1. PATHOGEN SE DES L SIONS H PATIQUES DU VHC : MOD LISATIONANIMALE Herv LERAT INSERM U955 Dpartement de Virologie Molculaire et Immunologie Physiopathologie et Thrapeutique des Hpatites Virales Chroniques (Pr. Pawlotsky) Hpital Henri Mondor, Crteil, France.

2. Pathogense associe au VHC Cirrhose CHC Fibrose Statose Rsistance InsulinePancreas Infectionchronique 3. Ncessit de dveloppement de modles animaux

Contexte dun organe entier dans un animal vivant.

Pathologies viro-induites:contribution du virus? 4. Modles animaux pour ltude des pathologies induites par le VHC

• Primates non-humains

• • Chimpanz

• • Ouistiti

Modles dinfection

• • Problme de disponibilit et de cot.

5.

• Rongeurs (humaniss)

• • uPA/SCID

• • Trimera

• • rat

Modles animaux pour ltude des pathologies induites par le VHC Modles dinfection 6.

• Transgense murine

• • Classique

• • Conditionnelle (systme Cre/Lox)

Modles animaux pour ltude des pathologies induites par le VHC Modles dexpression des protines virales

• Avantages:

• • Facilit dlevage, technique rode

• • Expression chronique long terme

• • Pas de rponse immune

• • Pas de rplication virale

7. The full-length HCV ORF transgenicmouse model FL-N/35Lerat et al., Gastroenterology 2002 RNAHCV+ X C57BL6J Liver micro-injections C57Bl6J x C3H/HeJ XC57BL6J DNAHCV+ FL-N E1 E2 core NS4a NS3 NS4b NS5a NS5b NS2 p7 Albumin promoter SV40 PolyA Genotype 1b FL-N/35 8. The full-length HCV ORF transgenicmouse model FL-N/35Lerat et al., Gastroenterology 2002 RNAHCV+ X C57BL6J Liver micro-injections C57Bl6J x C3H/HeJ XC57BL6J DNAHCV+ FL-N E1 E2 core NS4a NS3 NS4b NS5a NS5b NS2 p7 Albumin promoter SV40 PolyA Genotype 1b Steatosis Carcinoma Co-fibrogenic +CCl4 9. Hepatocellular Carcinomas A Lerat et al., Gastroenterology 2002. 1 cm 1 cm FL-N/35-170 UNC FL-N/35-171 UNC 1 cm FL-N/35-102 CERFE 10. Visualisation en IRM des CHC chez la souris VHC (H. Lerat, A. Luciani et T. Dcaens, donnes personnelles.) Tumeur 11. Hpatocarcinomes viro-induits :rledirectouindirectdes protines virales? Infection VHC Rponse immunitaire de lhteProtines virales Lsionshpatiques Cirrhose CANCER ? 12. Etapes essentielles de la carcinogenseNegriniet al ., 2010. Nature Mol Cell Biol Rev: 11; 220-28 13. Etapes essentielles de la carcinogenseNegriniet al ., 2010. Nature Mol Cell Biol Rev: 11; 220-28 14. Inhibition de la voie apoptotique FAS dans le foie des souris VHC APOPTOSE caspase 3 caspase 9 cytochrome C caspase 8 Fas FasL Bid Membrane cellulaire mitochondrie VHC(NS2) CIDE-B fragmentation ADN VHC (NS5A) calpane Etape vers lecancer 15. (M. Higgs, H. Lerat, donnes personnelles) Surcharge en FER CHC ROS Production de ROS dans les souris VHC, implication sur la carcinogense hpatique. DNA damage inflammation fibrosis NS3-NS5A Nox4 Electron transportComplex (1) CORE Glutathion 16. GADD45 GADD45 GADD45 GADD153 GADD34 Senseurs de stress Arrt du cyclecellulaire (G2/M) Lsions de lADN La famille GADD Les protines du VHC induisent la mthylation du promoteur de GADD45 : inhibition de sa transcription : vasion du point de contrle. Q M G 1 G 2 S G 0 CyclinB1 Cdc2 GADD45 Lsions delADN P P P Histone H3 Histone H1 Lamine VHC 17. 18. Vers un mcanisme de la carcinogense hpatique viro-induite? Chronicit infection CANCERduFOIE Expression VHC Inhibition rponse immune Multiplication cellulaire Surexpression des cyclines et oncognes Inhibition apoptose Diminution de protines pro apoptotiques Lsions ADN production ROSRparation ADN 19. Statose induite par le VHC: Mcanismes Molculaires? Rle direct des protines virales? 20. Statose micro-vsiculaire Lerat et al., Gastroenterology 2002. Non TG VHC TG VHC TG VHC TG 21. Statose micro-vsiculaire coloration Oil Red O analysein silico HCV TG NON TGM F M 0 5 10 15 20 25 12.5 0.4 13 0.8 14.4 0.8 14.1 0.3 n=12 n=12 n=10 n=7 p