurka dan aurkb meninkat pada semua limfoma +u-Myc sesuai

denan peninkatan kadar ekspresi sel 2 4ild-type # 'elanjutnya, peninkatan le*er m8N

aurka dan aurkb sesuai denan peninkatan transkrip Myc pada sampel anak manusia yan

dinilai dena 8>-1C8 kuantitatif# 'emua 2L manusia menekspresikan kadar m8N aurkb yan

tini (&0-.0 fold lebi" tini) dibandinkan denan kontrol normal C$&AI sel 2# 1eninkatan

ekspresi aurka kuran kuat tetapi masi" meninkat sesuai denan kadar aurka yan

diekspresikan ole" C$&AI sel 2 normal (ambar :c)# Nilai aurk yan tini pada 2L

dibandinkan denan

MCL tela" dikonfirmasi pada tinkat protein ole" imuno"istokimia (ambar :)# Jan pentin,

ketika menilai 9 sampel 2L primer denan fluoresensi "ibridisasi in situ, kami tidak mendeteksi

amplifikasi en 8 atau 82 (tamba"an ambar :)# $enan demikian, o*erekspresi

dari urka, dan terutama urkb, merupakan ciri dari sel 2 limfoma Mycdri*en pada tikus dan

manusia#

'ungsi kinase Aurora diperlukan untuk pemeliharaanlim!oma Myc (dri&en


14/25

+kspresi berlebi" dari 'el Myc sanat sensitif ter"adap sinyal atauaen yan menaretkan

transisi 3M dari cycle#::,: $enan demikian, kami"ipotesis ba"4a urora kinase in"ibitor

(D) munkin berkompromi dalam pemeli"araan limfoma Myc-dri*en#ntuk menuji aasan

ini, kami menilai konsekuensi dari "ambatan urora kinase di limfoma +OMycyan berbeda

dalam status p9: (tipe liar dan mutanp9:)# Menariknya, aris limfoma dari kedua enotipe p9:

yansanat rentan ter"adap '70:9;A pan-D saat dibudidayakan di*itro#2a"kan pada dosis

yan relatif renda" (9nm), penobatan D benar men"ambat proliferasi sel limfoma, dan

perpanjananpaparan menakibatkan penurunan yan sinifikan dalam jumla" sel (ambar -

2)#ntuk menilai apaka" ada sensiti*itas selektif dari ekspresi sel Myc ke in"ibisi urora kinase,

kami menelitiefek dari '70:9;A D yan diabadikan pada fibroblas 8atO&yan stabil dan

terinfeksi denan *irus kontrol atau *iruspenkodean berbaai onkoen,:: termasuk Myc

(ambar C ataspanel)#'eperti yan di"arapkan, Myc dan beberapa onkoen lainnya dipicu

meninkat dari sel-sel di fase ' (ambar C panel ba4a")# 'edikit mencolok, ekspresi berlebi"

'el Myc pada 8at-& secara sinifikan lebi"sensitif ter"adap penobatan D dibandinkan

denan sel-sel yan menekspresikan onkoen lainnyapada konsentrasi D serenda" &#9nM

(ambar $)# $enan demikian, selektif '70:9;A D meninduksi kematian sel dari ekspresi

berlebi" sel Myc#

1enelitian sebelumnya tela" menunjukkan ba"4a in"ibisi urka atau urkb

menyebabkan cacat pada mitosis dan 1aparan cytokinesis# &7-&A1aparan darisel-sel limfoma +S-

Myc ke '70:9;A men"asilkanakumulasi yan cepat dansinifikan dari sel pada 3M

(ambar 9), diikuti ole"apoptosis (sel sub-&Gambar 9 dan tamba"an ambar H, dansel

annein-FI Gambar 9CH) dan3atau peninkatan jumla"sel denan konten .N $N (ambar

9 6 tamba"an ambar )#1e4arnaan iemsa dari sel-sel ini dikonfirmasi akumulasi dari 'el-sel

limfoma +S- Myc pada prometap"ase atau metafase secepat; jam penobatan denan '70:9;A,

dan ini diikuti ole"munculnya sel polyploid (tamba"an ambar 9)# k"irnya, sepertiyandi"arapkan, penobatan '70:9;A pada sel limfoma +S- My ditandai dan cepat

menakibatkan penurunan kadar p'&0-==: dan untuk memperpanjan pembela"ancaspase-:

(ambar 92), konsistendenan efek apoptosis aen ini pada limfoma +SO Myc(ambar

9C)#etika sel-sel limfoma +S- Myc tela" diterapi denan pan-caspase in"ibitor B-F$-!1= dan

kemudian terkena D,apoptosis '70:9;A secara sinifikan berkuran dan secara


15/25

sinifikansel-sel lebi" menerima konten $N tetraploid atau octaploid (tamba"anambar 92)#

$enan demikian, urora kinase berperan pentin dalam men"ambat kerusakanmitosis dan

menimbulkan apoptosis dari sel limfoma Myc#

ntuk menkonfirmasi ba"4a '70:9;A meman selektif sebaai in"ibitor dari urkaatau urkb pada limfoma Myc-dri*en, kamimemoton mutasi pada urka3b denan metode

berbasis komputer yandiprediksi resisten denan in"ibitor ini#Mutasi inidiperkenalkan ke urka

(&;F) atau urkb (&;0F) ole"situs lansun mutaenesis, dan mutan tersebut banyak

diekspresikandi sel limfoma +S-Myc menunakan retro*irus menandun kinase in"ibitor-

resistant (D8) mutan ini (ambar ;C)#

)ambar *+ Aurk blok menghambat proli!erasi Myc ,dri&en i+ () sel-sel limfoma 1rimer +SOMyc (memiliki tipe

liar atau p9: mutan) dikultur e *i*o sampai aris lurus dibuat# Dni dira4at selama jam denanindikiasi

konsentrasi '70:9;A D# +fek proliferasi dinilai menunakan assay M>># ditunjukkansebua" penelitian dari :

penelitian yan dilakukan# 2ar me4akili mean '$# (2) 1roliferasi utama terapi e *i*o'el-sel limfoma +S-Myc*

indikasi dira4at untuk 4aktu yan ditunjukkan denan 9nm '70:9;A (D)#sel kontrol (abu-abu bar) yan tidak

diobati selama . jam# 2ar me4akili rata-rata persentase '+M sel dibandinkan denan sel masukan ditetapkan

sebaai &00% dari: percobaan tidak lansun# P1erbedaan sinifikan dibandinkan denan sel kontrol(1 0,0&)# (C)


16/25

/ibrobolas 8at-& yan stabil terinfeksi denan retro*irus menekspresikan onkoen dan kemudian diterapi denan

indikasi dosis dari D'70:9;A# 1anel atas nalisis le*el imunoblot c-Myc# ktin diunakan sebaai kontrol#

panel ba4a" 1ersentase sel 8at-& pada fase ' dinilai ole" pe4arnaan 1D untuk kadar $N# ($) +fek antiproliferatif

dari '70:9;A D pada sel 8at-&yan didoron ole" indikasi onkoen# 1ertumbu"an sel sync"ronous

diterapidenan D '70:9;A pada konsentrasi yan diindikasikan (puti", "itam, dan bar abu-abu) selama. jam

dan dinilai kematian sel denan analisis aliran cytometric dari kadar $N (1D)#2ar me4akili rata-rata persentase sel

denan kadar $N sub-& T '$ dari: percobaan tidak lansun# P1 Q0#9 sel yan terinfeksi Myc dibandinkan

denan sel lainnya#

"ususnya, ekspresi sel urkb-D8- menunjukkan resistensi yan sinifikanuntuk '70:9;A

se"ubunan denan terjadinya aneuploidisebaikapoptosis (ambar ;-2), dan penurunan

aktifitas urkbyan dinilai dari fosforilasi '&0-==: sanat berkuran (ambar ;C)# 8espon ini

tidak bermanifestasipada ekspresi sel limfoma urka-D8 (data tidak ditampilkan)# $enan

demikian,ekpresi berlebi" dari urkb-D8 cukup memberikan resistensi yan mendalam

ter"adap in"ibitor '70:9;A# +ksperimen janka pendekyan diterapkan dimediasi-s"8N

diruntu"kan selanjutnya menciptakan urkb adala" taret utama dari '70:9;A, sebaai

peruntu" dariurkb yan diinduksi fenotip akibat obat# Namun, janka panjanperuntu" baik

urka atau


17/25

)ambar -+ Inhibisi Aurk memicu mitosis dan poliploid dan menginduksi apoptosis dari sel lim!oma $.,Myc

terlepas dari status p-/+ () sel-sel limfoma +SOMycyan dikultur e *i*o tela" diterapi untuk indikasi 4aktu

yan ditunjukkan denan 9nm'70:9;A (D) dan dinilai kadar $N denan analisis aliran cytometric darisel

bernoda-1D# 'el-sel bernoda-1D dianalisis menunakan saluran /L pada skala linier# Jan ditunjukkan adala"

conto" "istoram# uantifikasi dan analisis statistik dari : percobaan tidak lansun tersedia sebaai

tamba"anambar # (2) sel-sel limfoma +S-Myc tela" diterapi untuk indikasi 4aktu yan ditunjukkan denan

D'70:9;A (9nm)# +kspresi dari indikasi protein dinilai menunakanimmunoblottin# (C) sel-sel limfoma +S-

Myc yan tidak diterapi atau sel yan diterapi denan 9nm'70:9;A (D) dianalisis untuk indeks apoptosis

mereka denanpe4arnaan annein F-1D# 'el di kuadran kanan atas me4akili apoptosis3sel nekrotik ak"ir# 'el di

kuadran kanan ba4a" merupakan sel a4al apoptosis# 1ersentase sel dalam kuadran ini diberikan# Menunjukkan

sala" satu rafik dot blot dari per4akilan : percobaan yan dilakukan secara tidak lansun#

urkb tidak kompatibel denanpertumbu"an janka panjan sel limfoma (data tidak

ditampilkan)# ami menyimpulkanba"4a urkb adala" taret utama untuk in"ibisi urora

kinase pada sel Myc -dri*en#

1ada transplantasi syneneic, limfoma +S-Myc meninduksi penyakit denan cepat#

ntuk mene*aluasi apaka" pen"ambatan urora kinase dikompromikantumorienesis yan

diinduksi-MJC in *i*o, C973tikus 2; syneneicdiineksi secara intra*ena denan sel limfoma

+S-Myc 9 U&09,dan setela" jam mereka kemudian diterapi denan '70:9;A (;0 m 3 k)

sekali per minu melalui a*ae oral# >ikuskemudian diamati untuk tanda-tanda a4al limfoma#

'eperti yan di"arapkan, tikusmenerima kendaraan sendiri yan berkemban secara cepat dan

limfoma disebarluaskan dalam 4aktu sampai : minu (ambar 7)# Cukup mencolok,

tumorienesismerupakan penundaaan yan jelas pada penerima transplantasi terapi '70:9;A

(ambar 76 menunjukkan percobaan tidak lansun)#

ntuk mene*aluasi efekti*itas in"ibisi urk ini pada "e4an denan 1enyakit dibuat,

tikus yan tidak diterapi yan tela" diineksi denan sel limfoma +S-Myc 9U&09dan manifestasi

klinis limfoma yan tela" berkembanmenerima pencitraan /$-1+> sebelum dan jam

setela" pera4atan '70:9;A# Cukup luar biasa, sala" satu aplikasidari '70:9;A secara

sinifikan cukup menurani serapan /$ ke situs limfoma (ambar 72)# 1emeriksaan

"istoloismenunjukkan penurunan yan sanat sinifikan dalam proliferasi pe4arnaan seli-;7

dan kematian sel limfoma masif dinilai denanpe4arnaan untuk bentuk aktif dari caspase-:


18/25

(ambar 7C)# $enan demikian, sel-sel limfoma Myc-dri*en sanat rentan ter"adap in"ibisi

urk secara in *i*o, dan in"ibisi urk merupakan terapi yan efektif untuk diberikan, penyakit

yan sanat aresif#

Diskusi

ontrol Myc, ole" kedua cara baik lansun maupun tidak lansun, ekspresidari reulator

kunci dari siklus perpinda"an sel ke sel pertumbu"an sel koordinasidan metabolisme denan

di*isi#,:,A,:9 Dni meliputireulasi cyclin $, Cdk, +f&, dan p7D1& selama fase transisi &-', &0-

&,&,&9,:; dan komponen dari prereplication yankompleks, 28C& dan cyclin + dan , selama

masuk danberkemban melalui ' p"ase#&;,:7-0 8elatif sedikit yan diketa"uitentan funsi Myc

pada transisi -M dan menaturmitosis dan sitokinesis, selain itu cyclin B1, !c" #!$1%,

Bub1b (2ub8&), dan Ma!" tampak lansun pada taret Myc#&;,&$i sini kami memberikan bukti

ba"4a Myc menontrol reulator pentinpada mitosis dan sitokinesis, urka dan urkb#

edua m8N urka dan urkb meninkat pada respon MJCdalam sel manusia dan

tikus, dan kedua en masuk dalamkotak-+ padabaian penatur-promotor mereka#

2aaimanapun, penelitian kami menunjukkan ba"4a"anya urka yan lansun diatur ole"

Myc, dan ini dibatasi untuksel tikus, sebaai Myc penikat promotor urka tikus tetapi tidak

menikat kotak-+ dalam en 8 manusia denan kondisi dimana terdapat penenalan kuat

m8N 8di Menanapi Myc#$enan demikian, Myc menikat baian lain pada lokus

8 manusia untuk menena"i transkripsi atau up-reulasi kedua urka


19/25


20/25

ambar 7# akti*itas urk diperlukan untuk pemeli"araan Myc-dri*en limfoma di*i*o# () panel >op ?ad4al injeksi

sel limfoma dan penobatan '70:9;A(;0 m 3 k berat badan, sekali seminu per a*ae oral)# panel ba4a"

elansunan =idupkur*a# ->ipe liar p9: atau p9: mutan +-Myc sel limfoma disuntikkan secara intra*enake

penerima syneneic, dan tikus diikuti selama onset limfoma# Dtuperbedaan antara kontrol dan urk kelompok

perlakuan in"ibitor (diperlakukan) adala"sinifikan secara statistik# (2) /$-1+> scan dilakukan sebelum dan

jam setela"penobatan oral tunal denan urk in"ibitor ('70:9;A, ;0 m 3 k berat badan) dalamtikus denan

limfoma nyata# (C) penilaian "istolois dari urk pen"ambatan dilimfoma manifest# 2aris atas =ematoksilin dan

eosin (=+) pe4arnaan menunjukkan besarnekrosis setela" urk pen"ambatan di diperlakukan dibandinkan tikus

kontrol (kelenjar eta" benin)# Dmuno"istokimiauntuk penanda menunjukkan menunjukkan penurunan berkemban

biak sel sebaaidinilai ole" i-;7 positif (baris kedua) dan peninkatan kematian sel apoptosisdinilai denan

pe4arnaan untuk dibela" (p&7) caspase-: (p&7Casp:6 baris ketia)# ambarakuisisi Eeiss ioplan mikroskop6

>ujuan udara 0 30#9 N 8encana-Neofluar6Eeiss ioCam M8C 9 kamera6 ioFision 8el #; perankat lunak

pemindaian6 aslipembesaran 00# panel kanan uantifikasi persentase i-;7 dansel p&7Casp:-positif di limfoma

kontrol atau limfoma dari tikus yan diobati jam denan dosis tunal dari urk in"ibitor '70:9;A# 2ar

me4akili mean1ersentase '+M sel positif dari kelenjar eta" benin dari : kontrol yan berbeda atau'70:9;A-

diperlakukan tikus#

dan urkb adala" terantun Myc tetapi terjadi melaluimekanisme kontrol tamba"an#&A >emuan

ini menunjukkan ba"4a Myc menatur murine dan dan ekspresi en urka dan urkb secara

nonkanonik lansun atau tidak lansun yan menontrol siklus sel melintasi ke dalam dan

melalui mitosis#

/ase mitosis dipicu ole" diaktifkannya Cyclin2&3Cdk& yan kompleks (faktor promotor-

M-fase), yan dikontrol selama siklus sel# sel yclin B1 adala" sasaran transkripsi en Myc,&;

dan ke"ilanan c-Myc men"ambattransisi -M# 'elanjutnya, tinkat Myc yan tini

mencea" penankapan #: ami memprediksi ba"4a kontrol dari transisi 3M ole" Myc


21/25

termasuk induksi urka karena urka memfosforilasi dan menaktifkanCdc92 fosfatase pada

sentrom yan kemudian memicu akti*asiyan kompleks Cyclin23cdk $alam skenario ini,

Myc meninduksi urka yan memberikan tinkat yan tepat dari urka yan diperlukan untuk

pematanan 'entrosom, pemisa"an 'entrosom, dan spindleassembly#&A

1ada sel normal, efek onkoenik Myc ini secara efektif dimanfaatkanole" apoptosis yan

muncul untuk menentukan tinkat proresi siklus sel# 'ecara k"usus, ekspresi Myc yan

berlebi"menaktifkan proram apoptosis p9: denan menaktifkan respon kerusakan $N

melalui >M9 atau melalui induksi tumor nukleoluspenekan rf yan menonaktifkan Mdm#;

edua respon inimenyebabkan induksi taret en apoptosis p9:# $enan demikian, ke"ilanan

funsi mutasi pada penekan tumor iniadala" keunulan dari malinancies Myc-dri*en#7

Menariknya, terdapat interaksi antara urka dan p9:, dimana urka lansunmemfosforilasi p9:

untuk meninkatkan omset protein p9: dan aktifitas transkripsi#7 ne"nya, dalam sel-sel yan

tela" ke"ilanan p9:,in"ibisi urka tela" terbukti memberikan keuntunan dalam

pertumbu"an# $ata kami menantan aasan ini, karena setidaknya dalam konteks'el 2

limfoma pen"ambatan myc-dri*en urka3urkb menara" pada kematian status p9:#

1ada sel 2 ekspresi Myc, in"ibisi akti*itas urka 3 urkb atau pen"ambat ekspresi yan

mempro*okasi cytokinesisdan menara" ke endoreduplikasi, dan memicu apoptosis# >emuan

inisedikit berbeda dari yan lain yan tela" menunjukkan ba"4ain"ibisi farmakolois dari

urka3urkb menara" ke tinkat yan lebi" tini dariendoreduplikasi dibandinkan

obser*asi#. 'ebaliknya, dalam konteks ekspresi berlebi" Mycmemberikan "asil predominan

yan membatalkan urka3akti*itas urkb adala" apoptosis, menunjukkan ba"4a urk dapat

menekan induksiapoptosis Myc pada fase -M dari siklus sel# Meskipun kita belum

meneta"ui ri4ayat peristi4ayan sensitif dalam ekspresi berlebi"an sel Myc untuk apoptosis

setela" in"ibisi urk, ini menyebabkan spekulasi ba"4a ini melibatkan bypass mitosispos

pemeriksaan dan3atau in"ibisi urkb jua memblok funsi antiapoptotic 'ur*i*in#A /akta ba"4a

resisitensi kinase-in"ibitordari urkb cukup untuk menekan efek dari in"ibitorpan-urk

mendukun aasan ini# 'elain itu, kami jua menunjukkanba"4a apoptosis berespon ter"adap

in"ibisi urk setidaknya sedikitselektif untuk ekspresi berlebi" sel Myc, terdapat efek yan jelas

lebi" kuat dari in"ibisi urka3urkb dalam selyan sedanberproliferatif yan didoron ole"

Myc dibandinkan onkoen lainnya# 2aaimanapun, ekspresi berlebi" Myc serin


22/25

dikaitkandenan tinkat yan sanat tini dari proliferasi# 2ersama-sama denanpekerjaan lain,

::,90 data kami menunjukkan sensiti*itas tertentudalam peruba"an sel MJC untuk aen yan

memicu transisidi-M#

Myc dan urora kinase sampai saat ini tela" ter"ubun melalui funsi sentral mereka pada transisi -M, dalam penembanan ketidakstabilan enomik, dan melalui akti*asi dan

funsi p9:# >emuan kami menunjukkan ba"4a Myc meninduksi urka dan menatur urkb

dan ba"4arespon ini sanat pentin untuk keanasan Myc-dri*en,ba"kan dalam penyakit

sepenu"nya, sanat menyarankan ba"4a aenyan menin"ibisi kinase ini memliliki terapi

atraktif yan cepatmembai keanasan yan memiliki keterlibatan denan Myc#

2capan Terima Kasih

1ara penulis berterimakasi" kepada 'abine 'trit5ke, Mic"aela aner, Madlen!elsner, danstaf

dari $epartemen edokteran Nuklir, > Munc"en, untuk bantuan teknis a"li6 fasilitas "e4an

E1/ (> MVnc"en) dan meW >rasene Dnti 'arana untuk pera4atan "e4an6 +ric" Ni (Ma-

1lanck Dnstitut, Martinsried, ?erman untuk menyediakanurka dan urkb ekspresi plasmid6

eor 2ornkamm(=elm"olt5 Eentrum Munc"en, Munic", ?erman) untuk menyediakan sel 1A:-

;6 $rs Mi"aela !nciu dan ?o"n 'andlund ('t ?ude1enelitian 8uma" 'akit nak, Memp"is, >N)

untuk menyediakan 2Lsamples6 dan +M$ - 'erono (8ockland, M) yan tela" memberikan

'70:9;A#

arya ini didukun ole" $eutsc"e /orsc"unsemeinsc"aft ('/2 >88 9 , ##6 dan

'/2 ., a#b), '4edia Cancer 'ociety, sosiasi anker Dnternasional 1enelitian, '4edia

8esearc" Council, empe /oundation dan meWni*ersitas (?##N#), National Dnstitutes of

=ealt" ("iba" C07;:7A6 ?#L#C#), dan dana dari Neara 2aian /lorida untuk 'cripps /lorida

(?#L#C#)#

Kepengarangan

ontribusi ##, ?##N#, ?#L#C#, ?#$#, dan C#1# perancan penelitian6 ?#d#=#, '#8#, #2#, #=#,

?#8#$#, M#8#, M#'#, ##, N#*#2#, N##, dan M## yan melakukan eksperimen dan menanalisis


23/25

data6M##=# menanalisis data microarray6 ##, ?##N#, dan ?#L#C# menulis kertas6 dan semua

penulis lasan kertas#onflik 1ara penulis menyatakan tidak ada persainandalam kepentinan

keuanan#orespondensi lric" eller, DDD Medis $epartemen, >ec"nisc"e

ni*ersitXt MVnc"en, Dsmaniner 'tr &9, .&;79 Munic", ?erman6 e-mailulric"#kellerYlr5#tum#de#

3e!erensi

2oer LM, $an CF# >ranslocations in*ol*inc-myc and c-myc function# !ncoene#

00&60(0)99A9-9;&0#

# $an CF# c-Myc taret enes in*ol*ed in cellro4t", apoptosis, and metabolism# Mol Cell

2iol#&AAA6&A(&)&-&

:# 2ernard ', +ilers M# Control of cell proliferationand ro4t" by Myc proteins# 8esults 1robl

Cell$iffer# 00;6:A-:#

# 2audino >, Mcay C, 1ende*ille-'amain =, etal# c-Myc is essential for *asculoenesis and

anioenesisdurin de*elopment and tumor proression#enes $e*# 006&;(&A)9:0-9:#

9# 1elenaris ', "an M, +*an D# 'uppression ofMyc-induced apoptosis in beta cells eposes

multipleoncoenic properties of Myc and trierscarcinoenic proression# Cell#

006&0A(:):&-::#

;# 8oussel M/, Cle*eland ?L, '"urtleff ', '"errC?# Myc rescue of a mutant C'/-& receptor impairedin mitoenic sinallin# Nature# &AA&6:9:(;:):;&-:;:#

7# Nilsson ?, Cle*eland ?L# Myc pat"4ays pro*okincell suicide and cancer# !ncoene#

00:6(9;)A007-A0

.# randori C, Co4ley 'M, ?ames L1, +isenman8N# >"e Myc3Ma3Mad net4ork and t"e

transcriptionalcontrol of cell be"a*ior# nnu 8e* Cell$e* 2iol# 0006&;;9:-;AA#

A# Coppola ?, Cole M$# Constituti*e c-myc oncoeneepression blocks mouse

eryt"roleukaemiacell differentiation but not commitment# Nature#&A.;6:0(;0;)7;0-7;:#

&0# 2ouc"ard C, >"ieke , Maier , et al# $irect inductionof cyclin $ by Myc contributes tocellcycle proression and se


24/25

&:# 2artek ?, Lukas ?# p7 destruction Cks& pulls t"etrier# Nat Cell 2iol# 00&6:()+A9-+A.#

&# eller 2, !ld ?2, $orsey /C, et al# Myc taretsCks& to pro*oke t"e suppression of

p7ip&, proliferationand lymp"omaenesis# +M2! ?# 0076;(&0)9;-97#

&9# Flac" ?, =ennecke ', le*i5opoulos , Conti $,mati 2# ro4t" arrest by t"e cyclin-

dependentkinase in"ibitor p7ip& is abroated by c-Myc#+M2! ?# &AA;6&9(:);9A9-;;0#

&;# Menssen , =ermekin =# C"aracteri5ation of t"ec-MJC-reulated transcriptome by '+

identificationand analysis of c-MJC taret enes# 1rocNatl cad 'ci ' # 006AA(A);7-

;7A#

&7# ndre4s 1$, natko +, Moore ?, '4edlo4 ?8#Mitotic mec"anics t"e auroras come into

*ie4#Curr !pin Cell 2iol# 00:6&9(;);7-;.:#

&.# Lu LJ, ood ?L, Je L, et al# urora is essentialfor early embryonic de*elopment and

tumor suppression#? 2iol C"em# 00.6.:(;):&7.9-:&7A0#

&A# Fader , Lens 'M# >"e urora kinase family incell di*ision and cancer# 2ioc"im 2iop"yscta#00.6&7.;(&);0-7#

0# anda , a4ai =, 'uto ', et al# urora-23DM-&kinase acti*ity is in*ol*ed in 8as-

mediated celltransformation# !ncoene# 0096(A)7;;-77#

>atsuka M, 'ato ', itajima ', et al# !*erepressionof urora- potentiates =8'-mediated

oncoenictransformation and is implicated in oralcarcinoenesis# !ncoene# 0096(;)&&-

&&7#

# Mao ?=, u $, 1ere5-Losada ?, et al# Crosstalkbet4een urora- and p9: fre, =orn ', 2rockmann M, et al# 'tabili5ationof N-Myc is a critical function of urora

in "umanneuroblastoma# Cancer Cell# 00A6&9(&);7-7.#

# dams ?M, =arris , 1inkert C, et al# >"ec-myc oncoene dri*en by immunolobulin

en"ancersinduces lymp"oid malinancy in transenicmice# Nature# &A.96:&.(;0;)9::-9:.#

9# 1ajic , 'pitko*sky $, C"ristop" 2, et al# Cellcycle acti*ation by c-myc in a 2urkitt

lymp"omamodel cell line# Dnt ? Cancer# 0006.7(;)7.7-7A:#

;# Lee >D, ?o"nstone '+, Joun 8# C"romatin immunoprecipitationand microarray-based

analysisof protein location# Nat 1rotoc# 00;6&()7A-7.#

7# 2oyd +, /arn"am 1?# Myc *ersus '/ discriminationat t"e cad ene is determined by

corepromoter elements# Mol Cell 2iol# &AA76&7(9)9A-9:7#

.# /rank '8, 'c"roeder M, /ernande5 1, >aubert ',mati 2# 2indin of c-Myc to c"romatin

mediatesmitoen-induced acetylation of "istone = andene acti*ation# enes $e*#

00&6&9(&;)0;A-0.#

A# mati 2, le*i5opoulos , Flac" ?# Myc and t"ecell cycle# /ront 2iosci# &AA.6:90-;.#


25/25

:0# =irota >, Lipp ??, >o" 2=, 1eters ?M# =istone =:serine &0 p"osp"orylation by urora 2

causes=1& dissociation from "eteroc"romatin# Nature#0096:.(707&)&&7;-&&.0#

: 2lack4ood +M, +isenman 8N# Ma a "eli loop"eli5ipper protein t"at forms a se

Translate Jurnal AURhjytK

Documents

Transcript of Translate Jurnal AURhjytK