Extraccin De ADN

UNIVERSIDAD TCNICA DE AMBATOFACULTAD DE CIENCIA E INGENIERA EN ALIMENTOSINGENIERA BIOQUMICAMDULO DE OPERACIONES UNITARIAS II

EXTRACCIN Y PURIFICACIN DE ADN POR CENTRIFUGACIN

Docente: Ing. Pablo AmanchaIntegrantes: Calero EstefanaChicaiza PedroDaz lvaroGuevara CristinaSexto BQ

EXTRACCIN Y PURIFICACIN DE ADN POR CENTRIFUGACIN

OBJETIVOSObjetivo General. Extraer ADN de una muestra de sangre utilizando el mtodo de purificacin centrifugacin.

Objetivos Especficos. Analizar los contaminantes que presenta una muestra de ADN.Identificar la pureza del ADN mediante la utilizacin de un espectrofotmetro de luz.

MARCO REFERENCIAL

Extraccin de ADNMayor cantidad de ADNLibre de protenas, lpidos e inhibidores de enzimas.

Etapas en la extraccin de ADN. Lisis celular. Los cidos nucleicos se liberan.Tampn de extraccin. EDTA, Tris-HCl y CTABEl detergente (CTAB)-lisis.CTAB captura los lpidos.Protenas entran en contacto con M.CSeparacin de protenas y lpidos Se separan por centrifugacin.Grupos fosfato. Fase acuosa.Protenas (Desnaturaliza) y Lpidos . Solventes orgnicos(Cloroformo).

Purificacin y Precipitacin del ADNSon eliminados los lpidos y las protenasAdicin de etanol y sol de iones de sodio o amonio(une grupos fosfato).ADN insolubleCentrifugacin(1800rpm). ADN- Fondo del tubo.Etanol (100%)2,5ml . Lavado (70%). Eliminacin por evaporacin.Redisolucin del ADN o Hidratacin.Cuantificacin de ADN.Espectrmetro.

Ingeniera gentica.

Medicina.

Aplicaciones del ADN en diferentes campos.

Bioinformtica

La nanotecnologa de ADN. FUNDAMENTOS TERICOSComnmente conocida como "huella gentica (Prueba de ADN).Herramienta muy utilizada.Se basa en la atraccin de los iones salinos hacia las cargas negativas del ADN.Se obtienen cidos nucleicos purificados a partir de diferentes fuentes mediante la reaccin de PCR.Es importante obtener y purificar la mayor cantidad de ADN obtenido, libre de otros compuestos. (ADN de alta calidad).Pruebas de ADN para:Estudios de filiacinCriminalsticaIdentificacin forenseCOSTOS DEL EXAMEN DE ADNFiscala General del Estado en Quito: No tiene costo

Cruz Roja Ecuatoriana: $480 (casos privados)$340 (casos judiciales)

Institucin privada:$400 aproximadamente

COMPARACION CON OTROS TIEMPOSEn 1928 Frederick Griffith, investigando una enfermedad infecciosa mortal, la neumona, estudi las diferencias entre una cepa de la bacteriaStreptococcus pneumoniaeque produca la enfermedad y otra que no la causaba.Griffith inyect las diferentes cepas de la bacteria en ratones. La cepa S mataba a los ratones mientras que la cepa R no lo haca.En los aos 40 Oswald Avery en compaia de Colin McLeod y Maclin McCarty continuaron con el experimento de Griffith,despusde haber realizado las mismas pruebas observaron que el responsable de la transformacin de las sepas cuando seconvertanen letales alser unidas era por el ADN y no por unaprotenacomo secreaen ese entonces, claro est que en esapocaa pesar de la evidencia que tena Avery no era lo suficientemente concluyente como para dejar de lado la idea de que el factor responsable era unaprotena.

DIMENSIONAMIENTOEsta tcnica por lo general es muy fcil de llevarla a cabo especialmente en los laboratorios de investigacin estudiantil ya que solo se requiere de alrededor de 4 o 5 horas para extraer el ADN y el tiempo vara de acuerdo a la estructura celular. Las personas encargadas de llevar a cabo esta tcnica de extraccin suelen trabajar con un para evitar contaminacin dentro de este proceso y dentro de un laboratorio en completa asepsia con materiales que no tienen gran costo con excepcin de la centrifuga; adems se usan bases para romper la pared celular de clulas vegetales y alcohol para precipitar el ADNASPECTOS IMPORTANTESAspectos ImportantesLa extraccin de ADN es un procedimiento importante de la biologa molecular. En la biologa molecular se estudia la bases moleculares de la vida; es decir, relaciona las estructuras de las biomolculas (ADN-ARN) con las funciones especficas que desempean en la clula y en el organismo.Equipos importantesEntre las mquinas utilizadas para extraer el ADN estn:"Batidoras", las cuales rompen las clulas para acceder al ADN, "Frasco de gel", el cual separa las secuencias de ADN en un gel usando una carga elctrica, y Centrifugacin, la cual hace girar una solucin de ADN y luego lo precipita (extrayndolo) utilizando sales. VENTAJASVentajas.La centrifugacin selectiva constituye un mtodo de purificacin eficaz.Suele asociarse a otros mtodos, como la cromatografa de columna centrifugada.Algunos procedimientos combinan la adsorcin selectiva en matriz cromatogrfica y la elucin por centrifugacin para purificar de forma selectiva un tipo de cido nucleicoEn su aplicacinIdentificacin de criminalesUna razn por la cual la extraccin de ADN es importante es porque proporciona el anlisis del ADN si hay algn caso de investigacin criminal que lo requiera. La mayora de las veces, un sospechoso es declarado culpable slo por el resultado que se obtiene del anlisis de muestras de ADN, especialmente cuando no se cuenta con otras evidencias.

Mtodo de extraccinTiempoMaterial de partida (mg)aConcentracin de ADN (g/L)bRendimiento (g ADN/mg de material de partida)cPurezadMtodo calentamiento30 min1,88 (0,34)0,5785 (0,111)15,81 (4,15)0,79Mtodo del fenol-cloroformo19 h1,89 (0,36)0,1305 (0,039)3,49 (0,92)1,96Mtodo del acetato de potasio4 h1,85 (0,20)0,1414 (0,027)3,81 (0,77)1,93Mtodo del acetato de potasio modificado4 h1,86 (0,32)0,2675 (0,028)7,38 (1,52)1,94Mtodo del CTAB4 h1,85 (0,38)0,1650 (0,025)4,67 (1,48)1,90Comparacin del tiempo de procesamiento, concentracin, rendimiento y pureza entre las muestras de ADN extradas por los diferentes mtodos.

CONCLUSIONESLa Extraccin de ADN es factible en una muestra de sangre utilizando el mtodo de purificacin centrifugacin el cual es muy eficaz al purificar de forma selectiva el tipo de cido nucleico.

Se analiz que los contaminantes presentes en una muestra de ADN son las protenas, lpidos y ARN.

Se identific la pureza del ADN mediante la estimacin de la concentracin de del ADN utilizando un espectrofotmetro de luz ultravioleta a una longitud de onda de 260 y 280 nm. As al establecer una relacin entre las dos concentracin 260nm (ADN)/280nm (Protenas) la pureza del ADN fue de 1,8. BIBLIOGRAFA

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