MDM2 SNP 309 HUMAN

PAPILLOMAVIRUS INFECTION IN

CERVICAL CARCINOGENESIS

BY:OSAMU NUNOBIKI

Laura Mejía Cardona

III Semestre

2010

INTRODUCTION Human papillomaviruses (HPVs) may

cause warts . (100 )30 types of HPV are associated

with cancer (16,18,11,6…). Transition zone selectivity.

INTRODUCTION: CERVICAL CANCER

The tisuue on the cervix become abnormal.

Cells start to grow uncontrollaby forming neoplasias.

SYMPTONS Unusual vaginal discharge .

Light vaginal bleeding or spots of blood outside of normal menstruation .

Pain or vaginal bleeding with sexual intercourse .

Post-menopausal vaginal bleeding .

HPV AND CANCER Displasia precancerous cells

CANCER Cervical intraepithelial neoplasia (CIN).

NORMAL CERVIX

HPV AND CANCER

CIN I CIN II

HPV AND CANCER

NIC IIIINVASIVE CERVICAL

CANCER

MICROSCOPY

GENERAL OBJECTIVE Is to investigate the biological

significance of single nucleotide polymorphism (SNP) at murine double-minute 2 homolog (MDM2) promoter 309 in cervical carcinogenesis.

MUESTRAS 195 muestras de frotis cervical. Toma de muestras bastoncillos de algodón Sln salina de tampón fosfato Almacenaron -20c

LINEA CELULAR Cultivo de células con un periodo de

vida indefinido, pueden ser transformadas genéticamente o derivadas de un tumor.

USOS LINEAS CELULARES Mantenimiento y producción de tejidos

para transplante. Ingeniería de proteínas Inmunologia Virologia Analisis Dx

LINEA CELULAR

Análisis genotípico de MDM2-SNP309.

Tipificación del virus papiloma humano (50,102,41)

8 líneas de células escamosas (SKG-I, SKG-II, SKG-IIIa, SKG-IIIb, OMC-1, YUMOTO, QG-U and QG-H)

PCR: REACCIÓN EN CADENA DE POLIMERASA

Amplificación enzimática: Directa-Indirecta.

# copias. Desnaturalización Alineamiento Síntesis

Detección, Dx, clonación, etc.

PREPARACIÓN DEL DNA Líneas celulares.

Lisis.

Buffer (20 mM NaCl, 10 mM Tris-HCl (pH 8,0), 10 mM EDTA (pH 8,0),0,5% SDS y 50 mg / ml de proteinasa K).

Extracción del ADN genómico: fenol-cloroformo

Precipitado con etanol utilizando técnicas estándar.

RESULTADOS Genotipo T / genotipo TG+GG. 41 pacientes (HSIL): riesgo VPH.

TT : linea celular SKG-IIIa. TG o GG: 6 lineas(ex:YUMOTO) (87.5 %):

riesgo VPH.

RESULTADOS 21 pacientes (HPV16-18): TG+GG , alelo

G. 47pacientes tipos diferentes de HSIL-VPH.

OR :TG+GG en los casos de HSIL / controles entre los 68 pacientes con alto riesgo VPH.

CARRILES 1, 5 Y 7: TG HETEROCIGOTOS.

CARRILES 2, 4 Y 6: HOMOCIGOTOS GG.

CARRIL 3:TT HOMOCIGOTA.

EL TIPO SALVAJE (T)EL MUTANTE (G)

ALELO 121-BP Y 168 PB-

FIGURA 1 : REPRESENTANTE GENOTIPADO DE MDM2-SNP309

EL GENOTIPO TT :SKG-IIIA

EL GENOTIPO DE LA TG DE SKG-I, SKG-II, III B SKG-1-Y EL MAC

EL GENOTIPO GG DE YUMOTO, QG QG-U Y H

FIGURA 2: GENOTIPADO DE MDM2-SNP309 EN 8 LÍNEAS DE CUELLO UTERINO CON CARCINOMA DE CÉLULAS ESCAMOSAS

DISCUSSION

MISTER OPINION YES / NOArvanitis

and SpandidosDemonstrated that MDM2 was one of thepotential candidates for the development of cervical neoplasms.

YES

Cheng Indicated that MDM2 protein expression may be useful as one of biomarkers ofclinical outcome.

YES

Cristina Investigated the role of HPV infectionin oral carcinogenesis and demonstrated that overexpression ofMDM2 protein is closely associated with high-risk HPV-related orallesions.

YES

Farhadieh Reported that immunohistochemical expression of MDM2 in primary tumor was found to be correlatedwith poor prognosis in laryngeal squamous cell carcinomas.

YES

CONCLUSIONS Por la relación del P53 con el MDM2SNP309,

este puede ser usado como marcador en la detección precoz del cáncer.

Los pacientes que presentan los tipos 16 y 18 desarrollan mas fácilmente el cáncer.

Se pueden implementar otras estrategias de tratamiento para los pacientes que padecen VPH, probablemente con la regulación de la sobreexpresión del MDM2.

CONCLUSIONES Es necesaria la buena educación sexual

desde edades tempranas para disminuir las cifras de enfermedades de transmisión sexual.

El mal estilo de vida genera sobreexpresión del P53.

El VPH aumenta la expresión del MDM2SNP309.

BIBLIOGRAPHY MARTINEZ SÁNCHEZ, Lina María. Biología

molecular. 5. ed. Medellín: UPB. Fac. de Medicina, 2009.139p-147p, 305p-306p.

LODISH, H. Biología celular y molecular. 5 edición. Buenos Aires: Médica Panamericana, 2004.236p-237p.

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20538323

http://www.hpv-cancer.com/2007/11/imagenes-del-cuello-uterino-cervix.html

http://medical-dictionary.thefreedictionary.com/cervical+cancer

MAPA CONCEPTUAL

"EL NACIMIENTO Y LA MUERTE NO SON DOS ESTADOS DISTINTOS, SINO DOS ASPECTOS DEL MISMO

ESTADO.“ MAHATMA GANDHI

Mdm2 is an important negative regulator of the p53 tumor suppressor. It is the name of a gene as well as the protein encoded by that gene. Mdm2 protein functions both as an E3 ubiquitin ligase that recognizes the N-terminal trans-activation domain (TAD) of the p53 tumor suppressor and an inhibitor of p53 transcriptional activation

Low-grade SIL refers to early changes in the size, shape, and number of cells that form the surface of the cervix. They may go away on their own, or, with time, may grow larger or become more abnormal, forming a high-grade lesion. High-grade SIL means there are a large number of precancerous cells, and, like low-grade SIL, these precancerous changes involve only cells on the surface of the cervix. The cells often do not become cancerous or invade deeper layers of the cervix for many months, perhaps years.