What went wrong in Gothenburg?or

Why is it so hard to count platelets…

Stefan Jacobsson

överläkareKlinisk kemi, Sahlgrenska Universitetssjukhuset

…because they are so peculiar!

JCB9909028.V1.mov

Identification and quantification of intermediates in platelet release by immunofluorescence

microscopy.

Thon J N et al. J Cell Biol 2010;191:861-874

© 2010 Thon et al.

Direct visualization of proplatelet/platelet release in culture.

Thon J N et al. J Cell Biol 2010;191:861-874

© 2010 Thon et al.

Organization of the cytoskeleton in the mature platelet and proplatelet.

Hartwig J et al. J Thromb Haemost 2003;1:1580-1586© 2003 Hartwig et al.

Bending and branching of mouse proplatelets.

Hartwig J et al. J Thromb Haemost 2003;1:1580-1586© 2003 Hartwig et al.

α-Granule delivery to the proplatelet tip.

Hartwig J et al. J Thromb Haemost 2003;1:1580-1586© 2003 Hartwig et al.

Even more strange in the disease state…

Platelets are so diverse…

• In the blood:

– Differ already as newborns

– Of different age

– Of different fate

• In the sample:

– Swell

– Partially activated

Heterogenous:

Size, form, content

Measuring characteristics

So we should validate the platelet counting

performance with normal and pathological platelets

”Procedur för validering vid byte av metod, analys kit,

instrument etc” Id:AX0197 (Utför relevanta avsnitt).Datum

(utförande)

Bilaga nr Sign

Om resultaten inte finns som kopplade godkända pdf dokument i RMT+ så skall de skannas

och pdf kopplas till detta dokument

Selektivitet/specificitet

Arbetsområde (tekniskt intervall)

Interferenser

Carry over (smitta mellan prover/ mellan reagens)

Linearitet

Detektionsgräns/kvantiteringsgräns

Utbyte

Jämförelse patientprover

Inomserie variation *

Total variation *

Referensintervall (byte av) *

Backup (reserv) metod/instrument

2. Validering av metod

OptSapph vs ADVIA, PLT, SU

OptSapph vs ADVIA, PLT, ÖS

OptSapph vs ADVIA, low PLT, SU

OptSapph vs ADVIA, low PLT, SU

OptSapph vs ADVIA, low PLT, SU

OptSapph vs ADVIA, low PLT, ÖS

OptSapph vs ADVIA, low PLT

ImmCD61 vs ADVIA, low PLT

0

2

4

6

8

10

12

14

16

18

1 2 3 4

CD61

Optik S

Optik A

ADVIA vs ADVIA, PLT

Analys diff i enheter mot ref. instr.

Välj referensinstrument eller mv från listan

-60,00

-40,00

-20,00

0,00

20,00

40,00

60,00

150,0 200,0 250,0 300,0 350,0 400,0 450,0

Analys och enhet

Anal

ys

diff

i en

hete

r

M1190 MIKROS S3609 S3611 S3612

Ö2701 Ö2702

ADVIA vs ADVIA, PLT

TPK diff i enheter mot ref. instr.

Välj referensinstrument eller mv från listan

-40,00

-30,00

-20,00

-10,00

0,00

10,00

20,00

30,00

40,00

50 100 150 200 250 300 350 400

TPK 10E9/L

TP

K

dif

f i en

het

er

M1190

MIKROS

S3611

S3612

Ö2701

Carry over, PLT

Sysmex test XT-200i Operator's Guide

(L1 - L3) / (H3 - L3) (L1 - L3) / H1

H1 H2 H3 L1 L2 L3 % Carry over % Carry over

1045 1008 1039 12 13 14 -0,195% -0,191%

971 959 950 14 13 9 0,531% 0,515%

1063 1062 1059 16 7 8 0,761% 0,753%

876 877 881 21 18 18 0,348% 0,342%

697 702 685 21 19 15 0,896% 0,861%

542 547 531 11 10 10 0,192% 0,185%

What we found, in short…

• Positive bias

• Significant carry over

• Difficulties in harmonizing instruments

How did Siemens explain all this

• Manufacturing flaws

• Installation adjustments suboptimal

• Calibration suboptimal

• Calibrator bias

– Reference method deviations

• Optical alignment material malfunctioning

• Method adjustments necessary

Platelet count – yearly mean values

Preliminary results for 2010

-6

-4

-2

0

2

4

6

8

10

12

2005 2006 2007 2008 2009 2010

Me

an y

ear

ly d

evi

atio

n (%

) fro

m s

urv

ey

me

an

ADVIA 120 ADVIA 2120 ADVIA 2120i

Kalibrering, specifikation

Alla tilldelade värden för ADVIA SETpoint Hematology-kalibrator och ADVIA TESTpoint

Hematology-kontroller är baserade på NISTs, ICSHs eller NCCLSs rekommenderade

procedurer eller godkända referensprocedurer och material.

...

Referensräkningen för PLT utförs med hemocytometer och faskontrastmikroskop. Makro-

spädningen för PLT är 1:125 med 1 % ammoniumoxalat som spädningsvätska.

De systemspecifika värdena (SSV) har tilldelats för ADVIA 120 SETpoint Hematology-

kalibrator- och ADVIA 120 TESTpoint Hematologykontroll-produkterna genom att

analysera varje lotnummer i ett ADVIA 2120/2120i Hematology-system som kalibrerades

med färska, normala helblodsprov som tilldelats värdena RBC, WBC, PLT, HCT och

HGB med hjälp av den metod som beskrivs ovan.

ADVIA 120 OPTIpoint-värdena tilldelas med ett ADVIA 2120/2120i Hematology-system

efter att systemet har standardiserats med tre referensoljor.

Carry over, specifikation

Prestandaegenskaper: Carryover

Prov-carryover för ADVIA 120 Hematology-systemet uppmättes för WBC, RBC, HGB och

PLT. Prestandaspecifikationen för carryover är ≤1% för samtliga parametrar.

Carryover utvärderades i ADVIA 120 Hematology-systemet genom aspirering av en hög

pool förberedd för linjär testning, följt av 3 aspirationer av cellfri plasma.

Procentuell carryover beräknades som:

% carryover = [(L1 - L3) / H] x 100

L1 = räkningen för den första aspirationen av cellfri plasma

L3 = räkningen för den tredje aspirationen av cellfri plasma

H = räkningen från den höga poolen

Följande resultat erhölls:

Parameter Observerad carryover

WBC 0,4 %

RBC 0,2 %

HGB 0,2 %

PLT 0,1 %

Ongoing workMPV, PDV, pathological samples…

-2

-1,5

-1

-0,5

0

0,5

1

6,00 6,50 7,00 7,50 8,00 8,50 9,00 9,50 10,00

MPV (mv)

Dif

fere

ns C

elld

yn

- A

DV

IA

Thank You for listening!

And thanks to all my coworkers at:

Sahlgrenska Universitetssjukhuset

SÄS, NÄL, Kungälvs sjukhus

Stefan Jacobsson