TLC -Cromatografia de camada fina · Fracos silica gel hidróxido de cálcio talco alum ina...

23
TLC - Cromatografia de camada fina Cromatografia de camada fina TLC - Thin Layer Chromatography planar / adsorção / zonal / analítica possibilidade de desenvolvimento bidimensional e de quantificação Fases estacionárias Adsorventes / diferentes de absorventes actividade de um adsorvente é determinada pela sua área superficial, a sua natureza actividade de um adsorvente é determinada pela sua área superficial, a sua natureza química e o arranjo geométrico dos átomos superficiais propriedades de um adsorvente: não deve dissolver na fase eluente não deve reagir com a fase móvel não deve reagir com os solutos deve dar resultados reproductíveis o processo de adsorção deve ser reversível o adsorvente não deve ser muito caro distância percorrida pelo soluto R f = ----------------------------------------------------------- distância percorrida pela frente do solvente Camada de fase estacionária : 250 μ μ μm

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Page 1: TLC -Cromatografia de camada fina · Fracos silica gel hidróxido de cálcio talco alum ina carbonato de calcio am ido carvão activado m agnésia sucrose Ácidos : sílica (separa

TLC

-C

rom

ato

gra

fia

de

ca

ma

da

fin

a

Cro

ma

tog

rafi

a d

e c

am

ad

a f

ina

TLC

-T

hin

La

yer

Ch

rom

ato

gra

ph

y

pla

na

r /

ad

sorç

ão

/ z

on

al

/ a

na

líti

ca

po

ssib

ilid

ad

e d

e d

ese

nvo

lvim

en

to b

idim

en

sio

na

l e

de

qu

an

tifi

caçã

o

Fase

s e

sta

cio

ria

s

Ad

sorv

en

tes

/ d

ife

ren

tes

de

ab

sorv

en

tes

act

ivid

ad

e d

e u

m a

dso

rve

nte

é d

ete

rmin

ad

a p

ela

su

a á

rea

su

pe

rfic

ial,

a s

ua

na

ture

za

act

ivid

ad

e d

e u

m a

dso

rve

nte

é d

ete

rmin

ad

a p

ela

su

a á

rea

su

pe

rfic

ial,

a s

ua

na

ture

za

qu

ímic

a e

o a

rra

njo

ge

om

étr

ico

do

s á

tom

os

sup

erf

icia

is

pro

pri

ed

ad

es

de

um

ad

sorv

en

te:

o d

ev

e d

isso

lve

r n

a f

ase

elu

en

te

o d

ev

e r

ea

gir

co

m a

fa

se m

óv

el

o d

ev

e r

ea

gir

co

m o

s so

luto

s

de

ve

da

r re

sult

ad

os

rep

rod

uct

íve

is

o p

roce

sso

de

ad

sorç

ão

de

ve

se

r re

ve

rsív

el

o a

dso

rve

nte

o d

ev

e s

er

mu

ito

ca

ro

dist

ânc

ia p

erc

orrid

a p

elo

sol

uto

Rf=

---

----

----

----

----

----

----

----

----

----

----

----

----

----

----

dist

ânc

ia p

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orrid

a p

ela

fre

nte

do

solv

ent

e

Cam

ada

de fa

se e

stac

ioná

ria :

250 µ µµµm

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TLC

-a

dso

rve

nte

s

Po

lare

s

vári

os

óxi

do

s in

org

ân

ico

s (

síli

ca,

alu

min

a,

ma

gn

ési

a)

ord

em

d

e e

luiç

ão

do

s so

luto

s se

gu

e a

po

lari

da

de

de

ste

s -

solu

tos

po

lare

s sã

o f

ort

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en

te

reti

do

s

–h

idro

carb

on

eto

s sa

tura

do

s <

hid

roca

rbo

ne

tos

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tico

s <

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res

< é

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res

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lde

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s ≈

ceto

na

s <

álc

oo

is ≈

am

ina

s <

am

ida

s <

áci

do

s ca

rbo

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cos

o-p

ola

res

carv

ão

act

iva

do

ord

em

de

elu

içã

o s

eg

ue

a p

ola

riza

bil

ida

de

da

s m

olé

cula

so

rde

m d

e e

luiç

ão

se

gu

e a

po

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zab

ilid

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e d

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mo

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las

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AIS

RE

TID

OS

-co

mp

ost

os

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tico

s, h

om

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mo

lecu

lar,

mo

lécu

las

com

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mo

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ha

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én

io o

u e

nxo

fre

Fo

rte

sM

éd

ios

Fra

co

s

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ge

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xid

o d

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iota

lco

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min

ac

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on

ato

de

ca

lcio

am

ido

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rvã

o a

cti

va

do

ma

gn

és

ias

uc

ros

e

Áci

dos

: sí

lica

(sep

ara

ácid

os)

Bás

icos

: Alu

min

a/ m

agn

ésia

(sep

ara

bas

es

Page 3: TLC -Cromatografia de camada fina · Fracos silica gel hidróxido de cálcio talco alum ina carbonato de calcio am ido carvão activado m agnésia sucrose Ácidos : sílica (separa

TLC

-a

dso

rve

nte

s

Síl

ica

ge

l

sup

ort

e m

ais

po

pu

lar

(5-1

0 µ

m)

pre

pa

rad

a p

or

hid

róli

se d

o s

ilic

ato

de

dio

seg

uid

a d

e c

on

de

nsa

ção

e p

oli

me

riza

ção

act

ivid

ad

e r

esu

lta

da

pre

sen

ça d

os

gru

po

s S

i --

OH

(si

lan

ol)

à s

up

erf

ície

con

tro

lo d

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ctiv

ida

de

po

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qu

eci

me

nto

du

ran

te a

pre

pa

raçã

o

act

iva

ção

re

com

en

da

da

(1

10

º /

30

-6

0 m

in)

Síl

ica

ge

l é

lig

eir

am

en

te á

cid

a

OS

iO

Si

O

OH

OH

OO

Síl

ica

ge

l é

lig

eir

am

en

te á

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a

est

eró

ide

s, a

min

o-á

cid

os,

álc

oo

is,

hid

roca

rbo

ne

tos,

líp

ido

se

vit

am

ina

s

Pre

pa

raçã

o

50

g /

60

ml

ág

ua

de

stil

ad

a

-e

spa

lha

r ra

pid

am

en

te /

se

car

/ a

ctiv

ar

H -

sem

im

pre

gn

an

te

G -

com

13

% d

e s

ulf

ato

de

lcio

F2

54

-co

m

ind

ica

do

r fl

uo

resc

en

te

imp

reg

na

ção

co

m n

itra

to d

e p

rata

(2

0%

) -

sep

ara

ção

de

co

mp

ost

os

com

du

pla

s li

ga

çõe

s

(me

no

s d

up

las

> R

f)

Page 4: TLC -Cromatografia de camada fina · Fracos silica gel hidróxido de cálcio talco alum ina carbonato de calcio am ido carvão activado m agnésia sucrose Ácidos : sílica (separa

TLC

-a

dso

rve

nte

s

Alu

min

a

Ain

da

mu

ito

co

mu

m

Pre

pa

rad

a p

or

con

de

nsa

ção

do

hid

róxi

do

de

alu

mín

io h

idra

tad

o

A a

ctiv

ida

de

de

pe

nd

e q

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r d

os

áto

mo

s d

e o

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én

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r d

os

de

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mín

io

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is d

ifíc

il d

e p

rep

ara

r d

ad

o q

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ge

ralm

en

te c

on

tem

ma

is i

mp

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zas

o c

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teú

do

de

ág

ua

é m

uit

o i

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ort

an

te p

ara

ob

ter

resu

lta

do

s re

pro

du

ctív

eis

act

iva

ção

a 7

5 -

11

0 º

/ 3

0 -

60

min

Al

Al

Al

O

O

O

O

O

O

O

O

Po

de

se

r o

bti

da

co

m s

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erf

ície

áci

da

, n

eu

tra

ou

sica

(a

ma

is c

om

um

)

sep

ara

ção

de

co

ran

tes,

vit

am

ina

s e

alc

aló

ide

s

Pre

pa

raçã

o

30

g /

40

ml

de

ág

ua

de

stil

ad

a

-e

spa

lha

r ra

pid

am

en

te /

se

car

e a

ctiv

ar

po

de

co

nte

r im

pre

gn

an

tes

e i

nd

ica

do

res

de

flu

ore

scê

nci

a

Page 5: TLC -Cromatografia de camada fina · Fracos silica gel hidróxido de cálcio talco alum ina carbonato de calcio am ido carvão activado m agnésia sucrose Ácidos : sílica (separa

TLC

-a

dso

rve

nte

s

Ce

lulo

se

ma

teri

al

org

ân

ico

dif

ere

nte

da

cro

ma

tog

rafi

a d

e p

ap

el

pa

pe

l -

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rese

nta

esp

aço

s v

azi

os

on

de

se

acu

mu

la o

so

lve

nte

-a

dif

usã

o l

ev

a a

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larg

am

en

to

da

s m

an

cha

s

celu

lose

-sã

o u

sad

as

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rtíc

ula

s p

eq

ue

na

s /

dis

trib

uiç

ão

ma

is r

eg

ula

r -

me

no

r d

ifu

são

Ce

lulo

se é

usa

da

pa

ra s

ep

ara

r co

mp

ost

os

hid

rofí

lico

sta

l co

mo

açú

care

s, a

min

cid

os,

es

ino

rgâ

nic

os

solú

veis

e á

cid

os

nu

clé

ico

s -

solu

çõe

s a

qu

osa

s

ge

ralm

en

te a

de

rem

mu

ito

fo

rte

me

nte

à s

ílic

a e

alu

min

ag

era

lme

nte

ad

ere

m m

uit

o f

ort

em

en

te à

síl

ica

e a

lum

ina

Tal

com

o e

m p

ap

el

o m

eca

nis

mo

é p

red

om

ina

nte

me

nte

de

pa

rtil

ha

Pre

pa

raçã

o

40

0 m

g a

mid

o /

10

ml

ág

ua

de

stil

ad

a +

90

ml

de

ág

ua

a f

erv

er

+ 2

0 g

de

ce

lulo

se

o g

rau

de

hid

rata

ção

de

pe

nd

e d

o t

em

po

de

ag

ita

ção

ag

ita

ção

du

ran

te m

uit

o t

em

po

le

va

à f

orm

açã

o d

e g

el

esp

alh

ar

rap

ida

me

nte

/ s

eca

r a

11

po

de

co

nte

r in

dic

ad

ore

s d

e U

V

Page 6: TLC -Cromatografia de camada fina · Fracos silica gel hidróxido de cálcio talco alum ina carbonato de calcio am ido carvão activado m agnésia sucrose Ácidos : sílica (separa

Pla

cas

com

erc

iais

Ad

sorv

en

tes

Síl

ica

; a

lum

ina

Su

po

rte

s

Vid

ro,

alu

mín

ioo

u p

lást

ico

(te

reft

ala

to d

e p

oli

eti

len

o)

Esp

ess

ura

0,2

5 m

m/

0,5

mm

/ 1

,0 m

m /

2,0

mm

Ma

ior

am

ost

ra e

xig

e m

aio

r e

spe

ssu

ra (

TLC

pre

pa

rati

va)

Act

iva

ção

Act

iva

ção

15

min

uto

s a

o a

r +

30

min

uto

s a

11

0 º

C

Na

lgu

ns

caso

s p

od

e e

leva

r-se

a t

em

pe

ratu

ra a

20

0 º

C (

4 h

ora

s) p

ara

ma

ior

act

iva

ção

Co

nse

rva

ção

Ap

ós

seca

ge

m /

act

iva

ção

as

pla

cas

de

vem

se

r g

ua

rda

da

s n

um

exc

ica

do

r

As

pla

cas

de

síl

ica

de

sact

iva

m-s

e m

uit

o

rap

ida

me

nte

50

% d

e a

ctiv

ida

de

pe

rde

-se

em

3 m

inu

tos

nu

ma

atm

osf

era

co

m 5

0%

de

hu

mid

ad

e

Page 7: TLC -Cromatografia de camada fina · Fracos silica gel hidróxido de cálcio talco alum ina carbonato de calcio am ido carvão activado m agnésia sucrose Ácidos : sílica (separa

TLC

–o

utr

os

ad

sorv

en

tes

Kie

selg

uh

r

Dia

tom

ite

-te

rra

de

dia

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áce

as

síli

ca c

om

plâ

nct

on

ma

rin

ho

(d

iato

ms)

ele

vad

a p

oro

sid

ad

e e

áre

a s

up

erf

icia

l -

mu

ito

usa

da

co

mo

aju

da

nte

de

fil

tra

ção

mu

ito

usa

da

co

mo

su

po

rte

de

fa

se e

sta

cio

ria

líq

uid

a -

pa

rtil

ha

Se

ph

ad

ex

ge

l de

xtra

n -

hid

rofí

lico

e n

eu

tro

ge

l de

xtra

n -

hid

rofí

lico

e n

eu

tro

ha

bit

ua

lme

nte

usa

do

na

fil

tra

ção

em

ge

l -

de

aco

rdo

co

m o

s p

eso

s m

ole

cula

res

Fase

re

ve

rsa

/ i

nv

ers

a

a s

ep

ara

ção

de

so

luto

de

po

lari

da

de

se

me

lha

nte

é d

ifíc

il c

om

síl

ica

ge

l m

esm

o p

ara

mo

lécu

las

de

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sos

mo

lecu

lare

s d

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ren

tes

é p

oss

íve

l a

lte

rar

a s

up

erf

ície

da

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ica

(O

H r

ea

ge

m c

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sil

an

os

org

ân

ico

s)

RP

-2,

RP

-8 ,

RP

-18

a f

ase

est

aci

on

ári

a o

rgâ

nic

a a

pre

sen

ta u

ma

re

ten

ção

pre

fere

nci

al

do

s co

mp

ost

os

o-

po

lare

s (f

ase

re

ve

rsa

) e

a s

ep

ara

ção

de

pe

nd

e d

os

pe

sos

mo

lecu

lare

s

a f

ase

vel

é p

ola

r (a

ceto

nit

rilo

)

cro

ma

tog

rafi

a d

e p

art

ilh

a

Page 8: TLC -Cromatografia de camada fina · Fracos silica gel hidróxido de cálcio talco alum ina carbonato de calcio am ido carvão activado m agnésia sucrose Ácidos : sílica (separa

TLC

-fa

se e

lue

nte

Ca

ract

erí

stic

as

-a

fa

se m

óve

l é

o c

om

po

ne

nte

de

ma

is f

áci

l su

bst

itu

içã

o

bo

a q

ua

lid

ad

e -

a c

om

po

siçã

o n

ão

de

ve v

ari

ar

de

lo

te p

ara

lo

te

o r

ea

ctiv

a

-d

e o

utr

o m

od

o o

s re

sult

ad

os

seri

am

dif

íce

is d

e i

nte

rpre

tar

ba

ixo

po

nto

de

eb

uli

ção

-p

refe

ríve

l p

ara

a s

eca

ge

m d

a p

laca

Alt

a p

ure

za (

An

ala

r) e

pre

ço r

azo

áve

l !!

Esc

olh

a

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elu

en

te d

eve

se

r a

ctiv

a (

re

tira

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so

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da

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se e

sta

cio

ria

) e

se

lect

iva

(se

pa

rar

do

is s

olu

tos

dif

ere

nte

s)d

ois

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s d

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ren

tes)

act

ivid

ad

e (

cap

aci

da

de

de

elu

içã

o)

em

re

lacç

ão

a s

ílic

a-g

el

ág

ua

> m

eta

no

l >

eta

no

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pro

pa

no

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pro

pa

no

na

> t

ricl

oro

me

tan

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dic

loro

me

tan

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be

nze

no

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eti

lbe

nze

no

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ricl

oro

eti

len

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te

tra

clo

rom

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no

>

cicl

oh

exa

no

> h

exa

no

Mis

tura

s d

e s

olv

en

tes

o m

ais

usu

al

-ca

pa

cid

ad

e d

e e

luiç

ão

o é

pro

po

rcio

na

l à

co

mp

osi

ção

am

ost

ra d

esc

on

he

cid

a

usa

r sí

lica

ge

l e

um

so

lve

nte

po

uco

po

lar

(pe

nta

no

)

acr

esc

en

tar

solv

en

te p

ola

r (2

, 4

, 8

, 1

6,

32

%)

Page 9: TLC -Cromatografia de camada fina · Fracos silica gel hidróxido de cálcio talco alum ina carbonato de calcio am ido carvão activado m agnésia sucrose Ácidos : sílica (separa

Se

pa

raçã

o d

e p

igm

en

tos

Page 10: TLC -Cromatografia de camada fina · Fracos silica gel hidróxido de cálcio talco alum ina carbonato de calcio am ido carvão activado m agnésia sucrose Ácidos : sílica (separa

rie

elu

otr

óp

ica

pa

ra a

dso

rve

nte

s p

ola

res

A e

scal

a va

i até

cer

ca d

e 0,75

pa

ra u

ma

plac

a de

síli

ca

Tabe

la d

efin

ida

para

pla

ca d

e al

umin

a

Page 11: TLC -Cromatografia de camada fina · Fracos silica gel hidróxido de cálcio talco alum ina carbonato de calcio am ido carvão activado m agnésia sucrose Ácidos : sílica (separa

Uso

de

mis

tura

s d

e m

istu

ras

de

so

lve

nte

s (s

ílic

a)

J.C

. To

uchs

tone

(P

ract

ice

of

TLC

)

Page 12: TLC -Cromatografia de camada fina · Fracos silica gel hidróxido de cálcio talco alum ina carbonato de calcio am ido carvão activado m agnésia sucrose Ácidos : sílica (separa

Uso

de

mis

tura

s d

e m

istu

ras

de

so

lve

nte

s (s

ílic

a)

J.C

. To

uchs

tone

(P

ract

ice

of

TLC

)

Page 13: TLC -Cromatografia de camada fina · Fracos silica gel hidróxido de cálcio talco alum ina carbonato de calcio am ido carvão activado m agnésia sucrose Ácidos : sílica (separa

Uso

de

mis

tura

s d

e m

istu

ras

de

so

lve

nte

s (s

ílic

a)

J.C

. To

uchs

tone

(P

ract

ice

of

TLC

)

Page 14: TLC -Cromatografia de camada fina · Fracos silica gel hidróxido de cálcio talco alum ina carbonato de calcio am ido carvão activado m agnésia sucrose Ácidos : sílica (separa

Exe

mp

lo d

e f

ase

s m

óve

is

Page 15: TLC -Cromatografia de camada fina · Fracos silica gel hidróxido de cálcio talco alum ina carbonato de calcio am ido carvão activado m agnésia sucrose Ácidos : sílica (separa

TLC

-a

spe

cto

s e

xpe

rim

en

tais

Pre

pa

raçã

o

pre

pa

rar

a m

istu

ra e

lue

nte

na

s p

rop

orç

õe

s a

de

qu

ad

as

ao

en

saio

satu

rar

a c

âm

ara

-m

an

ter

fech

ad

a e

à t

em

pe

ratu

ra d

o e

nsa

io

ev

ita

r e

vap

ora

ção

da

mis

tura

elu

en

te -

alt

era

ção

da

co

mp

osi

ção

con

tro

lar

o g

rau

de

hu

mid

ad

e d

a p

laca

Ap

lica

ção

da

am

ost

ra

usa

r m

icro

pip

eta

(1

-2

µl)

-n

ão

da

nif

ica

r o

su

po

rte

colo

car

a a

mo

stra

a c

erc

a d

e 1

,5 c

m d

a b

ase

-to

da

s a

am

ost

ras

na

m

esm

a li

nh

a

a m

an

cha

de

ve s

er

de

re

du

zid

as

dim

en

sõe

s (1

,5 m

m)

no

ca

so d

e a

mo

stra

s d

ilu

ída

s co

loca

r p

or

div

ers

as

ve

zas,

se

can

do

ap

ós

cad

a

ap

lica

ção

ev

ita

r q

ue

a m

an

cha

to

qu

e a

su

pe

rfíc

ie d

o s

olv

en

te (

5 -

8 m

m)

De

sen

vo

lvim

en

to

ma

nte

r a

te

mp

era

tura

de

ixa

r d

ese

nvo

lve

r o

cro

ma

tog

ram

a a

cerc

a d

e 3

cm

do

to

po

da

pla

ca

Re

ve

laçã

o

usa

r lu

z U

V (

25

4 /

36

6 n

m)

ou

re

vela

do

r a

de

qu

ad

o (

H2S

O4)

de

term

ina

r R

f, d

efi

nir

ta

ma

nh

o d

as

ma

nch

as

-q

ua

nti

fica

r se

de

sejá

vel

Page 16: TLC -Cromatografia de camada fina · Fracos silica gel hidróxido de cálcio talco alum ina carbonato de calcio am ido carvão activado m agnésia sucrose Ácidos : sílica (separa

Pla

ca d

e T

LC

Sa

tura

r a

ma

ra /

eq

uil

ibra

r a

pla

ca

Page 17: TLC -Cromatografia de camada fina · Fracos silica gel hidróxido de cálcio talco alum ina carbonato de calcio am ido carvão activado m agnésia sucrose Ácidos : sílica (separa

Efe

ito

da

in

satu

raçã

o d

a p

laca

Page 18: TLC -Cromatografia de camada fina · Fracos silica gel hidróxido de cálcio talco alum ina carbonato de calcio am ido carvão activado m agnésia sucrose Ácidos : sílica (separa

TLC

-m

au

s e

xem

plo

s

Po

lari

da

de

solu

to m

uit

o p

ola

r é

re

tid

o n

a o

rig

em

Am

ost

ra e

m d

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asi

a /

am

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ra m

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seca

de

ma

sia

da

am

ost

ra c

ria

ta

ilin

g /

am

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ra m

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seca

cri

a a

is

ma

ra m

al

satu

rad

a

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raçã

o in

sufi

cie

nte

le

va a

de

ma

sia

da

eva

po

raçã

o d

a f

ase

elu

en

te

Co

loca

ção

mu

ito

ba

ixa

/ d

em

asi

ad

a h

um

ida

de

am

ost

ra b

aix

a d

ifu

nd

e-s

e n

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ase

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en

te /

mu

ita

hu

mid

ad

e l

eva

a m

aio

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ifu

são

da

s a

mo

stra

ba

ixa

dif

un

de

-se

na

fa

se e

lue

nte

/ m

uit

a h

um

ida

de

le

va a

ma

ior

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usã

o d

as

ma

nch

as

e t

am

m a

um

a s

ep

ara

ção

de

fici

en

te

Page 19: TLC -Cromatografia de camada fina · Fracos silica gel hidróxido de cálcio talco alum ina carbonato de calcio am ido carvão activado m agnésia sucrose Ácidos : sílica (separa

TLC

-re

vela

do

res

tod

os

qu

ímic

os

/ m

éto

do

s fí

sico

s

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os

o-d

est

ruct

ivo

s

rad

iaçã

o v

isív

el

e U

V (

25

4 n

m e

36

6 n

m)

Va

po

r d

e i

od

o

ev

ap

ora

ção

/ p

laca

se

m a

lte

raçã

o

ág

ua

ind

ica

do

res

de

pH

(b

rom

ocr

eso

l /

bro

mo

fen

ol)

ind

ica

do

res

de

pH

(b

rom

ocr

eso

l /

bro

mo

fen

ol)

tod

os

de

stru

ctiv

os

50

% H

2S

O4

/ 1

10

C

5%

dic

rom

ato

de

po

táss

io o

u 5

% á

cid

o n

ítri

co e

m

40

% H

2S

O4

se

gu

ido

de

aq

ue

cim

en

to a

11

0 C

UV

(v

ita

min

as)

/ á

gu

a (

hid

róli

se -

ést

ere

s) /

io

do

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os

go

rdo

s p

oli

insa

tura

do

s)

Re

ag

en

tes

esp

ecí

fico

s sã

o c

on

he

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os

pa

ra q

ua

se t

od

as

as

cla

sse

s d

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om

po

sto

s

NO

TA:

o u

so d

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éto

do

s d

estr

utiv

os é

des

aco

nse

lhad

o s

emp

re

qu

e a

qu

antif

icaç

ão s

eja

o o

bje

ctiv

o d

a se

par

ação

cro

mat

og

ráfic

a

Page 20: TLC -Cromatografia de camada fina · Fracos silica gel hidróxido de cálcio talco alum ina carbonato de calcio am ido carvão activado m agnésia sucrose Ácidos : sílica (separa

TLC

-a

mo

stra

s

Cla

ssif

ica

ção

(e

ne

rgia

s d

e a

dso

rçã

o)

Gru

po

1:

mo

lécu

las

ne

utr

as

-h

idro

carb

on

eto

s

forç

as

de

Va

nd

er

Wa

al

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sica

s (n

ão

fo

rma

ção

de

lig

açõ

es

qu

ímic

as

gru

po

s m

eti

len

o -

o h

á s

ep

ara

ção

po

r p

eso

mo

lecu

lar

sep

ara

çõe

s b

oa

s e

ma

nch

as

red

on

da

s

Gru

po

2:

lig

açõ

es

po

lare

s (

C -

Cl

/ C

-N

O2

)

dip

olo

ind

uzi

do

-fí

sica

s /

ma

nch

as

red

on

da

s

Gru

po

3:

mo

lécu

las

po

lare

s (

áci

do

s, á

lco

ois

)

Ene

rgia

s de

ads

orçã

o(s

ílica

gel

)

Gru

po

Q

iin

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ção

R-C

H3

+0

.07

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W

R-C

H2

--0

.05

Vd

W

R-C

l+

1.3

2

d

ip. i

nd

.

R-O

-R+

3.6

1re

cep

tor

H

R-C

HO

+4

.97

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pto

r H

R-N

O2

+5

.71

dip

.ind

R-C

O2

R+

5.2

7re

c.H

/dip

.ind.

Gru

po

3:

mo

lécu

las

po

lare

s (

áci

do

s, á

lco

ois

)

Gru

po

s d

e s

up

erf

ície

po

lar

-n

ucl

eo

fíli

ca

inte

raçã

oco

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dso

rve

nte

via

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-H

fort

e -

po

ssib

ilid

ad

e d

e “

cau

da

s” n

as

ma

nch

as

Gru

po

4:

lig

açõ

es

qu

ímic

as

(co

vale

nte

s)

lig

açõ

es

fort

es

-m

á s

ep

ara

ção

R-C

O2

R+

5.2

7re

c.H

/dip

.ind.

R-C

OR

+5

.27

rec.

H/d

ip.in

d.

R-O

H+

5.6

0H

-H

R-N

H2

+8

.00

H-H

R-C

O2

H

+7

.60

H-H

Cs

Cm

Cs

Cm

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Cm

A fo

rma

das

man

chas

dep

end

e d

o e

qu

ilíb

rio

de

con

cen

traç

ões

est

abel

ecid

o e

ntr

e as

fas

esm

óve

l e e

stac

ion

ária

Page 21: TLC -Cromatografia de camada fina · Fracos silica gel hidróxido de cálcio talco alum ina carbonato de calcio am ido carvão activado m agnésia sucrose Ácidos : sílica (separa

Ca

sos

esp

eci

ais

TLC

pre

pa

rati

vo

Co

loca

r b

an

da

s la

rga

s d

e a

mo

stra

e d

ese

nvo

lve

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pla

ca

Re

tira

r a

síl

ica

de

ca

da

ma

nch

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dis

solv

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usa

nd

o u

m s

olv

en

te a

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qu

ad

o

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ali

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o e

qu

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me

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(H

PLC

, LC

MS

, F

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)

TLC

bid

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al

Co

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r a

am

ost

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o l

ad

o e

squ

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o d

a p

laca

e d

ese

nvo

lve

r

Se

car

a p

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lve

r d

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ovo

no

utr

o e

lue

nte

(co

loca

r o

la

do

esq

ue

rdo

da

pla

ca p

ara

ba

ixo

)b

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o)

Re

vela

r

Sep

araç

ão d

e am

inoá

cido

s

F. e

stac

ioná

ria: s

ílica

gel

F. M

óve

l 1:

tolu

eno

:2-c

loro

etan

ol:p

irid

ina

F. M

óve

l 2:

clo

rofô

rmio

:álc

oo

l ben

zílic

o:a

c. A

cért

ico

1: a

c. A

spár

tico,

2: a

c. G

lutá

mic

o, 3

: ser

ina

4: a

lani

na, 5

: glic

ina,

6: a

lani

na, 7

: met

ioni

na,

8: v

alin

a, 9

: iso

leuc

ina,

10:

cis

tein

a

Page 22: TLC -Cromatografia de camada fina · Fracos silica gel hidróxido de cálcio talco alum ina carbonato de calcio am ido carvão activado m agnésia sucrose Ácidos : sílica (separa

TLC

-va

nta

ge

ns

e d

esv

an

tag

en

s

Va

nta

ge

ns

Técn

ica

sim

ple

s e

ve

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til

-a

pli

ca-s

e a

qu

ase

to

da

s a

s cl

ass

es

de

co

mp

ost

os

Pe

qu

en

as

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tid

ad

es

de

am

ost

ra –

sem

gra

nd

e p

rep

ara

ção

A s

ep

ara

ção

po

de

se

r o

bti

da

co

m c

ust

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razo

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eis

-b

om

ad

sorv

en

te e

so

lve

nte

s p

uro

s

As

sep

ara

çõe

s p

od

em

se

r o

bti

da

s e

m t

em

po

s re

lati

va

me

nte

cu

rto

s

com

eça

a n

ão

se

r v

an

tag

em

em

re

laçã

o à

s p

eq

ue

na

s co

lun

as

de

HP

LC

O p

roce

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de

se

pa

raçã

o é

“v

isív

el”

e p

od

e s

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me

lho

rad

o a

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ran

do

su

po

rte

s o

u a

fa

se

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en

te ao

co

ntr

ári

o d

o G

C o

u H

PLC

e q

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os

solu

tos

mu

ito

re

tid

os

po

de

m p

ass

ar

de

spe

rce

bid

os

De

sva

nta

ge

ns

A p

rep

ara

ção

da

s p

laca

s é

co

mp

lica

da

est

á a

ca

ir e

m d

esu

so (

aq

uis

içã

o d

e p

laca

s p

rep

ara

da

s)

A q

ua

nti

fica

ção

é p

oss

íve

l ma

s im

pli

ca u

m e

no

rme

cu

sto

fin

an

ceir

o

po

r is

so o

TLC

é a

cnic

a d

e s

ep

ara

ção

cro

ma

tog

ráfi

ca t

ipic

am

en

te q

ua

lita

tiv

a /

sem

iqu

an

tita

tiv

a

–C

olo

caçã

o d

e a

mo

stra

s e

m q

ua

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da

de

s co

nh

eci

da

s e

qu

an

tifi

caçã

o p

or

com

pa

raçã

o

Page 23: TLC -Cromatografia de camada fina · Fracos silica gel hidróxido de cálcio talco alum ina carbonato de calcio am ido carvão activado m agnésia sucrose Ácidos : sílica (separa

Re

cord

ar

Dis

tân

cia

per

corr

ida

pel

o s

olv

ente

Dis

tân

cia

per

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ida

pel

o s

olu

to B

Lin

ha

de

fren

te d

o s

olv

ente

Res

oluç

ão =

X /

0,5

(d1

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2);x

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istâ

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tre

as

man

chas

; d1

e d

2 –

diâ

met

ros

das

man

chas

R m

ínim

o =

1R

f = d

istâ

ncia

per

corr

ida

pelo

sol

uto

/ dis

tânc

ia

perc

orrid

a pe

la fr

ente

do

solv

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Dis

tân

cia

per

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ida

pel

o s

olu

to A

Dis

tân

cia

per

corr

ida

pel

o s

olu

to B

Lin

ha

de

colo

caçã

o d

as a

mo

stra

s