Tcnicas parasitolgicasFACULTAD DE TECNOLOGA MEDICA

Diagnstico de laboratorio de las Enteroparasitosis

Caractersticas generales de las Enteroparasitosis Principales protozoosis y helmintiasis intestinales Ciclos biolgicos tipo: a) Entamoeba histolytica b) Taenia saginata c) Enterobius vermicularis d) Anquilostmidos Principios y utilidad de las tcnicas de estudio parasitolgico de heces. El examen coproparasitario Elementos no parasitarios de las heces El mtodo de Graham

Tracto digest humano Numerosos parsitos: Protozoos COMENSALES Helmintos PATOGENOS

Infestacin

Va digestiva (mayora de casos) Va cutnea

Formas infestantes

QUISTES / OOQUISTES Protozoos HUEVOS Helmintos LARVAS Tenias, TriquinaENTEROPARASITOSIS. Caractersticas generales

Mecanismos transmisin

Infestacin por FECALISMO

Infestacin por CARNIVORISMO

Infestacin s/ ciclo ANO-MANO-BOCA

Infestacin CUTANEAENTEROPARASITOSIS. Caractersticas generales Mecanismos transmisin Relacin con ciclo biolgico

Caracterstico de parsitos de ciclo biolgico MONOXENOINFESTACION POR FECALISMO

INFESTACION POR FECALISMO Hosp InfestadoMedio ExternoHosp SusceptibleFormasinfestantes(=)Contam sueloIngestin Quistes Ooquistes Huevos Larvas

Diagnstico de laboratorio de las Enteroparasitosis

IMPORTANTE:

1) Seleccin tcnica(s) s/ casos Grupo o especies de parsitos Fase evolutiva

2) Examen de varias muestras (3) por paciente

Evidenciacin de parsitos que: Viven en el tracto digestivo Realizan su trnsito al m ext a travs del mismo I) No todas las tcnicas son adecuadas para todos los parsitos: Importante conocer ciertos datos: Procedencia geogrfica del enfermo Resumen HC Resultados otras pruebas/anlisis Informacin relativa a trattos recientes

II) Un ex aislado con result negativo no tiene ningn valor eliminatorio

III) La muestra debe ser examinada rpidamente

El examen PARASITOLOGICO DE HECES forma parte del ESTUDIO COPROLOGICO, mas general, que informa sobre:

Aspecto macroscpico de las heces Consistencia / agua / Veloc trnsito..... Color (calidad/cantidad flujo biliar) Presencia de sangre, mucus ...... Aspecto microscpico restos alimenticios Presencia mucus, hemates, leucos, cls epiteliales ...... Presencia de parsitos (trofoz, quistes, huevos, larvas....) Elementos micticos, su relacin o proporcin con bacterias

El examen COPROPARASITARIO no resulta de utilidad cuando:

La eliminacin de los parsitos no se realiza por el intestino

La puesta de huevos no se lleva a cabo en el intestino

Los parsitos son inmaduros o estriles, y no dan lugar a formas de diseminacin Parasitismo por un nico individuo (esp dioicas) Parasitismo reciente (fase adulta no desarrollada)

1) Examen directo de una pequea porcin de heces frescas

2) Examen despus de aplicar un mtodo de concentracin

3) Examen de extensiones o preparaciones permanentes

Examen directo

Observacin microscpica minuciosa de toda la preparacin Objetivo seco dbil (10 x) Objetivo seco fuerte (25-40 x) Habitualmente no se emplea obj de inmersin Importante: No diluir demasiado las muestras

TECNICAS DEL EXAMEN COPROPARASITARIOExamen directoTincin Vacuolas NcleosSF LugolMovilidad (Trofozotos)

TECNICAS DEL EXAMEN COPROPARASITARIO2) Examen post-concentracin

Reunin en un pequeo vol los elementos parasitarios inicialmente dispersos en una gran masa de heces

Numerosos mtodos

Ninguno evidencia todos los tipos de parsitos, (cada uno tiene sus indicaciones precisas) Mtodos fsicos

Por sedimentacin Por flotacinMtodos difsicos

Empleo de 2 fases no miscibles Agua // Eter o Acetato etilo

METODOS DE CONCENTRACIONMtodos fsicos

Dilucin minuciosa heces en lquido o solucin de densidad: Inferior a la de los parsitos (Tcnicas de sedimentacin) Superior (Tcnicas de flotacin)

Ventajas: Realizacin muy simple Precisan poco material

Inconvenientes: Procesos largos Exigen mucha manipulacin No aplicables a series grandes de muestras

En ciertos casos se puede acelerar x centrifugacin suave

TECNICAS DE CONCENTRACION. Mt de sedimentacin simple

Triturar las heces (10-20 g) en agua de grifo Poner la dil en una probeta de 250-500 cc y rellenar (agua grifo) Dejar reposar aprox 1 h Deshechar sobrenadante Resuspender en agua de grifo Dejar sedimentar 45 min Deshechar sobrenadante Repetir esta op varias veces, hasta que el sobrenadante quede transparente Recoger y examinar el mat sedimentado. Hacer tres tomas: Superficie Media altura Fondo

TECNICAS DE CONCENTRACION. Mt de flotacin

Caractersticas a considerar:

Densidad sol empleada > Dens parsitos

Concentracin en superficie

Importante:

Manipular rpidamente

Impreg huevos operculados Sediment

Alteracin morfol huevos (Identificacin) SedimentoSulfato de cinz Pelcula superficial

METODOS DE CONCENTRACIONMtodos fsicos. Ejemplos

Tcnicas de sedimentacin

Mtodo de sedimentacin simple Mtodo de Faust e Ingalls Sedimentacin en columna alta

Tcnicas de flotacin

Mtodo de Fulleborn Mtodo de Willis (flotacin en salmuera) Mtodo de Faust (flotacin en sulfato de zinc)

METODOS DE CONCENTRACION

Mtodos difsicos

Derivados todos del mt de Telemann (1.908)

Empleo de dos fases no-miscibles Fase acuosa (sol. formaldehido) Fase ter o disolv de lpidos (Acetato de etilo)

Los elementos fecales y los parsitos se localizan en la fase acuosa o en la interfase agua-ter, en funcin de una caracterstica, el balance hidrfilo-lipfilo

METODOS DE CONCENTRACIONMtodos difsicos

Realizacin : Dilucin de las heces en agua (o el la fase acuosa) Adicin y emulsin con el ter ( o acet de etilo) Centrifugacin suave

Algunos ejemplos: Mtodo de Telemann Mtodo de Rivas Mtodo de Ritchie Mtodo de Blagg, Schloegel, Mansoer y KhalafEterRestosLp disueltosFormalinaSedimentoParsitos

Restos fecales y grasaAcetato de etiloFormalinaSedimento (Parsitos)12

EXAMENES DIRECTOS PARA DIAGNOSTICO DE ENTEROPARASITOSISTcnicas del Examen Coproparasitario. Resumen

1.- Observacin macroscpica

2.- Observacin microscpica

2.1.- Observacin microscpica de preparaciones en fresco (entre porta y cubre)

Muestras de heces directamente en SF o Lugol

Muestras de tcnicas de concentracin

2.2.- Observacin microscpica de preparaciones teidas, permanentes o no, que permiten la conservacin y la observacin cuidadosa y detallada de los parsitos

EXAMENES DIRECTOS PARA DIAGNOSTICO DE ENTEROPARASITOSISTINCIONES ACIDO-ALCOHOL RESISTENTES

Utilidad: Demostracin de ooquistes de Cryptosporidium spp. Evidenciacin de Cyclospora spp.

Aplicables a frotis de heces (tb ciertos concentrados)

Tcnicas: Las mas empleadas son la de KINYOUN y una modificacin de la ZIEHL-NEELSEN

TINCION DE HEMATOXILINA-FERRICA

Utilidad: Observacin detallada de quistes, pero s/t de trofozotos de protozoos. Si se realiza montaje, buena coleccin permanenteExige una realizacin cuidadosa,

COLORACIN DE KINYOUN (Cryptosporidium // Cyclospora)

Fijacin frotis: Metanol 30 seg Tincin : 5 min (frio) con sol de Fuscina bsica Fusc bsica 4 g Fenol 8 g Etanol (95%)90 ml A dest100 ml

Lavado a) Etanol 50%: 3-5 min b) Agua corriente

Decoloracin: Acido sulfrico 1%: 2 min

Contracoloracin: Azul metileno Loeffler: 1-2 min Azul de metileno0,3 g Alcohol 95%30 ml KOH 0,01%100 ml

Elementos no parasitarios de las heces RESTOS ALIMENTICIOS

Tejido conjuntivo Fibras musculares estradas (carne) Att tamao / ngulos Grasas neutras Glbulos refringentes tamao variable Acidos grasos Agujas finas Almidn Crudo: Granos en capas concntricas Cls reserva amilcea (s/ procedencia) Celulosa Digerible: Masas celulsicas (cls reserva) No digerible: Traquedas, pelos vegetales, polen etc CRISTALES Origen alimentario (oxalato de calcio) Endgeno (Ox calcio, fosfato amnico-magnsico, Charcott-Leyden) Medicamentos

Tipos de anlisisTcnicas coproparasitolgicas.Tcnicas en parasitosis sanguneas y tisulares.Tcnicas de anlisis de contenido duodenal.Tcnicas de anlisis de flujo vaginal.

Obtencin de la muestra fecalLa muestra emitida espontneamente es la muestra ptima para el examen coprolgico.Tambin se pueden usar muestras obtenidas mediante:RectoscopaTacto rectalAspirado rectal

Muestras inadecuadasLas que se han mantenido por ms de un da a temperatura ambiente.Las obtenidas despus de un estudio radiogrfico del tubo digestivo en el que se utiliz bario.Las que presentan gran cantidad de algunas sustancias que se han ingerido con fines teraputicos (v.gr. Aceite o antidiarreicos con bismuto).

LaxantesNo han de utilizarse de rutina.En caso de usarse, debe preferirse el sulfato de sodio.En trminos generales, nunca, deben emplearse laxantes aceitosos ya que se eliminan en forma de gotas, las cuales interfieren con el anlisis microscpico.

N de muestrasLo ptimo son tres muestras en das diferentes, esto debido a la eliminacin irregular de quistes o larvas de algunos parsitos, en vista de lo cual una sola muestra no tiene un 100% de sensibilidad.

ConservacinEn caso de que la muestra no pueda ser enviada inmediatamente al laboratorio, debe emplearse algn mtodo de conservacin para garantizar la calidad del diagnstico.

RefrigeracinCuando la conservacin se debe hacer por unas horas o hasta un da.Colocar el frasco con la muestra en el refrigerador, nunca en el congelador.

Preparaciones selladasSe coloca la muestra entre porta y cubreobjetos y se sella el borde del cubreobjetos con vaselina, Barniz de uas o Blsamo de Canad.Se obtiene as una preparacin que puede durar unas horas.

FormalinaSe mezclan ca. 3 g de heces por cada 10 ml de formalina al 10%.Se preservan bien los huevecillos de helmintos y los quistes de protozoarios.

Reactivo MIFContiene merthiolate, yodo y formalina.Se prepara as:250 ml de agua destilada200 ml de merthiolate 1/10025 ml de formalina 40%5 ml de glicerinaAl momento de usar se mezclan 23,5 ml de esta solucin con 1,5 ml de lugol concentrado.

Reactivo MIFSe adicionan un gramo de heces frescas por cada 10 ml de solucin MIF.

Reactivo PVAAlcohol polivinlico.Es una resina que se presenta como un polvo blanco que tiene los nombres comerciales de Elvanol o Gelvatol.

Reactivo PVAPreparacin en portaobjetos.3 gotas de fijador con un poco de materia fecal, y se deja secar.Se puede guardar hasta dos meses para coloracin posterior.

Reactivo PVAConservacin en frasco.Se mezcla una parte de heces con tres partes de fijador y se conserva tapado.

Anlisis

Observacin directaObservacin directa en salina.Observacin directa en lugol.Frotis grueso de Kato-Katz.Tcnica de Stoll-Hausher

TincionesHematoxilina frrica de Heindenhain.Coloracin tricrmica.Ziehl-Nielsen modificadoTincin de Koster.WrigthGiemsa

Tcnicas de concentracin

Tcnicas de concentracin

Existen dos tipos:SedimentacinFlotacin

SedimentacinMtodo de Ritchie(formol-ter)Mtodo de TelemannTcnica SafTcnica de Burrows(PAF)

FlotacinTcnica de Sheather(azcar).Tcnica de Faust(sulfato de zinc).Tcnica de Willis-Molloy(cloruro de sodio).

Tcnicas de anlisis de contenido duodenal

Anlisis de contenido duodenalMtodo de la cpsula de Beal.Aspirado duodenal.

Cpsula de BealSe consigue bajo el nombre comercial de Entero-Test .Consiste en una cpsula de gelatina con un hilo, donde uno de sus extremos se fija a la mejilla del paciente, y el otro arrollado en la cpsula, se traga, se deja dos o tres horas y luego se retira.

Anlisis de fluido vaginal

Anlisis de fluido vaginalSe realiza para buscar Trichomonas vaginalis, la muestra se toma con aplicador con algodn y se realiza la observacin directa microscpica en solucin salina.

Parasitosis Sanguneos y Tisulares

Gota gruesaSe realiza con sangre y consiste en una preparacin gruesa en portaobjetos de la muestra, la cual se fija y se tie para su observacin microscpica.

Raspado de pielCuando se presentan lceras sospechosas de infecciones por protozoarios, como leishmaniasis, se toma la muestra directamente de la lesin raspndola fuertemente con un bistur, luego el material se extiende en un portaobjetos para su fijacin, tincin y observacin.

XenodiagnsticoConsiste en usar cultivos axnicos de vectores de la enfermedad que sean de un sitio geogrfico diferente para que se alimenten del husped y luego revisarlos para buscar el parsito.

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