Kuhns MS. et al.Immunity 24 : 133-139 (2006 ) Complexes TCR/CD3.
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Kuhns MS. Kuhns MS. et alet al.Immunity 24 : 133-139 (2006.Immunity 24 : 133-139 (2006))
Complexes TCR/CD3Complexes TCR/CD3
Rudolph M.G. et al. Annu.Rev. Immunol.(2006) 24 : 419-466
Rudolph M.G. et al. Annu.Rev. Immunol.(2006) 24 : 419-466
Rudolph M.G. et al. Annu.Rev. Immunol.(2006) 24 : 419-466
Conformation des peptides trouvésdans les molécules de classe Ia
Conformation des peptides trouvésdans les molécules de classe II
Enzymes impliquées dans la Jonction des extrêmitésnon homologues : Non Homologous End Joining (NHEJ)
1)Ku 70 et KU 80 forment des hétérodimères qui possèdent des activités leur permettant de fixer les extrêmités de DNA.
2) Ku70/Ku80 s’associe à la sous-unité catalytique d’une protéine Kinase, DNA-PKcs pour former la protéine kinase dépendante du DNA.
3) Artémis qui est une nucléase et la DNA-PK jouent un rôle essentiel dans la formation des jonctions codantes.
4) XRCC4 et DNA ligase IV sont impliquées dans la ligation des jonctionscodantes et des séquences de recombinaison (RSS).
SCID = severe combined immune deficiencyExemple : souris ayant une mutation de l’enzyme DNA-Protein Kinase
Absence de mutations somatiques dans les régions variables des chaînes alpha et beta du TCR
• Diversité combinatoire :- recombinaison aléatoire entre les segments géniques V(D)J
- appariement entre une chaîne et une chaîne pour le récepteur des lymphocytes T (TCR)
Diversité des récepteurs pour l’antigène
• Diversité jonctionnelle : - délétion de nucléotides - addition de nucléotides :
dépendante de la matrice (élément P) indépendante de la matrice (élément N): médiée par la Terminale déoxynucléotidyl Transférase (TdT)
Diversité des récepteurs pour l’antigène
• la TdT est une ADN polymérase atypique puisque elle ne recopie aucun brin matrice
•Son expression est: retrouvée dans toutes les espèces de
vertébrés tissu-spécifique (thymus et moelle osseuse) transitoire au cours de l’ontogénie des cellules B et T ainsi qu’au cours du développement.
Migration sur ungel dénaturant
Analyse
6 7 8 910116 7 8 91011
Amplification par PCR BV BJBD BC
Elongation d’une amorce fluorescente
*
ADNcARN
La technique Immunoscope
L’obtention de souris déficientes en TdT (TdTko)
a permis de montrer de façon absolue que seule la
protéine TdT est responsable in vivo de l’addition des
éléments N.(Gilfillan et coll., Science, 1993, 261: 1175-78.
Komori et coll., Science, 1993, 261:1171-75)
Quelle est l’influence de la TdT sur la production du répertoire des
Lymphocytes T ?
Cabaniols J.P., Fazilleau N. et al. J.of Exp. Med (2001) 194: 1385-1390.
Nature du répertoire des lymphocytes T des souris déficientes en TdT (TdTko)
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Taille de CDR3 Taille de CDR3
Répertoire T
La technique Immunoscope II
Analyse statistique
CDR3J C
V D
Amplificationpar PCR
Séquençage exhaustif
6 7 8 9 10Taille CDR3
Aire(% du total)
X % Y %
Analyse Immunoscope
Extrapolation à la taille du répertoire
des Lymphocytes
T
• Le répertoire des cellules T des souris TdTko est polyclonal.
• Dans les souris TdTko, la taille du répertoire des TCR représente 5 à 10% de celle des souris de génotype sauvage.
• La baisse de diversité n’est pas contre-balancée par un accroissement de l’appariement d’une chaîne avec plusieurs chaînes .
Conclusion
Au moins 90% de la diversité du TCR est due à la TdT
De façon surprenante, lorsque la déficience en TdT
est introduite dans un fonds génétique prédisposant à
une maladie autoimmune, elle a un rôle protecteur.(Gilfillan et coll., 1995, Immunol Rev, 148:201-219
Conde et coll., 1998, JI, 161:7023-30Feeney et coll., 2001, JI, 167:3486-93Robey et coll., 2004, JI, 172:4624-29)
Quelle est l’influence de la TdT sur le répertoire des cellules T autoréactives
?