EXPO+BIOLOGIA MOLECULAR-2016 I

7/26/2019 EXPO+BIOLOGIA MOLECULAR-2016 I

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ntegrantes:

-Lpez Caceres,Carmen

-Rodas Salazar, Miguel -Chipa Aybar ,Eliana -Cienfuegos Adrianzen,Erika -Salaerry Acedo, Silia -!e"a Ramos, Eelyn -Moran #uiroz, $ernica

Ciclo: Seccin:

-

X

- %&

Asignatura

:- 'iolog(a Molecular

Docente:

-MsC)#)&) Minaya Galarreta, Angelica

TEMA


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Extraccin:sacar los componentes desde uncompartimento celular. Involucra: Lisis de las clulas que contienen a los AN

Inactivacin de nucleasas Clarificacin: separacin de los AN de los restos celulares.

Purificacin:Separacin de AN:De protenas solubles

De otros AN no deseadosDe Lpidos carbo!idratosDe sales " otros compuestos or#$nicos


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* Los +cidos nucleicos almacenan lainformacin genica de los organismosios y son los responsables de laransmisin herediaria)

* .ran pare del desarrollo f(sico de unorganismo a lo largo de su ida)

* Las proe(nas /ue elaboraran susclulas y las funciones /ue realizaran

es+n odas regisradas en esa cinamolecular)* E0isen dos ipos1 el A23 y el AR3)


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Es una macromolcula muy larga , filamenosay formada por deso0irribonucleidos, cada uno

de ellos compueso por una base nirogenada,un az4car deso0irribosa y un grupo fosfao)


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El ARN tiene una solahebra.

La pentosa de losnucletidos constituyenteses ribosa.

Sus cuatro bases son: A,G, C, U.

Es la molcula !ue diri"elas etapas intermedias de las#ntesis proteica.


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AR3r1 Recibe la informacin genica) 5raduce lasproe(nas) Se ubica en el ribosoma, organela donde

se sineiza las proe(nas)


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Mtodos de fragmentacin y lisis celularMtodos de fragmentacin y lisis celular

para la extraccin de ANpara la extraccin de AN

El procedimiento ideal de lisis debe tener la fuerzanecesaria para romper el material de inicio (clulas o

tejido) y la delicadeza requerida para preserar lasmolculas de inters (A!N o A"N)#

Mtodos fsicos6 7omogenizacin mec+nica,6 7omogenizacin en solucin6 Molienda manual en morero6 'olias de idrio6 Sonicacin

Mtodos qumicos62eergenes

Mtodos enzimticos6Lysozima: rome enlaces -!"#- entre $-acetil murmico y $-acetilglucosamina de etidoglicn de la ared celular de %acterias6Lyticasa: rome enlaces -!"& de glucano de le'aduras6(roteasas: rome enlaces etdicos de rot" de ared ymem%rana lasmtica e interacciones clula-clula"


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LISIS CELULAR

$# %lari&cacin# Eliminacin de restos

celulares (debris)6 Cenrifugaion6 &ilracin6 Modo mi0o1 enzimas 8 cenrifugacin

'# uri&cacin9!or /u purificar:3ucleasas /ue se liberan al lisar las clulas degradan los +cidos nucleicos)

5cnicas12esproeinizacin con fenol, /ue al desnaurar proe(nas causa suprecipiacin)

!recipiacin de proe(nas con sales ;


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)undamento del mtodo:Se basa en las diferencias en ladesnauralizacin, renauralizacindel A23 plasm(dico y el A23

cromosmico al aplicar 3a?7 enpresencia de un deergenefueremene aninico como el

2odesilsulfao de Sodio ;S2S> yAceao de poasio)

Se usa principalmene parae0raccin de A23 plasm(dicode E) coli)


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A23 plasmidico-pe/ue"os circulos cerrados coalenemeneA23 cromosmico-fragmenado


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- Elaborado por Murray y5hompson en @B)- Adecuado para e0raer y purificarA23 de egeales yespecialmene indicado paraeliminar los polisac+ridos y loscompuesos poli fenlicos /ueda"ar(an al A23)


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$ %cnica usada para la &ini preparacin deA'N plasm#dico .

$ Re!uiere de culti(o bacterial a "ranescala.

$ Separa A'N plasm#dico superenrrolladodel A'N plasm#dico circular !ue est) enestado rela*ado, concentr)ndolos por

centri+u"acin en una "radiente deromuro de Etidio -Cloruro de Cesio rEt- CsCl./

Superenrrolado:Co(alentemente cerrado y

muy empacado.

DNAcircular.'NA !ue no

se 0aempacado.


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* En clulas eucariicas, el

mAR3 difiere de oras especiesde AR3, en /ue coniene en sue0remo D, en una e0ensinrelaiamene grande de % aD residuos de adenina, enuna secuencia conocidacomopoli A8)

* La cromaograf(a en columnases usada normalmene para lapurificacin de grandescanidades de AR3 !oli ;A>)

*+MATG+A)A .EA)$.A.

* !ermie separar el conunode los mR3A celulares deoros acidos nucleicos,merced a la hibridacin /uea a producirse enre suscolas de poli A; en ele0remo D> y los oligmeros/ue coniene la resinacromaogr+fica)


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* Logra una purificacinr+pida y eficienecomparada con losmodosconencionales)

* Los sisemas de faseslida absorber+n los+cidos nucleicos en elproceso de e0raccindependiendo del p7 yconenido de salesbuffer)

!RF3CF!F?S* La ineraccin de los

puenes de hidrgeno conuna mariz hidrof(lica baocondiciones caorpicas)

* Fnercambio inico baocondiciones acuosas por

medio de un inercambioaninico)* G mecanismo de e0clusin

por afinidad y ama"o)


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* La purificacin en fase slida es normalmene

efecuada por el uso de una columna giraoria operadabao fuerzas cenr(fugas)

5F!?S1

!ar(culas de idrio 5ierra de diaomeas

Marices de s(lice

5ransporadores de inercambio aninico

(A// .E )A/E /0L.A

Lisis celular, adsorcin de +cidos nucleicos, laado yelucin


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* El principio es+ basado en la eleada

afinidad de las cadenas de A23 cargadasnegaiamene con respeco a laspar(culas de s(licas cargadas

posiiamene)


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* El sodio uega un rol como un cain enlazane opuene /ue arae el o0(geno cargado negaiameneen los fosfaos de las cadenas de +cidos nucleicos)


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* !AR5HCILAS 2E

$F2RF?

* 5FERRA 2E2FA5?MEAS

* .el de agarosainolucrado en el uso desales caorpicas

facilian el enlazamienode A23 a idrio com4nde s(lice)

* La absorcin de +cidonucleico es el susrao

de idrio , ocurre debidoal mecanismo y principiosimilar al de la adsorcinde cromaograf(a deadsorcin)

* Es una rocasedimenaria sil(cea

formada por micro fsilesde diaomeas, algasmarinas unicelulares /uesecrean un es/ueleo

s(liceo llamado fr4sula


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#uian el A23 renzada doble perono el AR3 o las proe(nas)

La diaomia resulane enlazada con el A23 esluego laado con un ampn /ue coniene alcohol)

Ese es luego deado de lado y el A23 es elu(do enun ampn bao en sal o en agua desilada)


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La separacin es unaforma simple y eficiene,el cual es uilizado

acualmene en lapurificacin de +cidosnucleicos)Isualmene, poradoresmagnicos con ligandosafinos inmiles opreparados conbiopol(mero /ue muesraafinidad al +cido nucleicoa raar son usados en elproceso de aislamieno)


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Iso de perlas magnicas implica cuyasuperficie iene una carga /ue se puedecambiar bas+ndose en el p7)

A p7 bao es+n carg+ndoseposiiamene, arayendo a las molculas

de A23 con carga negaia y permiiendo/ue las proe(nas y los conaminanes se

eliminen mediane el laado

!urificacin de +cidosnucleicos en base a

micro esferas

magnicas

El +cido nucleico esluego eluido de las

par(culas magnicascon un ampn de

elucin


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Macromolculas mas abundanes1!resenan gran ariedad1 Canidad 5ama"o &uncinLa clae de su ariedad1 Los amino+cidos)


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Aislar una proe(na1 Ina clula1 .ran ariedad de proe(nas)

Esencial para deerminar suspropiedades y aciidad)

Modos de separacin1 5ama"o, carga, propiedades de unin)


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.E/*+(*0$:

Separa las proe(nas bas+ndose en la carga elcrica de su

superficie inica, usando resinas /ue son modificadas por grupos/u(micos cargados posiiamene o negaiamene)


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)A/E/:

)ase estacionaria o intercam%iador i1nico1Carga elcrica fia)Reienen iones miles))ase m1'il:Solucin acuosa1 Solenes org+nicos)Conienen especies inicas)


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)2$.AME$T:

Las molculas cargadas de la muesra1inercambiadores inicos)Las molculas pueden asociadas o disociadas

;unin reersible>)Fnercambiadores1 aninicos y cainicos)


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$TE+*AM3A.+E/ A$0$*/:

!oradores grupos con carga posiia)Inen aniones de forma reersible).rupos amino alif+icos o arom+icos)

$TE+*AM3A.+ *AT0$*:!oradores de grupos con carga negaia)Inen caiones de forma reersible)

S?D, grupo carbonilo, hidro0ilo fenlico)


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.E/*+(*0$ 4 )2$.AME$T:

Llamada ambin cromaograf(a de e0clusinmolecular)Separa en funcin de su ama"o molecular de laproe(na)

Matriz: se5ade6 G-!78" cuando este material es

5umectado se transforma en gel"


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M9T. 4 MATE+AL1Columna cil(ndrica.eles uilizados1 sephade0 poliacrilamida agarosa&ase esacionaria1.r+nulos de maerial esponoso)


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La mariz esa formadopor un pol(meroenrecruzado con porosde ama"o deerminado)

Las proe(nas de mayorama"o migran m+sr+pido hacia la pareinferior)

Las de menor ama"openeran en los poros ysu marcha es mas lena)


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La Cromaograf(a de Afinidadpermie la separacin de mezclasproeicas por su afinidad ocapacidad de unin a undeerminado ligando)

Las proe(nas /ue ienen una alaafinidad hacia su grupo /u(micoespec(fico ales como los ligandos,se unir+n coalenemene y esas

se unir+n a la mariz de la columna,mienras las ora pasar+n a rasde la columna)


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#iagen - 'ioRobo EJ@ Adanced


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http://www.google.com.pe/imgres?q=equipo+western+blot&um=1&hl=es&rlz=1W1LENN_esPE453&biw=1366&bih=578&tbm=isch&tbnid=qJtsxM96cxl5PM:&imgrefurl=http://www.solostocks.com/venta-productos/salud/material-sanitario-instrumental/equipo-de-analisis-de-imagen-quimioluminiscencia-fluorescencia-5938159&docid=UhHI0vdqp_XLXM&imgurl=http://www.solostocks.com/img/equipo-de-analisis-de-imagen-quimioluminiscencia-fluorescencia-5938159z0.jpg&w=500&h=500&ei=lO6xTonkOIacgQeyypClAQ&zoom=1


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