Teknologi DNA Rekombinan.ppt

5/19/2018 Teknologi DNA Rekombinan.ppt

1/25

Rencana Perkuliahan

Aliran Informasi Genetik

Teknologi DNA Rekombinan

PCR & Diagnosis Molekuler (Aplikasi PCR)

Teknik Biologi Molekuler (UTS)

Produksi Biopharmaceutical & Vaccine 1X

Teknologi Fermentasi Senyawa Obat 1 X

Produksi Metabolit Sekunder senyawa Obat 2 X

Presentasi Kelompok Topik (Aplikasi PCR, ProduksiProtein terapetik, Fermentasi senyawa obat/pangan,

produksi met. Sekunder via kultur jaringan dan tanaman

transgeni, prod met sekunder via combinatorial

biosinthesis 3X.

BIOTEKNOLOGI


2/25

Teknologi DNA Rekombinan

Restriksi Endonuklease

Ligasi & Ligasi DNA

Vektor Kloning & Rekombinan DNA

Isolasi DNA & RNA


3/25

Goal..

Pemanfaatan Manipulasi Gen dalam Pengobatan


4/25

DNA Rekombinan


5/25

Nucleases

Nukleotida

IK. Hidrogen

Phospodiester


6/25

ExonucleaseVS Endonuclease

Nuclease dapat memotong/degradasi

molekul DNA dengan membelah IK.

Phosfodiester yang menghubungkan

nukleotida

Exonucleasemenghilangkan nukleotida

pada posisi ujung molekul DNA

Endonucleasememotong ikatan dalam

phosfodiester molekul DNA


7/25

Restriction Endonuclease (RE)


8/25

Enzim Restriksi


9/25

Ligasi

Ligase : Enzim yang mensintesis

pembentukan ikatan phosfodiester yang

menghubungkan nukleotida satu dengan

yang lainnya


10/25

Ligasi


11/25

Restriksi

& Ligasi


12/25

DNA VEKTOR

Vektor kloning berfungsi untuk

memperbanyak fragmen DNA yang

disisipkan, sehingga fragmen DNA hanya

di replikasi, tidak di transkripsi.

Vektor ekspresi digunakan untuk produksi

protein.


13/25

Vektor (Biotranspor)

Plasmid

Virus lambda bacteriophaga

Cosmid


14/25

Plasmid

DNA untai ganda

Berbentuk lingkaran

Bersalinan tinggi (high copy number) Berukuran kecil (mudah dimanipulasi)

Dapat bereplikasi sendiri

Dapat disisipi DNA asing Memiliki 2 gen marker : untuk mendeteksi

adanya vektor dan DNA sisipan


15/25


16/25


17/25


18/25

Tahapan kloning

Isolasi/preparasi DNA sisipan dan DNA

Vektor

Pemotongan molekul DNA

Penggabungan fragmen DNA sisipan ke

DNA vektor

Transformasi Identifikasi

Isolasi DNA rekombinan


19/25


20/25

Transfromasi

Sel kompeten : sel mampu menerima

DNA asing.

Sel diberi lar. CaCl2

agar sel menjadi

permeabel dan bermuatan + (DNA-).

Cara Heat Shock dan Kejutan listrik.


21/25

Kemungkinan dalam

transformasi? Sel kompeten tidak kemasukan DNA

apapun

Sel kompeten kemasukan DNA vektor

tetapi tidak membawa gen X

Sel kompeten kemasukan DNA vektor dan

membawa gen X (DNA rekombinan)


22/25

Seleksi putihbiru

Jika ada tiga cawan yang diisi media

padat, masing-masing diberi label media

A, B dan C

A hanya media padat

B media yang ditambah antibiotik (mis

Pinicilin)

C media padat ditambah antibiotik, X-gal

dan IPTG

Apa yang terjadi dalam media A, B dan C


23/25

Seleksi putihbiru

Media A, semua sel kompeten hidup

Media B, lebih sedikit sel kompeten hidup

dari media A karena sel kompeten yang

membawa DNA resisten antibiotik.

Media C, sama dengan media B tetapi

pada media tersebut ada dua warna Biru

dan Putih


24/25

Seleksi putihbiru


25/25

Next...

Konfirmasi DNA rekombinan

PCR

Teknologi DNA Rekombinan.ppt

Documents

Transcript of Teknologi DNA Rekombinan.ppt