Extraccion de ADN - Platano

8/16/2019 Extraccion de ADN - Platano

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EXTRACCIÓN DE DNA 1

EXTRACCIÓN DE DNAExperimento con reactivos de la vida cotidiana

Laura Martínez Martín- 1º Grado Genética - UA

A!ri" de #$1%


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Índice

Pág.

Introducción &&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& '

(!)eti*o+,&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& '

Materia",,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,& '

Procedimiento &&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&

Explicaciones científicas del procedimiento &&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& .

Valoración personal &&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 11

Webgrafia &&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 1#


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Introducción

Todo organismo vivo está formado por la ampliamente estudiada y

conocida molécula de DNA. Sabemos que los organismos vivos provienen de

una única célula ancestral llamada !"A. #ste $ec$o nos indica que entre

organismos vivos compartimos muc$o más de lo que a veces nos podr%amosllegar a imaginar. &or e'emplo( los $umanos compartimos el )*+ del DNA con

el plátano. Sin embargo( el porcenta'e de DNA que compartimos depende de

c,mo se mida. Si medimos secuencias idénticas de pares de bases( entonces

es bastante ba'o( pero si nos -'amos en los genes con funciones idénticas o

similares entonces es de $ec$o el )* +. Algunas de las cosas para las que

estos genes

codi-can son de bioqu%mica básica la

replicaci,n del DNA( la transcripci,n( latraducci,n( el metabolismo del DNA

/recombinaci,n ( reparaci,n0( el

metabolimso de la célula /catabolismo y

anabolismo0 y la regulaci,n del ciclo

celular /mitosis0. #ste tipo de genes son

nombrados por los bi,logos como

secuencias conservadas2.

&ara poder estudiar esta molécula con

detalle se precisa generalmente su aislamiento de la célula( y para ello es

necesario un con'unto de material e instrumentos de laboratorio comple'os. o

que este e3perimento pretende es un acercamiento simple y sencillo a la

técnica de e3tracci,n de DNA que se puede reali4ar en cualquier $ogar con

materiales de la vida cotidiana.

a/ Obetivos

Aislar y observar el DNA de un plátano con reactivos caseros.

!/ !aterial5 &látano

5 &i6a

5 7airy /o detergente0

5 Agua destilada

5 Sal

5 Agua

5 #tileno 8)9 /: $oras enel congelador0

5 ;alan4a

5 &robeta


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5 ;arillaagitadora

5


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Procedimiento

1. Trituración del plátano: "on la ayuda de un cuc$illo cortamos unos 1**gde plátano y lo troceamos $asta obtener porciones muy peque6as. Despuésaplastamos todos los tro4os con un tenedor para formar una pasta más o

menos $omogénea. Depositamos esta pasta en un vaso de precipitados.

2. Preparación de la solución de extracción: &rimero pesamos con labalan4a =g de sal. "on una probeta preparamos 1**ml de agua destilada y1*ml de 7airy. A continuaci,n lo me4clamos todo en un erlenmeyerprocurando no formar muc$as burbu'as.

3. Detergente + plátano:


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4. Baño caliente &onemos agua a calentar y con un term,metro medimos latemperatura $asta que alcance unos >*9" apro3imadamente. Despuésintroducimos el vaso de precipitados con la me4cla y vamos removiendodurante unos 1)? con la ayuda de una barita agitadora. @ay que procurarmanetener la temperatura en los >*9" y no $acer muc$as burbu'as.

5. Baño rio &reparamos un recipiente con agua y $ielo e introducimos elvaso de precipitados. o de'amos en estas condiciones durante )?removiendo constantemente.

!. Preparación del "u#o de piña ientras esperamos que pasen los )? delba6o fr%o preparamos el 4umo de pi6a. Troceamos una pi6a y trituramos laparte central o cora4,n en la batidora. 7iltramos la pasta con un colador

para obtener el 4umo.


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$. %iltración de la solución &reparamos un erlenmeyer con un coladorencima y vertemos el contenido del vaso de precipitados. A continuaci,npreparamos un embudo con un papel de -ltro encima y vertemos lasoluci,n obtenida anteriormente recogiendo el l%quido en un tubo deensayo. #ste segundo proceso puede tardar unos minutos.

&. 'olución + "u#o de piña "on una pipeta &asteur cogemos 1ml de 4umode pi6a y lo a6adimos a )ml del e3tracto en un tubo de ensayo. De'amosque actue el 4umo en la soluci,n de : o =?.

(. 'olución + alco)ol: Sacamos el alco$ol del congelador y preparamos enun tubo de ensayo apro3imadamente el mismo volumen de alco$ol que dela soluci,n de interés.


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1*. ,ser-ación del D/


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0#agen 1. Separaci,n de la membrana plasmática( envolturanuclear y la liberaci,n del DNA

Explicaciones científicas del procedimiento

#l DNA se encuentra en el interior del núcleo de las células eucariotas

rodeado de prote%nas /$istonas0 que lo mantienen unido y compactado. &ara

poder aislarlo y observarlo se deben des$acer la membrana plasmática y laenvoltura nuclear y también se precisa la desnaturali4aci,n de las prote%nas. A

continuaci,n se e3plicará qué pasos del procedimiento e3plicado

anteriormente son los encargados de reali4ar estas funciones y también se

aclarará el por qué de cada paso.

5 Trituraci,n del plátano Encrementar el área super-cial del plátano ayuda a

$acer la superf%cie de la membrana más fácil de disolver y también permite

una absorci,n más efecitva del calor y de las soluciones que se a6adirán.

5 Detergente as membranas de las células están formadas por dos capas de

l%pidos con prote%nas transmembrana a través de estas. #l detergente ayuda a

romper la bicapa de fosfol%pidos de las membranas plasmáticas y la envoltura

nuclear / Imagen 10. os l%pidos de la membrana se descomponen debido al

detergente que des$ace las uniones que mantienen la membrana 'unta.

"uando el detergente se pone en conacto con los l%pidos éstos se separan de la

membrana rompiéndola. a estructura de los l%pidos es similar a la del

detergente y eso $ace que se combinen( formando una burbu'a de detergente

y l%pidos / Imagen 20.

Imagen 2. Formación de burbujas entre el detergente y los fosfolípidos


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5 ;a6o caliente #ste paso se utili4a para liberar el DNA de sus barreras

protectoras. a incubaci,n se utili4a para acelerar el proceso de rotura de las

membranas y para ayudar a disolver la bicapa de fosfol%pidos mediante la

desnaturali4aci,n de las prote%nas de membrana y rotura de los enlaces que

mantienen los fosfol%pidos unidos. #l calor ablanda2 la membrana.

5 ;a6o frio #l agua fr%a ayuda a mantener el DNA intacto durante el proceso de

e3tracci,n. #l enfriamiento de la soluci,n ayuda a prevenir la desnaturali4aci,n

que podr%a destruir el DNA si se e3pusiera al calor de manera prolongada

/protege el DNA de en4imas que pueden destruirlo como las DNAasas ya que la

refrigeraci,n ralenti4a las reacciones en4imáticas0.

5 @omogenei4aci,n continua "on este procedimiento conseguimos que la

temperatura /tanto el calor como el fr%o0 actúe sobre todo el contenido dele3tracto( y no s,lo sobre las partes en contacto con el vaso de precipitados.

También se consigue que la soluci,n detergente pueda actuar sobre todo el

triturado de plátano.

5 7iltraci,n #ste paso permite separar los restos de los te'idos del plátano y de

las células que $emos roto en los pasos anteriores. #se maerial no nos interesa

y quedará retenido en el colador /los restos más grandes0 o en el -ltro /restos

más peque6os0. #l l%quido -ltrado que conseguimos es el que contiene el DNA

libre de la membrana nuclear.

5 Fumo de pi6a as moléculas de DNA están rodeadas de prote%nas del tipo

$istonas( y para obtener un e3tracto más puro de DNA es necesario

eliminarlas. &ara ello $ay que utili4ar en4imas proteol%ticos. #l 4umo de pi6a

contiene bromela%na( una en4ima capa4 de $idroli4ar las proteinas y por tanto

capa4 de separar el DNA de las $istonas / Imagen 30. #ste proceso ayuda a que

el DNA se desempaquete y es más fácil su e3tracci,n.

Imagen 3. Rotura de las histonas

y liberación del DNA


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EXTRACCIÓN DE DNA 1$

5 Alco$ol congelado #l DNA es una molécula polar( pero la reacci,n con el etanol

a muy ba'a temperatura $ace que se vuelva apolar e insoluble en el etanol

formándose un precipitado 'usto entre la capa con etanol l%quido y la capa con

el e3tracto. #l DNA es el único componente de la soluci,n que no es soluble en

el etanol( y se $ace visible porque las diferentes cadenas se van aglutinando

entre s% al precipitar debido a la acci,n de fuer4as f%sicas. #l alco$ol es menos

denso que el agua del e3tracto y por eso Gota sobre la capa del e3tracto.

5 Sal en la soluci,n de e3tracci,n a molécula de DNA es soluble en agua y por

tanto invisible( pero si se pone en contacto DNA que $aya estado en un medio

salado y alco$ol fr%o el DNA se vuelve insoluble y precipita. &or lo tanto el agua

salada ayuda a la precipitaci,n en el alco$ol. a sal también ayuda a separar el

DNA de las $istonas.


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EXTRACCIÓN DE DNA 1

Valoración personal

Antes de descubrir este e3perimento no me $ubiera imaginado que e3traerDNA de un organismo vivo fuera tan sencillo y muc$o menos usandoingredientes que tenemos en casa como el 7airy( la sal o la pi6a.

#l procedimiento no permine una puri-caci,n completa del DNA( es más( loque observamos no es únicamente DNA sino una me4cla de ácidos nucleicos/NA y DNA0. &or una parte sé que $e obtenido DNA ya que es lo que dicen laspáginas Hebs que $e consultado y los resultados se corresponden con estas(pero por otro lado me sigue quedando la duda de si relamente los $ilitosblancos que observo son ácidos nucleicos. Supongo que necesitar%a reali4arotro protocolo que me permitiera te6ir espec%-camente acidos nucleicos yestar%a bien si dispusiera del material necesario para manipularlo y reali4armás e3perimentos con el. A pesar de esto me $a gustado reali4ar une3perimento en casa y( además( en menos de una $ora.

A partir de aqu% me surgen dudas como por e'emplo( Isi $ubiera usado otroorganismo con más cromosomas $ubiera obtenido más DNAJ o( Ipodr%areali4ar este e3perimento con células $umanas o se requieren procesos máscomple'osJ BTendré que seguir investigando para encontrar la soluci,nC


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Webgrafia

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bK

dnaLe3tractionLlab.$tml

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