Cellules Tumorales Circulantes (CTC) et Cancer du Sein G. Barrière, A. Riouallon, J. Renaudie, M....
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Cellules Tumorales Circulantes
(CTC)
et Cancer du Sein
G. Barrière, A. Riouallon, J. Renaudie, M. Tartary, M. Rigaud
ASTRALAB
Décrites en 1869 par T.R. Ashworth
A case of cancer in which cells similar to those in the tumour
were seen in the blood after death
Aust Med J , vol 14,146-149,1869
Définition :
Cellules tumorales détectées dans le sang circulant
Cellules Tumorales Circulantes CTC
ASTRALAB
Définition:
Ce sont les cellules disséminées dans les
organes et en particulier dans la moelle osseuse
Cellules Tumorales Disséminéesou DTC
ASTRALAB
Nature des CTC
Il existe des sous-populations de CTC
Cellules épithéliales
Cellules mésenchymateuses
ASTRALAB
Jean Paul Thiery, Hervé Acloque, Ruby Y.J. Huang, M. Angela NietoCell, November 2009, Vol 139, Issue 5, p871
EMT Processus Physiologique et Pathologique
ASTRALAB
Piyush B Gupta, Christine L Chaffer & Robert A WeinbergNature Medicine, 2009, vol 15, p1010
Cellule Cancéreuse Souche (CSC) :Transition Epithéliale Mésenchymateuse
ASTRALAB
Masaaki Iwatsuki et alCancer Science, February 2010, Vol 101, Issue 2, p293
Transition Epithéliale Mésenchymateuse
ASTRALAB
Caractéristiques
des Cellules Cancéreuses Souches
(CSC)
Cellules résistantes :
- aux chimiothérapies classiques
- à la radiothérapie
Gupta B. et al, Cell ,138, 4, 645-659, 2009
Chimiothérapie conduit à un enrichissement en CSC
Levina et al, Plos One,3, p3077, 2008
ASTRALAB
Hartmut BeugCell, August 2009, Vol 138, Issue 4, p 623
CSC
Résistance Thérapeutique
Salinomycin targets breast cancer stem cells
ASTRALAB
Caractéristiques des CSC
Sur 16000 composés essayés pour déterminer de
nouvelles thérapeutiques,4 composés présentent
une sélectivité de toxicité pour les CSC: Etoposide Salinomycine Abamectine Negericine Seule l’Etoposide, inhibiteur de la topoisomérase II
est utilisée actuellement
Gupta B et al, Aôut 2009 ASTRALAB
Méthodes de détection des CTC
Système « Cell Search TM system » :
Immunofluorescence et
cytométrie
Système AdnaTest Breast Cancer :
Système immunomagnétique
IMS
Système Métagenex :
Isolement des cellules par
filtration
Système Epispot :
Empreintes protéiques
ASTRALAB
Billes couplées aux AC
SéparationLyse
cellulaireBilles couplées
aux AC
SéparationLyse
cellulaire
Billes couplées aux AC
SéparationLyse
cellulaireElimination des billes
Billes couplées aux AC
SéparationLyse
cellulaireBilles couplées
aux AC
SéparationLyse
cellulaire
Billes couplées aux AC
SéparationLyse
cellulaireElimination des billes
Cellules du sang
Cellules tumorales
Incubation avec les billes couplées aux AC
Séparation des complexe cellules–billes
de la phase liquide par un champ magnétique
Lyse cellulaireElimination des billes
1- sélection des CTC - EpCam, MUC1a, Muc1b(Cancer associated glycans)
Méthode AdnaGen
ASTRALAB
2- Extraction des ARNm
en utilisant des oligo(dT) couplés à des billes magnétiques
Transcription inverse
3- Analyse de l’expression des marqueurs spécifiques par PCR
multiplexe
Her2 neu
GA733-2
Muc 1
ALDH1
Twist
Akt2
PI3Kase
ER et PR
CSC
ASTRALAB
CTC
Deux études en cours
1. Primo diagnostic du cancer du sein400 patients
2. Cancer du sein métastatique120 patients
ASTRALAB
A. Valeur pronostic des CTC
B. Corrélation avec le ganglion sentinelle
C. Critères de classification
D. Orientation thérapeutique
1. Primo diagnostic du cancer du sein
ASTRALAB
A. Suivi thérapeutique
B. Evaluation précoce de l’efficacité des traitements
C. Thérapeutique individualisée
D. Utilisation pour les essais cliniques de nouvelles
thérapeutiques
2. Cancer du sein métastatique
ASTRALAB
NégatifPositif
Visualisation des résultats sur Agilent (Electrophorèse capillaire)
• Positivité > 0,15 ng/µL
Muc1
Résultats - + - + - -- - - Résultats - + - - - +- -
GA733-2Muc1Her2
-ASTRALAB
Cancers du sein : primo-diagnostic
Service des docteurs Renaudie et Riouallon
Arnaud
Prélèvement de sang (5mL)
avant opération (CTCS1)
15 jours à 3 semaines après opération (CTCS2)
Accord CPP et Consentement éclairé
Résultats étudiés à la fin de l’étude en regard de
l’observation clinique
Résultats partiels (150)
ASTRALAB
Répartition des cancers du sein
Type de tumeur Canalaire infiltrant 119Autres 24ND 7
Age moyen 60 ans
Cancers du sein (n) 150
ASTRALAB
Grade Scarff Bloom Richarson SBR1 15SBR2 88SBR3 34ND 13
Présence de ganglions N+ 40 cas
Statut hormonal ER et PR positifs 110 cas
ClassificationTNM TNM I 50 casTNM IIA 52 casTNM IIB 18 casTNM IIIA 9 casTNM IIIB 1 casTNM IV 1 cas
Statut Her2-neu Positifs 14 cas
ASTRALAB
Statut Triple négatif 16 cas
Identification des CTC dans le sang
ASTRALAB
Avant chirurgie
Après chirurgie
ASTRALAB
19 cas positifs /150 étudiés
Age SBR T N M Stade Résultat CTCS1
47 1 2 0 0 IIA Muc1 0,15 + GA 0,17
64 2 1 0 0 I GA 0,18
55 3 3 0 0 IIB Her2 1,92 + Muc1 2,66 + GA 1,23
76 2 2 2 0 III A Muc1 0,33
52 1 1 0 0 I GA 0,21
47 1 2 0 0 IIA Her 2 1,42 + Muc1 1,67 + GA 0,85
75 2 2 0 0 IIA GA 0,17
67 2 1 0 0 I Muc1 0,24
72 2 2 1 0 IIB Muc1 0,18
64 2 1 0 0 I GA 0,22
68 2 1 0 0 I Her2 0,19
46 3 2 0 1 IV GA 0,16
73 3 2 0 0 IIA Her2 0,39 + Muc1 0,91 + GA 0,26
68 1 1 1 0 I Muc1 0,23
60 ? ? ? ? ? Muc1 0,17
68 2 2 1 0 IIB Her2 0,15 GA 3, 3
74 2 1 0 0 I Her2 0,25
81 3 4b 0 0 IIIB Her2 0,19
59 3 2 0 0 IIA GA 0,19
CTCS1
ASTRALAB
12 cas positifs /128 étudiés
Age SBR T N M Stade Résultat CTCS2
72 2 2 0 0 IIA Her2 0,18 + Muc1 0,39
64 2 1 0 0 I Muc1 0,25
76 2 2 2 0 III A Muc1 0,33
52 1 1 0 0 I Muc1 0,36 + GA 0,16
49 2 2 0 0 IIA Muc1 0,21
47 1 2 0 0 IIA Muc1 0,21
62 1 1 0 0 I Muc1 0,17
61 1 1 0 0 I Her2 0,17
46 3 2 0 1 IV Muc1 0,19
68 2 2 1 0 IIB GA 2,26
45 2 2 1 0 IIB 0,15 Muc1
50 2 2 0 0 IIA 0,17 Muc1
6 cas positifs avant et après chirurgie6 cas positifs après chirurgie
CTCS2
• Patientes ayant des CTC avant chirurgie : 19
• Patientes ayant des CTC avant et après chirurgie : 6
• Patientes n’ayant des CTC qu’après chirurgie : 6
CTC après chirurgie :
Existence d’un foyer émetteur de cellules tumorales
(Moelle osseuse, micrométastases , organe ou ganglions lymphatiques)
Importance chez ces patientes d’assurer un suivi
des CTC (leur persistance ou leur augmentation doit amener à des
explorations complémentaires)
ASTRALAB
Her2 neu Tumeur Her2 neu CTC
• 2 Positives 2 Positives
• 1 Faiblement Positive 1 Positive
• 6 Négatives discordance 6 Positives
• 3 Positives discordance 3 Négatives
Pestrin et al 2009 : Etude sur 66 cancers avancés du sein
29% des patients avec des tumeurs Her2 négatives ont des CTC Her2 positives
42% patients avec des tumeurs Her2 positives ont des CTC Her2 négatives
Tewes et al 2009 : Etude sur 42 cancers métastatiques du sein
29% des patients avec des tumeurs Her2 négatives ont des CTC Her2 positives
Statut Her2 neu : CTC versus Tumeur
ASTRALAB
Conclusion
Résultats partiels (150)
• Détection et analyse des CTC dans le sang par l’intermédiaire
d’un profil moléculaire
• Projet 400 patientes
• Statistiques établies après inclusion des 400 patientes
• Etude finalisée après estimation de l’évolution de la maladie
avec ou sans rechute
• Valeur pronostique, choix des thérapeutiques adaptées et
individualisées après chirurgieASTRALAB
Etude Cancer du Sein Métastatique : Métastases hépatiques
ASTRALAB
Muc 1 0.34/ GA 1.76
C+ CTC
C+ EMT
GA
Muc
PI3Kase
Muc 1 0.11/ GA 0.35
PI3Kase 0.15
Cellule mésenchymateuse
Cellule cancéreuse apoptotiqueCellule cancéreuse épithéliale
15/12/09
14/01/10
11/02/10
15/03/10
N
N
GA 1.76
Muc 0.34
TA
XO
L - A
VA
ST
IN
ASTRALAB
Nous remercions :
L’URCAM du Limousin et le Laboratoire Astralab
qui supportent financièrement le développement de
ces programmes de recherche en oncologie
Les docteurs Alain Riouallon,Joel Renaudie,
Robert Arnaud, Bernard Leduc et l’association 3C
pour leur collaboration compétente
ASTRALAB