Diagnostico Virológico HIV, HCV, HBV en Diálisis. Interpretación de test Diagnósticos de...
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Diagnostico Virológico HIV, HCV, HBV en Diálisis. Interpretación de test Diagnósticos de Screening
Dra. Noemí del Pino | Diagnobio Laboratorio |
Congreso Argentino de Nefrología 2005
Pto. Iguazú - Misiones
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Población a estudiar : DIALISIS
– Los pacientes con insuficiencia renal crónico presentan alteraciones en la respuesta inmune tanto especifica como inespecífica.
– La hemodiálisis aumenta la exposición del paciente a:• Materiales biocompatibles (membranas)• Endotoxinas• Sustancias en el líquidos de diálisis (inductoras de
citoquinas)– Los reactantes de fase aguda están aumentados en
pacientes de HD, considerados crónicamente inflamados.– Recientemente se publicó un genotipo de la IL10
asociada a la baja producción de citoquinas por los monocitos, se correlaciona con la ausencia de respuesta a la vacuna de la Hepatitis B en HD. (Inmunology 2003).
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Los pacientes de HD son considerados población de riesgo, por lo que se recomienda testeo periódico para:
HCV HBV HIV
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Toma de muestras para test de Screening
• Pueden ser procesados en Suero o Plasma.
• Interferencias propias de las muestras:
– Eritrocitos en suspensión.
– Fibrina.
– Muestras lipémicas.
– Contaminación bacteriana.
– Congelado y descongelado de muestras.
– Muestra inactivadas.
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Recomendaciones del CDC sobre los Test de Screening
• No hay “standard” ni consensos para reportar los resultados en Test de Screening. (en distintas poblaciones)
• Existen variaciones sustanciales en los informes entre laboratorios:
– Seleccionar pruebas especificas y sensibles.– Tomar en cuenta las limitaciones del procedimiento.– Considerar los criterios de aceptación de cada Kit.– Interpretación de resultados.– Confirmar por métodos confirmatorios, en caso de resultados
repetidamente positivos con valores de corte bajos.
MMWR 2003 RECOMENDA
TION AND REPORT
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Característica de los Test de Screening
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Elección de Test de Screening
• Sensibilidad.
• Especificidad.
• Valor Predictivo: Expresa la probabilidad que un resultado muestre el verdadero status del paciente, pudiendo ser positivo o negativo,.
• Para test con alta sensibilidad y especificidad el valor predictivo depende de la prevalencia en la población a estudiar
• WHO recomienda tres criterios para la elección de los test
• I (objetivo para el uso del test)
• II (sensibilidad y especificidad)
• III (prevalencia en la población a estudiar)
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Interpretación de CUTOFF / Valor de Corte / S/CO
Significado S/CO: El valor de la densidad óptica de las muestras dividido la densidad óptica del CUT OFF establecido para el Test.
Muestra OD CUT OFF. OD
S/CO Avg. S/CO
1.595 0.623 2.56
1.243 0.543 2.29
1.271 0.543 2.34
2.40
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Interpretación de S/CO según:
• Consenso Argentino Hepatitis C (2004)Consenso Argentino Hepatitis C (2004)
Modelo de Informe:Método
Resultado informar S/CO => 2 (Pobla. Gral.)
• CDC Evaluación de S/CODependiendo de la
población en estudio y contexto clínico del paciente
MMWR 2003;52(No. RR-3):1-15.
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HCV
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Marcadores virales en Hepatitis C
• Directos:
– HCV RNA– HCcAg
• Indirectos:
– antiHCV IgG– antiHCV IgM
SCREENING Confirmación Monitoreo Pronostic.
Anti HCV +
Anti HCV (LIA, RIBA) +
HCV RNA (cualitativo) + +
HCV RNA (cuantitativo) + +
HCV genotipo, serotipo +
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Historia Natural de la infección de HCV
0
100
200
300
400
500
600
Normal
RNA (RT-PCR)
anti-HCV antibody
Symptoms/signs
Acute hepatitis Chronic liver disease/ cirrhosis
Weeks Months Years Decades
AL
T le
vel
20-30%
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Relevancia clínica de Ac anti HCV
• No distingue infección aguda de crónica.
• El Ac HCV core IgM no es marcador de HCV aguda.( este marcador esta presente en el 50-90% de HCV crónicos)
• Los test de Screening en suero no reconocen todas las cuasiespecies de HCV
No se ha identificado aún “Ac neutralizante anti-HCV”.
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Detección de marcadores del HCV
HCV RNA HCV Ag EIA 3.0 EIA 2.0 EIA 1.0
0 13 14 70 80 150 (days)
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Enzimoinmunoensayos para la detección de anti HCV
Genoma HCV
CDC
Core E1 E2/NS1 NS2 NS3 NS4 NS5
1º Gen
2º Gen
3º Gen
4º Gen
C-100-3
core NS3 NS4
core NS3 NS4 NS5
Distintos sistemas de expresión
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Test de Screening (anti HCV) relación de cut off en distintas poblaciones
Anti-HCV Study Group Total tested Average No. Screening RIBA results (%)HCV RNA Positive
Prevalence s/co ratio TestPositive
% Negative Ind** Positive (%)
9,5%Hemodialysis
patients 2936 Total 351 100 9.7 7.3 83 80.3
<3.8 45 12.8 64.4 33.3 2.2 4.4
=> 3.8 306 87.2 1.6 3.4 95 91.5
2 % (average)
Multiple groups 24.012 Total 689 100 26.9 7.3 65.9 41.6
with prevalences <3.8 231 33.5 78.8 16.9 4.3 3.7
ranging from 0.8% to 4.4% =>3.8 458 66.5 0.7 2.4 96.9 80.2
MMWR 2003
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Relación S/CO EIA test versus confirmación por RIBA
0
20
40
60
80
100
1.0-<3.0 3.0-<3.5 3.5-<3.8 >3.8
Per
cent
RIB
A P
osit
ive
Students HCWs NHANES IV STD Dialysis Hi-risk
Source: MMWR 2003;52(No. RR-3):1-15.
(N=231) (N=18) (N=21) (N=765)
EIA S/CO Ratio
_
13
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Comparación S/CO EIA test versus RIBA y NAT
En distintos grupos de prevalencia
0
20
40
60
80
100
Per
cent
RIB
A o
r N
AT
P
osit
ive
<3.8 >3.8
Screening-test-positive average s/co ratio
Source: MMWR 2003;52(No. RR-3):1-15.
* EIA 2.0 or EIA 3.0
_
Group prevalence 2% 10% 25%
RIBA positive
NAT positive
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Relación Anti-HCV CIA* S/CO Screening Test Positivos versus RIBA
0
20
40
60
80
100
Per
cent
RIB
A P
osit
ive
1.0-7.9 8.0
Screening-test-positive s/co ratio
2% 10% >20%
Source: MMWR 2003;52(No. RR-3):1-15
* VITROS Anti-HCV assay
Prevalence
>
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Conclusión:
• De los pacientes estudiados el 12.9 % anti HCV negativos resultaron HCV – RNA positivos.
• El HCV – RNA precede al anti HCV.
• La condición del estado inmunológico de los pacientes
Dialisys & Transplantation 1996
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HCV Falsos positivos
• Pacientes inmunocomprometidos• Todo resultados anti HCV por test de Screening con bajo S/CO
deben ser corroborados con un segundo test de screening y confirmados por NAT
CDC
HCV Falsos negativos
• Periodos de ventana.• Pacientes inmunocomprometidos.
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HCV: Algoritmo Laboratorio según S/CO
Screening TestScreening Test for Anti-HCVfor Anti-HCV
Negative (non-reactive)
REPORT
Positivelow s/co ratio§
Negative
Negative PositiveIndeterminate
Positive
Positive*high s/co ratio †
REPORT
RIBA™ for Anti-HCVCan be performed on same
sample collected for serology
REPORT
NAT for HCV RNACan only be performed if sample collected and handled in manner suitable for NAT
OR
REPORT REPORT
* Repeatedly reactive by EIA or reactive by CIA † Defined as >3.8 for EIA 2.0 or 3.0§ Defined as <3.8 for EIA 2.0 or 3.0 CDC
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HBV
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Marcadores de virus de la Hepatitis B
• IgM anti-HBc: Marcador de replicación viral.
• HBsAg: Marcador de infección.
• Anti-HBs: Marcador de inmunidad.
• HBcAg: No presente en suero.
• Anti-HBc: Marcador de infección pasada o actual.
• IgG anti-HBc: Memoria inmunológica.
• HBeAg:. Marcador de alto grado de infectividad.
• Anti-HBe: presente en estadios agudos y crónicos.
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Curso clínico del virus Hepatitis B
• Hepatitis B Aguda:– Ac HBc Ag IgM (marcador de replicación)– HBsAg (marcador de inefectividad)– HBV-DNA (marcador de replicación directo)– HBeAg (marcador de replicación solo en pacientes infectados con
cepas salvajes del HBV)
• Hepatitis B Crónica:– HBsAg.– Ac anti HBC Total (IgG – IgM)– Ac anti HBs
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Interpretación de presencia de anticuerpo anti-HBc positivo como único marcador de
Hepatitis B
• Sensibilidad insuficiente en los test de diagnostico para detectar Ac anti HBs.
• Hepatitis B en el pasado.
• Niveles no detectables de HBs Ag o portadores inactivos.
• Falso positivo anti-HBc
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![Page 28: Diagnostico Virológico HIV, HCV, HBV en Diálisis. Interpretación de test Diagnósticos de Screening Dra. Noemí del Pino | Diagnobio Laboratorio | Congreso.](https://reader036.fdocuments.in/reader036/viewer/2022062623/5528bde8497959977d8fda9d/html5/thumbnails/28.jpg)
Infección oculta del virus de la Hepatitis B en pacientes hemodialisados (Minuk, G et al
Hepatology 2004)
• 241 pacientes HD estudiados: Ac HBc Positivo
– 2 (0.8%) HBsAg (+)
– 239 HBsAg (-)
• 9 HBV-DNA (+) (3.8%) Baja Carga Viral
– 7 Mutaciones (sG145R)
Conclusión: La prevalencia en este estudio de HBV oculto fue (3.8%) asociada a baja carga viral y alta prevalencia de mutantes (sG145R)
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HBV Oculto en Donantes de Sangre
15511 Donantes (1995 – 1996)
434 Ac anti HBc (+) Recitados
167 Concurrieron a Consulta.
Ac anti HCV (+)
3 (2%)
Ac anti HBs (+)
142 (85%)
Ac anti HBc (+) – Ac anti HBs (-)
25
6 (-) 8 Rta. a la vacuna
14/25 Falsos Positivos
Fundación Favaloro
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• Conclusión: Viremia oculta por virus B aparece frecuentemente en pacientes anticore + con anti HbsAg +, que tienen además viremia positiva para hepatitis C, si bien es probable que no sean infectantes. Esto refuerza el concepto que deben priorisarse normas de bioseguridad sobre aislamiento de los pacientes con hepatitis C en las salas de diálisis.
Virus de la hepatitis B oculto en pacientes portadores de hepatitis C en hemodiálisis
Anti HBs Hbcore HBV DNA HCV RNA Anti HCV
BO 89 Pos 29 Pos Pos Pos
PJ Neg Pos 122 Pos Pos Pos
CJ Pos 105 Pos 3 Pos Pos Pos
IA Pos> 150 Pos 7 Pos Neg Pos
CC Pos> 150 Neg Pos Pos Pos
LL Pos 72 Neg Pos Neg 2.92
CJ >150 Pos 8 Pos Pos Pos
PC >150 Pos 7 Pos Neg Pos
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Investigación HBV-DNA en pacientes de HD anti HBc Positivos
19 pacientes DPCA
107 pacientes HD23 HBC (+)
23 DNA- HBV (-)
Ac anti HBs neg. 6
Congreso Argentino de Nefrología 1996
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Marcadores Serológicos Inusuales
Anti - HBC
AcHBC HBSAg anti HBS
- + +/-
+ - -
Marcadores Específicos HBeAg anti HBe anti HBcIgM
- + +
+ + -
Fuente: CDC
Mutación Core/precore?
Falso positivo HBC (mutacion HBSAg?)
HBV antigeno Mutación precore/core con reactivacion?
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Utilidad Clínica de los marcadores del HBV
• Ac anti HBcore en bancos de sangre se usa como marcador subrogante ante de la infección por HIV y HBV, ya que puede estar presente durante el periodo
de ventana de la infección aguda HBV luego de la desaparición de HBsAg pero antes de la aparición de Ac protectores anti HBs.
• Se ha demostrado que una proporción de anti HBcore positivos son virémicos De allí la utilidad de esta prueba en banco de sangre y población de riesgo.
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Utilidad Clínica de los marcadores del HBV (2)
• Estudios sobre pacientes en HD los cuales muestran compromiso del sistema inmune debido a uremia crónica, la relación entre ALT y actividad de HBsAg en HD es imperfecta.
– La respuesta inmune celular juega un papel crucial por lo que el aumento de ALT es intermitente, la carga viral del HBV fluctúa.
Neophron 1995
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Limitaciones de los Test para HBsAg
• Pueden arrojar resultados FALSOS NEGATIVOS en:– Métodos comerciales de baja sensibilidad.
– HBsAg con niveles por debajo del limite de detección (portadores inactivos).
– Según publicaciones recientes los pacientes con Ac anti HBc como único marcador puede ser considerado portador con baja viremia.
– Variantes del virus no reconocidos por los Test empleados en el diagnostico .
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![Page 37: Diagnostico Virológico HIV, HCV, HBV en Diálisis. Interpretación de test Diagnósticos de Screening Dra. Noemí del Pino | Diagnobio Laboratorio | Congreso.](https://reader036.fdocuments.in/reader036/viewer/2022062623/5528bde8497959977d8fda9d/html5/thumbnails/37.jpg)
HIV
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Test de Screening para HIV
• Falsos Positivos:– Tanto en técnicas EIA como WB el rango descripto de falsos positivos
(0.0004% a 0.0007%) (N. Engl I.Med 1988).
– Autoanticuerpos (enfermedades autoinmunes)– Inmunosupresión– Pacientes expuestos recientemente al virus Eptein Barr.– Pacientes tratados con heparina, se pueden coagular parcialmente y
producir resultados erróneos debido a la presencia de fibrina.– Tomar muestras antes de la terapia con heparina o en tubos con
anticoagulante.– Muestra hemolisados y/o lipémicas.
• Periodo de Ventana (11 a 22 días):– 0.3 % en población de alta prevalencia.– < 0.005 % en población de baja prevalencia.
• Respuesta atípica del huesped por causas desconocidas (AIDS 1995, MMWR 1996).• Agammaglobulina.• Subtipos O en HIV2 (JANAT 1994) (MMWR1996)
Resultados Falsos Negativos:
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Detección de marcadores del HIV
HIV RNA P24 Ag EIA 3.0
0 11 16 22 (days)
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HIV markers during early infectionHCV RNA (plasma)
HIV Antibody
11
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
HIV p24 Ag16 22
5 Days6 Days
Theoretical Infectivity Day 0HIV RNA Day 11HIV p24 Ag Day 16HIV Antibody Day 22
DT = 21.5 hrs
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Resumen y Conclusiones
• Seleccionar test de alta sensibilidad y especificidad.
• Tomar en cuenta las interferencias propias de las muestras y el estado inmune del paciente.
• Informar los resultados con, método utilizado, valor S/CO e interpretación del mismo (positivos – negativos).
• Evaluar los test de screening y sus valores de corte en distintas poblaciones. (de alto riesgo – bajo riesgo).
• Seria de suma utilidad un “consenso sobre diagnostico virológico en diálisis” a fin de estandarizar los informes de laboratorio y establecer las limitaciones de los test de screening comercializados en nuestro país.