Peranan
analisis DNA lokus STR
pada kasus Paternitas

Djaja Surya Atmadja

Dep. Ked. Forensik & Medikolegal FKUI, Jakarta

E-mail: atmadjads@yahoo.com

*

Ketika ayah mulai curiga,

*

Mengetahui asal usul

Hak asasi setiap anakTerkait dengan hak asuh, biaya hidup, waris, hak untuk menjadi wali nikah.Hak untuk ikut ke negara asal orangtua: kasus kawin campur (kasus imigrasi)

*

Jenis kasus sengketa asal usul

Kasus ragu orangtua (disputed parentage)Kasus ragu ayah (disputed paternity)Kasus ragu ibu (disputed maternity)Kasus ragu kerabat

*

Sengketa asal usul dlm masyarakat

Cukup banyak kasusnya dalam masyarakatTerbanyak: kasus Ragu AyahFenomena gunung es: diselesaikan sembunyi-sembunyi karena dianggap aib keluargaBagi pria yang terlibat: nama baik (reputasi), keutuhan rumah tangga, biaya hidup, karir (PP 10)

*

Kasus Ragu Ayah

Kasus Ragu Ayah terbanyak: klaim wanita hamil ke pria; kasus dugaan selingkuh, masalah klaim waris dan silsilahMenyangkut nama baik para pihak melakukan pemeriksaan secara diam-diam: Rahasia pribadi terhadap pihak ketiga

*

Pemecahan kasus

Kasus Ragu Ayah merupakan kasus medis, sehingga pemecahan juga secara medisPrinsip pemeriksaan: sifat biologis anak adalah gabungan dari sifat ayah dan ibunya pemeriksaan polimorfismePolimorfisme dibagi dalam: polimorfisme protein dan polimorfisme DNA

*

Pembuktian ilmiah Ragu Ayah

Polimorfisme protein I: gol darah, gol protein serum, gol enzim eritrosit maks 70 %Polimorfisme protein II: Human Lymphocyte Antigen (HLA) 97 %Polimorfisme DNA diatas 99 %

*

Polimorfisme DNA

Base polymorphism: panjang DNA yang sama, tetapi sebagian isi basanya bervariasi membentuk alel yang berbeda analisis dengan dot-blot atau sequencingLength polymorphism: isi DNA yang sama, tetapi berulang dalam jumlah pengulangan yang berbeda analisis dengan elektroforesis atau spektrofotometer kapiler (ABI system)

*

Target Region for PCR

*

Short Tandem Repeats

Termasuk intron tidak mengkode protein tertentuTermasuk Tandem Repeats (TR)Ukuran pendek, yang tersebar pada berbagai kromosomTerdiri dari 2-5 basa tertentu, yang berulang dengan jumlah pengulangan yang berbeda-beda. Perbedaan antara individu terletak pada jumlah pengulangannya yang berbeda

*

Contoh lokus STR (TCAT)n

*

Contoh alel STR (AATG)n

Setiap orang memiliki 2 alel STRIndividu ini memiliki alel (AATG)7 dan (AATG)8, sehingga notasinya adalah 7,8

*

Analisis STR

Analisis dengan metode PCRSetiap individu memiliki 2 alel, yang masing-masingnya diberi nama sesuai dengan jumlah pengulangannyaSatu alel berasal dari ibu (alel maternal), alel satunya berasal dari ayahnya (alel paternal)Termasuk core-DNA penurunan berdasarkan hukum Mendel

*

Multiplex PCR

Dalam satu reaksi PCR dicampurkan sampai 15 pasang Primer dari 15 lokus STR

Sensitivitas: dapat mendeteksi kurang dari 1 ng DNA

Dapat menganalisis sampel yang tercampur dan degradasi

Untuk pembedaan alel digunakan pewarna Fluorescent dapat membedakan alel STR yang Overlapping

*

AmpFlSTR Profiler Plus

Kit available from PE Biosystems (Foster City, CA)

9 STRs amplified along with sex-typing marker amelogenin in a single PCR reaction

D3

FGA

vWA

5-FAM (blue)

D13

D5

D7

NED (yellow)

A

D8

D21

D18

JOE (green)

GS500-internal lane standard

ROX (red)

*

*

ABI Prism 310 Genetic Analyzer

capillary

Syringe with polymer solution

Autosampler tray

Outlet buffer

Injection electrode

Inlet buffer

*

Contoh penurunan STR

Lokus vWAInklusi Tersangka ayah : 11, 16

Anak : 11, 14

Ibu : 14, 15

Eksklusi Tersangka ayah : 12, 13

Anak : 10, 14

Ibu : 10, 11

*

Paternity Indeks

Angka yang menyatakan berapa kali seorang pria punya kemungkinan merupakan ayah Biologis dari seorang anak, dibandingkan pria lain yang diambil random dalam populasi Misal: PI = 123.756 pria tsb punya kemungkinan 123.756 kali lebih mungkin jadi ayah anak tsb dibanding pria lain dalam populasi

*

Prinsip analisis STR

Pemeriksaan dengan sebanyak mungkin lokus didapatkan ketepatan yang makin tinggiDianjurkan pemeriksaan 10 lokus atau lebihPenghitungan Paternity Indeks sebisanya menggunakan database orang Indonesia

*

Inklusi dan Eksklusi

Semua lokus sesuai: Pria ini adalah bapak biologis dari anak A dengan Paternity Index . dan probability %Dua atau lebih lokus menunjukkan eksklusi: Pria ini adalah BUKAN bapak biologis dari anak A (ketepatan 100 %)

*

Kasus mutasi

Ada satu lokus menunjukkan eksklusiKalau memungkinkan periksa lebih banyak lokusBegitu diperhatikan DNA paternal anak yang tidak sesuai DNA pria, hanya berbeda SATU angkaPria tetap dianggap ayah biologis dari anak, dengan Paternity Indeks penghitungan khusus, yang nilainya lebih rendah

*

Contoh kasus mutasi

Pemeriksaan terhadap 10 lokus didapatkan 9 lokus sesuai dan 1 lokus eksklusiLokus eksklusi FGA sbb:

Tersangka ayah: 20, 21

Anak: 19, 24

Ibu: 22, 24

*

Profil STR pada ABI system

*

Contoh kasus Inklusi

No. Lokus Tn. XAnak BNy. MKesimpulan01. CSF1PO11 , 1211 , 1111 , 11Mungkin02. D7S82010 , 1210, 10 9 , 10Mungkin03. D21S1130 , 33.230 , 3129 , 31Mungkin04. D8S117915 , 1515 , 1514, 15Mungkin05. D28133819 , 2119 , 2220 , 22 Mungkin06. D16S53910 , 12 10 , 1210 , 12 Mungkin07. D13S317 9 , 11 9 , 11 9 , 11Mungkin08. TH01 7 , 9 7 , 7 7 , 8 Mungkin09. D3S135814 , 1614 , 1817 , 18 Mungkin10. D18S5116 , 1717 , 1812 , 18Mungkin11. TPOX 8 , 11 8 , 9 8 , 9Mungkin12. vWA14 , 1616 , 1816 , 18Mungkin13. D19 S43314 , 1413 , 14 13 , 15.2Mungkin14. FGA22 , 2322 , 2222 , 22Mungkin15. D5S81810 , 1110 , 1010 , 10 Mungkin

*

Contoh kasus Eksklusi

No. Lokus Tn. XAnak ANy. MKesimpulan01. CSF1PO 11 , 1211 , 1111 , 11Mungkin02. D7S82010 , 12 8 , 10 9 , 10Eksklusi *03. D21S1130 , 33.229 , 3129 , 31Eksklusi *04. D8S117915 , 1514 , 1514, 15Mungkin05. D28133819 , 2120 , 2220 , 22 Eksklusi *06. D16S53910 , 12 10, 1110 , 12 Eksklusi *07. D13S317 9 , 11 8 , 11 9 , 11Eksklusi *08. TH01 7 , 9 7 , 8 7 , 8 Mungkin09. D3S135814 , 1618 , 1817 , 18 Eksklusi *10. D18S5116 , 1712 , 1512 , 18Eksklusi *11. TPOX 8 , 11 8 , 9 8 , 9Mungkin12. vWA14 , 1618 , 1816 , 18Eksklusi *13. D19S43314 , 1413 , 13.213 , 15.2Eksklusi *14. FGA22 , 2319 , 2222 , 22Eksklusi *15. D5S81810 , 1110 , 1110 , 10 Mungkin

*

Prosedur pemeriksaan RA

Konsultasi kasus oleh klien (nasabah)Analisis aspek hukum dan agamaInformed consentPengambilan sampel DNA oleh dokter: darah atau usapan selaput lendir pipiPemeriksaan DNA: 10 15 lokus STR dengan metode PCR

*

Rahasia kedokteran

Kasus RA pada umumnya dianggap aib bagi kedua pihak umumnya klien ingin kasusnya dirahasiakanDokter yang memeriksa klien RA: wajib menyimpan rahasia klien (etika, hukum). Pelanggaran atas rahasia ini diancam dengan pidana penjara 9 bulan (ps. 322 KUHP)

*

Penutup

Kasus sengketa asal usul semakin banyak dalam masyarakatPenyelesaian kasus RA dilakukan secara ilmiah kesimpulan yang tepat dan akuratPemeriksaan yang paling tepat: pemeriksaan DNA lokus STR.Pemeriksaan dilakukan pada sebanyak mungkin lokus STR, dianjurkan 10 lokus atau lebih

*

Terima kasih

Kuliah Modul Biologi MolekulerFK Universitas Bengkulu22 April 2014

*