Informes de Laboratorio Bioqumica IIMedina Michell, Prez Fernanda Departamento de Ciencias de la Vida, Universidad de las Fuerzas Armadas-ESPESangolqu, Ecuadorlore_mp13@hotmail.com fefi_feps@hotmail.com Abstract This paper presents a design of educational activity, which aims to promote and complement the practices carried out in the laboratory of Biochemistry II. We begin with a review of blood components, to continue the description of each method in the analysis of the concentration of glucose, triglycerides, cholesterol and Urea in the blood. This article is complemented with the results obtained by performing these practices in class.

Resumen Este artculo presenta un diseo de actividad didctica, cuyo objetivo es favorecer y complementar las prcticas realizadas en el laboratorio de Bioqumica II. Empezamos con una revisin sobre los componentes sanguneos, para continuar con la descripcin de cada mtodo en el anlisis de la concentracin de Glucosa, Triglicridos, Colesterol y Urea presentes en la sangre. Este artculo est complementado con los resultados obtenidos al realizar estas prcticas en clase.Introduccin La sangre es un tejido especial compuesto por clulas (eritrocitos o hemates, leucocitos o glbulos blancos y trombocitos o plaquetas) y una sustancia intercelular liquida (plasma sanguneo) en la cual estn suspendidas las clulas. Cuando se ha extrado fibringeno por coagulacin el plasma se llama suero. [1]Fig.1. Composicin de la sangre Las funciones principales de la sangre son el transporte de: Oxigeno desde los pulmones hacia los tejidos. Dixido de carbono desde los tejidos hacia los pulmones. Sustancias nutritivas desde el intestino hacia otros rganos. Productos nitrogenados de metabolismo hacia los riones y el hgado. Hormonas hacia sus dianas celulares. Adems la sangre cumple con: Defensa contra agentes patgenos. Amortiguacin de los lquidos corporales. Termorregulacin. Hemostasia.Clulas Sanguneas Las clulas sanguneas maduras solo viven durante un tiempo relativamente breve (das a meses) de modo que tienen que volver a producirse en forma continua. Se calcula que en los adultos se forman diariamente unos 200.000 millones de eritrocitos y alrededor de 70.000 millones de neutrfilos. En los mamferos la formacin de las clulas sanguneas y de las plaquetas ocurre en la medula sea y recibe el nombre de hematopoyesis. Los precursores de los linfocitos tambin se originan en la medula sea pero la abandonan muy pronto y maduran en el timo (linfocitos T) o en los ganglios linfticos y el bazo (Linfocitos B). [1]Plasma Es el componente mayoritario de la sangre, bsicamente una solucin acuosa de color amarillento, en la que eventualmente se encuentra disueltos electrolitos, iones y sustancias ms complejas como lpidos, vitaminas, cofactores y protenas plasmticas. [1]Fig.2. Composicin del plasmaCdigo de colores de tubos de ensayo Los tubos pueden contener sustancias agregadas para preservar el procesado en el laboratorio clnico. Usar el tubo equivocado puede provocar reacciones adversas en la muestra de sangre que no puedan ser utilizadas luego para su procesamiento. [1] Las sustancias pueden ser anticoagulantes (EDTA, citrato de sodio, heparina) o un gel con densidades intermedias entre las clulas sanguneas y el plasma sanguneo. Adems algunos tubos contienen sustancias que preservan ciertos qumicos o sustancias dentro de la sangre, como por ejemplo la glucosa. Cuando un tubo se centrifuga, las clulas sanguneas se depositan en el fondo del tubo, y quedan cubiertas por una capa de gel, y el plasma sanguneo queda en la capa superior. El gel permite que el tubo se pueda invertir para el transporte sin correr el riesgo de que las clulas se vuelvan a mezclar con el plasma. Cuando un tubo que no ha sido tratado con un agente coagulante se centrifuga, el lquido claro es plasma y contiene plaquetas. [1]Fig.3. Cdigo de coloresDesarrollo de ContenidosExtraccin de sangre En la prctica de rutina, la extraccin de sangre venosa es el mtodo de eleccin cuando se requieren mayores volmenes de sangre para diagnstico en el laboratorio o cuando razones excluyen la extraccin de sangre capilar. La sangre venosa tambin se puede extraer a travs de un catter ya conectado en vena o mediante venopuncin. [2] Mediante los anlisis se puede detectar la presencia de muchas enfermedades habituales y frecuentes como puede ser la anemia, la diabetes, las infecciones, pero tambin pueden dar a conocer otras menos frecuentes y ms graves como la leucemia u otros tipos de cncer. [2]

Anlisis de glucosa en sangreEl nivel de glucosa en la sangre es la cantidad de azcar que contiene. El nivel de glucosa en sangre tambin se denomina glucosa en suero y glucemia. [3] La glucosa es una fuente importante de energa para la mayora de las clulas del cuerpo, incluidas las del cerebro. Los carbohidratos que se encuentran en las frutas, los cereales, el pan, la pasta y el arroz se transforman rpidamente en glucosa en el cuerpo, lo que eleva el nivel de dicho azcar en la sangre. [3] Los niveles de glucosa en sangre aumentan despus de haber ingerido alimentos y desencadenan la produccin de una hormona denominada "insulina" en el pncreas, la cual se libera en el torrente sanguneo. La insulina acta como una llave que abre las puertas de las clulas y permite la entrada de la glucosa. Sin insulina, la glucosa no puede penetrar en las clulas y permanece en el flujo sanguneo. Como consecuencia, los niveles de azcar en sangre son mayores de lo normal. [3]

Anlisis de colesterol en sangre Colesterol es una molcula de carcter lipdico cuya funcin principal es formar parte de la estructura de las membranas de las clulas que conforman rganos y tejidos, tambin interviene en la sntesis de otras molculas, como las hormonas suprarrenales y sexuales. [6] Principalmente, se produce en el hgado aunque tambin se realiza un aporte importante de colesterol a travs de la dieta. [6] Niveles de colesterol:Menos de 200 mg/dL = Deseable (menor riesgo)200 a 239 mg/dL = Lmite elevado (mayor riesgo)240 mg/dL y superior = Colesterol en la sangre elevado (Ms del doble de riesgo que el nivel deseable) [7]

El colesterol es insoluble en medios acuosos por lo que se transporta en lipoprotenas, constituidas por una parte lipdica y otra proteica. Existen dos tipos diferentes de lipoprotenas. [8] Lipoprotenas de baja densidad o LDL Denominada tambin como colesterol malo debido a que transporta el colesterol a tejidos para su utilizacin, incluyendo las arterias. [8] Niveles de colesterol HDL:Menos de 70 mg/dL = Objetivo opcional si tiene un riesgo muy alto de ataque al corazn o muerte por ataque al corazn.Menos de 100 mg/dL = ptimo para personas con enfermedades del corazn o diabetes100 a 129 mg/dL = Cerca o por encima del nivel ptimo130 a 159 mg/dL = Lmite elevado160 a .189 mg/dL = Elevado190 mg/dL y superior = Muy elevado [7]

Lipoprotenas de alta densidad o HDL Denominada como colesterol bueno ya que recogen el colesterol de los tejidos y lo llevan al hgado para ser eliminados del cuerpo a travs de la bilis. [8] Niveles de colesterol HDL:Menos de 40 mg/dL en hombres = HDL bajo (mayor riesgo)Menos de 50 mg/dL en mujeres = HDL bajo (mayor riesgo)40 a 59 mg/dL = Cuanto ms elevado, mejor60 mg/dL y superior = HDL elevado (menor riesgo) [7]

El aumento de colesterol en sangre y su depsito en las arterias origina la enfermedad ateroesclertica cardiovascular, esta enfermedad incluye enfermedad coronaria (angina e infarto de miocardio), cerebrovascular (infarto cerebral o ictus) y la enfermedad arterial perifrica (Claudicacin o dolor en piernas). [8]

Anlisis de triglicridos en sangre Los triglicridos son molculas que se encuentran en determinados alimentos y en nuestro organismo se sintetizan en el hgado. [8] Los triglicridos son transportados mediante lipoprotenas que se producen en el intestino e hgado y son transportados a los tejidos donde se utilizan como reserva de energa para cubrir las necesidades metablicas de los msculos y el cerebro. [8] La elevada concentracin de triglicridos se conoce como hipertriglicidemia y constituye uno de los factores de riesgo cardiovascular. [8] Niveles de triglicridosMenos de 150 mg/dL = Normal150 a 199 mg/dL = Lmite elevado200 a .499 mg/dL = Elevado500 mg/dL y superior = Muy elevado [7]

Anlisis de urea en sangre La urea constituye la fraccin de nitrgeno no proteico ms importante en la mayora de los lquidos biolgicos. En el hombre es el principal producto final del metabolismo proteico. Se produce en el hgado y es excretada por la orina a travs de los riones. [4] Una elevacin de la concentracin srica de urea, se interpreta generalmente como una posible disfuncin renal. Sin embargo, no debe dejarse de lado el hecho de que los valores sricos de urea se encuentran ntimamente relacionados con la dieta y el metabolismo proteico, por lo que cualquier alteracin en estas variables se traducir en un cambio de la concentracin de urea en suero. [4] La urea es el resultado final del metabolismo de las protenas. Se forma en el hgado a partir de la destruccin de las protenas. Durante la digestin las protenas son separadas en aminocidos, estos contiene nitrgeno que se libera como ion amonio, y el resto de la molcula se utiliza para generar energa en las clulas y tejidos. El amonio se une a pequeas molculas para producir urea, la cual aparece en la sangre y es eliminada por la orina. Si el rin no funciona bien la urea se acumula en la sangre y se eleva su concentracin. [4]Materiales y MtodosExtraccin de sangreMateriales Jeringuilla 5mL Torundas con alcohol Torniquete Tubo rotulado: nombre y fecha Gradilla Curitas Guantes de ltex Recipientes de desecho: roja (desechos infecciosos y corto punzantes) y negra (desechos comunes). Centrfuga.Procedimiento Preparar los materiales. Localizar en el brazo una vena apropiada y, en general, se utilizan las venas situadas en la flexura del codo. Colocar el torniquete (cinta de goma-ltex) en el brazo, cuatro dedos sobre la vena a punzar. Mediante una palpacin se localizar la vena apropiada, se limpiar la zona del pinchazo con un antisptico de adentro hacia afuera. Se realizar la puncin con el bisel hacia arriba, formando un ngulo de 45. Cuando la sangre fluya por la aguja, aspire (mediante la jeringa o mediante la aplicacin de un tubo vaco) hasta conseguir la cantidad deseada. Retire el torniquete. Extraer la aguja y presionar la zona con una torunda para favorecer la coagulacin y se le indicar que mantenga el brazo extendido. Eliminar desechos en sus respectivos recipientes. Centrifugar durante cinco minutos.Anlisis de glucosa en sangre

Prueba enzimtica colorimtrica La glucosa se determina despus de la oxidacin enzimtica en presencia de glucosa oxidasa. El perxido de hidrgeno reacciona bajo la catlisis de peroxidasa con fenol y 4-aminofenazona formando un complejo rojo-violeta usando la quinoneimina como indicador.

Reaccin

Clculo de la concentracin de glucosa

Valores normales75-115 mg/dl (en ayunas)Materiales y Reactivos Jeringas de 5ml Cinta de goma-ltex Alcohol antisptico Algodn Curitas Tubos tapa roja Centrifugadora Micropipetas RGT STD Espectrofotmetro

Procedimiento Se realiz la extraccin de sangre de dos personas, una en ayunas y la otra en estado postprandial. Se dej reposar las muestras por 5 minutos y se centrifug. En el tubo blanco se coloc 1000 ul de RGT. En el tubo estndar se coloc 1000 ul de RGT y 10 ul de STD. En el tubo con la muestra 1 se coloc 1000 ul de RGT y 10 ul del suero de la persona en ayunas. En el tubo con la muestra dos se coloc 1000 ul de RGT y 10 ul del suero de la persona en estado postprandial. Se realiz bao mara a las muestras por 5 minutos a 37C. Se ajust en espectrofotmetro a 520 nm de longitud de onda. Se midi la absorbancia de cada muestra. Se realiz los clculos para medir la concentracin de glucosa.

RXBLANCOSTDM1M2

RGT1000 uL1000 uL1000 uL1000 uL

STD10uL

Suero 110uL

Suero 210uL

Tabla1. Esquema del pipeteoAnlisis de colesterol en sangre

Prueba enzimtica colorimtrica El colesterol se determina despus de la hidrlisis enzimtica y la oxidacin. El indicador es la quinoneimina formada por el perxido de hidrgeno y 4-aminoantipirina en presencia de fenol y peroxidasa.

Reaccin

Clculo de la concentracin de colesterol

Valores normales220-260 mg/dl (en ayunas)Materiales y Reactivos Jeringas de 5ml Cinta de goma-ltex Alcohol antisptico Algodn Curitas Tubos tapa roja Centrifugadora Micropipetas RGT STD Espectrofotmetro

Procedimiento Se realiz la extraccin de sangre de dos personas, una en ayunas y la otra con ayuno de 6 horas. Se centrifug por 5 minutos. En el tubo blanco se coloc 1000 ul de RGT. En el tubo estndar se coloc 1000 ul de RGT y 10 ul de STD. En el tubo con la muestra 1 se coloc 1000 ul de RGT y 10 ul del suero de la persona en ayunas. En el tubo con la muestra dos se coloc 1000 ul de RGT y 10 ul del suero de la persona con ayuno de 6 horas Se coloc las muestras a bao mara por 5 minutos a 37C. Se ajust en espectrofotmetro a 500 nm de longitud de onda. Se midi la absorbancia de cada muestra. Se realiz los clculos para medir la concentracin de colesterol.

RXBLANCOSTDM1M2

RGT1000 uL1000 uL1000 uL1000 uL

STD10uL

Suero 110uL

Suero 210uL

Tabla1. Esquema del pipeteo

Anlisis de triglicridos en sangre

Prueba enzimtica colorimtrica Los triglicridos son determinados despus de hidrlisis enzimtica con lipasas. El indicador es Quinoneimina formada a partir de perxido de hidrgeno, 4-aminoantipirina y 4-chlorofenol bajo la influencia cataltica de peroxidasa

Reaccin

Clculo de la concentracin de colesterol

Valores normales150-199 mg/dl (en ayunas)Materiales y Reactivos Jeringas de 5ml Cinta de goma-ltex Alcohol antisptico Algodn Curitas Tubos tapa roja Centrifugadora Micropipetas RGT STD Espectrofotmetro

Procedimiento Se realiz 2 extracciones de sangre de una persona en ayunas. Se centrifug por 5 minutos. En el tubo blanco se coloc 1000 ul de RGT. En el tubo estndar se coloc 1000 ul de RGT y 10 ul de STD. En el tubo con la muestra 1 se coloc 1000 ul de RGT y 10 ul del suero de la primera extraccin. En el tubo con la muestra dos se coloc 1000 ul de RGT y 10 ul del suero de la segunda extraccin. Se coloc las muestras a bao mara por 5 minutos a 37C. Se ajust en espectrofotmetro a 500 nm de longitud de onda. Se midi la absorbancia de cada muestra. Se realiz los clculos para medir la concentracin de colesterol.

RXBLANCOSTDM1M2

RGT1000 uL1000 uL1000 uL1000 uL

STD10uL

Suero 110uL

Suero 210uL

Tabla1. Esquema del pipeteo

Anlisis de urea en sangre

Prueba enzimtica colorimtrica La ureasa cataliza la hidrlisis de la urea, presente en la muestra, en amoniaco y anhdrido carbnico. Los iones amonio reaccionan con salicilato e hipoclorito en presencia del catalizador nitroprusiato, para formar un indofenol verde. [5]

Reaccin

Clculo de la concentracin de urea

Valores normales10-50 mg/dl Materiales y Reactivos Jeringas de 5ml Cinta de goma-ltex Alcohol antisptico Algodn Curitas Tubos tapa roja Centrifugadora Micropipetas RGT 1 y 2 STD Espectrofotmetro

Procedimiento Se realiz la extraccin de sangre de dos personas. Se dej reposar las muestras por 5 minutos y se centrifug. En el tubo blanco se coloc 1000 ul de RGT1 con la enzima. En el tubo estndar se coloc 1000 ul de RGT1 con la enzima y 10 ul de STD. En el tubo con la muestra 1 se coloc 1000 ul de RGT1 con la enzima y 10 ul del suero de la persona. Se realiz bao mara a las muestras por 3 minutos a 37C. Posteriormente se agreg el RGT 2 1000 ul a las muestras y dejo en bao mara por 5 minutos a 37C. Se ajust en espectrofotmetro a 520 nm de longitud de onda. Se midi la absorbancia de cada muestra. Se realiz los clculos para medir la concentracin de urea.

RXBLANCOSTDM1M2

RGT1+ enzima1000 uL1000 uL1000 uL1000 uL

STD10 uL

Suero 110 uL

Suero 210 uL

Se dej en bao mara a las muestras durante 3 minutos a 37C.

RGT21000 uL1000 uL1000 uL1000 uL

Se dej en bao mara a las muestras durante 5 minutos a 37C.

Tabla4. Esquema del pipeteo

ResultadosExtraccin de sangre Durante la primera extraccin de sangre se pudo obtener la cantidad necesaria para centrifugar y separar el plasma. Con mayor prctica el proceso de extraccin ser sencillo y se podrn obtener mejores resultados para su posterior anlisis.Anlisis de glucosa en sangre Ab. Estndar:0.264 Ab. Muestra 10.334 Ab. Muestra 20.180

Anlisis de colesterol en sangre Ab. Estndar:0.167 Ab. Muestra 10.082 Ab. Muestra 20.111

Anlisis de triglicridos en sangre Ab. Estndar:0.278 Ab. Muestra 10.034 Ab. Muestra 20.076

Anlisis de urea en sangre Ab. Estndar:0.403 Ab. Muestra 10.092 Ab. Muestra 20.145

DiscusinExtraccin de sangre El torniquete nunca debe aplicarse durante ms de un minuto antes de la extraccin de la sangre venosa, ya que se producir hemoconcentracin, con la siguiente alteracin de los resultados. [2]Anlisis de glucosa en sangre En la muestra 1 se obtuvo una concentracin (mg/dl) de 126.515, lo cual est por encima de los rangos normales, esto sucedi debido a que el individuo se encontraba en estado postprandial, es decir que haba ingerido alimentos recientemente, lo que hizo aumentar sus niveles de glucosa en sangre. [3] En la muestra 2 se obtuvo una concentracin de 68.181 mg/dl debido a que el individuo se encontraba en ayunas, este nivel est dentro de las concentraciones normales. [3]Anlisis de colesterol en sangre La muestra 1 obtuvo una concentracin (mg/dl) de 98.204 el cual se encuentra en un rango deseable de colesterol en sangre, sin embargo es importante recalcar que los niveles demasiado bajos de colesterol pueden ser causados por: Hipertiroidismo, o una glndula tiroidea muy activa, enfermedad del hgado, mala absorcin, pobre absorcin de nutrientes a nivel intestinal, mal nutricin, deficiencia de manganeso. [9]Estudios revelan que niveles de colesterol bajo se asocian a la depresin, ansiedad y tambin al derrame cerebral. [9] La muestra 2 obtuvo una concentracin (mg/dl) de 132.934 que se encuentra en el rango deseable de los lmites de colesterol, el paciente se encontraba en ayuno de aproximadamente 12 sin embargo en los estudios de colesterol no se ve afectado el resultado por el ayuno ya que este no sufre cambios inmediatos [10] Anlisis de triglicridos en sangre La muestra uno y la muestra dos se obtuvo del paciente nmero 2. En la muestra nmero uno se obtuvo una concentracin (mg/dl) de 24.46, este valor se encuentra en el rango normal de triglicridos en sangre determinados mediante la bibliografa. En la muestra 2 se obtuvo una concentracin (mg/dl) de 54,67, este valor se encuentra en el rango normal, la paciente se encontraba en ayuno de 6 horas aproximadamente lo cual pudo afectar los resultados ya que para el anlisis de triglicridos es necesario un ayuno de aproximadamente 12 horas sin haber ingerido alimentos ni bebidas. A diferencia de las pruebas de colesterol si comparamos los resultados de triglicridos en ayunas y despus de una comida encontraramos una variacin significativa, en los resultados. [11] Anlisis de urea en sangre Para la muestra 1 se obtuvo una concentracin (mg/dl) de 18.263 que comparado con los rangos normales de urea que son entre 10 y 50 (mg/dl), podemos afirmar que el nivel de urea en sangre es normal. La prueba presenta valores reales ya que la paciente se encontraba en ayuno. Para la muestra 2 se obtuvo una concentracin (mg/dl) de 28,784 que se encuentra dentro del rango de los niveles de urea en sangre. Este resultado se obtuvo en ayunas de 3 horas. Tiempo necesario para calcular una buena medicin de concentracin de urea [11] ConclusionesExtraccin de sangre La extraccin de sangre se puede realizar mediante tres procedimientos diferentes dependiendo de las magnitudes que se requieran: puncin arterial, venosa y de la piel.Anlisis de glucosa en sangre Es importante el anlisis de glucosa en sangre para determinar enfermedades o trastornos que tengan que ver con la absorcin y el metabolismo de la glucosa en el cuerpo. Tales trastornos pueden ser de dos tipos: hiperglucemia o hipoglucemia. Las variaciones de datos en los resultados de los diferentes grupos es debido a la falta de experiencia en este tipo de ensayos, tambin se debe a que las muestras fueron manipuladas por diferentes personas y es recomendable que una sola persona sea la que realice todo el proceso.Anlisis de colesterol en sangre Los datos obtenidos en la absorbancia del estndar de todos los grupos de laboratorio presentaban poca variacin lo que significa que los datos obtenidos son confiables. Tanto la muestra 1 como la muestra 2 se encuentran en los rangos deseables de colesterol por lo que excluimos afecciones relacionadas a los niveles elevados de colesterol. Anlisis de triglicridos en sangre Las concentraciones de las 2 muestras se encuentran muy por debajo del lmite de triglicridos en sangre esto se puede deber a una dieta baja en grasas por arte de la paciente o a otras afecciones ya mencionadas. Al tomar 2 muestras de la misma persona se esperara tener resultados similares sin embargo podemos notar que hay una variacin significativa por lo que podemos concluir que existi una errnea manipulacin de la muestra y los reactivos.Anlisis de urea en sangre Los resultados de la muestra 1 y 2 estn dentro de los rangos normales establecidos en la bibliografa por lo que se concluy que La urea cumple sus funciones fisiolgicas, tales como, inhibir el cotransporte Na-K2Cl en los eritrocitos humanos, inhibir la xido ntrico sintasa inducible por macrfagos a nivel postranscripcional y ser el precursor de algunos de los compuestos guanidinicos [9].

Referencias

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AnexosExtraccin de sangre

1. Preparacin de materiales

2. Localizacin de la vena3. Mediante el torniquete

4. Preparacin de la jeringuilla

5. Puncin a 45

6. Retirar el torniquete y cubre el pinchazo

7. Colocamos la sangre en el tubo por las paredes

Proceso para anlisis de la extraccin de sangre1. Centrifugar las muestras

2. Pipetear los reactivo

3. Bao mara y colocacin del RGT2

4. Tubos despus de bao maraGlucosa

Colesterol

Triglicridos

Urea

5. Anlisis en el espectrofotmetro