MassHunter Workstation Software — программа сбора …...Задание 1....

Agilent MassHunter Workstation Software — программа сбора данных Data Acquisition для трехквадрупольного ГХ-МС 7000

Руководство по ознакомлению

Вводные сведения 3

Подготовка системы 3

Подготовка образцов, необходимых для сбора данных 3

Упражнение — Разработка метода сбора данных в 7000 5

Задание 1. Установите параметры впускного отверстия и

инжекции 5

Задание 2. Ввод параметров сбора данных ГХ 7

Задание 3. Создание метода сбора данных для поиска исходных

ионов 11

Задание 4. Сбор данных сканирования исходных ионов

(дополнительно) 13

Задание 5. Определение массы исходных ионов 15

Задание 6. Создание метода сбора данных для определения масс

ионов-продуктов 18

Задание 7. Сбор данных для определения ионов-продуктов

(дополнительно) 21

Задание 8. Определение ионов-продуктов 23

Задание 9. Создание метода MRM 26

Упражнение — Создание метода количественного анализа 28

Задание 10. Сбор данных MRM (дополнительно) 28

Задание 11. Создание серии количественного анализа 31

Задание 12. Создание метода количественного анализа MRM 33

Задание 13. Количественная оценка серии неизвестных проб 43

Agilent Technologies

В данном руководстве описано использование ГХ/МС Agilent Triple Quad серии 7000 для сбора и анализа данных проб. Если при ознакомлении с данным руководством требуется пропустить необходимые для сбора данных шаги, используйте поставляе-мые с системой демонстрационные файлы данных в каталоге бензодиазепинов (в папке Benzodiazepine\Data на установочном диске Data Acquisition).

В настоящем руководстве описывается, как определить лучшие настройки сбора для анализа исследуемых соединений. Эти инструкции не только помогут понять, как настроить метод для оптимизации параметров прибора, чтобы получить максимальную чувствительность при сборе данных, но и как использовать программу Qualitative Analysis для определения значений параметров, при которых получается наилучший отклик. Сведения о программе Qualitative Analysis также приведены в Руководстве по ознакомлению с Qualitative Analysis, а о программе Quantitative Analysis — в Руководстве по ознакомлению с Quantitative Analysis.

Для получения сведений о принципах работы масс-спектрометра с тройным квадруполем и важности значения энергии столкновения см. Руководство по концепциям. Для получения общих сведений см. главу 3 «МС Agilent Triple Quad и чувствительность» Руководства по концепциям. Для получения подробных сведений о работе программы см. онлайн-справку.

Каждое задание представлено в виде таблицы, состоящей из трех столбцов:

• Шаги — следуйте этим общим указаниям для дальнейшегосамостоятельного изучения программы.

• Подробные инструкции — используйте их, если необходима помощь илиесли предпочитаете пошаговый процесс обучения.

• Комментарии — здесь представлены советы и дополнительнаяинформация о каждом этапе упражнения.

2 Руководство по ознакомлению с трехквадрупольным ГХ-МС Agilent 7000

Вводные сведенияПодготовка системы

Вводные сведения

Перед началом работы необходимо убедиться в готовности системы. Если запланирован сбор данных, требуется выполнить настройку прибора.

Подготовка системы

1 Следует убедиться, что:

• Установлены программы Data Acquisition, Qualitative Analysis иQuantitative Analysis.

• В системе используется ГХ Agilent 7890A с испарителем с/без деленияпотока и автоматическим пробоотборником для жидких материалов.

• Выполнена настройка ГХ/МС Triple Quad серии 7000.

• Рабочие характеристики проверены.

• Система включена.

• Фенилметилсилоксан Agilent HP-5MS 5 %: установлена колонка 30 м x250 мкм x 0,25 мкм.

2 Выполните конфигурацию ГХ для колонки Agilent HP-5MS.3 Скопировать файлы с данными на используемый ПК.4 Скопируйте фалы данных из папки Benzodiazepine\Data на установочном

диске Data Acquisition в любую директорию на жестком диске. В этой папке находятся все файлы данных, необходимые для выполнения данного упражнения.

Не используйте файлы данных бензодиазепинов, которые уже имеются на компьютере, если не уверены, что эти файлы являются копиями оригиналов, которые хранятся на диске, или если несколько человек пользуются этими файлами. Не используйте эти файлы данных проб для просмотра сведений о пробе или печати отчета.

Подготовка образцов, необходимых для сбора данных

Этот раздел можно пропустить, если не планируется выполнять сбор данных, а планируется только научиться использовать программы Qualitative Analysis и Quantitative Analysis для разработки метода. Обучиться работе с программами Qualitative Analysis и Quantitative Analysis можно с использованием поставляемых с системой файлов данных для бензодиазепинов.

Руководство по ознакомлению с трехквадрупольным ГХ-МС Agilent 7000 3

Вводные сведенияПодготовка образцов, необходимых для сбора данных

Материалы, требуемые для пробоподготовки:

• Ампула объемом 1 мл со смесью бензодиазепинов, каталожный номерAgilent B-033.

• Ацетонитрил для разбавления проб.

• Виалы для проб.

1 Подготовьте пробы для обработки с использованием программы Qualitative Analysis.a Добавьте бензодиазепин из ампулы в находящийся в стеклянной виале

или пробирке ацетонитрил и разбавьте вдвое, чтобы конечная концентрация составила 10 нг/мкл.

b С полученным раствором подготовьте 10 пробирок с пробами АПЖМ.2 Подготовьте калибровочные пробы для программы Qualitative Analysis.

a Добавьте бензодиазепин из ампулы в находящийся в виале Эппендорф ацетонитрил и разбавьте до получения конечных концентраций 1; 0,5; 0,25; 0,125 и 0,0625 нг/мкл.

b С полученным раствором подготовьте пять пробирок с пробами АПЖМ для растворов с пятью разными концентрациями. Разметьте пробирки BenzoL1 — BenzoL5.

3 Подготовьте неизвестные пробы для программы Qualitative Analysis.a Добавьте бензодиазепин из ампулы в находящийся в стеклянной виале

или пробирке ацетонитрил и разбавьте до получения конечных концентраций 0,4; 0,2 и 0,1 нг/мкл.

b С полученным раствором подготовьте три пробирки с пробами АПЖМ. Разметьте пробирки BenzoSample01 — BenzoSample03.

Перед выполнением этого упражнения выполните автонастройку прибора. Для получения сведений о настройке прибора см. Руководство пользователя или онлайн-справку.


Упражнение — Разработка метода сбора данных в 7000 Задание 1. Установите параметры впускного отверстия и инжекции

Упражнение — Разработка метода сбора данных в 7000

Задание 1. Установите параметры впускного отверстия и инжекции

Рисунок 1 Программное обеспечение Agilent MassHunter Workstation —

Окно сбора данных Data Acquisition

Шаги Подробные инструкции Комментарии

1 Выполните настройку впускного

отверстия, источника ввода

и задействуйте 7000.

a Дважды щелкните значок Сбор данных на рабочем столе Windows.

b Нажмите значок Параметры впускного отверстия и ввода.

c Выберите ГХ для впускного отверстия

пробы и установленный АПЖМ

для источника ввода.

d Установите флажок Использовать МС.

• Отображается показанное на Рис. 1

окно Сбор данных.

• Отображается показанное на Рис. 2

диалоговое окно Параметрывпускного отверстия и ввода.

Правка параметров ГХ

Средство редактирования метода для QQQ

Параметры впускного

Редактирование

отверстия и ввода

последовательнсти


Упражнение — Разработка метода сбора данных в 7000 Задание 1. Установите параметры впускного отверстия и инжекции

Рисунок 2 Параметры впускного отверстия и ввода


Упражнение — Разработка метода сбора данных в 7000 Задание 2. Ввод параметров сбора данных ГХ

Задание 2. Ввод параметров сбора данных ГХ

В данном упражнении вводятся параметры ГХ для анализа.


2 Введите подходящие для смеси

бензодиазепинов параметры ГХ.

См. Табл. 1.

a Щелкните значок Редактировать параметры ГХ (Рис. 1).

b Выберите значок Настройки CFT, затем выберите столбец 1 в столбце

Описание.

c Выберите Вкл. режим управления, а

затем выберите режим Поток.

Для исходного Значения и значения

После цикла введите 1,2 мл/мин.

d Выберите коллизионную ячейку

Модуль ЭКД N2 в столбце Описание

и отмените Вкл. управления.

e Выберите коллизионную ячейку

Модуль ЭКД с гелием в столбце

Описание и отмените Вкл. управления.

f Выберите значок Впускные отверстия на вкладке SSL и введите

указанные в Табл. 1 параметры

впускного отверстия.

g Выберите значок Термостат и

введите указанные в Табл. 1

параметры термостата.

h Выберите значок АПЖМ на вкладке

Передний инжектор и введите

указанные в Табл. 1 параметры

впускного отверстия.

i Выберите значок Дополнительные нагреватели, задействуйте и задайте

температуру 134 °C.

j Нажмите кнопку OK.

• Отображается окно Правкапараметров ГХ, показанное

на Рис. 3 на стр. 8.

• Выбрав соответствующее окно,

наведите мышь на значок для

определения функции значка.

• В этом методе поток газа

коллизионной ячейки выключен.

• Если АПЖМ подсоединен

к Заднему впускному каналу,выберите вкладку Заднийинжектор.

• Происходит загрузка параметров

ГХ, и окно закрывается.



Рисунок 3 Окно «Правка параметров ГХ»

Таблица 1 Параметры ГХ для метода сбора данных

Параметр Значение

Термостат

Время выравнивания 0,5 мин

Программа термостата 100 °C в течение 1 мин, 25 °C/мин до 300 °C,

поддерживать в течение 10 мин

Время анализа 19 мин

Переднее впускное отверстие SS Гелий

Режим Без деления потока

Нагреватель Вкл. 300 °C



Давление Автоматически задается значение Вкл. с настройками CFT

потока через колонку

Поток обдува септы Вкл. 3 мл/мин

Режим экономии газа Вкл. 20 мл/мин через 3 мин

Поток продувки для ввода с делением потока 50 мл/мин в течение 1 мин

Доп. модуль температуры 2 {Линия передачи МСД}

Нагреватель Вкл.

Температура 134 °C

Колонка # 1 Фенилметилсилоксан HP-5MS 5 %: 30 м x 250 мкм x 0,25 мкм

Вход Переднее впускное отверстие SS: гелий

Выход Вакуум

(Начальный) 100 °C

Поток 1,2 мл/мин

Программа потока Выкл.

Переднее устройство ввода

Размер шприца 10 мкл

Вводимый объем 1 мкл

Промывки растворителя A (перед вводом) 2

Промывки растворителя A (после ввода) 4

Объем растворителя A 2 мкл

Промывки растворителя B (перед вводом) 2

Промывки растворителя B (после ввода) 4

Объем растворителя B Макс

Промывки пробы 1

Объем промывки пробы 5 мкл

Прокачки пробы 5




Время выдержки (перед вводом) 0 мин

Время выдержки (после ввода) 0 мин

Скорость набора промывки растворителя 300 мкл/мин

Скорость распыления промывки растворителя 6000 мкл/мин

Скорость набора промывки пробы 300 мкл/мин

Скорость распыления промывки пробы 6000 мкл/мин

Скорость распыления ввода 6000 мкл/мин

Задержка вязкости 7 с

Глубина пробы Отключено

Модуль ЭКД коллизионной ячейки

Азот Выкл.

Гелий Выкл.



Упражнение — Разработка метода сбора данных в 7000 Задание 3. Создание метода сбора данных для поиска исходных ионов

Задание 3. Создание метода сбора данных для поиска исходных ионов

В этом упражнении пользователь начнет работу с введенными для метода в задании 2 параметрами ГХ, а затем введет параметры 7000 для сканирования исходных ионов и сохранит метод.


3 Введите подходящие для смеси

бензодиазепинов параметры МС и

сохраните метод как

iiipaul1_MS_Scan.M, где iii —

ваши инициалы.

a Нажмите значок Средство редактирования метода для QQQ

(Рис. 1).

b Задайте Температуру источника

250 °C, для Энергии электронов

задайте значение Настройка, для

Задержки растворителя — 4 мин,

а для Настройки детектора —

Дельта НЭУ.

c Для Фильтрации по времени задайте

значение Ширины пика 0,7 с.

d В разделе Временной сегмент

введите Время начала 3,0 и выберите

Тип сканирования Сканирование МС1 из раскрывающегося списка.

Для Дельта НЭУ введите 0 и выберите

Данные сохранены.

e В разделе Сегменты сканирования

введите Сканирование для Имени сегмента, 50 для Начальной массы,

450 для Конечной массы и 500

для Времени сканирования.

f В разделе Параметры сканирования

введите Величина шага 0,1 а. е. м. и

Порог 100.

g Нажмите кнопку ОК, чтобы закрыть

окно.

h В главном окне выберите

Метод > Сохранить метод как и


iiipaul1_MS_Scan.M, где iii — ваши

инициалы.

• Откроется показанное на Рис. 4

окно Средства редактированияметода для QQQ

• 7000 начинает сбор данных по истечении 4 мин, что связано с

настройкой Задержки.растворителя.


Упражнение — Разработка метода сбора данных в 7000Задание 3. Создание метода сбора данных для поиска исходных ионов

Рисунок 4 Средство редактирования метода для QQQ


Упражнение — Разработка метода сбора данных в 7000 Задание 4. Сбор данных сканирования исходных ионов (дополнительно)

Задание 4. Сбор данных сканирования исходных ионов (дополнительно)

В этом задании пользователь научится выполнять сбор данных сканирования с использованием разработанного в предыдущих заданиях метода. Это задание является дополнительным, потому что следующее задание можно выполнить с использованием поставляемого с системой файла с примерами данных. По желанию можно создать свой собственный файл данных, как описано в этом задании.

выполнение


4 Выполните сбор данных

(дополнительно).

• Назовите файл данных

iiifirst_trial3_scan.D, где iii —


• Укажите путь

к местоположению файлов

данных и метода.

a Нажмите значок Запустить цикл (зеленая стрелка).

b В окне Путь к данным введите

каталог для сохранения файла

данных, собранных в данном цикле.

c В разделе Переднее впускное отверстие введите

iiifirst_trial3_scan.D для Имени файла данных, где iii — ваши

инициалы.

d Введите номер местоположения

Виалы в лотке автосамплера.

e В окне Разделы метода для выполнения выберите Сбор данных.

f Нажмите кнопку OK и Выполнить метод.

• Отображается диалоговое окно

Запустить цикл, показанное

на Рис. 5.

• Метод передается в ГХ и 7000.

Когда приборы готовы,

выполняется введение пробы,

сбор данных и передача их

в указанный каталог.


Упражнение — Разработка метода сбора данных в 7000Задание 4. Сбор данных сканирования исходных ионов (дополнительно)

Рисунок 5 Диалоговое окно «Запуск цикла»


Упражнение — Разработка метода сбора данных в 7000 Задание 5. Определение массы исходных ионов

Задание 5. Определение массы исходных ионов

В этом упражнении пользователь научится определять исходные ионы для каждого соединения в файле с собранными данными.


5 Откройте файл с собранными

данными.

• В программе Qualitative

Analysis откройте файл с

примерами first_trial3_scan.Dили файл данных, созданный

при выполнении «Задание 1.

Установите параметры

впускного отверстия и

инжекции» на стр. 5.

a Дважды нажмите значок Qualitative Analysis.

Система отобразит диалоговое окно

Открытие файлов данных.

• При открытии файла данных

флажок Загрузить результаты

(в левом нижнем углу) становится

серым, потому что полученные

результаты не были сохранены.

Если установлен флажок, это

означает, что файлы данных уже

содержат результаты. Снимитеэтот флажок перед открытием файла.

Перед началом работы убедитесь,

что все предыдущие настройки

возвращены к значениям

по умолчанию:

• Восстановить шаблоны

по умолчанию.

• Выберите Просмотр >

Конфигурация окон>Восстановить конфигурациюпо умолчанию.

• Убедитесь, что выбран метод

default.m. (см. область заголовка).

• Нажмите Метод > Открыть.

• Выберите default.m и нажмите

Открыть.

• Верните параметры отображения

к значениям по умолчанию.

• Нажмите Инструменты >Параметры отображенияграфиков.

• Нажмите По умолчанию, а

затем OK.



b Выполните один из следующих

вариантов:

• Выберите файл данных

с примерами first_trial3_scan.D и

нажмите Открыть.

• Выберите файл данных, созданный

в «Задание 4. Сбор данных

сканирования исходных ионов

(дополнительно)» на стр. 13, и


По умолчанию в системе

отображается Сводная ионная

хроматограмма (TIC).

• На рисунке ниже показана

компоновка по умолчанию. Вот что

видит пользователь.

• В программе Qualitative Analysis

отображается только что открытый

файл данных с той же компоновкой

и параметрами, что и ранее

открытый файл. Поэтому для этого

упражнения ОБЯЗАТЕЛЬНО

вернуть настройки по умолчанию.




• Определите массы исходных

ионов для всех восьми пиков.

• Они определены правильно,

если значения совпадают

с представленными в этой

таблице.

• После определения масс

исходных ионов закройте файл

данных.

c В окне Результаты хроматограмм

на панели инструментов выбран

значок Выбор диапазона .

d Нажмите левой кнопкой мыши и

перетащите курсор через первый пик

на ВУ около 9,0, чтобы образовалась

затененная область, как показано ниже.

e Нажмите правой кнопкой мыши

внутри затененной области и

в контекстном меню выберите

команду Извлечь спектр МС.

f Повторите действия step d–step e

для других соединений.

Массы исходных ионов должны совпа-

дать со значениями из таблицы в шаге 2.

g Нажмите Файл > Закрыть файл данных.

h Ответьте Нет на вопрос о сохранении

результатов.

• В окне Результаты спектра МС

отображается средний спектр

из выделенной внутри пика зоны.

• Значение массы предшественника,

оксазепама, определено и

составляет m/z 239,1.


ПИК

1

2

3

4

5

6

7

8

СоединениеОксазепам

Лоразепам

Диазепам

Темазепам

Флунитразепам

Нитразепам

Клоназепам

Алпразолам

ВУ9,0

9,3

9,4

10,0

10,1

10,9

11,4

12,1

m/z239,1

274,1

283,2

271,1

312,2

253,1

314,1

308,2


Упражнение — Разработка метода сбора данных в 7000Задание 6. Создание метода сбора данных для определения масс ионов-продуктов

Задание 6. Создание метода сбора данных для определения масс ионов-продуктов

В этой части разработки метода мы используем четыре энергии столкновения, чтобы определить наилучший ион-продукт для мониторинга множественных реакций (MRM). Начнем с метода, сохраненного в «Задание 3. Создание метода сбора данных для поиска исходных ионов» на стр. 11, и изменим часть 7000 метода сбора данных так, чтобы фрагментировать ранее определенные исходные ионы и сканировать ионы-продукты с четырьмя различными энергиями соударений.


6 Введите подходящие

обнаружения иона-продукта

для оксазепама параметры МС и


iiipaul1_Oxazepam_prod_ion_Scan2.M, где iii — ваши инициалы.

Используя данные предыдущего

задания, создайте

дополнительные методы для

семи оставшихся соединений.

a Из рабочей станции Data Acquisition

откройте метод iiipaul1_MS_Scan.M,

где iii — ваши инициалы.

b Нажмите значок Средство редактирования метода для QQQ.

c В разделе Временной сегмент

введите начальное Время 3,0,

выберите из выпадающего списка

Тип сканирования иона-продукта,

введите значение 650 для Дельта НЭУ и выберите Данные сохранены.

d В разделе Сегменты сканирования

введите Оксазепам для Имени сегмента, 239,1 для Исходного иона,

50 для MS2 от, 275 для MS2 до, 300

для Времени сканирования (мс) и 5

для Энергии столкновения.

e Задайте значение Разрешения МС1

Широкий.

f В разделе Параметры сканирования введите Величина шага 0,1 а. е. м. и выберите Данные профиля.

g В области Сегменты сканирования

нажмите на таблице правой кнопкой

мыши и выберите Новый сегмент сканирования из контекстного

меню.

h Повторите указанные выше шаги

трижды.

• Этот метод был ранее сохранен

в задании 3, а параметры сбора

данных ГХ обеспечивают

превосходное разделение

соединений.

• Откроется окно Средстворедактирования методадля QQQ.

• Создается новый сегмент

сканирования со всеми

значениями для первого сегмента

сканирования.

• В 7000 поддерживается не более четырех сегментов

сканирования.


Упражнение — Разработка метода сбора данных в 7000 Задание 6. Создание метода сбора данных для определения масс ионов-продуктов


i Для второго сегмента сканирования

измените Энергию столкновения

на 15.

j Для третьего сегмента сканирования

измените Энергию столкновения

на 25.

k Для четвертого сегмента

сканирования измените Энергию столкновения на 35.

l Нажмите кнопку ОК, чтобы закрыть

окно.

m В главном окне выберите



iiipaul1_Oxazepam_prod_ion_Scan2.M, где iii — ваши инициалы.

n Нажмите значок Средство редактирования метода для QQQ.

o Для каждого приведенного в Табл. 2

соединения создайте новый метод.

Для этого повторите указанные выше

шаги, заменяя значения из Табл. 2 и

сохраняя каждый метод в таблицу

с соответствующим названием.

• Для оптимальной

чувствительности определения

ионов-продуктов и селективности

требуется в общей сложности

четыре сегмента сканирования,

каждый с отличающейся

от других энергией столкновения.

• Создается восемь специфических

для соединения методов.

Таблица 2 Требуемые методы и измененные значения для определения ионов-продуктов

Метод Имя сегмента Исходный ион

MS2 от MS2 до Время сканирования

Энергия столкновения

iiipaul1_Oxazepam_prod_ion_Scan2.M Оксазепам 239,1 50 275 300 5, 15, 25, 35

iiipaul1_Lorazepam_prod_ion_Scan1.M Лоразепам 274,1 50 280 300 5, 15, 25, 35

iiipaul1_diazepam_prod_ion_Scan1.M Диазепам 283,1 50 290 300 5, 15, 25, 35

iiipaul1_flunitrazepam_prod_ion_Scan1.M Флунитразепам 312,2 50 315 300 5, 15, 25, 35

iiipaul1_temzepam_prod_ion_Scan1.M Темазепам 271,1 50 280 300 5, 15, 25, 35

iiipaul1_nitrazepam_prod_ion_Scan1.M Нитразепам 253,1 50 270 300 5, 15, 25, 35

iiipaul1_clonazepam_prod_ion_Scan1.M Клоназепам 314,1 50 320 300 5, 15, 25, 35

iiipaul1_alprazelam_prod_ion_Scan1.M Алпразолам 308,2 50 320 300 5, 15, 25, 35


Упражнение — Разработка метода сбора данных в 7000Задание 6. Создание метода сбора данных для определения масс ионов-продуктов

Рисунок 6 Метод сбора данных 7000 для оксазепама с целью определения

иона-продукта


Упражнение — Разработка метода сбора данных в 7000 Задание 7. Сбор данных для определения ионов-продуктов (дополнительно)

Задание 7. Сбор данных для определения ионов-продуктов (дополнительно)

В этом задании пользователь научится создавать последовательность сбора данных для определения ионов-продуктов бензодиазепинов с использованием восьми специфических методов, разработанных в предыдущем задании.


7 Настройте и выполните

последовательность

(дополнительно).

• Назовите файлы данных

iiixx_prod_ion_scan1.d, где

iii — ваши инициалы, а xx —

название соединения.

a Нажмите значок Редактирование последовательности для

отображения Таблицы последовательности.

b Из выпадающего списка рядом

с кнопкой Новая проба на панели

Таблица последовательности

выберите 5 проб.

c Для каждой пробы введите Имя

пробы, номер расположения Виалы

АПЖМ, имя Файла метода и Файла данных, как показано на Рис. 7.

d Используйте выпадающий список

Заполнить вниз для копирования

в столбец Тип значения Проба, а

в столбец Разб. значения 1 для всех

проб.

e Нажмите кнопку OK.

f Выберите Последовательность > Сохранить последовательность как

для сохранения последовательности

как BenzoPI.Sequence.xml. g Разместите восемь виал с пробами

в указанное местоположение лотка

АПЖМ.

h Нажмите кнопку Выполнение последовательности, чтобы открыть

диалоговое окно Запустить последовательность.

i При необходимости добавьте

Комментарий, измените Каталог файла данных и нажмите кнопку

Выполнить последовательности.

• Данный шаг является

дополнительным, так как можно

использовать шесть образцов

файлов данных.

• Теперь в таблице имеется восемь

строк с пробами.


Упражнение — Разработка метода сбора данных в 7000Задание 7. Сбор данных для определения ионов-продуктов (дополнительно)

Рисунок 7 Значения таблицы последовательности

Рисунок 8 Диалоговое окно «Запустить последовательность»


Упражнение — Разработка метода сбора данных в 7000 Задание 8. Определение ионов-продуктов

Задание 8. Определение ионов-продуктов

В этом упражнении пользователь научится определять ионы-продукты для каждого соединения в специфическом для каждого из них файле с собранными данными.


8 Откройте файлы с собранными

данными в программе Qualitative

Analysis.

a Дважды нажмите значок Qualitative Analysis.

Система отобразит диалоговое окно

Открытие файлов данных.

• При открытии файла данных

флажок Загрузить результаты

(в левом нижнем углу) становится

серым, потому что полученные

результаты не были сохранены.

Если установлен флажок, это

означает, что файлы данных уже

содержат результаты. Снимитеэтот флажок передоткрытием файла.

b Выполните один из следующих

вариантов:

• Выберите восемь образцов

файлов данных и нажмите

Открыть.

• Выберите файлы данных,

собранных в «Задание 7. Сбор

данных для определения

ионов-продуктов

(дополнительно)» на стр. 21, и


c В Навигаторе по данным снимите

флажки для всех соединений, кроме

оксазепама.

d На панели инструментов в окне

Результаты МС-спектра выберите

из выпадающего меню 5.

• Для выбора нескольких файлов

данных используйте клавишу

CTRL.

• Одновременно может

отображаться только один файл

сбора данных.

• Может отображаться до пяти

панелей спектра.



Рисунок 9 Извлеченные спектры для сканирования четырех энергий столкновения

с указанием выбранных ионов-продуктов

e В окне Результаты хроматограмм

на панели инструментов выбран

значок Выбор диапазона .

f Нажмите левой кнопкой мыши и

перетащите курсор через видимый

пик, соответствующий ВУ этого

соединения, чтобы образовалась

затененная область.

g Нажмите правой кнопкой мыши

внутри затененной области и

в контекстном меню выберите

команду Извлечь спектр МС. Спектр

для этого пика показан на Рис. 9.

• Для оксазепама этот пик

составляет около 9 мин.

• В окне Результаты МС-спектра

отображается средний спектр из

выделенной внутри пика области

для каждого сегмента

сканирования четырех энергий

столкновения в методе сбора

данных.





• Определите массы

ионов-продуктов для всех восьми

пиков.

• Они определены правильно,

если значения совпадают

с представленными в Табл. 3.

• После определения масс

исходных ионов закройте

файл данных.

h Ион-продукт для первого

соединения, оксазепама, определен

и имеет m/z 177,1 при ИСД 25.

i Снимите флажок для текущего

файла данных в окне Навигатора по данным.

j Установите флажок для следующего

файла данных.

k Повторите действия step f–step j для других соединений.

Массы ионов-продуктов должны

соответствовать значениям в Табл. 3.

l Нажмите Файл > Закрыть файл данных.

m Ответьте Нет на вопрос о сохранении

результатов.

• Рассмотрите каждый спектр,

чтобы определить наиболее

селективный ион. Выявите самое

большое значение массы,

наиболее близкое к исходному

иону, с минимальной

интерференцией с близкими

ионами.

Здесь наилучшим выбором

является ион со значением 100,

когда другие ионы имеют

максимальное значение 25

в других спектрах.

Таблица 3 Ионы-продукты, определяемые в бензодиазепинах

Соединение Файл данных Исходный ион Ион-продукт Энергия столкновения

Оксазепам Oxazepam_prod_ion_scan2.d 239,1 177,1 25

Лоразепам Lorazepam_prod_ion_scan1.d 274,1 239,1 15

Диазепам Diazepam_prod_ion_scan1.d 283,1 238,1 25

Флунитразепам Flunitrazepam_prod_ion_scan1.d 312,2 266,1 25

Темазепам Temazepam_prod_ion_scan1.d 274,1 77,1 35

Нитразепам Nitrazepam_prod_ion_scan1.d 253,1 152,1 25

Клоназепам Clonazepam_prod_ion_scan1.d 314,1 268,2 25

Алпразолам Alprazolam_prod_ion_scan1.d 308,2 279,2 15


Упражнение — Разработка метода сбора данных в 7000 Задание 9. Создание метода MRM

Задание 9. Создание метода MRM

В этом упражнении пользователь научится создавать метод MRM для определения наличия бензосоединений в пробе.


9 Откройте программу Data

Acquisition и создайте метод

MRM с использованием данных

из Табл. 3 на стр. 25.

a Из рабочей станции Data Acquisition

откройте метод iiipaul1_MS_Scan.M,

где iii — ваши инициалы.

b Нажмите значок Средство редактирования метода для QQQ.

c В разделе Временной сегмент

введите начальное Время 3,0,

выберите из выпадающего списка

Тип сканирования MRM, введите

значение 650 для Дельта НЭУ и

выберите Данные сохранены.

d В разделе Сегменты сканирования

введите Широкий для Разрешения MS1 и Разрешения MS2 и 50

для Выдержки.

e В области Сегменты сканирования

нажмите на таблице правой кнопкой

мыши и выберите Новый сегмент сканирования из контекстного

меню.

f Повторите указанные выше шаги

семь раз.

g Заполните оставшиеся поля раздела

Сегменты сканирования, чтобы

результат совпал с Рис. 10 на стр. 27.

h Нажмите кнопку ОК, чтобы закрыть

окно.

i В главном окне выберите



iiipaul1_benzo_mrm_1.M, где iii —


• Используются и остаются

неизменными параметры сбора

данных ГХ этого метода. В этой

процедуре редактируются

параметры метода 7000 с целью

создания метода MRM.


Упражнение — Разработка метода сбора данных в 7000 Задание 9. Создание метода MRM

Рисунок 10 Заполненный раздел сканирования для метода MRM


Упражнение — Создание метода количественного анализаЗадание 10. Сбор данных MRM (дополнительно)

Упражнение — Создание метода количественного анализа

Задание 10. Сбор данных MRM (дополнительно)

В этом упражнении пользователь научится создавать последовательность для сбора данных калибровки, используемую для количественного анализа собранных данных MRM для проб, содержащих бензодиазепины. Кроме того, имеются три пробы, содержащие бензодиазепины, которые служат для демонстрации количественного анализа неизвестных проб. Часть программы, заключающаяся в сборе данных для калибровочных содержащих бензодиазепины проб, является дополнительной, так как образцы файлов данных имеются на диске с программой.




10 Откройте программу Data

Acquisition и используйте

созданный в предыдущем задании

метод MRM для сбора данных

калибровки. Эти данные

необходимы для создания метода

количественного анализа в

программе Quantitative Analysis.

a С рабочей станции Data Acquisition заг-

рузите метод iiipaul1_benzo_mrm_1.M.

b Нажмите значок Редактирование последовательности для отображения

Таблицы последовательности.

c Добавьте или Удалите записи проб,

чтобы в Таблице последовательности

содержалось пять строк с пробами.

d Для первой пробы введите BenzoLevel1

в поле Имя, расположение виалы в

АПЖМ в поле Виала, выберите

Benzo_MRM.M для Файла метода,

введите paul1_benzo_L1_19Nov08.D

для Файла данных, выберите Кали-бровка из выпадающего списка для

Типа, введите L1 для Уровня и 1 для

Разведения. См. Рис. 11 на стр. 30.

e Используйте выпадающий список

Заполнить с приращением на панели

инструментов Таблица последовательности для копирования

с приращением указанных для первой

строки значений Имени, Виалы и

Уровня в оставшиеся четыре пробы.

f Используйте выпадающий список

Заполнить на панели инструментов

Таблица последовательности для

копирования указанных для первой

строки значений Файла метода,

Файла данных, Типа и Уровня

в оставшиеся четыре пробы.

g Измените имя _L1_ part Файла данных, чтобы оно соответствовало

закономерности, указанной на Рис. 11

на стр. 30.

h Добавьте три дополнительные строки

в таблицу проб и заполните значения

для трех проб так, чтобы заполненная

таблица соответствовала Рис. 11 на

стр. 30.

i Нажмите кнопку ОК, чтобы закрыть окно.

• Этот метод был создан в «Задание

9. Создание метода MRM» на

стр. 26.

• Для удаления следующих

друг за другом записей проб

нажмите на первую пробу

для удаления в левой колонке

с номерами проб, удерживая

клавишу Shift, нажмите на

последнюю пробу в таблице для

удаления. Когда будут выделены

подлежащие удалению пробы,

нажмите клавишу Delete своего

компьютера.

• Увеличиваемое таким образом

Расположение виалы

подразумевает, что виалы

размещают в лотке

пробоотборника друг за другом.



Рисунок 11 Последовательность калибровочных содержащих бензодиазепины проб

и неизвестных проб


j Выберите Последовательность > Сохранить последовательность как

для сохранения последовательности

как BenzoCalibration.Sequence.xml. k Разместите пять виал с пробами

с известной концентрацией и три

виалы с пробами с неизвестной

концентрацией в известные месте

лотка АПЖМ.

l Нажмите кнопку Выполнение последовательности, чтобы открыть

диалоговое окно Запустить последовательность.

m При необходимости добавьте

Комментарий, измените Каталог файла данных и нажмите кнопку

Выполнить последовательности.

• Оставшиеся шаги являются

необязательными. Подготовка

этих виал с пробами

осуществляется в разделе

«Подготовка образцов,

необходимых для сбора данных»

на стр. 3.


Упражнение — Создание метода количественного анализаЗадание 11. Создание серии количественного анализа

Задание 11. Создание серии количественного анализа

В этом упражнении пользователь научится создавать серию, которая используется для создания метода количественного анализа с использованием данных, которые были собраны для пяти калибровочных проб, обработанных в предыдущем задании.


11 Откройте программу Quantitative

Analysis и создайте серию для

анализа данных.

Дайте серии имя и назначьте

каталог.

• Добавьте пробы в серию.

a На рабочем столе Windows дважды

нажмите значок QQQ Quantitative Analysis.

b В главном меню выберите Файл > Новая серия, для поиска каталога

с пятью калибровочными пробами

воспользуйтесь выпадающим

списком Просмотреть и введите имя

серии BenzoCalibrationData, а затем

нажмите кнопку Открыть.

c В главном меню выберите Файл > Добавить пробы и выберите пять

файлов данных

paul1_benzo_L1_19Nov08.D–

paul1_benzo_L5_19Nov08.D.

• Открывается Quantitative Analysis

Workstation.

• Этот каталог выбирается для

файлов данных в «Задание 10.

Сбор данных MRM

(дополнительно)» на стр. 28.

Если задание по сбору данных

было пропущено, можно

использовать пять образцов

файлов данных с диска

с программой. Просто скопируйте

образцы файлов данных пробы

в этот каталог.

• Для создания калибровочной

кривой требуются пять файлов

калибровки, и один из них

используется для извлечения

данных MRM для метода.

• Тип для всех пяти проб —

Калибровка, а Уровень должен

быть в пределах от L1 до L5. Тип

и Уровень берутся из

последовательности сбора данных

Табл. 11 на стр. 30.


Упражнение — Создание метода количественного анализаЗадание 11. Создание серии количественного анализа

.

d Нажмите кнопку OK. Теперь Таблица серии содержит пять проб.

e При необходимости измените Тип

на Калибровку, выполните

сортировку столбца Имя и введите

значения, показанные в столбце

Уровень.

f При необходимости добавьте столбцы

Разведение и Количество в раздел

Проба Таблицы серии. Введите

значение 1 для всех записей

Разведение и Количество в этих

столбцах.

• Теперь серии требуется метод

анализа данных для

автоматического выполнения

анализа пробы.



Упражнение — Создание метода количественного анализаЗадание 12. Создание метода количественного анализа MRM

Задание 12. Создание метода количественного анализа MRM


12 Создайте метод Data Analysis. a В главном меню выберите Метод > Создать > Новый метод из полученных данных MRM для

отображения диалогового окна Новый метод из полученных данных.

b Для выбора каталога серии

используйте выпадающий список

Просмотреть. Нажмите на файле

данных paul1_benzo_L5_19Nov08.D, а

затем нажмите кнопку Открыть.

• Сохраненные в созданном

в «Задание 9. Создание метода

MRM» на стр. 26 методе сбора

данных данные пробы

используются для автоматического

заполнения полей метода анализа

данных.

• Большая часть метода анализа

данных создается программой

на основе файла данных пробы, а

затем результат предоставляется

пользователю для завершения

редактирования метода вручную

в средстве редактирования.

•



c На панели Задачи метода нажмите

Задачи настройки метода, затем

нажмите Настройка соединения MRM

для отображения Таблицы метода.

• Проверьте восемь соединений,

которые были изначально

включены в метод сбора данных.




• Создайте таблицу калибровки. d На панели Задачи метода нажмите

Задачи настройки метода, а затем

Настройка концентрации.

e В столбце Разб. высокой конц. для

первого соединения в таблице введите

1000,0, затем из выпадающего списка

выберите 1 : 2 для столбца Профиль разб.

• Столбцы Таблицы метода

изменяются для упрощения ввода

уровней концентраций.

• Для автоматического расчета

концентраций для других уровней

программа использует самую

высокую концентрацию для

калибровочного образца, число

уровней калибровки и схему

разбавления.




f На панели инструментов Таблица метода введите L для Префикса имени уровня и 5 для Числа уровней,

затем нажмите кнопку Создать уровень.

• Ниже для первого соединения в

таблице метода показана таблица

калибровки, в которой содержатся

записи концентраций для каждого

из пяти уровней калибровки.




• Скопируйте таблицу калибровки

в другие квантификаторы.

g В Таблице квантификаторов

выберите первое соединение,

нажмите на нем правой кнопкой

мыши и выберите в контекстном меню

Копировать уровни калибровки в.

• Отобразится диалоговое окно

Копирование уровней калибровки в. Используйте указанный ниже

способ для копирования таблицы

калибровки для текущего

соединения в таблицы для других

выбранных или всех соединений.

h Для выбора всех соединений

в диалоговом окне нажмите кнопку

Выбрать все, а затем нажмите

кнопку OK.

• Эта таблица калибровки копируется

в таблицу Квантификатор всех

восьми соединений.




• Настройка калибровочной кривой i На панели Задачи метода нажмите

Задачи настройки метода, а затем

Настройка калибровочной кривой.

j В таблице Квантификатор в столбце

CF для первого соединения выберите в

выпадающем списке вариант

Квадратичная. При выбранной ячейке

нажмите на ней правой кнопкой

мыши и в контекстном меню выберите

Заполнить вниз.

• Отображается Таблица метода

с выделенными столбцами АК,

Начало координат АК и Вес АК.

• В этом примере для

бензодиазепинов АК будет иметь

значение Квадратичная, Началокоординат АК — Игнорировать,

и Вес АК — Нет.




• Выберите интегратор. k На панели Задачи метода нажмите

Дополнительные задачи, а затем

Настройка параметров интегрирования.

l На панели Таблица метода для

каждого Квантификатора нажмите

запись в столбце Инт. для

отображения диалогового окна

Интеграция и выбора МС-МС (ГХ)

в выпадающем списке Интегратор.

m Нажмите кнопку Применить ко всем

для задания этого значения Интегратора

для всех пиков квантификатора.

n Нажмите кнопку ОК, чтобы закрыть

это диалоговое окно.

• В MassHunter можно выбрать

несколько интеграторов.

• Используйте интегратор МС-МС

(ГХ), который оптимизирован для

данных MRM при использовании

ГХ. Это интегратор без параметров.

•

• Этот интегратор используется

для интегрирования всех пиков.





• Выйдите из средства

редактирования метода и

сохраните метод.

o На панели Задачи метода нажмите

Сохранить/Выйти, а затем Выйти.

• Примените метод анализа данных

к серии.

p Нажмите кнопку Да.

q Нажмите кнопку Анализировать серию, чтобы выполнить

количественную оценку всех проб

в серии.

• Метод применяется ко всем

пробам в Таблице серии.

• При выборе Анализировать сериюпроисходит регистрация отклика

соединения для каждого

калибровочного образца и

последующее использование их

для создания уравнений

аппроксимации кривой

для каждого соединения.



• Проверьте калибровочную кривую

для каждого соединения.

r На панели калибровочной кривой

нажмите правой кнопкой мыши и

выберите в контекстном меню

Помощник аппроксимации кривой.

s В таблице Аппроксимация кривой

выберите строку с Типом

Квадратичная, Игнорировать для

Начало координат и используйте

значение не больше 0 для Числа отключенных точек.

• В таблице Аппроксимация кривойнажмите на значке фильтра рядом

с названием столбца. При нажатии

значка фильтра Тип и выборе

Квадратичная становятся

возможны только квадратичные

уравнения для кривой калибровки

этого соединения. Для другого

критерия попробуйте указанный

ниже способ.




t Проверьте аппроксимацию кривой для

различных уравнений, выбрав другую

строку в таблице аппроксимации кри-

вой. Если вы найдете лучшую аппрок-

симацию кривой, выберите ее и в

области построения кривой калибровки

нажмите правой кнопкой мыши и

выберите в контекстном меню Принять кривую, построенную помощником.

u На панели инструментов Таблица серии нажмите на правую стрелку для

выбора следующего откалиброванного

соединения и повторите шаги q–s.

v Повторяйте указанные выше шаги,

пока не будут проверены и, при

необходимости, исправлены все

восемь откалиброванных соединений.

• Эти аппроксимации кривой были

изначально выбраны в step j не

графическим способом.

• На панели Кривая калибровки

одновременно отображаются

только данные калибровки только

для одного соединения.

w Нажмите кнопку Анализировать серию, чтобы выполнить

количественную оценку всех проб

в серии.

• Этот шаг необходим, только если

было изменено уравнение

аппроксимации кривой во время

проведенного ранее

редактирования.

• Сохраните метод Data Analysis

.

x В главном меню выберите Метод > Редактировать для отображения

Редактора методов.

y На панели Задачи метода нажмите

Сохранить/Выйти, а затем Сохранить как.

z Введите BenzoDA для имени метода и

нажмите кнопку Сохранить.



Упражнение — Создание метода количественного анализаЗадание 13. Количественная оценка серии неизвестных проб

Задание 13. Количественная оценка серии неизвестных проб

В этом упражнении пользователь научится создавать серию, которая используется для количественного анализа неизвестных проб с бензодиазепинами, используя созданный в предыдущем заданииколичественный метод. Файлы данных проб не поставляются для этих неизвестных проб с бензодиазепинами. Эти файлы данных можно получить, только выполнив «Задание 10. Сбор данных MRM (дополнительно)» на стр. 28.


13 Откройте программу Quantitative Analysis и создайте серию для анализа данных.Дайте серии имя и назначьте каталог.

• Добавьте пробы в серию.

a На рабочем столе Windows дважды нажмите значок QQQ Quantitative Analysis.

b В главном меню выберите Файл > Новая серия, для поиска каталога с тремя пробами с бензодиазепинами воспользуйтесь выпадающим списком Просмотреть и введите имя серии BenzoSamples031709, а затем нажмите кнопку Открыть.

c В главном меню выберите Файл > Добавить пробы и выберите пробы BenzoSample01.D — BenzoSample03.D.

• Открывается Quantitative Analysis Workstation.

• Этот каталог включен в диск с программой. Просто скопируйте образцы файлов данных пробы в этот каталог.

.

d Нажмите кнопку OK. Теперь Таблица серии содержит три неизвестных пробы.

e При необходимости измените Тип на Проба.

f При необходимости добавьте столбцы Разведение и Количество в раздел Проба Таблицы серии. Введите значе-ние 1 для всех записей Разведение и Количество в этих столбцах.

• Теперь серии требуется метод анализа данных для автоматического выполнения анализа пробы.

g В главном меню выберите Метод > Открыть > Открыть и применить из существующего файла для отображения диалогового окна Открыть файл метода.

h Введите BenzoDA.quantmethod.xml для Имени файла и нажмите кнопку Открыть.

i Нажмите кнопку Анализировать серию, чтобы выполнить количествен-ную оценку всех проб в серии.

j Проверьте результаты для каждого соединения в методе.

• Метод будет применен к данной серии.

• Распечатайте один или более отчетов.


www.agilent.com

Agilent Technologies, Inc. 2009

Второе издание, июнь 2009 г.

G6845-98001

Agilent Technologies

MassHunter Workstation Software — программа сбора …...Задание 1....

Documents

Transcript of MassHunter Workstation Software — программа сбора …...Задание 1....