UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE

MÉXICO

ESCUELA NACIONAL PREPARATORIA

NÚMERO 2

“ERASMO CASTELLANOS QUINTO”

TEMAS SELECTOS DE BIOLOGÍA

GRUPO 600C

PRACTICA DE LABORATORIO 2

CULTIVO DE MICROORGANISMOS

INTEGRANTES DEL EQUIPO:

AYALA BUTANDA CITLALLI ROXANA.

MERÁZ ACEVEDO ADRIÁN SEBASTIÁN.

RIVAS MEZQUITA LUISA ANDREA.

SÁNCHEZ GARCÍA KARLA EDITH.

URIBE MEJÍA MÓNICA PAMELA.

Planteamiento del problema

¿Qué efecto tienen los antibióticos, tanto los antibióticos naturales como los

artificiales frente a los microorganismos que encontramos en todos lados?

Introducción

En el siguiente trabajo se da una breve explicación de la historia y de los tipos

de medios de cultivo existentes que son de gran importancia para mantener,

separar, y poder seleccionar a los microorganismos para poder estudiarlos

detalladamente.

También se dará una explicación acerca de los antibióticos sintéticos y

naturales y de forma más específica de la miel que es un antibiótico natural y

de la penicilina que es un antibiótico sintético. Ya que en la práctica que se

llevará acabo se pondrán a prueba estos dos antibióticos sobre el medio de

cultivo en este caso el caldo de pollo para identificar cual es su efecto en los

microorganismos que se encuentran en él.

También a través del microscopio podremos observar éstos microorganismos

Y conocer un poco más sobre su estructura.

Finalmente viene implícito lo que es un antibiograma que es una prueba

microbiológica que se realiza para conocer la sensibilidad de una colonia

bacteriana ante el efecto de un antibiótico.

Medios de cultivo

Gran parte de la microbiología depende de la capacidad de cultivar y mantener

microorganismos en un laboratorio, y esto sólo es posible si se dispone de

medios de cultivos adecuados. Además los medios especiales son

imprescindibles para aislar e identificar los microorganismos, evaluar la

sensibilidad de antibióticos, analizar agua y alimentos… Un medio se utiliza

frecuentemente para seleccionar y cultivar microorganismos específicos o para

facilitar la identificación de una especie en particular. En estos casos, la función

de un medio estará también determinada por su composición. MEDIOS

SINTÉTICOS O DEFINIDOS.- Algunos microorganismos, particularmente los

autótrofos, pueden crecer en medios relativamente sencillos, que contienen

CO2 como fuente de carbono, nitratos o amonio como fuente de nitrógeno,

sulfatos, fosfatos, y diversos minerales . Esta clase de medios en que se

conocen todos los componentes se denomina medios definidos o medios

sintéticos. No todos los medios definidos son tan sencillos, sino que pueden

elaborarse a partir de docenas de componentes. Los medios definidos se

emplean ampliamente en investigación. MEDIOS COMPLEJOS Losa medios

que contienen algunos ingredientes se desconocen se denominan medios

complejos. Estos se necesitan porque a menudos se desconocen los

requerimientos nutricionales de un microorganismo en particular. Los medios

complejos contienen componentes como peptonas, extracto de carne y de

levadura. Se necesita un medio sólido para cultivar microorganismos en

superficie, se puede solidificar un medio líquido añadiendo agar o cartagenina

que son agentes solidificantes por que una vez que se funde en agua fría

hirviendo, puede enfriarse hasta una temperatura de 40 a 42°C sin

endurecerse, no fundirá de nuevo hasta que alcance una temperatura de 80 a

90°C. Otros tipos de agentes solidificantes son el gel de sílice utilizado para

cultivar bacterias autótrofas en medios sólidos en ausencia de sustancias

orgánicas. (Harley, J.P, et al, 1999)

Tipos de medios

Medios para fines generales.- Porque mantienen el crecimiento de muchos

microorganismos. Ej. Caldo y agar. (Harley, J.P, et al, 1999)

Medios enriquecidos.- La sangre y otros nutrientes especiales se pueden

incorporar a los medios para fines generales para favorecer el crecimiento de

heterótrofos existentes. Ej. Agar mas sangre (Harley, J.P, et al, 1999)

Medios selectivos.- Favorecen el crecimiento de microorganismos particulares.

Las sales biliares o colorantes favorecen el crecimiento de bacterias

gamnegativas, al inhibir el crecimiento de las grampositivas sin afectar a las

primeras. Las pasibilidades de selección son infinitas y existen docenas de

medios selectivos especiales disponibles. (Safont, N, 2004)

Medios diferenciales.- Son medios que diferencian entre grupos distintos de

bacterias e incluso permiten una identificación tentativa de los

microorganismos, según sus características biológicas. Ej. El agar sangre y el

agar MacConkey. (Harley, J.P, et al, 1999)

Aislamiento de cultivos puros.

En los hábitats naturales, los microorganismos crecen en poblaciones mixtas o

complejas que contienen varias especies. Esto representa un problema para el

microbiólogo porque no se puede estudiar adecuadamente un único tipo de

microorganismo en un medio mixto. Se ne4csita un cultivo puro, población de

células que procede de una única célula, para caracterizar una especie

individual. Los cultivos puros son tan importantes que el desarrollo de las

técnicas de cultivos puros por el bacteriólogo alemán Robert Koch trasformó

la microbiología. Existen varias formas de preparar cultivos puros. Las más

comunes son:

SIEMBRA EN PLACAS POR EXTENSIÓN: Si se extiende una mezcla de

células en una superficie de agar, de manera de que cada célula cree formando

una colonia independiente cada colonia representa un cultivo puro. La siembra

por extensión es una forma directa y fácil de conseguir este resultado. Se pasa

un volumen pequeño de una célula microbiana di8luida conteniendo entre 100

y 200 células, o menos, al centro de una placa de agar y se extiende

uniformemente sobre la superficie con una varilla doblada de vidrio estéril. Las

células dispersas desarrollan colonias aisladas. Este tipo de siembra puede

usarse para contar una población microbiana.

Las colonias puras se pueden obtener también mediante siembra de estrías.

Se pasa la mezcla microbiana a un extremo de la placa de agar con un asa de

inoculación o un hisopo y se extiende formando estrías sobre la superficie

siguiendo uno de los posibles patrones recomendados. En algunos puntos de

este proceso algunas células individuales se desprenden del asa al frotarla

sobre la superficie y desarrollan colonias separadas. En ambas técnicas un

buen aislamiento depende de la separación adecuada de las células

individuales. (Harley, J.P, et al, 1999)

SIEMBRA EN PROFUNDIDAD: Se emplea ampliamente con bacterias y

hongos puede generar también colonias aisladas. La muestra original se diluye

varias veces para reducir la población microbiana la suficiente con el fin de

obtener colonias separadas cuando se siembren. La mayoría de las bacterias y

hongos no se destruye con la exposición breve al agar calentado. Después de

endurecerse el agar cada célula se fija a un lugar y forma una colonia

individual. Las colonias que crecen sobre la superficie se pueden utilizar

también para inocular un medio fresco y preparar cultivos puros.

Las técnicas anteriores precisan de placas especiales de cultivo denominadas

placas de Petri. Las placas de Petri son muy fáciles de usar pueden aplicarse

para ahorrar espacio y constituyen unos de los materiales más comunes de los

laboratorios de microbiología.

Los métodos de siembra descritos anteriormente son incluso más eficaces para

producir cultivos puros cuando se emplean con medios selectivos o

diferenciales.

Los microorganismos que crecen en superficies sólidas tienden a formar

colonias con una morfología característica. Las colonias crecen normalmente

con mayor rapidez en los extremos donde la cantidad de recursos disponibles

es mayor. (Harley, J.P, et al, 1999)

Antibióticos

Se denomina antibiótico a cualquier antibiótico utilizado para eliminar o inhibir

el crecimiento de organismos infecciosos tanto en seres humanos como en

animales.

Los antibióticos son elaborados en su metabolismo propio por seres vivos:

plantas, animales, bacterias, hongos. Un antibiótico puede definirse como una

sustancia derivada de un organismo vivo, generalmente un microorganismo, o

una modificación química de la misma que inhibe la producción, el crecimiento

e incluso destruye otros microorganismos y células anormales.

En un principio el término antibiótico se utilizaba para referirse a los

compuestos orgánicos producidos por bacterias u hongos que resultaban

tóxicos para otros microorganismos. (Cruz, A, 2001).

El mecanismo de acción de los antibióticos fue conocido científicamente hasta

el Siglo XX. La primera observación de lo que hoy en día se denominaría

antibiótico fue realizada en el siglo XIX por el químico francés Louis Pasteur,

EL uso de los antibióticos se dio en 1928 con los trabajos de Fleming, Chain y

Florey al descubrir la penicilina. Una veintena de los antibióticos son extraídos

industrialmente, éstos son la penicilina, la tiratrasina, estreptomicina,

terramicina, etc. (Cruz, A, 2001).

¿Qué tipo de antibióticos existen?

Los antibióticos pueden clasificarse tomando en cuenta diferentes criterios:

• Según su mecanismo de acción, algunos antibióticos impiden la síntesis de la

pared celular de los microorganismos, otros alteran la membrana plasmática, y

la mayor parte de ellos inhiben la síntesis de ácidos nucleicos o proteínas.

• Según la estructura química se diferencian las penicilinas, cefalosporinas,

aminoglucósidos, tetraciclinas, sulfamidas u otros.

• Según su espectro de acción, es posible dividirlos en agentes de amplio

espectro, que actúan frente a multitud de bacterias, y agentes de espectro

restringido que solo actúan frente a algunos tipos de bacterias. (Cruz, A, 2001).

Usos y Abusos

El uso excesivo de los antibióticos sin previa autorización médica ha traído

como consecuencia la resistencia de los gérmenes patógenos, mejor conocida

como resistencia bacteriana, causando efectos secundarios como anemia,

alucinaciones, alteraciones gastrointestinales etc.

También la utilización de antibióticos antes de que aparezca la infección para

tratar prevenirla, ha agravado el problema de resistencias. (Cruz, A, 2001).

Actualmente en algunos países el uso de antibióticos es cada vez menor,

permitiendo la utilización de medios alternativos como lo es el naturismo.

Con el desarrollo de la bioquímica en los últimos años se ha descubierto que

las frutas y las hortalizas contienen innumerables sustancias con poder

curativo. Con lo que también se logra calmar el dolor e incluso ayudar ala

pronta recuperación del paciente. Éstos son verdaderos antibióticos naturales

que cumplen con la función nutritiva, preventiva, curativa, y depurativa en el

organismo ya que logran arrastrar la mayoría de desechos que se han quedado

atascados en el cuerpo por el uso inadecuado de antibióticos sintéticos. (Cruz,

A, 2001).

En increíble la cantidad de enfermedades que son tratadas específicamente

con antibióticos sintéticos como la penicilina, amoxicilina, v ancomicina, etc sin

embargo también estas pueden tratarse con antibióticos naturales, algunas

enfermedades son el acné, artritis, colitis, faringitis, neumonía, varicela, etc.

(Cruz, A, 2001).

Antibióticos naturales

La tierra produce a través de procesos naturales como el sol y la lluvia infinidad

de reinos vegetales que permiten la formación de sustancias que procuran

inmunidad frente a bacterias y virus nocivos.

Algunas plantas desarrollan flavonoides que protegen contra la destrucción

interna de proteínas, enzimas, tallos, hojas, de ciertas plantas. Hoy en día la

bioquímica y la biología molecular han descubierto que l brócoli contiene

sulforano el cual puede ayudar a prevenir el cáncer, que el ajo y la cebolla

tienen órganos sulfurados que ayudan a reducir el desarrollo de tumores. La

lista de sustancias presentes en los alimentos que pueden ayudar contra las

enfermedades es larga, los betacarotenos en las hortalizas y verduras

frondosas, de color anaranjado oscuro, los licopenos del tomate, la bromelina

de la piña, naranjita y nobiletina de los cítricos, toso pueden ayudar aprevenir el

cáncer. (Cruz, A, 2001).

Son numerosas las plantas que poseen un intenso poder antibiótico.

Crucíferas: En este grupo cabe citar la mostaza, el rábano, la cocleria .

Liliáceas: A esta familia pertenecen ajos, cebollas y puerros. Todos ellos

contienen ácido tiociánico-HSCN, cuya estructura química presenta complejos

compuestos azufrados con gran poder bactericida especiales, el berro.

Otras plantas de reconocida acción antibiótica frente a bacterias, virus y

hongos son:

Árbol del té.

Equinacéa.

Jengibre.

Orégano.

Semillas de pomelo (extracto).

Tomillo.

Menta

Tila

Algunos alimentosos con propiedades antibióticas:

Propóleo

Setas medicinales

Miel

(Safont, N, 2004)

La miel

La miel es un producto que ha utilizado el ser humano desde los albores de la

humanidad. De hecho, las pinturas rupestres de la Cueva de la Araña, en

Bicorp (Valencia), que datan de 10.000 años a.C, muestran como un hombre

está recolectando miel. Esto demuestra que ya los primeros pobladores la tierra

descubrieron los beneficios de este alimento.

Hipócrates, el padre de la medicina, alabó sus poderes terapéuticos y la utilizó

para curar diversas afecciones de la piel, úlceras y para aliviar el dolor en

general. Los egipcios, por su parte, la utilizaron para tratar las cataratas, llagas,

cortes o quemaduras.

Procede del néctar de las flores. Gracias a ello, la miel es rica en vitaminas

como la B6, tiamina, niacina, riboflavina y ácido pantoténico. Asimismo,

contiene minerales esenciales como el calcio, cobre, hierro, magnesio,

manganeso, fósforo, potasio, sodio y cinc.

Las propiedades antibacterianas de la miel proceden principalmente de su

contenido en la enzima glucosa oxidasa. Ésta enzima produce peróxido de

hidrógeno (agua oxigenada).

Sus propiedades nutritivas hacen de este alimento una poderosa arma contra

los resfriados, los dolores de garganta, bronquitis, sinusitis, asma y algunas

afecciones de la piel. De hecho, recientes estudios demuestran que la miel

pura contiene un efectivo agente antimicrobiano, muy útil para el tratamiento de

las quemaduras menores, las heridas superficiales y como terapia adicional de

los dolores de garganta y otras afecciones bacterianas.

Puede neutralizar la bacteria Helicobacter pylori causante de la mayoría de

úlceras del estómago responsables de la acidez y dolor estomacal.

Su elevado contenido de azúcar, que limita la cantidad de agua capaz de

permitir que los microorganismos se desarrollen, su acidez, su escaso pH y su

pobre contenido en proteínas que privan del nitrógeno que necesitan las

bacterias para crecer, hacen de la miel una barrera contra las infecciones.

(Safont, N, 2004)

Un reciente estudio llevado a cabo por un grupo de investigadores de

Ámsterdam, dirigido por Sebastián A.J. Zaat y publicado en la revista FASEB

Journal muestra que la miel cuenta con ingredientes bactericidas naturales .En

concreto, el estudio describe en su artículo que la miel acumula pequeñas

partes de agua oxigenada y de metilglioxal, sustancias que poseen toxicidad

sobre las bacterias. Además, en su composición, se pudo identificar un nuevo

péptido, llamado defensina-1, con propiedades antimicrobianas. Los péptidos

antimicrobianos son pequeñas moléculas presentes en plantas y animales que

actúan en mecanismos de defensa, eliminando a patógenos como bacterias,

virus y parásitos, además de tener una función moduladora de la respuesta

inmunitaria innata o natural.

El estudio demostró que la defensina-1 de la miel es capaz de matar

Staphylococcus aureus resistente a meticilina, Escherichia coli resistente a

beta-lactámicos, Pseudomonas aeruginosa resistente a ciprofloxacina y

Enterococcus faecium resistente a vancomicina, entre otros. ( J. Zaat. S,

2010)

Penicilina

En 1928 Alexander Fleming noto que la

contaminación al de un placa de cultivo

bacteriano con el hongo Penicillium

notatum lisaba las bacterias cercanas.

Esto fue consecuencia de la presencia

de penicilina, un antibiótico secretado

por un hongo. No obstante, las dificultades para aislar y caracterizar a la

penicilina, debido a su inestabilidad, hicieron que pasaran más de 15 años para

que esta se encontrara disponible para el uso clínico de rutina. (Voet D. 2004)

La penicilina se une de manera específica a las enzimas que funcionan para

unirse en forma cruzada con bandas de peptidoglucano de las paredes de la

células bacterianas e inactiva las enzimas. Dado que la expansión de la pared

celular también requiere la acción de enzimas que degradan las paredes

celulares, la exposición de bacterias en proliferación a la penicilina, enduce a

su lisis: esto es, la penicilina interrumpe el equilibrio normal entre la biosíntesis

y la degradación de la pared celular. Sin embargo dado que ninguna enzima

humana se une a la penicilina, tiene baja toxicidad para el hombre, lo que

contribuye una necesidad terapéutica. (Voet D. 2004)

La mayoría de las bacterias resistentes a la penicilina secretan penisilinasa que

inactiva a la penicilina al divar el enlace amida de su anillo betalactámico. Sin

embargo la observación de que la actividad de penicilinasa varia con la

naturaleza del grupo R de la penicilina condujo a la semisíntesis de penicilinas,

como la ampicilina, que son eficaces en la clínica contra cepas de bacterias

resistentes a la penicilina. (Voet D. 2004)

Penicilina. Tomada de: Voet D. 2004

Antibiograma. Tomada de Tortora,G. 2007.

El antibiograma

El primer objetivo del antibiograma es el de medir la sensibilidad de una cepa

bacteriana que se sospecha es la responsable de una infección a uno o varios

antibióticos. En efecto, la sensibilidad in vitro es uno de los requisitos previos

para la eficacia in vivo de un tratamiento antibiótico. El antibiograma sirve, en

primer lugar, para orientar las decisiones terapéuticas individuales.

El segundo objetivo del antibiograma es el de seguir la evolución de las

resistencias bacterianas. Gracias a este seguimiento epidemiológico, a escala

de un servicio, un centro de atención médica, una región o un país, es como

puede adaptarse la antibioterapia empírica, revisarse regularmente los

espectros clínicos de los antibióticos y adoptarse ciertas decisiones sanitarias,

como el establecimiento de programas de prevención en los hospitales. Hay

pues un doble interés: Terapéutico y epidemiológico. (Tortora,G. 2007).

Realización de un antibiograma

Siempre que una toma bacteriológica de finalidad dìagnóstica haya permitido el

aislamiento de una bacteria considerada responsable de la infección.

(Tortora,G. 2007).

Establecer esta responsabilidad exige una colaboración entre el bacteriólogo y

el clínico. En efecto, en ciertas circunstancias, el microbiólogo no podrá

determinar con certeza que el aislamiento de una bacteria exige un

antibiograma, sin los datos clínicos que le aporta el médico. Por ejemplo, una

bacteria no patógena puede ser responsable de la infección de un enfermo

inmunodeprimido o en un lugar determinado del organismo. La presencia de

signos clínicos puede ser también determinante para la realización de un

antibiograma (por ejemplo: la infección urinaria con un número reducido de

gérmenes). (Tortora,G. 2007).

Sensibilidad bacteriana a los antibióticos

La determinación de la Concentración Inhibidora Mínima (CIM) es la base de la

medida de la sensibìlidad de una bacteria a un determinado antibiótico. La CIM

se define como la menor concentración de una gama de diluciones de

antibiótico que provoca una inhibición de cualquier crecimiento bacteriano

visible. Es el valor fundamental de referencia que permite establecer una

escala de actividad del antibiótico frente a diferentes especies bacterianas.

(Tortora,G. 2007).

Hay diferentes técnicas de laboratorio que permiten medir o calcular de rutina,

y de manera semicuantitativa, las CIM (métodos manuales y métodos

automatizados o semiautomatizados). Estos diferentes métodos de rutina

permiten categorizar una cierta cepa bacteriana en función de su sensibilidad

frente al antibiótico probado. Esta cepa se denomina Sensible (S), Intermedia

(I) o Resistente (R) al antibiótìco. (Tortora,G. 2007).

Para un determinado antibiótico, una cepa bacteriana es, según la NCCLS:

Sensible, si existe una buena probabilidad de éxito

terapéutico en el caso de un tratamiento a la dosis habitual.

(Tortora,G. 2007).

Resistente, si la probabilidad de éxito terapéutico es nula o

muy reducida. No es de esperar ningún efecto terapéutico

sea cual fuere el tipo de tratamiento. (Tortora,G. 2007).

Intermedia, cuando el éxito terapéutico es imprevisible. Se

puede conseguir efecto terapéutico en ciertas condiciones

(fuertes concentraciones locales o aumento de la

posología). (Tortora,G. 2007).

Ciertas moléculas son representativas de un grupo de antibióticos. Los

resultados (S, I, R) obtenidos con estas moléculas pueden ser ampliados a los

antibióticos del grupo, que en ese caso no es necesario ensayar (Ejemplo:

Equivalencia entre la cefalotina que se ensaya y las restantes cefalosporinas

de 1ª generación que no es necesario probar, ya que el resultado puede

deducirse del obtenido en la cefalotina).Este hecho permite ensayar un número

reducido de antibióticos, sin limitar por ello las posibilidades terapéuticas.

(Tortora,G. 2007).

Interpretación de un Antibiograma

Ciertos mecanismos de resistencia se expresan débilmente in vitro, cuando se

inscriben en el DNA bacteriano. Su expresión en el organismo, en donde las

condiciones en cuanto a medios son diferentes, expondría al riesgo de fracaso

terapéutico. Para evitar esto, el antibiograma debe ser interpretado de manera

global a fin de descubrir, a través de la comparación de las respuestas para

cada antibiótico, un mecanismo de resistencia incluso débilmente expresado.

Así, gracias a la interpretación, una cepa que aparece como falsamente

sensible será categorizada como I o R (Ejemplo: Una cepa de Klebsiella

pneumoniae productora de BLSE puede aparecer sensible in vitro a las

cefalosporìnas de 3" generación. El resultado de Sensible debe ser corregido a

Intermedio o Resistente, ya que la utilización de estos antibióticos correría el

riesgo de provocar un fracaso terapéutico). (Tortora,G. 2007).

Justificación:

Se eligió trabajar con los antibióticos: miel (natural) y penicilina (artificial),

debido a la fácil obtención de estos, ya que los podemos comprar en una tienda

o en una farmacia, respectivamente. Además son fáciles de diluir en agua para

poder probarlos en los medios de cultivo, su información esta a mayor alcance

de nosotros y como ya dijimos son de uso común.

Hipótesis:

Nosotros consideramos que tanto los antibióticos naturales, como los

antibióticos sintéticos tiene un nivel de fuerza muy similar para combatir a los

microorganismos, pero cabe destacar que los naturales ofrecen una mayor

ventaja al no provocar tantos efectos secundarios como a veces llegan a

hacerlo los sintéticos.

Objetivos: Aprender a preparar un medio de cultivo, observar con el

microscopio diferentes microorganismos y conocer el efecto de los antibióticos

naturales y sintéticos en éstos.

Metodología.

Los materiales, sustancias y equipo que utilizaremos en la práctica serán los

siguientes:

Las sustancias a utilizar serán: Carragenina 50g. Gel antibacterial y alcohol.

Caldo de pollo 300mL. Miel natural. Penicilina y Agua.

Los materiales y equipos a utilizar serán: Perforadora. Papel filtro. Autoclave.

Horno de medios. Asa de siembra. Cajas de petri esterilizadas en una bolsa

de plástico. Algodón, gasas y masking. Parrilla eléctrica. Vaso de precipitado.

Matraz Helen Meyer. Balanza. Agitador. Reloj de vidrio. Bata de laboratorio y

cubre bocas. Lámpara de alcohol. Microscopio. Campana de flujo laminal.

Procedimiento:

Lo primero que tendremos que realizar para la práctica serán los medios de

cultivo en donde crecerán los microorganismos para que después partamos de

ahí y entonces podamos comprobar la eficacia de los antibióticos naturales y

artificiales

1 Estos se harán primeramente midiendo las cantidades de caldo de pollo

que tendrá que llevar metiendo esta en el matraz Helenmeyer, se calcularan

300mL con ayuda del vaso de precipitado. Ya después estando esto se

llenara de agua para que quede la disolución; también se medirán 90g de

carragenina en la balanza y aun no se le agregaran a la solución.

2 Ya teniendo medido el caldo y la carragenina, se proseguirá a calentar

este en la parrilla eléctrica y mientras comienza a hervir, se le va agregando la

carragenina poco a poco y moviendo la mezcla con el agitador, para que no

queden grumos.

Materiales utilizados en el paso 1.

3 Ya disuelta la cantidad de carragenina medida en el caldo y que estos se vean uniformemente distribuidos, se tapara el matraz con las gasas, haciendo un tapón a la medida y luego sellando con el maskin.

4 Esto se rotulara y se llevara a la autoclave en donde se esterilizara.

5 Una vez ya estando esterilizado el caldo, tendremos que entrar a la

campana de flujo laminal en donde desinfectaremos nuestras cajas petri con

alcohol y entonces poder empezar el vaciado del medio.

Sustancia obtenida, después del paso 2.

Matraz con el caldo y tapado con maskin y gasas.

Autoclave utilizada en el experimento, perteneciente al laboratorio.

6 Ya vaciado en todas las cajas estas se rotulara y juntaran sin salir de la

campana. Ya terminado esto se meterán al refrigerador.

7 Una vez terminados los medios se elegirán 4 cajas petri que serán

abiertas en cuatro lugares diferentes, como el trasporte o debajo de la cama,

esto con el fin de que en ella comiencen a poblar microorganismos. Para esto

se abrirá la caja más o menos 30 min. Para que se poblé de

microorganismos, entonces esta se vuelve a sellar y se meterá en el horno de

cultivos donde se dejara unos 5 días.

8 Entonces ya pasado este tiempo, se van a disolver previamente los

antibióticos, que en este caso el natural es la miel, se disolverá con agua, y

penicilina también disuelta.

Vaciado del caldo en las cajas petri dentro de la campana de flujo laminal.

Cajas petri con caldo adentro (izquierda. Sellado de cajas petri con masking (derecha)

9 Con una perforadora se agujerara el papel filtro, creando círculos que

nos ayudaran en la elaboración de nuestro antibiograma.

10 Se sacaran los medios del horno y con ayuda del microscopio

micrométrico se observaran las colonias y se elegirá un cultivo.

11 A las cajas no contaminadas se les colocaran los circulitos resultantes

de la perforación del papel filtro, remojados en los antibióticos. Por cada caja

petri se pondrán 6 circulitos siendo estos remojados con los antibióticos y

agua (esto es 2 serán remojados en miel, 2 con penicilina y 2 con agua,

siendo estos últimos los testigos.) señalados al reverso de la caja con plumón

indeleble.

Preparación de antibiótico natural (miel)

Caja petri con crecimiento de bacterias y hongos.

Caja petri con señalización de los antibióticos

12 Una vez puestos los circulitos remojados, con el asa de siembra

(calentada la punta con la lámpara de alcohol) se tomará parte de una

colonia del cultivo previamente seleccionado y se pasara esta por toda la caja

petri, pasando por encima de los circulitos. Esto se repetirá en todas las cajas

no infectadas.

13 Hecho esto se meterán de nuevo al horno, por otros 5 días para observar el efecto de los antibióticos y así comprobar la hipótesis.

RESULTADOS

Realizamos una tabla de los resultados obtenidos.

Muestra Antibiótico Natural.(miel)1 2

Antibiótico Artificial.(penicilina)3 4

Testigo.(agua)5 6

1 A A A A B B2 A A A B B A3 A A B B B A4 B A B B B A

Simbología y porcentaje de contaminación en los círculos.

A. Contaminación masiva. (80% al 100%).

B. Contaminación regular. (50% al 75%).

C. Contaminación menor. (0% al 45%).

Muestra Numero 1

En este antibiograma se puede observar que en el antibiótico natural y artificial

se dio el crecimiento microbiano en gran cantidad (masivo) y en el testigo se

dio de manera mas moderada el crecimiento microbiano.

Vista desde arriba Vista desde abajo

Elaboración de antibiograma.

Muestra Numero 2

En este antibiograma se puede observar el crecimiento masivo de

microorganismos en los tres lotes, en el natural, artificial y el testigo.

Vista desde arriba Vista desde abajo

Muestra Numero 3

En este antibiograma se puede observar el crecimiento masivo de

microorganismos en el lote con antibiótico natural y en el testigo, y en el

antibiótico artificial se dio un crecimiento microbiano moderado.

Vista desde arriba Vista desde abajo

Antibiograma 1Antibiograma 1

Antibiograma 2 Antibiograma 2

Muestra Numero 4

En este antibiograma podemos observar que el crecimiento masivo de

microorganismos se dio en el lote de antibiótico natural y en el testigo, y en el

lote con antibiótico artificial se dio un crecimiento moderado.

Vista desde arriba Vista desde abajo

Discusión

Tras haber realizado la práctica y haber visto los resultados que obtuvimos, nos

hemos dado cuanta que tal vez hemos realizado un paso de manera errónea

puesto que la hipótesis no fue comprobada, y los resultados fueron negativos,

Antibiograma 3 Antibiograma 3

Antibiograma 4 Antibiograma 3

aunque logramos aislar de manera correcta nuestra bacteria. Los resultados no

apoyan a la hipótesis formulada con base en las referencias e investigaciones

que realizamos. Otra idea del porque del fallo de los antibióticos frente al

crecimiento microbiano, pudo ser el que dejamos mucho tiempo a las cajas

petri con el crecimiento de microorganismos. Creemos que probablemente los

antibióticos funcionaron en un principio del cultivo, pero con el paso del tiempo

se anulo su efectividad frente a los microorganismos

Conclusión

Como se aprecia en los resultados, nuestra hipótesis era errónea pues se

presentaron mayor cantidad de bacterias en la parte del antibiótico natural

(miel) que en el artificial (penicilina). Aunque nuestros resultados no fueron los

que originalmente se esperaban, la realización de la práctica, así como la

culminación de esta fue satisfactoria y nos hizo darnos cuenta de la cantidad de

microorganismos que se encuentran flotando a nuestro alrededor ya sea en

casa o en el trayecto de la casa a la escuela y viceversa, entre otros lugares.

Bibliografía

Harley, J.P, Klein D.A y Prescott J.M (1999) Microbiología. 4° Edición. México:

McGraw-Hill, pp 1-16.

Cruz, A. (2001) Antibióticos Naturales. México: Selector, pp 15-29.

Safont, N. (2004) La miel, antibiótico natural. Recuperado el 10 de noviembre

del 2011 en

<http://www.dmedicina.com/vida-sana/nutricion/la-miel-antibiotico-natural>

J. Zaat. S. (2010) How honey kills bacteria. The FASEB Journal. Recuperado el 10 de noviembre del 2011 en

<http://www.fasebj.org/content/24/7/2576.abstract>

Voet D., Voet J.G.(2004). Bioquímica 3ª edición: México: medica

panamericana pp 389

Tortora,G. Funke,B y Case,L. (2007)Introducción a la microbiología, México:

Medica Panamericana pp 229-231