Reu, Inst. Adolf o Lutz,46 (1/2) :45-51, 1986.

TÉCNICAS CROMATOGRÁFICAS PARA A DIFERENCIAÇÃO DEOLEOS ESSENCIAIS CÍTRICOS DE LIMÃO SICILIANO E TAHITI *

Helena Yuco YABIKU **Walkyria H. LARA **

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YABIKU, H.Y. & LARA, W.H. - Técnicas cromatográficas para a diferenciaçãode óleos essenciais cítricos de limão siciliano e Tahiti. Re». Inst. Adolfo Lutz,46 (1/2) :45-51, 1986.

RESUMO: Para verificação das diferenças qualitativas e quantitativas dosóleos essenciais de limão dos tipos Sieiliano e Tahiti, foram estudadas duas técnicascromatográficas: a da camada delgada e a gasosa. A técnica da cromatografia emcamada delgada baseou-se na utilização de placas de vidro de 20 x 20 em, reco-bertas com sílica gel G; a fase móvel utilizada foi benzeno - acetato de etila -ácido acético glacial, na proporção de 90: 10: 1. A detecção foi feita de duas manei-ras: uma, através da visualização na câmara de luz ultravioleta, outra atravésde pulverização com reagente químico. A técnica de cromatografia em fase gasosautilizou o detector de ionização de chama, com fase estacionária de 5% SP-1000 emSupelcoport, para mostrar as diferenças existentes entre estes dois óleos. Verifi-cou-se que, tanto na técnica da cromatografía em camada delgada quanto nacromatografia em fase gasosa, houve diferenças de comportamento destes doisóleos que permitem facilmente identificá-Ios. Na cromatografia em camada delgadahouve diferença no número de manchas e, também, na intensidade de algumas.Na cromatografia em fase gasosa foram identificados picos e áreas diferentes doscomponentes dos óleos essenciais.

DESCRITORES: óleos essenciais de limão siciliano (Citrus limon Burm) ede limão Tahiti (Citrus latifolia Tanaka), análise; cromatograia em camada del-gada; cromatografia em fase gasosa.

INTRODUÇÃO

O Brasil é um dos maiores produtoresmundiais de frutos cítricos, sendo que quasetoda a totalidade é exportada. Segundo aCarteira de Comércio Exterior do Banco doBrasil, em 1984, o suco de laranja, sozinho,arrecadou US$ 1,225 bilhão 4.

Das cascas destes frutos cítricos obtém-seos correspondentes óleos essenciais. São trêsos processos de extração: pela destilação avapor, por expressão a frio e por abrasãoda superfície da casca 3. No Brasil, o pro-cesso de extração por expressão a frio,conhecido como colâ preeseâ, é o comumenteutilizado.

Os óleos essenciais vêm tendo crescente usocomo fontes de isolados e derivados aromá-

ticos. Leis recentes, no tocante às indústriasalimentícias, vêm incentivando o uso de subs-tâncias naturais, como é o caso de óleosessenciais e corantes naturais. Seu uso é regu-lamentado, em nosso País, pelo Decreto-lein.? 55.871, de 26 de março de 1965 1.

Graças às suas fragrâncias delicadas, per-sistentes e agradáveis, os óleos essenciaisencontram grande aplicação nas indústriasde perfumaria e alimentos. Sendo estes óleosobtidos de produtos naturais, eles são mis-turas bastante complexas, constituídas prin-cipalmente de hidrocarbonetos monoterpênicos,derivados terpenóides oxigenados e sesquiter-pemcos, Em aromas, é muito importantereconhecer que, mesmo quando um compo-nente do aroma está presente em grandeconcentração, não é ele necessariamente oresponsável pelo aroma e/ou odor do produto.

* Realizado na Seção de Aditivos e Resíduos de Pesticidas do Instituto Adolfo Lutz, São Paulo, SP.** Do Instituto Adolfo Lutz.

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Este componente pode ser inodoro ou mesmoum realçado!' de odor 5. Este fato ocorre comos óleos cítricos, onde os terpenóides oxige-nados, que são constituintes menores, contri-buem com maior intensidade no aroma e odordestes óleos 2.

Visando mostrar diferenças na composiçãoentre os óleos essenciais de limão das varie-dades siciliano (CitrW3 limonBurm) e Tahiti(Citrus latifolia Tanaka), independentementede pequenas variações qualitativas e quanti-tativas que ocorrem quando os frutos sãocultivados em diferentes condições, tais comoclima irrigação, natureza do solo, foramutiliz~das duas técnicas cromatográficas.

MATERIAL E MÊTODOS

Foram utilizadas 18 amostras de óleo essen-cial de limão siciliano e 9 amostras de limãoTahiti, procedentes de diversas regiões doEstado de São Paulo, colhidas em diferentesépocas.

Método de cromatografia em camada delgada

MaterialAparelho para preparação de placas paracromatografia em camada delgada(c.c.d.)

Placas de vidro de 20 x 20 em parac.c.d.

Cuba de vidro para c.c.d.

Câmara de luz ultravioleta (254 e 366nm)

Microsseringas

ReagentesSílica gel G (tipo 60)Solvente (fase móvel): benzeno - ace-tato de etila - ácido acético glacial(90:10:1)

Revelador: ácido sulfúrico (1: 1)

Procedimento - Agitar vigorosamente síli-ca gel com água, na proporção de 10 g para20 ml, e aplicar esta solução nas placas devidro, na espessura de 250 p.,m. Secar ao arem torno de 10 minutos e, depois, deixar du-rante 30 minutos em estufa a 105°C. Retirarda estufa, resfriar e aplicar na placa alíquo-tas de 5 p.,l das amostras de óleos essenciaisde limão siciliano e Tahiti. Correr com osolvente até atingir aproximadamente 14 emde altura da placa. Retirar da cuba e secarà temperatura ambiente na capela. Observara placa inicialmente na câmara de luz ultra-violeta, nos comprimentos de onda de 254 e366 nm, e depois pulverizar com o revelador.Ativar a 105°C na estufa, por aproximada-mente 10 minutos.

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Método de cromatografia em fase gasosa

Equipamento

Cromatógrafo a gás (Varian 3700), comdetetor de ionização de chama e colunade vidro de 3,5 m por 1/4 de poI.(empacotada com 5% de polietilenoglicol (SP-I000), em Supelcoport, 80 -100 mesh, nas seguintes condições deoperação:

Temperatura do detetor: 2800C

Temperatura do injetor: 2700C

Temperatura da coluna: inicialmentea 89 °C, por 5 min e, depois, a umarazão de 4 °C por min, até 250°C

Gás de arraste: nitrogênio

Fluxo de gás: 88 mI/min

Volume injetado: 1 p.,I

RESULT ADOS E DISCUSSÃO

Verificou-se que, tanto na técnica de cro-matografia em camada delgada quanto na decromatografia em fase gasosa, houve dife-renças de comportamento dos dois óleos, quepermitem facilmente identificâ-los.

Na cromatografia em camada delgada hádiferenças no número de manchas e tambémna intensidade de algumas, conforme a figura1. Nesta figura observam-se as amostras dedois óleos desenvolvidos no solvente (fasemóvel), sendo a detecção apenas pela visua-Iizaçâo ria câmara de luz ultravioleta. Foramdetectadas 16 e 18 manchas respectivamentenos óleos de limão siciliano e Tahiti, cujosvalores de Rf são vistos na taleba 1. As dife-renças mais visíveis foram observadas dametade para baixo nas placas corresponden-tes provavelmente aos derivados oxigenados.As manchas mais distintas são as fluores-centes, com valores de Rf 0,52, 0,47 e 0,40.As outras manchas são praticamente iguais,variando apenas suas intensidades.

As placas, uma vez observadas na luz ultra-violeta, foram pulverizadas com reagentequímico e posteriormente ativadas (fig. 2).As diferenças entre os dois óleos tambémsão bastante visíveis, indicando que as duastécnicas de revelação foram bastante úteis.

A constituição química genérica dos óleosessenciais de frutos cítricos compreende hi-drocarbonetos monoterpênicos, monoterpênicosoxigenados (álcoois, ésteres, aldeídos, ceto-nas) e hidrocarbonetos sesquiterpênicos, quepodem ser visualizados nos cromatogramasobtidos dos óleos essenciais de limão sicilianoe Tahiti, respectivamente representados nasfiguras 3 e 4.

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FIGURA 1 - Cromatogramas dos óleos essenciais de limão siciliano (a) e Tahiti (b) , sob visuali-zação na câmara de luz ultravioleta.

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FIGURA 2 - Gromatogramas dos óleos essenciais de limão siciliano (a) e Tahiti (b) , após pulveri-zação com revelador.

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TABELA

Valores de R] das manchas dos óleos essenciais de limão siciliano e Tahiti

ManchasValores de Rf x 100

n.?Limão siciliano Limão Tahiti

O O

6 7

19 13

26 22

33 28

39 31

43 35

49 40

52 47

59 52

65 54

68 57

72 59

80 66

89 74

100 81

90

100

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

17

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Os primeiros picos dos cromatogramas dosóleos essenciais de limão siciliano e Tahiti,obtidos nas condições acima citadas, diferementre si apenas nas áreas e não nos picosdos diferentes componentes dos óleos. Por-tanto, bastante compatíveis com os resultadosobtidos com as placas. As diferenças residembasicamente nos picos correspondentes aosderivados oxigenados e aos hidrocarbonetossesquiterpênicos.

CONCLUSÃO

As duas técnicas utilizadas, cromatografiaem camada delgada e cromatografia em fasegasosa, são bastante viáveis e úteis na iden-

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tificação de óleos de limão siciliano e Tahiti.Estas técnicas possuem grande vantagem emrelação às determinações físico-químicas, quesão os parâmetros normalmente utilizados,pois necessitam apenas de pequenas quanti-dades de amostra, em torno de 1 a 5 p.l, alémde serem mais rápidas.

Agradecimentos

A Ruth Ogawa , da firma Firmenich &Cia. Ltda., São Paulo, pelos cromatogramastraçados no cromatógrafo gasoso, e a SérgioViana, do Instituto Biológico de São Paulo,pela execução dos filmes.

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YABIKU, H.Y. & LARA, W.H. - Chromatographic techniques for differentiationof essential oils of Sieilian lemon and Tahiti lemon. Rev. Inst. Adolfo Lutz,46 (1/2) :45-51, 1986.

ABSTRACT: Thin-Iayer chromatography and gas Iíquid chromatography wereemployed for qualitative and quantitative differentiation of essential oils fromTahiti and Sicilian types of lemon. TLC employed 20 x 20 em glass plates whichwere coated with benzene - ethyl acetate - glacial acetic acid in the proportion90:10:1. Detection was made through visual examination in an ultraviolet lightclramber as well as through a chemical spray, GC used the flame ionization withstationary phase of 5% SP-I000 in Supelcoport for disclosing differences betweenthe two oils. The behaviour of the oils allowed their easy differentiation. The TLCshowed differences in the number of spots as well as in the intensity of some spots.GC identified peaks and different areas corresponding to components of thetwo essential oils.

DESCRIPTORS: essencial oils; Sicilian lemon (Citrus limon Burm) essentialoils, analysis; Tahiti lemon (Citrus latifolia Tanaka) essential oil, analysis;thin-Iayer chromatography; gas-liquid chromatography.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS graphy. New York, Academic press, 1962.p. 371-82.

1. BRASIL. Leis, decretos etc. - Decreto n.?55.871, de 26 de março de 1965. DiárioOficial, Brasília, 9 abro 1965. Seção I,pt. I, p. 3610-22. Modifica o Decreto n.?50.040, de 24 de janeiro de 1961, referentea normas reguladoras do emprego deaditivos para alimentos, alterado peloDecreto n.? 691, de 13 de março de 1962.

2. BURCHFIELD, H.P. & STORRS, E.E. - Bio-chemical applications of gas chromato-

3. GUENTHER, E. - The essential oils. NewYork, Van Nostrand, 1949. v. 3, p. 5-38.

4. NOGUEIRA, C.R. - Suco de laranja vai paraos Estados Unidos. Folha de S. Paulo,São Paulo, 17 jan. 1985. p. 13.

5. SWAN, D.F.K. - Analysis of essential oilsby capillary gas chromatography. Analyst,London, 110 (4): I-lI, 1984.

Recebido para publicação em 23 de janeiro de 1986.

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