UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE NICARAGUA MANAGUA

Recinto Universitario ¨Rubén Darío¨

Instituto Politécnico de la Salud

Dr. Luis Felipe Moncada

PRUEBAS DIAGNOSTICAS II

HEMATOLOGIA

Tema:

TIPOS DE TUBOS Y ANTICOAGULANTES

Autor:

Carlos Antonio Solís Soza

Profesor:

Msc. María Inés Jirón

Managua, Viernes 8 de abril de 2016.

Introducción

La hematología es la ciencia que se encarga de estudiar todo los componentes

sanguíneos, tales como las células (hematíes o eritrocitos o glóbulos rojos,

leucocitos o glóbulos blancos y plaquetas), plasma y de los tejidos formadores de

esas células (órganos hematopoyéticos: médula ósea, sistema linfático, bazo,…).

Cada prueba que se realizan en el laboratorio es para observar el desarrollo y las

alteraciones de los componentes de la sangre o tejidos hematopoyéticos. Cuando

se produce dichas alteraciones en el organismo o se modifican los parámetros de

los componentes, que en condiciones normales son constantes, nos indica que

hay una enfermedad o infección en el organismo.

La cantidad de sangre necesaria depende de las pruebas que haya que analizar

pero en una extracción normal suelen ser entre 10-15 ml que se distribuye en

tubos con tapones de diferentes colores que tienen anticoagulantes distintos

adecuados a las pruebas que se vayan a analizar. No obstante, algunos tubos

poseen geles acelerantes de la coagulación como también los que no los llevan.

En este trabajo explicara más afondo.

Objetivo

Conocer los diferentes anticoagulantes existentes que son empleados en

los laboratorios clínicos.

Mostrar los distintos colores de los tubos y su orden al momento de la toma

de muestra.

Anticoagulantes

1. EDTA (Ácido etilendiaminotetraacético) o sal disódica, dipotásica o

tripotásica del ácido etilendiaminotetraacético, actua mediante un efecto

quelante sobre el calcio (Ca++), impidiendo el proceso de la coagulación al

fijarlo. Es el anticoagulante de elección para hemograma.

Este anticoagulante se utiliza fundamentalmente para la realización de

recuentos celulares, sobre todo en los autoanalizadores y permite además

la realización del hematocrito y del frotis sanguíneo hasta dos horas

después de la extracción de la muestra al mismo tiempo que impide la

aglutinación de las plaquetas.

Las sales de potasio tienen la ventaja, respecto a las de sodio, de ser más

fácilmente solubles en sangre cuando las usamos a partir del producto

sólido, sin embargo , las tres sales afectan el tamaño del eritrocito,

especialmente después del almacenamiento de la sangre anticoagulada por

espacio de algunas horas.

El International Council for Standardization in Hematology (ICSH)

recomienda la sal dipotásica como anticoagulante para recolectar muestras

sanguíneas destinadas al recuento y caracterización del tamaño celular y

especialmente cuando los valores del hematocrito se requieren para la

calibración de los contadores automáticos.

El K2 EDTA. 2H2O posee un peso molecular relativo de 404,1g; 1g quela 100

mg de calcio iónico y el pH para una solución al 1% es de 4.8 ± 1,0. La

cantidad de EDTA dihidratado agregada a la sangre debe ser de 1.5-2.2

mg/mL. de sangre total. Esta cantidad es un compromiso entre la cantidad

requerida para evitar la coagulación y la cantidad a la cual se producen las

alteraciones celulares.

Los productos habitualmente comercializados consisten en una solución

equilibrada de sales sódicas y potásicas de EDTA (0,342 mol/l) pH 7,2, con

estas la proporción recomendada es 1/100 Ej: 10 µL de anticoagulante para

1 mL de sangre (990 µL estrictamente hablando).

2. HEPARINA SÓDICA. HEPARINA DE LITIO, es un anticoagulante

fisiológico que actúa impidiendo que la protrombina se transforme en

trombina. Estructuralmente es un mucopolisacárido ácido. Los frotis

realizados con muestras sanguíneas anticoaguladas con heparina producen

en las tinciones panópticas un color azulado y una pseudovacuolización

celular por lo tanto no se lo recomienda para tal fin. La proporción adecuada

es de 15-20 UI (0.1-0.2 mg) de heparina por ml de sangre.

3. CITRATO TRISÓDICO, C6H5O7Na3, actúa impidiendo que el calcio se

ionice, evitando así la coagulación. Se utiliza para realizar las pruebas de

Hemostasia en una proporción sangre: anticoagulante 9:1 (Por Ej.:2mL

sangre con 250µL anticoagulante); así como para la velocidad de

eritrosedimentación en una proporción sangre: anticoagulante 4:1 (Por Ej.:

2 mL sangre con 500 µL anticoagulante).

4. ACD (Acido-Citrato-Dextrosa): se emplea fundamentalmente en Bancos

de Sangre para conservar las unidades de sangre y estudios metabólicos

eritrocitarios por permitir una buena conservación de los hematíes. Se

utiliza en una proporción de un volumen de ACD por cada cuatro

volúmenes de sangre. La proporción de la mezcla del anticoagulante es de:

Ácido Cítrico 0.9 g, Citrato disódico 2 g, Dextrosa 2 g, H2O destilada 120

mL. Conserva la muestra por 21 días.

5. CPD (Citrato-fosfato-dextrosa): Este tipo de anticoagulante estabiliza el

pH de la sangre en valores cercanos a 7.1 durante el periodo de

almacenamiento, lo que permite que los componentes celulares continúen

su metabolismo.

Por otra lado el fosfato presente en la solución anticoagulante permite

mantener las reservas de ATP, lo que se traduce en una mayor estabilidad

de la membrana celular y por último, conserva niveles elevados de 2,3-

difosfoglicerato (2,3-DPG) lo que disminuye la afinidad de la hemoglobina

por el oxígeno facilitando su liberación en los tejidos. Este se puede

conservar hasta 28 días.

6. CTAD: La viabilidad de CTAD (una mezcla de citrato, teofilina, adenosina y

dipiridamol) como un nuevo anticoagulante para uso en laboratorio médico

se estudió de forma prospectiva.

La sangre total anticoagulada con CTAD exhibió resultados muy similares a

los de sangre anticoagulada con EDTA en el recuento de sangre completa y

diferencial de glóbulos blancos automatizado excepto por una ligera

disminución en el recuento de plaquetas y el volumen medio de plaquetas.

Los datos de prueba química para el plasma obtenido a partir de toda

CTAD sangre fueron similares a los obtenidos para sueros pareados.

Entre las pruebas de coagulación, tiempo de protrombina, el tiempo de

tromboplastina parcial y concentraciones de fibrinógeno fueron similares a

los obtenidos con plasma de citrato. Basándose en los resultados, CTAD

fue juzgado para ser un buen candidato como un nuevo anticoagulante.

7. Oxalatos

Actúan como anticoagulantes removiendo el calcio de la sangre en forma

insoluble de oxalato de calcio. Si se utiliza oxalato de sodio u oxalato de

potasio se produce un encogimiento significativo de los eritrocitos, por lo que

se prefiere usar el anticoagulante de Wintrobe que consiste en una mezcla de

oxalatos de amonio y potasio en relación 2:1 (la cantidad recomendada es de

2mg por mL de sangre), el cual no afecta el valor corpuscular medio y puede

usarse para la determinación de hemoglobina, hematocrito, recuentos

globulares y además no interfiere en la velocidad de eritrosedimentación.

El uso en las extensiones de sangre está limitado a los primeros minutos, ya

que pueden desarrollarse con rapidez formas dentadas en los eritrocitos,

vacuolización en el citoplasma de los granulocitos, fagocitosis de cristales de

oxalato, artefactos en los núcleos de linfocitos y monocitos y otras

deformidades.

Colores

Tapón Rojo

No posee Aditivo (tubos de vidrio) Se obtiene sueroAnálisis Químico y SerológicoLos tubos contienen un activador de coagulación aplicada por aspersión (tubos de plástico)Se necesita 60 minutos para poder coagularseLa inversión en tubos plásticos (5 veces) y en vidrio nada Fuerza y tiempo de centrifugación: < 1300 g; 10 min. a 25°C

Tapón Celeste

El aditivo es Citrato de Sodio Inversiones del tubo previenen la coagulación (3-4 veces)Se obtiene PlasmaDeterminación de la coagulación Pruebas que se realizan son: Tiempo de protrombina y Tiempo parcial de tromboplastina Fuerza y tiempo de centrifugación: 1500 g; 15 min. A 18-22°CEl tubo debe permanecer cerrado hasta su análisis (podría perder CO2 en contacto con el aire,incrementándose el pH).

Tapón Lila o Morado

El aditivo es EDTA Se obtiene Plasma En pruebas hematológicas se usa la sangre total, como biometría hemática completa (BHC) y recuento plaquetario. Inversión de estén tubo es de 6 veces En determinaciones de sangre total, homogeneizar el tubo previo el análisis.En determinaciones de plasma, evitar la centrifugación a más de 1300 g durante 10-15 min. a 18-22°C.

Tapón Anaranjado (RST)

El aditivo es la trombinaSe obtiene SueroSe realiza exámenes de Química Sanguínea La coagulación completa se produce menos de 5 minutos después de la extracción.Inversión es de 6 vecesFuerza y tiempo de centrifugación: 1000 - 1300 g; 10-15 min. a 18-22°C

Tapón Rosa

El aditivo es EDTASe obtiene PlasmaPara determinaciones en sangre entera en hematología, Banco de Sangre (Compatibilidad Sanguínea) y Química Sanguínea (Estudios de Hormonas).Inhibe la calicreinaInversión 8 veces En determinaciones de sangre total, homogeneizar el tubo antes del análisis.Condiciones de centrifugación: variables, según los análisis. Evitar la centrifugación a más de 1300 g durante 10-15 min. a 18-22°C.Permite la conservación del plasma, tras la centrifugación, durante 48 horas a 4ºC.

Tapón verde

El aditivo es HeparinaSe obtiene PlasmaDeterminaciones Químicas (Determinación de amoniaco),

Hematológicas (fragalidad osmótica)

Fuerza y tiempo de centrifugación: < 1300 g; 10 min; 18-22ºC.

Están disponibles con los siguientes anticoagulantes, en forma

seca: heparina de sodio, heparina de litio o heparina amónica

(todos provienen de la mucosa intestinal porcina.)

La heparina de sodio y la heparina de litio tienen calidad

farmacéutica y no contienen conservantes.

Inversión 8 veces

Tapón Gris

El aditivo es Citrato Se obtiene Plasma Contiene conservantes que actúan como inhibidores glicoliticos: Fluoruro sódico, fluoruro sódico + oxalato potásico, fluoruro sódico + heparina sódica, iodo acetato de litio + heparina de litio o fluoruro sódico + EDTA.El fluoruro y el iodo acetato son los conservantes comúnmente utilizados para prevenir la glicólisis en muestras de sangre hasta 24 horas a temperatura ambiente.También pueden utilizarse para determinaciones de lactato y alcohol en sangre.Fuerza y tiempo de centrifugación: < 1300 g durante 10 min; 18-22ºC.Realizar la determinación de glucosa como máximo 48h después de la extracción de la muestra.Realización de determinaciones de alcohol en sangre y lactato

Tapón Amarillo

El aditivo es ACD (Acido Citrato Dextrosa) y partículas de sílice Se obtiene SueroDeterminación Química y SerológicaSe utiliza para la extracción de muestra para hemocultivo en microbiologíaSe emplean estudios de Bancos de Sangre, fenotipificacion de HLA y pruebas de ADN y paternidad.Fuerza y tiempo de centrifugación: 1000 - 1300 g; 10-15 min. a 18-22°CNo centrifugar el tubo de nuevo una vez formada la barrera de gel.Se deben almacenar a 4-25°C y proteger de la luz solar. Activan y aceleran el proceso de coagulación.Inversión 6 veces

Tapon Negro

El aditivo es Citrato de Sodio, su función es de anticoagulante y diluyente Se obtiene PlasmaDetermina VSG (Velocidad de Sedimento Globular)

La relación sangre / aditivo es 4:1, cuando los tubos están llenados correctamente según su volumen de vacío (Método de Westergren). Inversion 8 veces

Tapón Blanco

Aditivo EDTA K2

Se obtiene plasmaDetermina la carga viral, PCR y pruebas de ácidos nucleicos.Inversión 8 vecesFuerza y tiempo de centrifugación: 1100 g; 10 min. a Tª ambiente (18-22ºC) en rotor horizontal

Tapón Azul

Aditivo EDTA K2

Inversión 8 vecesSe obtiene plasmaPosee un activador de coagulación en el tuboDetermina los elementos traza, toxicología y determinaciones en química nutricional Fuerza y tiempo de centrifugación: 1000 - 1300 g; 10-15 min. a 18-22°C (en suero o plasma).

Tapón Beige

Aditivo es EDTA K2 (Plástico)Se obtiene plasmaSu inversión es de 8 veces Determina plomo El tubo está certificado por contener menos de 0.01 ug/ml (pm) de partículas contaminantesLa inversión del tubo previene la formación de coágulos

Otros tipos de tubos

BDTM P100

Contiene spray seco EDTAK2, como anticoagulante y propiedades estabilizadoras para minimizar la degradación de proteínas.Se obtiene PlasmaEs usado en investigaciones exclusivamente y además el uso de este producto para procesos de diagnóstico y gestión de pacientes está estrictamente prohibido. Posee un separador mecánico que logra minimizar la contaminación celular.

Tubos CPT™

Contienen un anticoagulante (citrato de sodio o heparina de sodio) y un medio de separación de células consistente en un gel y un líquido de gradiente de densidad (ficoll).Se utiliza para obtener células mononucleares en elevada concentración y/o plasma para ensayos.El procesamiento de células para cultivos de inmunotipaje (ej. Tipaje HLA), estudios de función celular, detección de tumores celulares, preparación de ácidos nucleícos, virología, y determinaciones de marcadores genéticos son más rápidos que con métodos de separación manuales con múltiples pasos.Centrifugación: 1650 g; 20 min a 18-25º C

Tubos con CTAD

Su aditivo anticoagulante CTAD (citrato, teofilico, adenosina y dipiridamol), con un pH de 5.Estos tres aditivos inhiben la liberación del factor plaquetario 4 (PF4) y previenen su acoplamiento a la heparina, evitando el riesgo de resultados de pruebas falsamente bajos.El fin de este tubo es de monitorizar la terapia con heparina y puede ser utilizado para los estudios de coagulación de rutina.Fuerza y tiempo de centrifugación: 1500 g; 15 min. a 18-22°CLos tubos deberán almacenarse de 4-25ºC y protegerse de la luz natural y artificial.La estabilidad de la muestra en sangre completa durante 4 horas a temperatura ambiente.

Tubo PST™ II

Contiene heparina de litioSe Inhibe el proceso de coagulaciónLa inversión es de 9 veces Fuerza y tiempo de centrifugación: 2000 g; 10 min. a 18-22°CSe deben almacenar a 4-25°C y proteger de la luz solar.Es utilizado para hacer química clínica (pacientes con terapia anticoagulantes)

Orden recomendado en la extracción de muestras múltiples

Heparina de Litio

Tubo con EDTA VSG

Tubo de coagulación

Tubo sin anticoagulante

Tubo con gel separador

Botella de Hemocultivo

Colores de los tubos

Conclusión

El conocimiento sobre los anticoagulantes es de suma importancia, ya que

podremos obtener el plasma requerido en las pruebas hematológicas o bien el

suero que brinda información valiosa en las áreas inmunológicas y químicas, lo

cual muestra el metabolismo y determina la concentración de inmunocomplejos

que posee dicho paciente , y entre otras pruebas.

Para cada prueba antes de extraerla, se debe tener el conocimiento del tipo de

tubo que debe usarse al momento de su extracción, ya que existen protocolos de

trabajo ya establecidos. Toda prueba que se realice merita una muestra acorde al

estudie que se está realizando. Todo analista clínico debe seguir el protocolo de

extracción con el fin de evitar la pérdida de tiempo y de volver a puncionar

nuevamente al paciente.

Bibliografía

BD Vacutainer. BD Diagnósticos Sistemas Preanalíticos Catálogo de

productos para la recolección de muestra venosa, arterial y de orina.

Citado en: http://bd.com/mexico/vacutainer/pdfs/catalog.pdfBD Vacutainer. Catálogo de productos. 2009. Citado en:

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Fernández, Eduardo & Conde Anguita, María África. Importancia del orden

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