Trichomoniasis'de

Parazitolojik Tanı

Giresun bölge toplantısı- 18 Mayıs 2018

Trichomonas vaginalis

(Donne 1836)

• armut şeklinde

• aktif hareketli

• 10X7 µm

• Dört serbest kamçı

• Dalgalanan zar

• Fagositoz

oC de 5 gün 40 oC’de ölür

17-30 oC değişik saatler

24 saat idrarda

Isı pH

Fe Sistein Proteazlar

TVV

Adezin proteinleri

Diğer mikroorganizmalar

DSÖ 276 milyon yeni olgu/yıl

Servikal kanser, prostat kanseri oluşumunda predispozan

HPV ve HIV geçiş riskini

Hamilelikte erken doğum, erken membran rüptürü, post natal

enfeksiyon

Direkt Mikroskopi

Kültür Boyama (Gram, Akridin

Oranj vs)

Hızlı testler

Hücre kültürü

İmmunositokimyasal (ICC) yöntem

ELISA, IFA, Lateks aglutinasyon

PAP smear

TANI

Moleküler testler

MALDI-TOF

hızlı ucuz

kolay Duyarlılığı

(%38-82)

Direkt

mikroskopi

1000 parazit /ml

Giemsa,

May Grünwald

Akridin oranj

leishman Periodic asid schiff (PAS)

Fontana

Papanicolaou

Boya yöntemleri

Hızlı

Kolay uygulanır

İncelemesi kısa sürer

Özel ekipman gerektirir

Bekledikçe solar ve kalıcı kayıt kalmaz

boya duyarlılık Özgüllük

giemsa 80 98,3

Akridin oranj 100 98

TYM(Diamond by)

CPLM (sistein-pepton-karaciğer-maltoz)

Trichosel besiyeri (BBL)

InPou c h ™ T V

Kültür

100 parazit/ml

%75-96

Uygun örnek

Ekim işlemi

TYM besiyeri (Tripticase-Yeast Extract-Maltose)

Gerekli malzemeler:

Hazırlanışı

• L-Cysteine HCL :1 gr

• L-Ascorbik asit :0.2 gr

• K2HPO4 :0.8 gr

• KH2PO4 :0.8 gr

• Tripticase veya

• Triptik soy buyyon :20 gr

• Yeast Extract :10 gr

• Maltose :5 gr

• Agar :0.5 gr

• Distile su :900 ml

• Maddeler tartılır ve eritilir.

• Karışımın pH’ı 6’ya ayarlanır.

• 121 0C de 20 dakika otoklavlanır.

• Otoklavdan çıktıktan sonra soğur

• Kristalize penisillin (1000 000 Ü/2ml): 1ml eklenir

• Streptomycin 2 gr/2ml : 0.5 mg/ml 1000 ml ye 500 mg (0.5 ml)

• Flucan, Lümen: 0.1 cc/ml 1000 ml ye 100 cc

• İnaktive edilmiş, varsa at serumu yada FCS : %10 oranında kullanılmadan hemen önce eklenir.

Buzdolabında 2-3 ay - 20 C de 6 ay- 1 yıl

Besiyeri tüpü 37 oC ye ısıtılır

Tuşe yapılmadan, spekulum takılır

Arka fornix’den steril eküvyon çubuğu ile akıntı materyali alınır

Menstrüasyon döneminde örnek

alınmaz

Besiyeri tüpüne aktarılır ağzı kapatılır

Etüv 37 oC

Trichomonas vaginalis için örnek alımı

Parazit sayısı az ise

Defektli parazitler varsa

Parazit kültürde çoğalmıyorsa

Cansız parazitler

Ekipman

Zaman (2-7 gün)

Deneyim

Hızlı testler

10 dakika gibi kısa sürede sonuç

Duyarlılık

Canlı parazit olmasa da yanıt alınabiliyor

Moleküler testlere göre daha ucuz

Ekipman gerektirmez

Hasta muayenesi esnasında uygulanabilir

PZR

Klasik PZR

Real-Time

Multipleks

PZR

Nested PZR

Kadın

Erkek

Vajinal yıkama sıvısı

İdrar (sabah ilk)

Arka forniksden pamuklu eküvyonla alınan örnek

Prostat masajı sonrası alınan sekresyon

İdrar (sabah ilk)

Üretral yayma

(pamuklu eküvyonla alınan)

PAP smear örneği (eski ve yeni)

PZR çalışılabilecek örnekler

PRİMERLER

18 S Ribozomal gen bölgesi Tv1 5’ TAA TGG CAG AAT CTT TGG AG 3’ Tv2 5’ GAA CTT TAA CCG AAG GAC TTC 3’

TV spesifik 261- bp tekrarlayan bölümünü çoğaltır TVK3 (5’AT TGT CGA ACA TTG GTC TTACCC TC-3’) TVK7 (5’-TCT GTG CCG TCT TCA AGT ATG C-3’)

T. vaginalis spesifik genomun 98-bp fragmanı çoğaltır TVA5-1 (AT GTTCTA TCT TTT CAT TGT) TVA6 (GAT CAC CAC CTT AGT TTA CA)

β-tubulin geni

BTUB 9, 5’ CAT TGA TAA CGA AGC TCT TTA CGA T 3’

BTUB 2, 5’ GCA TGT TGT GCC GGA CAT AAC CAT 3’

AP65-1VE 2 Adesin geni AP65 A, 5’ GAT TCC TCT TCA CAC ACC CAC CAG 3’ AP65 B, 5’ AAT ACG GCC AGC ATC TGT AAC GAC 3’

330 bp

862/ 16 (%1,9) 862 /8 ( % 0,9) DM 862/14 ( %1,6) Kültür 14 izolat metronidazole duyarlı Genotiplendirme ( A, I, E)

• Primer: AP 65

• Bu çalışmada ilk kez T. vaginalis tanısında kullanılmak amacı ile test edilmiş ve başarılı olduğu bildirilmiştir.

615 örnekte Prestoplus testi ile MOLBIOL LightMix Kit Trichomonas vaginalis tanısında karşılaştırılmış

Uyumsuz örnekler Qiagen® Microbial DNA qPCR TV

Her iki test benzer sonuçlar vermiş

(McNemar p > 0.05).

Ribozomal RNA saptamayı hedefler

ICC

• 1 parazit/ml

• HIV pozitif hamilelerde özellikle tercih edilebilir

• Asemptomatikleri saptamada daha etkili

• Ucuz, pratik ?

Pozitif kontrol Negatif kontrol

HIV + vajinal sekresyon

CDC

Yüksek riskli gruplarda LAB

testleri uygulansın

Çok eşliler Para karşılığı seks

yapanlar Uyuşturucu kullananlar

CYBH öyküsü olanlar

Mikroskobi Negatif

Vajinal, üretral Sekresyon

İdrar sedimenti

Kültür NAAT

Boyama Giemsa,

leishman vs.

Her bölgede en azından Üniversite Hastanelerinde

referans merkezleri oluşturulup bu merkezlerde

referans testler çalışılabilir.

Beni dinlediğiniz için Teşekkür Ederim…