Effects of Rubus coreanus Extracts on Ultraviolet-A ...
Transcript of Effects of Rubus coreanus Extracts on Ultraviolet-A ...
้่ฅไฝ่ช(Korean J. Medicinal Crop Sci.) 17(5) : 321 โ 327 (2009)
321
์์ธ์ ์ด ์กฐ์ฌ๋ ์ธ๊ฐํผ๋ถ์ฌ์ ์์ธํฌ์ ๋ณต๋ถ์ ์ถ์ถ๋ฌผ์ด ๋ฏธ์น๋ ์ํฅ
์ ํฅ์*ยทํ์งํ*ยท๊น ์*ยท์ค์ฑํธ*ยท๊น์น์ญ*ยท์ ๋ช ํ*ยท์ดํ์ฉ*,
**โ
*๊ฐ์๋ํ๊ต BTํน์ฑํํ๋ถ๋ํ, **๊ฐ์๋ํ๊ต ์๋ช ๊ณตํ์ฐ๊ตฌ์
Effects of Rubus coreanus Extracts on Ultraviolet-A Irradiated
Cultured Human Skin Fibroblasts
Hyang Suk Jeong*, Ji Hye Ha*, Young Kim*, Sung Ho Oh*, Seoung Seop Kim*,Myoung Hoon Jeong*, and Hyeon Yong Lee*,
**โ
*College of Bioscience & Biotechnology, Kangwon National Univ., Chuncheon 200-701, Korea. **Research Institute of Bioscience and Biotechnology, Kangwon National Univ., Chuncheon 200-701, Korea.
ABSTRACT : Sunlight, and in particular its UV component, is the major environmental trigger that underlies the major
signs of human skin and skin cancer in general. Therefore, this study was carried out to investigate the UV protection effects
of R. coreanus. R. coreanus was extracted by ultra high pressure extraction process at 500 ใซ and 30โ for 5 and 15 minutes.
The cytotoxicity of the extracts extracted by ultra high pressure process on human dermal fibroblast cell CCD-986sk,
human kidney normal cell HEK293, and human lung normal cell HEL299 was measured as 17.5%, 16.5% and 14.0%,
respectively in adding 1.0ใ/ใ of the samples, which was much lower than that from conventional water extraction method
at 100โ as 23.2%, 22.5%, 21.2%. The secretion of NOโ from macrophage showed 15.9 ยตM on the R. coreanus extract from
this process, which was higher than others. Prostaglandin E2 (PGE2) production from UV-induced human skin cells was also
greatly decreased down to 510 pg/ใ, compared to the control. From the results, we considered that the extracts from R.
coreanus could be potent natural materials for skin anti-inflammation agent, and could be used as a potential anti-aging for
the photo-damaged skin.
Key Words : Ultra High Pressure, Rubus coreanus Miquel, Cytotoxicity, PGE2, UV-Protection
์ ์ธ
์ต๊ทผ UV๋ก ์ธํ ํผ๋ถ ๋ ธํ์ ์ ๊ทน์ ์ผ๋ก ๋์ฒํ์ฌ ํผ๋ถ์
๊ฑด๊ฐ์ ์งํค๋ ค๋ ๋ ธ๋ ฅ์ด ๋จ๋ ๋ ธ์๋ฅผ ๋ถ๋ฌธํ๊ณ ๋์์ง๊ณ ์๋ค.
ํผ๋ถ๋ ํํํ์ ๋ณํ๋ฅผ ์ง์ ๋์ผ๋ก ๊ด์ฐฐํ ์ ์์ ๋ฟ ์๋
๋ผ ์กฐ์ง์ ์๊ฒํ๊ธฐ ์ฉ์ดํ๊ธฐ ๋๋ฌธ์ ๋ ธํ ํ์์ ์ฐ๊ตฌํ๋๋ฐ
์์ด์ ๊ฐ์ฅ ์ ํฉํ ๋์์ด๋ค (Cho et al., 2003). UV๋ ํผ
๋ถ๋ฅผ ๋๊ฒ ํ ๋ฟ๋ง ์๋๋ผ ์์ ์นจ์ฐฉ๊ณผ ํผ๋ถ์ ๋ฑ ์ฌ๋ฌ ๊ฐ์ง
ํผ๋ถ ์งํ์ ์์ธ์ด ๋๊ธฐ๋ ํ๋ค. UV๋ฅผ ์ฌํ๊ฒ ์ฌ๋ฉด ํผ๋ถ ํ
๋ฉด์ ์๋ถ์ด ์ฆ๋ฐํ๋ฉฐ, ์ฌํ ๊ฒฝ์ฐ ์๋ถ์ ๋ณด์ ํ ์งํผ ์ธต์ด
์์๋์ด ๋ง๋ฅด๊ณ ๊ฐ๋ผ์ง๋ฉด์ ํผ๋ถ์ ๊ฒฐ์ด ๊ฑฐ์น ์ด์ง๋ค. ์ด๊ฒ์ด
๋ฐ๋ณต๋๋ฉด ํผ๋ถ์ ๊ฐ์ง์ธต์ด ๋จ๋จํด์ ธ์ ํ๋ณต์ด ํ๋ค์ด์ง๋๋ฐ,
์ด์ ๊ฐ์ ํ์์ ์ผ๊ตด๋ฟ ์๋๋ผ ์ ์ฒด ํผ๋ถ ์ ๋ฐ์ ์ผ๋ก ์ผ์ด
๋๋ค. ์ด๋ฌํ ํผ๋ถ ๊ฑด์กฐ์ฆ์ด ์ฌํ๋ฉด ๊ฐ๋ ค์์ฆ์ด ์๊ธฐ๊ณ ๊ธ์ด
์ ์ธ๊ท ๊ฐ์ผ์ ์ผ์ผํค๋ ์ ์ํ์ ๊ฒช๊ฒ ๋๋ค. ํผ๋ถ๋ ๊ฐ์
์ ํด์๊ทน์ ๋ฐ๋ณต๋์ด ๋ ธ์ถ๋๋ฉด ํผ๋ถ ๊ฒฝํ๋ก ํํผ ์ธํฌ์ ์ฆ์
๊ณผ ํจ๊ป ๊ฐ์ง์ธต์ด ๋๊บผ์์ ธ์ ์ฒ์ ์ ํด์๊ทน ๋ ธ์ถ ์ ๋ํ๋ด
์๋ ๋ฐ์์ ๋นํ์ฌ ์ ์ ์ฝํ ๋ฐ์์ ๋ํ๋ธ๋ค. ์ด์ ๊ด๋ จํด
UVB๊ฐ ๋ฌด๋ชจ ์์ฅ์ ํผ๋ถ ์๋ถ ์ ์ง๊ธฐ๋ฅ์ ์์์ ์ฃผ๋ ๊ฒ์ด
์ฐ๊ตฌ๋ ๋ฐ ์๋ค (Yoon et al., 1995). ํผ๋ถ์ ํ๋ ฅ์ด ๋จ์ด์ง๋ฉด
์ ์ฃผ๋ฆ์ด ์๊ธด๋ค. UV์ ๊ฐ์ ์ธ๋ถ ์คํธ๋ ์ค๋ก ์ธํด ํผ๋ถ ํ
๋ ฅ ์ฌ์ ์ธ ์ฝ๋ผ๊ฒ๊ณผ ์๋ผ์คํด์ด ๋ถํด๋์ด ํผ๋ถ ํ๋ ฅ์ด ๋จ์ด์ง
๊ฒ ๋๊ณ ์์ฐ์ค๋ฝ๊ฒ ์ฃผ๋ฆ์ด ์๊ธฐ๊ณ ํผ๋ถ๊ฐ ์ฒ์ง๊ฑฐ๋ ํ๋ฉด์ด
๊ฑฐ์น ์ด์ง๊ฒ ๋๋ค (Gilchrest, 1989).
๋ณต๋ถ์(Rubus coreanus Miquel)๋ ์ฅ๋ฏธ๊ณผ์ ์ํ๊ณ ์ฐ๋ฆฌ๋
๋ผ ์ค๋ถ ์ด๋จ์ ์ฐ๊ธฐ์ญ ์์ง์ ์๋ผ๋ ์๋ฌผ๋ก ๋์ด๊ฐ 2~3 m
์ ๋์ด๋ฉฐ, ์ค๊ธฐ๋ ํฐ ๋ถ์ด ๋ฎ์ฌ ์๊ณ ๊ฐ๊ณ ๋ฆฌ ๋ชจ์์ ๊ฐ์๊ฐ
์๋ ์ด๋งค ์ฝ์ฌ์ด๋ค (Bae, 2000). ๋ณธ์ด๊ฐ๋ชฉ์ ๊ธฐ๋ก๋ ์ฝ๋ฆฌ ํจ
๊ณผ๋ฅผ ๋ณด๋ฉด, ์ด๋ค ์ฒ์ฐ์ฝ์ฌ๊ฐ ์ธ์ฒด์ ์์ ํ๋ฉด์๋ ์ฝํจ๊ฐ ๋ค
๋ฅธ ํ์ฝ์ ๋นํด ๋ฐ์ด๋๋ฉฐ, ๊ฐ ๊ธฐ๋ฅ์ ๊ฐํํ์ฌ ์๋ ฅ์ ์ฆ์ง์
โ Corresponding author: (Phone) +82-33-250-6455 (E-mail) [email protected] 2009 July 9 / Revised 2009 July 28 / Accepted 2009 September 30
์ ํฅ์ยทํ์งํยท๊น ์ยท์ค์ฑํธยท๊น์น์ญยท์ ๋ช ํยท์ดํ์ฉ
322
ํค๊ณ , ๊ธฐ์ด์ ๋์ฐ๋ ํจ๊ณผ ์ธ์๋, ์ฑ๊ธฐ๋ฅ์ ๋์ฌ์ฃผ๊ณ ์๋ณ์
๋ฐฐ์ค์ ์ฝ๊ฒ ํด์ฃผ์ด ์ฒ์ฐ ์์ฐ๊ฐ์ฅ์ ์ธ์ ๋จ์ฑ์ ์ ๋ฆฝ์ ๋ฐ
๋ฐฐ๋จ๊ธฐ๋ฅ์ ํ์ํ ํจ๊ณผ๊ฐ ์๋ ๊ฒ์ผ๋ก ์๋ ค์ ธ ์๋ค (Kim et
al., 2008). ๋ณต๋ถ์์ ์ ์ฉ ์๋ฆฌ ํ์ฑ ๋ฌผ์ง์ ๊ฐ๊ณผ ์ ์ฅ์ ํจ
๊ณผ์ ์ผ๋ก ์์ฉํด ํผํผํ๊ฒ ํ๋ค. ์๋ฆฌ ํ์ฑ ๋ฌผ์ง์ ์ข ๋ฅ๋ก๋
์ด๋งค์์๋ sanguiin H-4, gallic acid, ์์์๋ ellagic acid,
quercetin, ์ค๊ธฐ์์๋ epicatechin, procyanidin B-4 ๋ฑ์ด ๋ณด๊ณ
๋์๋ค (Yang et al., 2007). ๋ณต๋ถ์๋ ํ์ฌ ์์ฉ์ผ๋ก ์ฒญ๋์
๋ฃ์ ๋ค๋ฅ ๋ฑ์ผ๋ก ์ด์ฉ๋๊ณ ์ฃผ๋ฅ์ ์๋ฃ๋ก์ ํฌ๊ฒ ๊ฐ๊ด๋ฐ๊ณ
์์ผ๋ฉฐ ์ด๋ฅผ ๋ท๋ฐ์นจํ๊ธฐ ์ํ ๊ธฐ์ด์๋ฆฌํ์ฑ ์๋ฃ๋ค์ด ๋ง์ด ๋ณด
๊ณ ๋์๋ค. ํนํ ์ด๊ณ ์ ๊ณต์ ์ ๋์ ํ ๋ณต๋ถ์์ ๋ฉด์ญ ํ์ฑ ์ฆ
์ง ์ฐ๊ตฌ๋ ๊ธฐ์กด์ ์ ํต์ ์ธ ๋ฐฉ๋ฒ์ผ๋ก ์ถ์ถํ ์ถ์ถ๋ฌผ๊ณผ ๋น๊ตํ
์ ๋ ์ ์ฉํ ๊ธฐ์ ๋ก ํ๊ฐ๋๊ณ ์๋ค (Kwon et al., 2007).
์ต๊ทผ์๋ ๋ณต๋ถ์์ ์๋ฆฌํ์ฑ์ ๋ฐํ์ผ๋ก ํ์ฌ ๋ณต๋ถ์ ๊ณผ์ฆ์
์ฒจ๊ฐํ ํธ๋ฉ์ ํ์ง ํน์ฑ์ ๋ํ ์ฐ๊ตฌ๊ฐ ์งํ๋์๋ค (Yoo et
al., 2008). ๊ทธ๋ฌ๋ ํฅ์ฅํ์ ๋ํ ๋ณต๋ถ์์ ์๋ฆฌํ์ฑ ํจ๋ฅ์
๊ดํ ์ฐ๊ตฌ๋ ๋ฏธํกํ ํธ์ด๋ค.
์ด๊ณ ์ ์ฒ๋ฆฌ๋ ์ต๊ทผ ์ฝ์ฉ์๋ฌผ์์ ์์์์ ๋น์์์ฑ์ ์
๋ฌผ์ฑ ํํ๋ฌผ์ง ์ญ์ทจ์ ์์ด ๊ฐ์ฅ ํจ์จ์ ์ผ๋ก ํ์ฉ๋ ์ ์๋
์ถ์ถ ๊ธฐ์ ์ด๋ค. ์ด๊ณ ์ ๊ธฐ์ ์ ์ฝ์ฉ ์๋ฌผ์ ์ค์ ๊ตฌ์ฑ ์ฑ๋ถ์
๋จ์๊ฐ์ ์ถ์ถ ํ๋ ๊ฒ์ด ๊ฐ๋ฅํ๋ฉฐ, ๋ถ์๋ฌผ์ด ๊ฑฐ์ ์์ด ๋์
์๋์ ๋จ์ผ ์ฑ๋ถ์ ์ฝ๊ฒ ์ป์ ์ ์๋ ์ฅ์ ์ ๊ฐ์ง๋ค
(Deliza et al., 2005). ์ด๊ณ ์ ์ฒ๋ฆฌ๋ ์ฒ์ฐ ์์ฌ์ ๋ณด์กด์ฑ, ๋ฌผ
์ฑ, ๊ธฐ๋ฅ์ฑ์ ํฅ์์์ผ์ค๋ค. 100~1000ใซ์ ์๋ ฅ์ ์ด์ฉํ์ฌ
์๋ ฅ๋งค์ฒด๋ก ๋ฌผ์ด๋ ์ค์ผ์ ์๋ ฅ์ ์๊ฐ์ ์ผ๋ก ๊ท ์ผํ๊ฒ ์ ๋ฌ
์ํค๋ ์๋ฆฌ์ด๋ค. ์์ฌ์ ๊ฐ๊ณต์์ ์ด์ฒ๋ฆฌ์ ์๋ ฅ์ฒ๋ฆฌ๋ ๋ชจ๋
์ฒด๋ด ๋์ฌ์ฑ์ ํฅ์์ํค๋๋ฐ, ์ด์ฒ๋ฆฌ๋ ํํ๋ณํ๊ฐ ๋ง์ด ์ผ์ด
๋๋๋ฐ ๋ฐํ์ฌ ์๋ ฅ์ฒ๋ฆฌ๋ ํํ์ ์ผ๋ก ํฐ ๋ณํ๋ฅผ ์ผ์ผํค์ง
์๋ ์ฅ์ ์ด ์๋ค. ๋ฐ๋ผ์ ์ด๊ณ ์ ๊ณต์ ์ ๋น๊ฐ์ด์ฒ๋ฆฌ ๊ฐ๊ณต๋ฐฉ
๋ฒ์ด๋ฏ๋ก ์ฒ์ฐ ์์ฌ ๋ด์ ์ฃผ์ ์ฑ๋ถ์ ๋ณ์ฑ์ํค์ง ์์ ์ ์
๊ฐ์ ์ ์ง์ํฌ ์ ์๋ ๊ฐ๊ณต๊ธฐ์ ๋ก ํ๊ฐ๋๊ณ ์๊ณ , ๊ธฐ์กด์ ๊ฐ
์ด์ฒ๋ฆฌ์ ์ํ ์์ฌ์ ์กฐ์ง๊ฐ ๋ฐ ํ๋ฏธ ์ ํ ๋ฑ์ ๊ทน๋ณตํ ์
์๋ค.
๋ณธ ์ฐ๊ตฌ์์๋ ๊ธฐ์กด์ ์ด์์ถ์ถ ๋ฐฉ๋ฒ์ ํตํด ์ป์ ๋ณต๋ถ์
์ถ์ถ๋ฌผ๊ณผ ์ด๊ณ ์ ์ถ์ถ๋ฌผ์ ๋น๊ตํ์๋ค. NOโ ์์ฑ๋ ์ธก์ ,
PGE2 ์ธก์ ์ ํตํด ์ฌ์ ์์ธํฌ์์ ํผ๋ถ๋ฉด์ญ์ ๋ฏธ์น๋ ํจ๊ณผ๋ฅผ
์์๋ณด๊ณ ๋ ๋์๊ฐ ํฅ์ฅ์์ฌ์ ๊ด๋ จ๋ ๋ถ์ผ์ ํ์ฉํ๊ธฐ ์ํ
๊ธฐ์ด ์๋ฃ๋ก ์ด์ฉํ๊ณ ์ ์ฐ๊ตฌ๋ฅผ ์ํํ์๋ค. ์ธ๊ฐ ์ ์ ์ธํฌ
์ ํผ๋ถ์ฌ์ ์์ธํฌ์์์ ์ธํฌ ๋ ์ฑ์ ๋น๊ตํจ์ผ๋ก์ ํผ๋ถ ๋ฉด
์ญ ์ฆ์ง ์์ฌ๋ก์ ์์ ์ฑ์ ํ์ธํ์๋ค.
์ฌ๋ฃ ๋ฐ ๋ฐฉ๋ฒ
1. ์คํ์ฌ๋ฃ
๋ณธ ์คํ์ ์ฌ์ฉ๋ ๋ณต๋ถ์ (Rubus coreanus)๋ 2008๋ 7์
์ ๋ฐ๊ต์ฐ ๋ถ๊ทผ์์ ์ฑ์ทจํ ๊ฒ์ ๊ฑด์๋ฃ๋ก ๊ตฌ์ ํ์ฌ ์์จ์์
๋ณด๊ดํ๋ฉด์ ์ฌ์ฉํ์๋ค. ์ด๊ณ ์ ์ถ์ถ์ ๋ณต๋ถ์ 50 g์ ๋น๋ ํฉ
์ ์ฆ๋ฅ์์ ํจ๊ป ๋ฃ์ด ๊ณต๊ธฐ๊ฐ ๋ค์ด๊ฐ์ง ์๋๋ก ์ ๋ฐ๋ดํ
ํ, ์ด๊ณ ์ ์ถ์ถ ์ฅ์น (Ilshin autoclave, Korea) ๋ฅผ ์ด์ฉํ์ฌ
500ใซ์ ์๋ ฅ์ 5๋ถ, 15๋ถ์ผ๋ก ์ถ์ถ ์กฐ๊ฑด์ ์ค์ ํ์ฌ ์คํํ
์๋ค. ์ด๊ณ ์ ์ถ์ถ์ด ๋๋ ์๋ฃ๋ฅผ ๊ฐ๊ฐ ์์ง ํ๋ฅ ๋๊ฐ๊ธฐ์
๋ถ์ฐฉ๋ ์ถ์ถ flask์ ์๋ฃ ์ค๋์ ๋ํ์ฌ ๊ฐ๊ฐ 10๋ฐฐ์ ์ฆ๋ฅ์
๋ฅผ ์ถ์ถ์ฉ๋งค๋ก ์ฌ์ฉํ์ฌ 100โ์์ 24์๊ฐ ์ถ์ถํ์๋ค. ๋์กฐ
๊ตฐ์ผ๋ก๋ ๋ณต๋ถ์ 50 g์ ์ด๊ณ ์ ์ถ์ถ๊ณผ์ ์ ์ ์ธํ๊ณ ๋๋จธ์ง
๋ ๊ฐ์ ์กฐ๊ฑด์ธ 100โ์์ 24์๊ฐ ์ด์ ์ถ์ถํ์๋ค. ์ป์ด์ง
์ถ์ถ๋ฌผ๋ค์ ๊ฐ์์ฌ๊ณผ์ฅ์น (Rotary Vacuum Evaporator N-N
series, EYELA, Germany)๋ก ์ฌ๊ณผํ์ฌ ๋์ถ์ ํ์๊ณ , ๋๊ฒฐ๊ฑด
์กฐ๋ฅผ ํ ํ์ ์คํ์ ์ฌ์ฉํ์๋ค (Kim et al., 2008). ๊ธฐ์กด์
๋ฐฉ๋ฒ๋๋ก ์ถ์ถํ ์ถ์ถ๋ฌผ์ NE๋ก, ์ด๊ณ ์ ์ถ์ถ๋ฌผ์ 5๋ถ, 15๋ถ
๊ฐ๊ฐ HPE5, HPE15๋ก ํ๊ธฐํ์๋ค.
2. ์ธํฌ์ฃผ ๋ฐ ์ธํฌ ์์ก ๋ฐฐ์ง
์คํ์ ์ด์ฉ๋ ์ธํฌ์ฃผ๋ ์ธ๊ฐ ํผ๋ถ ์ฌ์ ์์ธํฌ์ธ CCD-
986sk (human, skin fibroblast, KCLB, KOREA)์ ์ธ๊ฐ ํ
์ ์์ธํฌ์ธ HEL299 (human, lung, KCLB, KOREA)๋ก ์ธํฌ
๋ฐฐ์์ ํ์ํ ๋ฐฐ์ง๋ก RPMI 1640์ ์ฌ์ฉํ์๊ณ , ์ธ๊ฐ ์ ์ฅ
์ ์์ธํฌ์ธ HEK293 (human, kidney, KCLB, KOREA)๋
๋ฐฐ์ง๋ก MEM (minimum essential medium)์ ์ฌ์ฉํ์๋ค. ๊ทธ
๋ฐ์ ๋ฐฐ์์ ํ์ํ ์์ฝ์ผ๋ก hepes buffer (SIGMA, USA)
์ FBS (fetal bovine serum) (GIBCO, USA), gentamycin
sulfate (SIGMA, USA), trysin-EDTA (SIGMA, USA)๋ฅผ ์ฌ
์ฉํ์๋ค. ๊ฐ ์ธํฌ๋ RPMI 1640 ๋ฐฐ์ง์ MEM ๋ฐฐ์ง์์
10% heating-inactivated FBS๋ก ์ ์์์ผ ๋ฐฐ์ํ์ฌ ์คํ์ ์ด
์ฉํ์๋ค.
3. ์ ์์ธํฌ ๋ ์ฑ ์ธก์
์ธํฌ๋ ์ฑ ์ธก์ ์ ์ํด์ SRB assay๋ฅผ ์ด์ฉํ์ฌ ์ธก์ ํ์๋ค.
Sulforhodamine B (SRB) assay๋ ์ธํฌ ๋จ๋ฐฑ์ง์ ์ผ์ํ์ฌ ์ธ
ํฌ์ ์ฆ์์ด๋ ๋ ์ฑ์ ์ธก์ ํ๋ ๋ฐฉ๋ฒ์ผ๋ก ์คํ ๋์ ์ธํฌ์ธ
HEK293 (in 10% FBS media)์ ๋๋๋ฅผ 4~5ร104 cells/ใ์ผ
๋ก 96 well plate์ ๊ฐ well์ 100ใ์ฉ ์ฒจ๊ฐํ์ฌ 24์๊ฐ ๋ฐฐ
์ (37โ, 5% ๋์ CO2)ํ ํ, ๊ฐ๊ฐ์ ์๋ฃ๋ฅผ ์ต์ข ๋๋ 0.2,
0.4, 0.6, 0.8, 1.0ใ/ใ๋ก 100ใ์ฉ ์ฒจ๊ฐํ์ฌ 48์๊ฐ ๋ฐฐ์ํ
์๋ค. ๋ฐฐ์์ด ์๋ฃ ๋ ํ์ ์๋ฑ์ก์ ์ ๊ฑฐํ๊ณ ์ฐจ๊ฐ์ด 10%
(w/v) TCA (trichloroacetic acid)๋ฅผ 100ใ ๊ฐํ์ฌ 4โ์์ 1
์๊ฐ๋์ ๋ฐฉ์นํ ํ ์ฆ๋ฅ์๋ก 4~5ํ ์ธ์ฒํ์ฌ TCA๋ฅผ ์ ๊ฑฐํ
๊ณ ์ค์จ์์ plate๋ฅผ ๊ฑด์กฐํ ๋ค ๊ฐ well์ 1% (v/v) acetic
acid์ ๋ น์ธ 0.4% (w/v) SRB์ฉ์ก์ 100ใ์ฉ ์ฒจ๊ฐํ๊ณ ์์จ
์์ 30๋ถ ๋์ ์ผ์์์ผฐ๋ค. ๊ฒฐํฉ๋์ง ์์ SRB ์ผ์์ก์
1% acetic acid๋ก 4~5ํ ์ ๋ ์ธ์ฒ, ๊ฑด์กฐ์ํจ ํ์ 10 mM
UV์ ๋ํ ๋ณต๋ถ์์ ํผ๋ถ ๋ณดํธ ํจ๊ณผ
323
Tris buffer 100ใ๋ฅผ ์ฒจ๊ฐํ์ฌ ์ผ์์ก์ ๋ น์ฌ๋ธ ํ 540ใ์
์ microplate reader๋ฅผ ์ด์ฉํ์ฌ ํก๊ด๋๋ฅผ ์ธก์ ํ์๋ค (Dol
and Peto, 1981).
4. Macrophage์์์ nitric oxide ์์ฑ๋ฅ ์ธก์
์ฌ์ฉ๋ ์ธํฌ์ฃผ๋ ๋ง์ฐ์ค ์ ๋ RAW 264.7 ๋์์ธํฌ์ด๋ฉฐ,
์ธํฌ๋ 10% heat-inactivated bovine serum๊ณผ 90% DMEM
(Dulbecco's modified Eagle's medium)์ ์ด์ฉํ์ฌ 24well
plate์ 4~5ร104 cells/well์ ๋๋๋ก ๋ฃ์ ๋ค์, ์๋ฃ๋ฅผ ์ฒจ๊ฐ
ํ๊ฑฐ๋ ์ฒจ๊ฐํ์ง ์๊ณ 5% CO2 incubator์์์ 37โ์์ 48
์๊ฐ๋์ ๋ฐฐ์ํ์ฌ ์คํ์ ์ฌ์ฉํ์๋ค. ๋์์ธํฌ์์ ๋ฐ์๋
๋ nitric oxide์ ์์ ํ์ฑํ๋ ๋์์ธํฌ ๋ฐฐ์์ก์ ์ถ์ ๋์ด
์๋ nitrite์ ์์ microplate assay๋ฅผ ์ด์ฉํ์ฌ ์ ๋ํจ์ผ๋ก์
์ธก์ ํ์๋ค. ๋จผ์ ์๋ฃ๋ฅผ ์ฒ๋ฆฌํ๊ณ 48์๊ฐ ๋์ ์ธํฌ๋ฅผ ๋ฐฐ์
ํ๊ณ ์๋ฑ์ก 50ใ๋ฅผ ์ทจํ์ฌ ๋์ผ๋ถํผ์ Griess์์ฝ (1%
sulfanilamide/0.1% N-(1-naphthyl)-ethylenediamine dihydrochloride/
2.5% H3PO4)์ ์ฒจ๊ฐํ์ฌ ์ค์จ์์ 10๋ถ๊ฐ ๋ฐ์์ํจ ํ
ELISA reader (Molecular Devices, USA)๋ฅผ ์ด์ฉํ์ฌ 540
ใ์ ํก๊ด๋๋ฅผ ์ธก์ ํ์๋ค. Nitrite์ ํ์ค๋ฌผ์ง๋ก๋ sodium
nitrite๋ฅผ ์ฌ์ฉํ์์ผ๋ฉฐ ๋๋๋ 0.25 ยตM์์๋ถํฐ 4 ยตM๊น์ง
DMEM ๋ฐฐ์ง๋ก 2๋ฐฐ์ฉ ํฌ์ํ์ฌ ์ป์ ํ์ค๊ณก์ ๊ณผ ๋น๊ตํ์ฌ ๊ณ
์ฐํ์๋ค. NOโ์์ฑ๋ฅ์ ์์ฑ ๋์กฐ๊ตฌ ๋ฌผ์ง๋ก๋ LPS๋ฅผ ์ฌ์ฉํ
์๋ค.
5. PGE2๋ฅผ ์ด์ฉํ UV ์ต์ ํ์ฑ ์ธก์
UV ์กฐ์ฌ๋ COX-2 (cyclo-oxygenase-2) enzyme์ ์์ ํฌ
๊ฒ ๋ณํ์์ผ ๋์ ์์ค์ PGE2 (Prostaglandin E2) ๋ฐํ๋์
๋ํ๋ธ๋ค. ์ธ๊ฐ ์ฌ์ ์์ธํฌ์ธ CCD-986sk ์ธํฌ๋ฅผ 10% FBS์
DMEM ๋ฐฐ์ง์ ํํํ์ฌ 1ร106 cells/ใ๋ก ์กฐ์ ํ ๋ค 37โ,
์ต๋ 5%์ CO2 incubator์์ 24์๊ฐ ๋ฐฐ์ํ์ฌ ์ฌ์ฉํ์๋ค.
์ด ํํ์ก์ aspirin์ 50 ยตM์ด ๋๋๋ก ์ฒจ๊ฐํ์ฌ ์ธํฌ์ ์์กด
ํ๋ COX-2 ํจ์์ ํ์ฑ์ ๋น๊ฐ์ญ์ ์ผ๋ก ์ต์ ์์ผ PGE2 ์
์ ๋์ผํ๊ฒ ์กฐ์ ํ์๋ค. ๋ค์์ผ๋ก ์ธํฌ ํํ์ก๊ณผ ์๋ฃ๋ฅผ 96
well ์ธํฌ ๋ฐฐ์๊ด ๊ฐ well์ 20ใ์ฉ ์ฒจ๊ฐํ๊ณ 37โ, ์ต๋
5% CO2 ๋ฐฐ์๊ธฐ์์ UV filter (Coralife, 35W, UV) ๋ฅผ ์ด
์ฉํ์ฌ UVA (6.3 J/ใ )๋ฅผ 2์๊ฐ ๋์ ์กฐ์ฌํ์๋ค. ๋ฐฐ์ ํ
์ธํฌ๋ฅผ well ๋ฐ๋ฅ์ ๋ถ์ฐฉ์ํค๊ณ , ๋ถ์ฐฉ๋ ์ธํฌ๋ฅผ PBS
(phosphate buffered saline)์ผ๋ก 2ํ ์ธ์ฒํ ํ, ํ๋ฉด์ ๋จ์
์๋ ์ธํฌ๋ฅผ ์คํ์ ์ฌ์ฉํ์๋ค. PGE2 Express EIA Short
kit๋ฅผ ์ด์ฉํ์์ผ๋ฉฐ, ํญ PGE2 ํญ์ฒด๊ฐ ๋ถ์ฐฉ๋์ด ์๋ plate์
๊ฐ well์ ํ์ํ ์์ธต์ก๊ณผ ํจ๊ป PGE2-acetylcholinesterase
tracer๋ฅผ ๋ฃ์ด ์์จ์์ 18์๊ฐ ๋ฐฐ์ํ๊ณ , ๊ฐ well์ ๋จ์์๋
์ฉ์ก์ ๋ง๋ํ ํธ์ด๋ธ ํ, 0.05% tween 20-phosphate buffer
solution์ผ๋ก ๊ฐ well์ 5ํ ์ธ์ฒํ๊ณ Ellman ์์ฝ 200ใ๋ฅผ
๊ฐ well์ ๋ฃ์ ํ 7์๊ฐ ๋ฐฐ์ํ์ฌ 405ใ์์ ํก๊ด๋๋ฅผ ์ธก
์ ํ์๋ค. PGE2 ๋ฅผ ํ์คํ์ผ๋ก ๊ฒ๋์ ์ ์์ฑํ์ฌ ๊ฐ๊ฐ์ ์
๋ฃ๋ฅผ ์ฒ๋ฆฌํ ๋ฐฐ์์ก์์์ PGE2 ์์ฑ๋์ ๊ตฌํ์๋ค.
6. HPLC์ ์ํ ์๋ฆฌํ์ฑ ๋ฌผ์ง์ ๋ถ์
๋ณต๋ถ์ ์ด๊ณ ์ ๋ณํ ์ถ์ถ๋ฌผ์ HPLC ๋ถ์์ฉ water์ ๋ น์ฌ
0.45ใ ๋ง filter๋ก ์ฌ๊ณผํ์ฌ 200 ppm์ ๋๋๋ก ์ธก์ ํ์๋ค.
HPLC ๊ธฐ๊ธฐ๋ Waters (High Performance Liquid Chromato-
graph, USA)๋ฅผ ์ฌ์ฉํ์ฌ ๋ถ์ํ์๋ค.
Column์ C18 5 ยต, ์ฉ๋งค๋ ์ ์ ๋ water์ acetonitril์
8 : 2 ๋น์จ๋ก ์กฐ์ ํ์ฌ ์ฌ์ฉํ์๊ณ , ์ ์์ 0.5ใ/min, detector
์ ํก๊ด๋๋ 350ใ๋ก ํ์๋ค. ๋ณต๋ถ์์ ์คํ ๋ค๋ ๋ฌผ์ง๋ก๋
catechin, caffeic acid, taxifolin, ferulic acid๋ฅผ ๊ฐ์ ์กฐ๊ฑด์ผ๋ก
์กฐ์ ํ์ฌ ์ฌ์ฉํ์๋ค.
7. ํต๊ณ์ฒ๋ฆฌ
SPSS program (ver. 12.0, SPSS Inc., Chicago, IL, USA)
์ T-test๋ก ๊ฒ์ ํ์์ผ๋ฉฐ ๋ชจ๋ data๋ ํ๊ท ยฑํ์ค์ค์ฐจ (Mean
ยฑ standard error)๋ก ๋ํ๋ด์๋ค. ๋ํ p < 0.05์ธ ๊ฒฝ์ฐ๋ฅผ ํต๊ณ
์ ์ ์์ฑ์ด ์๋ ๊ฒ์ผ๋ก ํ์ ํ์๋ค.
๊ฒฐ๊ณผ ๋ฐ ๊ณ ์ฐฐ
1. ์ ์์ธํฌ ๋ ์ฑ ์ธก์
์คํ์ ์ฌ์ฉ๋ ๋ณต๋ถ์ ์๋ฃ ๋๋๋ ๊ฐ๊ฐ 0.2, 0.4, 0.6, 0.8
๊ทธ๋ฆฌ๊ณ 1.0ใ/ใ๋ก ์กฐ์ ํ์ฌ ์ ์์ธํฌ ๋ฐ ์ฌ์ ์์ธํฌ์ ๋ํ
์ฑ์ฅ ํจ๊ณผ๋ฅผ ๊ฒํ ํ์๋ค. Fig. 1์ ๋ณต๋ถ์์ HEK293 ์ ์ ์ธ
ํฌ์ ๋ํ ๋ ์ฑ์ ๋ํ๋ธ ๊ฒ์ผ๋ก ์ต๊ณ ๋๋์ธ 1.0ใ/ใ์์
์ด๊ณ ์ 15๋ถ ๊ณต์ ์ RHPE15๊ฐ 16.5%๋ก ๋ฎ์ ์ธํฌ ๋ ์ฑ์
๋ํ๋๊ณ , ์ผ๋ฐ ์ด์์ถ์ถ๋ฌผ์ธ RWE๊ฐ 22.5%์ ๋์ ์ธํฌ๋ ์ฑ
์ ๋ํ๋๋ค. ์ธ๊ฐ ํ ์ ์ ์ธํฌ HEL299์ ๋ํ ์ธํฌ ๋ ์ฑ
์ ์ต๊ณ ๋๋์ธ 1.0ใ/ใ์์ ์ด๊ณ ์ 15๋ถ ๊ณต์ ์ RHPE15
๊ฐ 14.0%๋ก ๊ฐ์ฅ ๋ฎ์ ์ธํฌ๋ ์ฑ์ ๋ณด์๋ค. ์ธ๊ฐ์ฌ์ ์์ธํฌ์ธ
CCD-986sk์ ์ธํฌ๋ ์ฑ ๋ํ ๋ชจ๋ ์ถ์ถ๋ฌผ ์ค RHPE15๊ฐ
1.0ใ/ใ์ ๋๋์์ 17.5%๋ก ๋ฎ์ ์ธํฌ๋ ์ฑ์ ๋ํ๋๊ณ ,
WE๊ฐ 23.2%๋ก ๋์ ๋ ์ฑ์ ๋ํ๋๋ค. ์ธ ๊ฐ์ง ์ธํฌ์ ์ ์
์ธํฌ ๋ ์ฑ ์คํ ๊ฒฐ๊ณผ, ๋ชจ๋ ์ด๊ณ ์ ์ถ์ถ๋ฌผ์ด ๊ฐ์ฅ ๋ฎ์ ์ธํฌ
๋ ์ฑ์ ๋ณด์์ผ๋ฉฐ ์ด๊ณ ์ ์ฒ๋ฆฌ๋ฅผ ์ค์ ํ ๊ฒฝ์ฐ ์ผ๋ฐ ์ถ์ถ๋ฌผ๋ณด
๋ค ์ธํฌ๋ ์ฑ์ด ๋ฎ์์ง๋ ํจ๊ณผ๋ฅผ ํ์ธํ ์ ์๋ค. ์ด๊ฒ์ ์ฝ์ฉ
์๋ฌผ๋ค์ด ๊ฐ์ง๊ณ ์๋ ๋ ์ฑ ๋ฌผ์ง์ด ์ด๊ณ ์์ผ๋ก ์ธํด ๋ณ์ฑ๋๊ฑฐ
๋ ํ๊ดด๋์ด ๋ ์ฑ์ด ๋ฎ์์ง๋๋ฐ ์ํฅ์ ๋ฏธ์น ๊ฒ์ผ๋ก ๋ณด์ธ๋ค.
์ด๊ณ ์ ๊ณต์ ์ ๋์ ์ผ๋ก ์ฒ์ฐ๋ฌผ์ ๋จ๋ฐฑ์ง ๋ณํ ๋ฐ ์ธํฌ๋ฒฝ
ํ๊ดด๊ฐ ์ ๋๋์ด ์ฉ๋งค๊ฐ ์ธํฌ ๋ด๋ถ ๊น์์ด ์นจํฌํ์ฌ ์ฉ์ถ์ด
์ฉ์ดํ๊ฒ ๋๋ฉฐ, ์ ์ฉ ์ฑ๋ถ์ ์๋์จ ๋ํ ํฅ์๋๋ค. ๊ธฐ์กด ํ๊ณ
์ ์ด๊ณ ์ ๊ณต์ ์ ์ํ ํ๊ฒฝ์ฒ์ ๋ ์ฑ ๊ฐ์๋ฅผ ํ์ธํ ์คํ๊ณผ
๋น๊ตํ์ ๋ ์ต๊ณ ๋๋์์ HEK293์ ์ธํฌ๋ ์ฑ์ด 20.4%,
์ ํฅ์ยทํ์งํยท๊น ์ยท์ค์ฑํธยท๊น์น์ญยท์ ๋ช ํยท์ดํ์ฉ
324
HEL299์ ์ธํฌ๋ ์ฑ์ด 21.6%์ผ๋ก ๋ํ๋ ๊ฒ์ผ๋ก ๋ฏธ๋ฃจ์ด๋ณด์,
๋ณต๋ถ์ ์ถ์ถ๋ฌผ์ ์ด๊ณ ์ ๊ณต์ ๋์ ์ ์ ์์ธํฌ ๋ ์ฑ์ 20%
์ดํ๋ก ๋ฎ์ถ ์ ์์ผ๋ฏ๋ก ์ฐ๊ตฌ๊ฐ์น๊ฐ ์ถฉ๋ถํ ๊ฒ์ผ๋ก ์ฌ๋ฃ๋๋ค
(Kim et al., 2007). ์ด๊ณ ์ ์ถ์ถ์ ์์๊ฒฐํฉ, ์ ๊ธฐ์ ๊ฒฐํฉ, ๋ฐ
๋ฐ๋ฅด๋ฐ์ค ๊ฒฐํฉ๊ณผ ๊ฐ์ ์๋์ง ์์ค์ด ์ ํ๋ ์ฝํ ๊ฒฐํฉ์ ๋
์ด ์ฑ๋ถ ๋ณ์ฑ์ ์ ๋ํ์ฌ ๋ณต๋ถ์์ ์ฒ์ฐ๋ฌผ ์์ฒด์ ๋ ์ฑ ์ ๊ฐ
ํจ๊ณผ๋ ๊ฐ์ ธ์ค๋ ๊ฒ์ผ๋ก ์๊ฐ๋๋ค. ๋ณต๋ถ์์ ๊ฐ์ ํ์ฝ์ฌ๋ ์ธ
ํฌ๋ฒฝ์ด ๊ฒฌ๊ณ ํ์ฌ ์๋ฆฌํ์ฑ ๋ฌผ์ง์ ์ป๊ธฐ ์ํด์๋ ๊ธฐ์กด์ ๊ฐ๊ณต
๊ธฐ์ ๊ณผ ๋ค๋ฅธ ์ด๊ณ ์์ ๋์ ํ๋ฉด ๋ ํจ์จ์ ์ผ๋ก ์๋ฆฌํ์ฑ ๋ฌผ์ง
์ ์ป์ ์ ์์ ๊ฒ์ผ๋ก ์ฌ๋ฃ๋๋ฉฐ, ํนํ ํ์ฝ์ฌ์ ์์ฉํ ์ด
๊ณ ์์ ๋์ ์๋์ง์ ์๋ ฅ์ ๋ณดํต ์ด์์ถ์ถ๋ก ์ป์ ์ ์๋
์ ์ฉ์๋ฆฌํ์ฑ ๋ฌผ์ง์ ์ป์ ์ ์๊ฒ ํ์ฌ ํ์ฝ์ฌ์ ํจ์ ํ ์ฒ
์ฐ๋ฌผ์ ์ฌํ๊ฐํ ์ ์๊ฒ ํ๋ค.
2. Macrophage์์์ nitric oxide ์์ฑ๋ฅ ์ธก์
๋์์ธํฌ์ NOS (nitric oxide synthase)๋ ํญ์ ์กด์ฌํ๋
๊ฒ์ด ์๋๋ผ TNF-ฮณ (tumor necrosis factor-ฮณ), TNF-ฮฑ (tumor
necrosis factor-ฮฑ)์ ๊ฐ์ ์ฌ๋ฌ ๊ฐ์ง cytokine๊ณผ LPS (E. coli
derived lipopolysaccharide)์ ๊ฐ์ ์ธ๊ท ๋ด ๋ ์์ ์ํฅ์ ๋ฐ
์ NOS ์ ์ ์์ ๋ฐํ์ด ์ ๋๋๊ธฐ ๋๋ฌธ์ ์๋ฃ๋ฅผ LPS์ ๊ฐ
์ด ํฌ์ฌํ์ฌ NOโ์ ์์ฑ๋ฅ์ ํ์ธํ์๋ค. Fig. 2์์ ํ์ธํ
Fig. 1. Cytotoxicity of the extracts from R. coreanus by different extraction processes on normal cell line, HEK293, HEL299 and CCD-986sk.
โ RWE : normal water extraction at 100โ of R. coreanus
โ โ RHP5 : high pressure extraction for 5 minutes in RWEโ โ โ RHP15 : high pressure extraction for 15 minutes in RWE
Fig. 2. Nitric oxide production from Raw264.7 cell lines in addingthe extracts under several extract conditions from R.
coreanus (0.5ใ/ใ).โ RWE : normal water extraction at 100โ of R. coreanus
โ โ RHP5 : high pressure extraction for 5 minutes in RWEโ โ โ RHP15 : high pressure extraction for 15 minutes in RWE* p < 0.05 : significantly different from RWE group
UV์ ๋ํ ๋ณต๋ถ์์ ํผ๋ถ ๋ณดํธ ํจ๊ณผ
325
์ ์๋ฏ์ด LPS์ Raw264.7 ์ธํฌ์ฃผ์ ๋ณต๋ถ์ ์๋ฃ๋ฅผ ์ฒ๋ฆฌํ
์ฌ ์ดํ๊ฐ ๋ฐฐ์ํ ํ, ๋ฐฐ์์ก ์ค์ NOโ (nitric oxide)๋๋๋ฅผ
์ธก์ ํ ๊ฒฐ๊ณผ, ์๋ฌด์ฒ๋ฆฌ๋ ํ์ง ์์ ๋์กฐ๊ตฐ (control)๊ณผ ๋น๊ตํ
์์ ๋ ๋ชจ๋ ์๋ฃ ์ฒจ๊ฐ๊ตฐ์์ ๋์ ํ์ฑ์ ๋ํ๋ด์์ผ๋ฉฐ, ํน
ํ LPS์ ํผํฉ ์ฒ๋ฆฌํ์์ ๋ NOโ์ ์์ฑ๋ฅ์ด ํฐ ํญ์ผ๋ก ์ฆ
์ง๋๋ ๊ฒ์ ํ์ธํ ์ ์์๋ค.
์ด๋ฅผ ํตํด ๋ณต๋ถ์ ์ด๊ณ ์ ์ถ์ถ๋ฌผ์๋ ๋์์ธํฌ์ NOโ ์์ฑ
๋ฅ์ ์ฆ์ง์ํด์ผ๋ก์จ ๋ฉด์ญ ํ์ฑ์ ์ฆ์งํ๋ ํ์ฑ์ด ์์ผ๋ฉฐ ์ด
๋ LPS ๋ฑ ์ธ๊ท ๋ด ๋ ์์ ํจ๊ป ์์น์์ฉ์ ๋ํ๋ผ ์ ์์
์ ์ ์ ์๋ค๋ ๊ฒ์ ์ ์ ์๋ค. ํํธ, ๊ธฐ์กด์ ํ๊ณ ์ฐ๊ตฌ์
์๋ ๋ณต๋ถ์ ๋ฌผ ์ถ์ถ๋ฌผ๊ณผ ์ํ์ฌ ์ถ์ถ๋ฌผ์ NOS์ ์ ํด ํ์ฑ
์ ๋๋๋ณ๋ก ์คํํ์ฌ ์ํ์ฌ ์ถ์ถ๋ฌผ์ NOS ์ ํด ํ์ฑ์ด ์ข
๋ค๋ ๊ฒ์ ํ๊ฐํ ๋ฐ ์๋ค (Park et al., 2006). ๋ณธ ์ฐ๊ตฌ๋ฅผ ํต
ํด ๋ณต๋ถ์ ์ด๊ณ ์ ์ถ์ถ๋ฌผ์๋ Macrophage์ NOโ ์์ฐ์ ํ
์ฑํ์ํค๋ ํน์ด ์ ์ฉ์ฑ๋ถ์ด ์์ ๊ฒ์ผ๋ก ์ฌ๋ฃ๋๋ค. ํนํ, UV
๊ฐ ์ง์์ ์ผ๋ก ํผ๋ถ์ ์ํฅ์ ์ฃผ๊ฒ ๋๋ฉด ๋ฉ๋ผ๋์ด ๊ณผํ์ฑ๋
๊ณ , ํผ๋ถ ๋ฉด์ญ์ด ๋จ์ด์ง๋ฉฐ, ์ฒด๋ด์ ํ์์ข ์ธํฌ๊ฐ ๋น ๋ฅด๊ฒ ์๋ผ
ํผ๋ถ ์ข ์์ด ํ์ฑ๋๊ฒ ๋๋ค. ๋ฐ๋ผ์, ๋ณต๋ถ์ ์ถ์ถ๋ฌผ์ ํ์์ข
์ธํฌ ๋ฐ ๋ค๋ฅธ ์์ธํฌ์ ๋ํ ๋ ์ฑ ๋ฐ ์ ํ์ ์ผ๋ก ๋ฉด์ญ ํ์ฑ์
๋ํ๋ด๋ ์ ํจ์ฑ๋ฌธ์ ๋ํ ๊ฒ์์ด ์งํ๋์ด์ผ ํ ๊ฒ์ผ๋ก ์ฌ๋ฃ
๋๋ค.
3. PGE2๋ฅผ ์ด์ฉํ UV ์ต์ ํ์ฑ ์ธก์
UV๋ฅผ ์ด์ฉํ์ฌ ์ธ๊ฐ fibroblast์ธ CCD-986sk๋ฅผ ์๊ทนํจ์ผ๋ก
์จ ์ผ์ฆ๊ณผ ๊ด๋ จ์ด ์๋ PGE2์ ์์ฑ๋์ ์ธก์ ํ ๊ฒฐ๊ณผ๋ Fig.
3์ (A)์ (B)์ ๋ํ๋ด์๋ค. Fig. 3์ (A)๋ UV๋ฅผ ์กฐ์ฌํ์ง
์์ ์ธํฌ์์์ PGE2์ ๋ฐํ๋๋ฅผ ๋ํ๋ธ ๊ฒ์ผ๋ก, ์๋ฃ ์ฒจ๊ฐ
๋ฅผ ํตํ PGE2์ ์์ฑ๋์ ๋ณดํต ์ถ์ถ๋ฌผ ๊ตฐ์ ๋นํด ๋ฎ๊ฒ ๋ํ
๋ฌ์ผ๋ฉฐ ๋๋ ์์กด์ ์ผ๋ก ๊ฐ์ํ๋ ๊ฒฝํฅ์ ๋ณด์ฌ 1.0ใ/ใ์
๋๋์์ RHPE15๊ฐ 510 pg/ใ๋ก ๊ฐ์ฅ ๋ฎ์ PGE2 ์์ฑ๋์
๋ํ๋ด์๋ค. Fig. 3์ (B)๋ UV๋ฅผ ์กฐ์ฌํ ์ธํฌ์์์ PGE2
์์ฑ๋์ ๋ํ๋ธ ๊ฒ์ผ๋ก, UV ๋น์กฐ์ฌ ์กฐ๊ฑด์์์ ๋ง์ฐฌ๊ฐ์ง๋ก
์๋ฃ ์ฒจ๊ฐ๋ฅผ ํตํด PGE2์ ์์ฑ๋์ด ๊ฐ์ํ์์ผ๋ฉฐ, ๋๋ ์์กด
์ ์ผ๋ก ๋ฎ์์ง๋ ๊ฒฝํฅ์ ๋ํ๋ด์๋ค. ๋ํ UV ๋น์กฐ์ฌ ์กฐ๊ฑด์
์์ ๋ง์ฐฌ๊ฐ์ง๋ก 1.0ใ/ใ์ ๋๋์์ RHPE15๊ฐ 998 pg/ใ
๋ก ๊ฐ์ฅ ๋ฎ์ PGE2 ๊ฐ์ ๋ํ๋ด๋ฉฐ ๋ค๋ฅธ ๋๋์์๋ ์ ์์ ์ผ
๋ก ๋ฎ์ ์์น๋ฅผ ๋ํ๋ด์๋ค. COX-2๋ ๋ค๋ฅธ cytokine๋ค์ ์
ํด ํ์ฑํ ๋๋ฉฐ ๊ถ๊ทน์ ์ผ๋ก prostaglandin์ ์ฆ๊ฐ์ํค๋ ํจ์
์ด๋ค.
์ด๋ฌํ ๊ฒฐ๊ณผ๋ ๋ณต๋ถ์ ์ด๊ณ ์ ์ถ์ถ๋ฌผ์ด COX-2์ ์์ฉํด ์ผ
์ฆ cytokine์ ๋ถ๋น๋ฅผ ์ง์ ์ ํดํ์์ ๊ฐ๋ฅ์ฑ๊ณผ, PGE2๊ฐ ์
์ฑ๋๊ธฐ ์ ๋จ๊ณ์ธ arachidonic acid๊ฐ PGH2 (prostaglandin
H2)๋ก ์ ํ๋๋ ๊ณผ์ ์ ๋ง์์ ๊ฐ๋ฅ์ฑ์ ๋ํ๋ธ๋ค. ๋ณต๋ถ์ ์ถ
์ถ๋ฌผ์ ๋ํด PGE2๊ฐ ๋๋ ์์กด์ ์ผ๋ก ๊ฐ์ํ์์ผ๋ฏ๋ก, ๋ณต๋ถ
์ ์ด๊ณ ์ ์ถ์ถ๋ฌผ์ด ํผ๋ถ ์ผ์ฆ ๋ฌผ์ง ๊ฐ์ ํจ๊ณผ๋ฅผ ๊ฐ์ง๋ ๊ฒ์
ํ์ธํ์์ผ๋ ์ถ๊ฐ์ ์ธ ์ฐ๊ตฌ๋ฅผ ํตํด ์ถ์ถ๋ฌผ์ ํน์ด์ binding
์ ์กฐ์ฌํ๊ณ ๋ฉ์ปค๋์ฆ์ ๋ฐํ์ผ๋ก์จ ํ์ฑ์ ํ์ํ๋ ์คํ์ด
์งํ๋์ด์ผ ํ ๊ฒ์ผ๋ก ์ฌ๋ฃ๋๋ค. ๋ณธ ์ฐ๊ตฌ๋ ์ด๊ณ ์ ์ถ์ถ ๊ณต์
์ ํตํ ๋ณต๋ถ์์ ํผ๋ถ์ธํฌ ๋ณดํธ ํจ๊ณผ๋ฅผ ๊ด์ฐฐํ ์ต์ด ์ฐ๊ตฌ๋ก
์ ๊ฐ์น๊ฐ ์๋ค.
4. HPLC์ ์ํ ์๋ฆฌํ์ฑ ๋ฌผ์ง์ ๋ถ์
์ด๊ณ ์ ๊ณต์ ์ ์ํ ๋ณต๋ถ์ ์ถ์ถ๋ฌผ์ ์ ์ฑ์ ์ธ ๋ถ์๋ฒ์ธ
HPLC๋ฅผ ์ด์ฉํ์ฌ ์ธก์ ํ์ฌ ๋ณธ ๊ฒฐ๊ณผ, ์ด๊ณ ์ ๊ณต์ ์ 15๋ถ
๋ณํํ ์ถ์ถ๋ฌผ์์ peak๊ฐ ๋ค์ํ๊ณ ๋ง์ด ๊ฒ์ถ๋๋ ๊ฒ์ ๊ด
์ฐฐํ ์ ์์๋ค. Fig. 4๊ณผ ๊ฐ์ด, ์ด๊ณ ์ ์ถ์ถ ๊ณต์ ์ ํ ์ถ
์ถ๋ฌผ์์ ์๋ฆฌํ์ฑ์ด ์๋ ๊ฒ์ผ๋ก ๋ฐํ์ง ์ฒ์ฐ๋ฌผ์์ ๋ฐ๊ฒฌ
๋๋ catechin, caffeic acid, taxifolin, ferulic acid ๋ฑ์
์คํ ๋ค๋ ๋ฌผ์ง์ด ๊ณผ๋ ์ฉ์ถ๋์ด ๋์จ ๊ฒ์ ํ์ธํ์๋ค. ์ด
peak ๋ค์ ๋ฉด์ ์ด๋ ๋ถํฌ์ ์ฐจ์ด๊ฐ ์์ ์คํ์ ํ๋ ํผ๋ถ
๋ฉด์ญ ์ฆ์ง ํจ๊ณผ๊ฐ ์ด๊ณ ์ ์ถ์ถ๋ฌผ์์ ๋ณดํต ์ถ์ถ๋ฌผ์ ๋นํด
๋ ์ข์ ์๋ฆฌํ์ฑ๋๋ฅผ ๋ณด์๋ค๋ ๊ฒ๋ค์ ์ฆ๋ช ํ ์ ์๋ ๊ฒฐ
๊ณผ๋ก ์ฌ๋ฃ๋๋ค.
Fig. 3. Effect of R. coreanus on PGE2 secretion of human fibroblastCCD-986sk by (A) Non-UV irradiation and (B) UV radiation
โ RWE : normal water extraction at 100โ of R. coreanus
โ โ RHP5 : high pressure extraction for 5 minutes in RWEโ โ โ RHP15 : high pressure extraction for 15 minutes in RWE
์ ํฅ์ยทํ์งํยท๊น ์ยท์ค์ฑํธยท๊น์น์ญยท์ ๋ช ํยท์ดํ์ฉ
326
๊ฐ์ฌ์ ๊ธ
๋ณธ ์ฐ๊ตฌ๋ ๋์ด์งํฅ์ฒญ ๋ฐ์ด์ค๊ทธ๋ฆฐ 21 (๊ณผ์ ๋ฒํธ :
20070401034013) ์ฐ๊ตฌ์ง์์ผ๋ก ์ํ๋ ๊ฒ์ผ๋ก ์ด์ ์ฌ์ฌํ
์ฌ์๋ฅผ ํํฉ๋๋ค.
LITERATURE CITED
Bae GH. (2000). The medicinal plants of Korea. Kyohak
Publishing Co., Ktd. Seoul, Korea. p. 231-231.
Cho KH, Lee MK, Jo SJ, Kim KH, Park KC, Eun HC and
Chung JH. (2003). Histologic changes in the skin with
photoaging. Korean Dermatological Association. 41:754-760.
Deliza R, Rosenthal A, Abadio FBD, Silva CHO and Castillo
C. (2005). Application of high pressure technology in the fruit
juice processing: benefits perceived by consumers. Journal of
Food Engineering. 67:241-246.
Dol R and Peto R. (1981). The causes of cancer; quantitative
estimates of avoidable risks of cancer in the Unitede States
today. Journal of the National Cancer Institute. 66:1192-1308.
Fig. 4. HPLC Analysis of R. coreanus extracts. (A) Typical HPLC chromatograms of standard (catechin, caffeic acid, taxifolin and ferulic acid) on R. coreanus. (B) Typical HPLC chromatograms of RHPE15โ RHP15 : high pressure extraction for 15 minutes in R. coreanus water extracts.
UV์ ๋ํ ๋ณต๋ถ์์ ํผ๋ถ ๋ณดํธ ํจ๊ณผ
327
Gilchrest BA. (1989). Skin aging and photoaging. Journal of the
American Academy of Dermatology. 21:610-613.
Kwon MC, Kim CH, Na CS, Kwak HG, Kim JC and Lee HY.
(2007). Comparison of immuno-modulatory regulatory activities
of Rubus coreanus Miquel by ultra high pressure extracts
process. Korean Journal of Medical Crop Science. 15:398-404.
Kim CH, Kwon MC, Syed AQ, Hwang B, Nam JH, and Lee
HY. (2007). Toxicity reduction and improvement of anticancer
activities from Rhodiola sacha-linensis A. Bor by ultra high
pressure extracts process. Korean Journal of Medical Crop
Science. 15:411-416.
Kim CH, Kwon MC, Han JG, Na CS, Kwak HG, Choi GP,
Park UY and Lee HY. (2008). Skin-Whitening and UV-
protective effects of Angelica gigas Nakai extracts on uitra high
pressure extraction process. Korean Journal of Medicinal Crop
Science. 16:255-260.
Kim SD, Lee BH, Sohn DW, Cho YH, Lee SM, Kim JO and
Kim SW. (2008). The effect of herbal formulation KH-305
mainly consisted of Rubus Coreanus on benign prostatic
hyperplasia-induced rat. The Korean Society of Pharmacognosy.
39:80-85.
Park JH, Oh SM, Lim SS, Lee YS, Shin HK, Oh YS, Choe
NH, Park JH and Kim JK. (2006). Induction of heme
oxygenase-1 mediates the anti-inflammatory effects of the
ethanol extract of Rubus coreanus in murine macrophages.
Biochemical and Biophysical Research Communication. 351:
146-152.
Yoo OK, Back HI and Cha YS. (2008). Quality characteristics of
pudding added with bokbunja (Rubus coreanus Miquel) fruit
juice and bokbunia wine. Korean Journal of Food Culture.
23:616-620.
Yoon DH, Kim HO, Kim TY, Kim JW and Song KY. (1995).
The effect of ultraviolet B irradiation on the skin barrier
function in hairless mice. Korean Dermatological Association.
33:669-678.
Yang HM, Lim SS, Lee YS, Shin HK, Oh YS and Kim JK.
(2007). Comparison of the anti-inflammatory effects of the
extracts from Rubus coreanus and Rubus occidentalis. Korean
Journal of Food Science and Technology. 39:342-347.