طشق تحضيش العيناث النباتيت المجهشيتوتطبيقاتها

3محاضرة

ختلف تحضر العنات النباتة المجهرة باختالف أحجام النباتات ودرجة تعقد تراكب أجسامها ، وهناك

:عدة طرق منها

.Squash Method 1- طرقة الهرس

Smear Method ( المسحة)طرقة الؽشاء -2

Whole Mount الكاملة طرقة العنة -3

Maceration Method التفكك طرقة -4

Sectioning Method التقطع طرقة -5

:Squash Method طشيقت الهشس -اولا

التراكب مكن بواسطتها اظهار الهرس وطرقة . القطاعات التظهرهاللعنة الت ه دراسة التراكب الداخلة

العنة على الشرحة وتغطى بغطاء بوضع ، وتجري عملة الهرس تربطها ببعضوالعالقات الت الداخله

مكن مشاهدتها تحت وبالتال الداخلة الى الخارج المكونات الشرحة ،ثم ضغط على غطاء الشرحة حتى تظهر

.نفسها المجهر وجب ان كون الضغط على غطاء الشرحة متساوا لتفادي كسره او كسر الشرحة

: هذه الطرقة لدراسة وتستعمل

تحضر اطوار االنقسام الؽر مباشر

االختزالتحضر اطوار االنقسام

الكروموسومالتركب

اللقاح تحضر حبوب

:الطشيقت كما يلي التي تحضش بهزه بعض التحضيشاث النباتيت

: Mitosisأطوار االنقسام ؼر المباشر تحضر

المجهر الضوئ ، وجد ان نسج القمم باستخدام Mitosisمن اجل دراسة االطوار المختلفة لالنقسام ؼر المباشر

من ه allium cepaكما وجد ان جذور نبات البصل .النامة للجذور النباتة ه انسب العنات لتوضح هذه االطوار

.عندما تكون الدراسة لمبتدئ لم تكن لده خبرة ف تحضر العنات النباتة النباتة ، خصوصا افضل الجذور

:شوعا اهم هذه الطرق واكثرها ومن االنقسام ؼر المباشر ، الطواروهناك عدة طرق لتحضر شرائح مجهرة

طرقة فولجن( 1

االستوكارمنطرقة استخدام صبؽة ( 2

الكولشسنطرقة استخدام ( 3

.البنفسجة جنشنطرقة استخدام صبؽة ( 4

: Feulgen Methodطرقة فولجن-1

.، القتل والتثبت ،التحلل ، الصبػ ، الهرس الجذورانبات : التالهوتتلخص بالخطوات

: Root Germinationانبات الجذور (أ)

ف اوعة زجاجة ملئة bulbsتستحث الساق القرصة لنبات البصل على انتاج الجذور ، وذلك بوضع االبصال

لفوهاتها بماء مقطر ،بحث تكون الساق القرصة دائما مؽمورة ف الماء ،وللحصول على جذور مناسبة ف الطول

.اام حسب درجة الحرارة 5-3تستؽرق العملة وقتا تراوح بن

: Killing and Fixationالقتل والتثبت ( ب)

.سم 1,5الى 1القمم النامة لجذور البصل بطول من تقطع -1

.الجذور المقطوعة جدا بالماء المقطر للتخلص من أي مواد عالقة بها تؽسل -2

،وذلك ( بالحجم 1:3بنسبة )خلك ثلج وحمض % 70 االثلالجذور ف محلول مثبت تكون من الكحول توضع -3.ساعة قبل العملة التالة للتثبت 24ساعة الى 12 مابن تترواحلفترة

.تؽسل الجذور مرتن على االقل بالماء المقطر للتخلص من اثار المثبت-4

: Hydrolysisالتحلل (ج)

ثم توضع ف فرن او حمام مائ على NHCLتنقل الجذور الى انبوبة اختبار تحتوي على حمض الهدروكلورك عاري

.دققة 12م لمدة 60درجة

:Stainingالصبػ (د)

ان معاملة . تنقل الجذور من حمض الهدروكلورك ثم تؽسل بالماء مرتن او ثالثا حتى تخلص من اثار الحمض تماما -1

.الجذور بالحمض تساعد كثرا ف عملة تفكك الخالا عن بعضها

ما بن تترواحزمنة لفترة ( محلول فولجن)القاعدي الفوشنتنقل الجذور الى زجاجة ساعة ثم ضاؾ علها صبؽة -2

دققة تحت درجة حرارة الؽرفة العادة ،بعد تلك الفترة الحظ ان القمم النامة للجذور قد تلونت باللون 15-20

.البنفسج الداكن، وهذه الخطوة تسهل تحدد القمم النامة المطلوبة فقط

: Squashingالهرس ( هـ)

ونقل لها الجذر المصبوغ بواسطة ملقط % 45حمض خلك تركزه قطروف وسطها زجاجة وتوضع شرحه توخذ -1

.وقطع الجزء المصبوغ بواسطة موس

.تخلص من باق الجذر وتهرس القمة النامة جدا بواسطة ساق زجاجة -2

الخلكوضع ؼطاء الشرحة وضؽط علها بواسطة االبهام حتى تفرد جدا الخالا المنقسمة و للتخلص من حمض -3

.الزائد

. الضوئ تتبع مراحل االنقسام ؼر المباشر تحت المجهر مكن -4

: Smear Method( المسحو)طشيقت الغشاء -ثانياا

على شرحة ( ؼشاء)المعلقة ف سائل وجعلها ف طبقة واحدة متجانسة العضاتهدؾ هذا التحضر الى نشر الخالا او

.مصطنعهزجاجة من اجل قتلها وتثبتها ف ان واحد دون تشوهها او اظهار حقائق

وتستخدم هذه الطرقة لتحضر العنات النباتة الت تتكون اجسامها من خلة واحدة كالبكترا وبعض الفطرات

. وؼرها السبحةواالجسام كالبالستداتخلوة عضاتوالطحالب او الخالا المعزولة او

: Smear of Bacteriaالؽشاء البكتري تحضر -أ

: Stainingصبػ الؽشاء البكتري -ب

عدمة اللون الحتوائها على نسبة عالة من الماء، ولكن باستخدام بعض النهاصعب فحص ودراسة الخلة البكترة

مكن تحدد معالمها وتمزها عن الوسط الموجودة فه، وتساعد الصبؽات بصورة عامة ف دراسة المتخصصهالصبؽات

مركبة مكن استعمالها لصبػ بعض اجزاء البكترا مثل االبواغ الداخلة *الشكل الخارج للبكترا ،ولكن هناك صبؽات

.وجدار الخلة المتاكروماتنةوالؽالؾ واالسواط البكترة والحببات الدهنة والحببات

:Whole Mountطشيقت العينت الكاملت -ثالثاا

الى تجزئتها وعمل قطاعات ،ومن هذه التحتاجالت ( الصؽرة الحجم )تستخدم هذه الطرقة للعنات النباتة الدققة

،واجزاء من االوراق كسلخة من البشرة او الشعرات الثالوسةالعنات على سبل المثال الطحالب الخطة ،والطحالب

.او حبوب اللقاح واالوراق الصؽرة او اجزائها وؼرها

ومن ابسط الطرق لتحضر العنة النباتة للفحص المجهري ه طرقة تحمل جزء صؽر من العنة ف بضع قطرات

ان التحمل ف الماء قد نتج عنه جفاؾ سرع للعنة ،لذا كون من االفضل تحمل العنة ف قلل من مع من الماء ،

فوضع مزد من الجلسرن تحت ؼطاء الشرحة قد قلل تبخر الماء التبخر لذا الماء على ولسرعة ، % 10الجلسرن

الشرحة لعدة اام بل اشهر ، ولكن جب تداول لقد حفظ وهذا التحضر االخر عتبر تحضرا مؤقتا ،ولكن من العنة ،

.تلك الشرائح بعناة خاصه وحفظها ف علب شرائح مسطحة

:كاملت ومن النمارج النباتيت التي تحمل

الطحالب والفطرات الخطة معظم

االولة الثالوسةالسراخس

والقائمة المنبطحهالحزازات وبعض

الصؽرة واجزاء الزهرة واجزاء من االوراق الكبرة كاالوراقمن النباتات الزهرة اجزاء

الؽدد من بشرة الورقة او الساق المحتوة على الثؽور والشعرات والزوائد و الماخوذه السلخات

الالكتوفنولتحمل هذه العنات ف محلول مكن lactophenol Solution مع اضافة الصبؽة المطلوبة اذا رؼب

.ف ذلك

الالكتكمحلول حمض استعمال lactic Acid او الفنولPhenol ( الكربولكحمض Carbolic Acid ) ف تحمل

.العنة الكاملة قلل من عملة انتفاخ مكوناتها وزد مدة الحفظ وعتبر تحضر نصؾ مؤقت

: مالومن االمثلة على تحضر العنة الكاملة

تحضر فحص حركة البكترا -1

تحضر عنات بعض أنواع الفطرات -2

تحضر الطحالب المجهرة وفحصها -3

تحضر عنات النباتات الراقة -4

: الراقةتحضر عنات النباتات

الصؽرة او اجزاء من االوراق الكبرة او اجزاء الزهرة او كاالوراقتحضر عنات كامله من النباتات الراقة مكن

: مالهذه الطرق ، ومن بشرة االوراق والسقان وؼرها سلخات

Clearing methodsتحضر العنة بالتروق -1

Epidermal Stripsبشرة النبات سلخاتتحضر -2

Fixation of stomalتثبت فتحة الثؽر -3 aperture

Epidermal Stripsبشرة النبات سلخاتتحضر

هناك عدة طرق لتحضر العنات النباتة، وابسط هذه الطرق Epidermal Charactersصفات خالا البشرة لدراسة

البشرة خالا ه الت تجري بسلخ طبقة البشرة نفسها من على العضو النبات كالورقة او الساق لدراسة انواع

وتتكون البشرة عادة من طبقة واحدة من الخالا Cuticleواالدمة Trichomesوالشعرات Stomataوالثؽور

اذا Sinuous متموجهعلى السطح العمودهلس بنها مسافات بنة ماعدا فتحات الثؽور ،وتبدو جدر خالا البشرة

.فحصت ف منظر سطح

: Maceration Methodطشيقت التفكيك -سابعاا

الخالا لتوضح تلك ال تكف دراسة الخالا المفردة او المعزولة فإن القطاعات العرضة او الطولة للعنات عند

عن بعضها البعض ، وتم ذلك بإذابة ( معزولة)فستعان بتفكك خالا وانسجة العنة الى خالا منفصلة ولذا

مادة الصفحة الوسطى الت تربط بن الجدر الخلوة وكذلك المواد االضافة االخرى ،وتسمى هذه الطرقة

بالتفكك تم فها فصل الخالا بعضها عن بعض دون الحاق الضرر بجدرها وهناك عدة طرق للتفكك تختلؾ

:ومنها . حسب المواد المستخدمة

Boiling Waterالمؽل الماء 1)

هدروكسد الصودوم او البوتاسوم% 5محلول 2)

حمض النترك% 10و الكرومكحمض % 10محلول3)

Schultz,sللتفكك سكالتزطرقة 4) Maceration Process ( البوتاسوم كلورات+حمض سترك.)

:BoilingWaterالماء المؽل -أ

سلولوزةو تستعمل هذه الطرقة لتفكك العنات النباتة الطرة قللة الخشبة والت تتكون جدر خالاها من مواد بكته

الحلق والحلزون التغلظ، Thickeningف الخشب التغلظ. مثال البرنشممحدودة من النسج او فصل طبقات

.االوعة ،انواع

:طرق العمل

.الى اجزاء وتوضع ف كأس ثم تغمر بالماء( ورقة ، جذرساق ،)تقطع العنة النباتة -1

.حتى تم تفككها بسهولة بإبرة تشرح ( المتخشبه االنسجهحسب )تغلى العنة على اللهب لمدة ساعتن او اكثر -2

.تؤخذ كمة قلله من العنة المغلة ثم توضع على شرحة نظفة وتفكك الخالا واالنسجة باستخدام إبرت تشرح-3

.تزال جمع االنسجة المرئة الكبرة-4

.ضاف الها قطرة من محلول الجلسرن المخفف بالماء ، بغطاء الشرحة ، ثم تفحص تحت المجهر-5

طشيقت التقطيع: خامسا

عتمد تحضر العنات الكبرة الت ال مكن فحصها مباشرة تحت المجهر والت جب تقطعها الى أجزاء صغرة على

وه عملة تتم بخطوات ذات تنظم .االلتزام بجداول زمنة مناسبة ومعنة مع استخدام محالل ذات نسب معنة أضا

:منهاالتقطع وهناك بعض العوامل الت تؤثر ف عملة . معن

نوع السكن ودرجة حدتها وزاوة ملها -1

وسط الطمر -2

نوع النسج النبات -3

مهارة القائم بعملة التقطع وخبرته -4

–الطمر –التشرب –التروق –نزع الماء –القتل والتثبت : اتباع الخطوات السابقة لعملة التقطع بالترتب وه -5

.الصبػ والتحمل على الشرحة –التقطع –تحمل العنة على جهاز التقطع

: 2واجب

المحاضشهبعض التحضيشاث النباتيت وقذ تناولنا في لذساست تستعمل طشيقت الهشس -3

اركشي بقيت األنىاع مع ششح واحذة منها؟ Mitosisتحضيش أطىاس النقسام غيش المباشش

وفيما تستخذم مع ششح كل طشيقو ؟ ( القىالب ) البصموعذدي طشق -4