What went wrong in Gothenburg?or
Why is it so hard to count platelets…
Stefan Jacobsson
överläkareKlinisk kemi, Sahlgrenska Universitetssjukhuset
…because they are so peculiar!
JCB9909028.V1.mov
Identification and quantification of intermediates in platelet release by immunofluorescence
microscopy.
Thon J N et al. J Cell Biol 2010;191:861-874
© 2010 Thon et al.
Direct visualization of proplatelet/platelet release in culture.
Thon J N et al. J Cell Biol 2010;191:861-874
© 2010 Thon et al.
Organization of the cytoskeleton in the mature platelet and proplatelet.
Hartwig J et al. J Thromb Haemost 2003;1:1580-1586© 2003 Hartwig et al.
Bending and branching of mouse proplatelets.
Hartwig J et al. J Thromb Haemost 2003;1:1580-1586© 2003 Hartwig et al.
α-Granule delivery to the proplatelet tip.
Hartwig J et al. J Thromb Haemost 2003;1:1580-1586© 2003 Hartwig et al.
Even more strange in the disease state…
Platelets are so diverse…
• In the blood:
– Differ already as newborns
– Of different age
– Of different fate
• In the sample:
– Swell
– Partially activated
Heterogenous:
Size, form, content
Measuring characteristics
So we should validate the platelet counting
performance with normal and pathological platelets
”Procedur för validering vid byte av metod, analys kit,
instrument etc” Id:AX0197 (Utför relevanta avsnitt).Datum
(utförande)
Bilaga nr Sign
Om resultaten inte finns som kopplade godkända pdf dokument i RMT+ så skall de skannas
och pdf kopplas till detta dokument
Selektivitet/specificitet
Arbetsområde (tekniskt intervall)
Interferenser
Carry over (smitta mellan prover/ mellan reagens)
Linearitet
Detektionsgräns/kvantiteringsgräns
Utbyte
Jämförelse patientprover
Inomserie variation *
Total variation *
Referensintervall (byte av) *
Backup (reserv) metod/instrument
2. Validering av metod
OptSapph vs ADVIA, PLT, SU
OptSapph vs ADVIA, PLT, ÖS
OptSapph vs ADVIA, low PLT, SU
OptSapph vs ADVIA, low PLT, SU
OptSapph vs ADVIA, low PLT, SU
OptSapph vs ADVIA, low PLT, ÖS
OptSapph vs ADVIA, low PLT
ImmCD61 vs ADVIA, low PLT
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
1 2 3 4
CD61
Optik S
Optik A
ADVIA vs ADVIA, PLT
Analys diff i enheter mot ref. instr.
Välj referensinstrument eller mv från listan
-60,00
-40,00
-20,00
0,00
20,00
40,00
60,00
150,0 200,0 250,0 300,0 350,0 400,0 450,0
Analys och enhet
Anal
ys
diff
i en
hete
r
M1190 MIKROS S3609 S3611 S3612
Ö2701 Ö2702
ADVIA vs ADVIA, PLT
TPK diff i enheter mot ref. instr.
Välj referensinstrument eller mv från listan
-40,00
-30,00
-20,00
-10,00
0,00
10,00
20,00
30,00
40,00
50 100 150 200 250 300 350 400
TPK 10E9/L
TP
K
dif
f i en
het
er
M1190
MIKROS
S3611
S3612
Ö2701
Carry over, PLT
Sysmex test XT-200i Operator's Guide
(L1 - L3) / (H3 - L3) (L1 - L3) / H1
H1 H2 H3 L1 L2 L3 % Carry over % Carry over
1045 1008 1039 12 13 14 -0,195% -0,191%
971 959 950 14 13 9 0,531% 0,515%
1063 1062 1059 16 7 8 0,761% 0,753%
876 877 881 21 18 18 0,348% 0,342%
697 702 685 21 19 15 0,896% 0,861%
542 547 531 11 10 10 0,192% 0,185%
What we found, in short…
• Positive bias
• Significant carry over
• Difficulties in harmonizing instruments
How did Siemens explain all this
• Manufacturing flaws
• Installation adjustments suboptimal
• Calibration suboptimal
• Calibrator bias
– Reference method deviations
• Optical alignment material malfunctioning
• Method adjustments necessary
Platelet count – yearly mean values
Preliminary results for 2010
-6
-4
-2
0
2
4
6
8
10
12
2005 2006 2007 2008 2009 2010
Me
an y
ear
ly d
evi
atio
n (%
) fro
m s
urv
ey
me
an
ADVIA 120 ADVIA 2120 ADVIA 2120i
Kalibrering, specifikation
Alla tilldelade värden för ADVIA SETpoint Hematology-kalibrator och ADVIA TESTpoint
Hematology-kontroller är baserade på NISTs, ICSHs eller NCCLSs rekommenderade
procedurer eller godkända referensprocedurer och material.
...
Referensräkningen för PLT utförs med hemocytometer och faskontrastmikroskop. Makro-
spädningen för PLT är 1:125 med 1 % ammoniumoxalat som spädningsvätska.
De systemspecifika värdena (SSV) har tilldelats för ADVIA 120 SETpoint Hematology-
kalibrator- och ADVIA 120 TESTpoint Hematologykontroll-produkterna genom att
analysera varje lotnummer i ett ADVIA 2120/2120i Hematology-system som kalibrerades
med färska, normala helblodsprov som tilldelats värdena RBC, WBC, PLT, HCT och
HGB med hjälp av den metod som beskrivs ovan.
ADVIA 120 OPTIpoint-värdena tilldelas med ett ADVIA 2120/2120i Hematology-system
efter att systemet har standardiserats med tre referensoljor.
Carry over, specifikation
Prestandaegenskaper: Carryover
Prov-carryover för ADVIA 120 Hematology-systemet uppmättes för WBC, RBC, HGB och
PLT. Prestandaspecifikationen för carryover är ≤1% för samtliga parametrar.
Carryover utvärderades i ADVIA 120 Hematology-systemet genom aspirering av en hög
pool förberedd för linjär testning, följt av 3 aspirationer av cellfri plasma.
Procentuell carryover beräknades som:
% carryover = [(L1 - L3) / H] x 100
L1 = räkningen för den första aspirationen av cellfri plasma
L3 = räkningen för den tredje aspirationen av cellfri plasma
H = räkningen från den höga poolen
Följande resultat erhölls:
Parameter Observerad carryover
WBC 0,4 %
RBC 0,2 %
HGB 0,2 %
PLT 0,1 %
Ongoing workMPV, PDV, pathological samples…
-2
-1,5
-1
-0,5
0
0,5
1
6,00 6,50 7,00 7,50 8,00 8,50 9,00 9,50 10,00
MPV (mv)
Dif
fere
ns C
elld
yn
- A
DV
IA
Thank You for listening!
And thanks to all my coworkers at:
Sahlgrenska Universitetssjukhuset
SÄS, NÄL, Kungälvs sjukhus
Stefan Jacobsson
Top Related