FACULTAD DE ZOOTECNIA

DEPARTAMENTO ACADEMICO DE CIENCIA ANIMAL COLORACIONES MICROSCOPICAS

CURSO : BIOLOGIA GENERAL

PROFESORA : Blgo. CHUQUILIN BUSTAMANTE, Edilberto ALUMNOS : ALANIA GARCIA, Mishella ALDAVA PARDAVE, uriel AQUINO VARA, Roger A. AREVALO DIAZ, Diana del C. AREVALO GARCIA, Max. ASCENCIO MALPARTIDA, Yerson. BALDEON VALLES, Antonio. BARRIOS SANTOS, Karen

BUSTILLOS BENANCIO, Romer A. CACHIQUE PUJAY, Alba CANCHANYA LOAYZA, Carlos

SEMESTRE : 2006 – I

GRUPO : M1A

TINGO MARIA – PERU 2006. INTRODUCCION

Todas las actividades de la célula, tanto a nivel molecular como a nivel

superior están controladas y determinadas directa o indirectamente por una sola clase de

substancias (ADN). Estas moléculas maestras son, por naturaleza, las responsables de la

transferencia e información de una generación de células a otra (Herencia).

El tamaño de las células es muy variable algunas son grandes otras pequeñas, el color

que poseen y el contraste muchas veces impiden observarlas bien por el microscopio

óptico por lo cual el medio más simple de aumentar su contraste es utilizando colorantes

tiñendo así su morfología, para lo cual se emplean dos métodos:

Preparados en fresco: para observar células vivas. En este método no se utiliza ningún

colorante. Las células que se observan se encuentran en su propio medio u otro similar y

el índice de refracción de estas es muy similar al medio que lo rodea, al no existir un

contraste suficiente que los haga claramente visibles.

Preparados en seco: para observar células muertas y teñidas. Para la correcta

observación del material celular, mediante este método, requiere una serie de pasos

previos como extensión, fijación y tinción de este material. Este método permite

observar y diferenciar claramente tanto varios tipos morfológicos de células y los

siguientes objetivos son:

- Observar correctamente un preparado en fresco y en seco.

- Conocer métodos de observación de las células y técnicas de coloración más comunes.

- Reconocer los microorganismos existentes en el agua estancada

- Conocer las distintas formas y tipos de células que componen en los tejidos animales

II. REVISION DE LITERATURA

2.1. CELULA

La célula es la unidad más pequeña de la materia viva, capaz de llevar a cabo

todas las actividades necesarias para el mantenimiento de una vida. Tiene todos los

componentes físicos y químicos necesario para su propio mantenimiento, crecimiento y

división, cuando cuentan con los nutrientes necesarios y un medio adecuado. Ningún

componente celular es capaz de sobrevivir fuera de la célula. (VILLE, 1992).

2.1.1. Formas celulares

La forma de una célula se relaciona con la función y que está realiza, algunas células

como la ameba y los leucocitos pueden hacer variar su forma durante su trayectoria, los

espermatozoides tienen una cola larga, en forma de látigo que ayuda en la locomoción,

y las células nerviosas poseen extremos delgados y largos que les permiten transmitir

mensajes a través de grandes distancias, otras células como las epiteliales asumen una

forma casi rectangular y se unen a otras como si fuesen ladrillos, hasta formar

estructuras laminadas, célula circulares, etc. (VILLE, 1992).

Los organismos pueden clasificarse en dos grupos fundamentalmente diferentes, según

la estructura y complejidad de sus células.

2.2. Células procariotas

Son aquellos que carecen de núcleo y generalmente son más pequeñas que los

eucarióticas, el ADN de las células procarióticas esta confinado a una o más regiones

nucleares, que a veces se le denominan nucleoides, los nucleoides no están limitados

por una membrana independiente

2.3. Células eucariotas

Son aquellos que contienen una estructura llamado núcleo, que se encuentran limitado

por una membrana nuclear y varios organelos membranosos complejos, con las

mitocondrias.

2.3.1. Estructura celular de las células eucariota.

Estructura celular Función Célula vegetal Célula animal

Membrana celular

Contiene al citoplasma, regula el paso de materiales hacia adentro y fuera de la célula, ayuda a mantener la forma celular, comunica a la Célula con otras.

Presente Presente

Pared celular

Protección contra los agentes mecanismos, evita la dilatación excesiva provocada por la presión interna del citoplasma.

Presente: Contiene celulosa

Ausente

LisosomasContiene enzimas que degradan material ingerido, las secreciones y desperdicios celulares

Generalmente ausente

Suelen estar presentes

Ribosomas Síntesis de polipéptidos Presente Presente

Aparato de GolgiModifica, empaca y distribuye proteínas a vacuolas y otras organelos

Presente Presente

Vacuolas Transporta y almacena material ingerido, desperdicios y agua.

Generalmente presente

Pequeñas o ausente

Retículo endoplasma tico

Sitio de síntesis de lípidos y de proteínas de membrana Presente Presente

Plastidios

La clorofila captura energía luminosa, se producen ATP y otros compuestos energéticos que después se utilizan en la conversión de CO en glucosa

Presente Presente

Cromosomas

Contiene genes (unidades de información hereditaria que gobiernan la estructura y actividad celular)

Formados por ADN y

proteínas lineales

Formados por ADN y

proteínas lineales

Fuente: (ville, 1992)

2.4. TEJIDO

Es un conjunto de células especializadas de forma similar entre si, y de sustancia

intercelular, que se asocian para realizar una función especifica o un grupo de funciones

(VILLE, 1992).

2.5. Tejido animal

Un tejido esta formado por varias células, estrechamente asociadas entre si, y se

clasificas en:

2.5.1. Tejido epitelial

Está formado por células acopladas, formando una capa o láminas continúas, que

cubren la superficie o algunas cavidades del cuerpo. Otra superficie de esta capa se une

al tejido subyacente, mediante una membrana basal, compuesta por fibras muy

delgadas, de un material formando por polisacáridos producidos por las células

epiteliales. Además de la capa externa de la piel, las membranas de los sistemas

digestivas y respiratorias, y tubulos renales, son ejemplo de tejido epitelial.

Las funciones de los tejidos epiteliales son de protección, absorción, secreción y

sensación (VILLE, 1992).

Características

- Sus células están íntimamente unidas por uniones celulares.

- Sus células adoptan formas geométricas.

- Dichas células se apoyan sobre la membrana basal.

- Presentan abundantes terminaciones nerviosas.

- El tiempo de vida de las células epiteliales es limitada de modo que hay procesos

de renovación celular constante.

2.5.2. Tejido conectivo

La principal función de los tejidos conectivos es la unión de otras tejidos, pues también

dan soporte al cuerpo, sus estructuras y protegen a los órganos subyacentes (VILLE,

1992).

2.5.3. Tejido cartilaginoso.

El esqueleto de soporte de los vertebrados consta de cartílagos. El cartílago esta

presente en el esqueleto de las fases embrionarias de todos los vertebrados, aunque en

adulto es reemplazado por huesos (excepto en el caso de tiburones y rayas).

La estructura de sostén del pabellón de la oreja, los anillos de soporte de las paredes de

vías respiratorias y la punta de la nariz son ejemplo claros de estructura cartilaginosa en

el ser humano (VILLE, 1992).

2.5.4. Tejido muscular estriado

Son tejidos con células especializadas en la contracción, sus células se denomina fibras

musculares o miocitos. Este tejido es responsable del movimiento del cuerpo.

Las fibras del músculo estriado pueden contraerse rápidamente pero no pueden

permanecer contraídas. Una fibra de músculo estriado debe relajarse y descansar

momentáneamente antes contraerse de nuevo las fibras del músculo estriado por lo

general se encuentra bajo control voluntario (VILLE, 1992).

2.5.5. Tejido nervioso

El tejido nervioso está compuesto por neuronas, células especializadas en la conducción

de impulsos electroquímicos, y células líales, que dan soporte y nutrición a las neuronas.

Algunas neuronas reciben señales del medio interno y externo y la transmisión a la

medula espinal y al cerebro, otras prolongaciones de las células nerviosas procesos y

almacenan información. Esta es la base celular en los complejos funciones de

conciencia, memoria, pensamiento y movimiento dirigido (VILLE, 1992).

El tamaño y forma de las neuronas es variable, pero generalmente cada una posee un

cuerpo celular, que contiene al núcleo del cual se proyectan dos prolongaciones con

forma de pelo.

Las dendritas son fibras especializadas para recibir impulsos de los estímulos

ambientales o de otras células (VILLE, 1992).

El axón sencillo se especializa en la conducción de impulsos fuera del cuerpo de la

célula. Los axones generalmente son largos y lisos, pero en ocasiones pueden

ramificarse (VILLE, 1992).

2.5.6. Tejido sanguíneo

La sangre, que el líquido que corre por las arterias y venas, esta formada por glóbulos

rojos, blancos y plaquetas, todos suspendidos en el plasma, que es la parte a otra del

cuerpo. Algunos de esas sustancias se disuelven simplemente en el plasma, mientras que

otras van fijas a proteínas como albúminas.

Casi todos los biólogos clasificas a la sangre entre los tejidos conectivos; sin embargo,

otros consideran que la sangre es un tipo especial de tejido ya que las células del tejido

conectivo secretan su matriz circundante y las células de la sangre no secretan el plasma

(VILLE, 1992).

2.6 Tejido vegetal

Clasifican a los tejidos vegetales, algunas células parecen en contraste en situación

intermedia entre los tipos celulares, asimismo, hay células que cambian de aspecto

durante su vida.

No obstante, en general los tejidos pueden ser asignados a una de los categorías

principales: tejidos meristemáticos formados por células inmaduros en proceso de

división celular y los tejidos permanentes, integrados por células maduras diferenciadas

(VILLE, 1992).

2.6.1. Clasificación de los tejidos vegetales

Los tejidos vegetales se clasifican en los siguientes tipos:

Meristemos.- Constituidos por células proliferantes que causan el crecimiento y

desarrollo de la planta.

Parénquima.- Formando por células más diferencias que realizan funciones

fotosintéticos o de almacén de sustancias nutritivas, como agua almidón, etc.

De sostén.- Tejidos de células especializadas, con paredes muy engrosadas para cumplir

esa misión lo constituyen la colénquima y esclerenquima. También contribuyen la

sostén de las plantas. Los vasos, sobre todos los leñosos.

Vasculares o conductores.- Constituyen el sistema circulatorio de la planta. Son el

leño o xilema y el liber o floema.

Protectoras.- Protegen de la perdida de agua y de la acción de

agentes externos son la epidermis y la peridermis.

Secretoras.- Hay tejidos secretores formando parte de la epidermis, como las

glándulas, pelos, o coloraciones

Son compuestos, orgánicos y otros internos, como las células que forman los conductos

resiníferos que contienen radicales cromóforos esto es que producen color y grupo de

anxocromos que forman sales los grupos nitrito (-NO2) y azo (-N = N) son cromóforos.

Los radicales hidroxilo (-OH) y amino (-NH2) son grupos anxocromos. Los cromóforos

imparten la propiedad cromógena al colorante y los anxocromos permiten que el

colorante se una con la fibra o tejido. (Ville, 1988).

2.7. COLORACIONES

Son compuestos, orgánicos que contienen radicales cromóforos esto es que producen

color y grupo de anxocromos que forman sales los grupos nitrito (-NO2) y azo (-N = N)

son cromóforos. Los radicales hidroxilo (-OH) y amino (-NH2) son grupos anxocromos.

Los cromóforos imparten la propiedad cromógena al colorante y los anxocromos

permiten que el colorante se una con la fibra o tejido. (Ville, 1988).

2.7.1. Coloración Bacteriana

Entes de la tinción las bacterias suelen encontrarse en agua o en otro

líquido en un porta objeto limpio y son extendido en una película uniforme y delgada.

Se deja que la película seque en el aire y los microorganismos son fijados por sustancias

químicas o por el calor moderado. (Ville, 1988).

Tinciones: Es un método utilizado para estudiar microorganismos. (No vivos); en estas

tinciones se observa morfología, estructura y agrupamientos de microorganismos.

(Ville, 1988).

2.8 TIPOS DE COLORANTES

2.8.1 Colorantes básicos - Verde de metilo (verde).

- Azul de metileno (azul).

- Pironina G (rojo)

- Azul de toluidina (azul)

- Reaccionan con los grupos de aniónicos de los componentes estúrales que son los

grupos fosfato de los ácidos nucleicos (DNA, RNA) los grupos sulfato de los

glucosaminoglucanos y los grupos carboxilo de las proteínas. (Sherman, 1994)

- Los tres grupos se ionizan y quedan disponibles para la reacción con el colorante

básico por medio de uniones electrostáticas; a un pH ligeramente ácido o neutro.

(Sherman, 1994)

- Hematoxilina no es colorante básico en sentido estricto. (Sherman, 1994)

- Hematoxilina se presta para aquellos procedimientos tintoriales no los que a ella le

sigue la eosina u otros colorantes ácidos. (Sherman, 1994)

- Los colorantes básicos verdaderos no suelen usarse en secuencias en donde el

colorante básico es seguido por un ácido por que la anilina básica tiene a disociarse

del tejido durante los lavados posteriores en soluciones acuosas. (Sherman, 1994)

2.8.2 Colorantes Ácidos

- Fucsina ácida (rojo)

- Azul de anilina (azul)

- Eosina (rojo)

- Naranja G (naranja)

- Se unen primariamente a los componentes estúrales por medio de enlaces

electrostáticos de manera similar pero opuesta a la de los colorantes básicos. (Otto,

1993).

- Las anilinas ácidas reaccionan con grupos cationicos, como son los grupos Aminos

ionizados de las proteínas. Aunque el enlace electrostático constituye el principal

factor en la unión primaria del colorante con el tejido. (Otto, 1993).

- En la técnica de MALLORY se usan tres colorantes ácidos, azul de anilina,

fucsina ácida, y naranja G. Estos tiñen con selectividad el colágeno, el citoplasma en

general y los eritrocitos, respectivamente. (Otto, 1993).

- La fucsina ácida también tiñe los núcleos. (Otto, 1993).

- En otras técnicas con anilinas ácidas múltiples se emplea la hematoxilina para

teñir los núcleos primero y luego se aplican los colorantes ácidos con el fin de teñir

selectivamente el citoplasma y las fibras extracelulares. (Otto, 1993).

- Los colorantes básicos también pueden emplearse combinados, pero estas

combinaciones no son de uso tan extendido como las de los colorantes ácidos.

2.9. TINCION GRAM

Es un extendido bacteriano fijado al calor sobre un portaobjetos se trata con el colorante

básico, violeta de cristal. Todos los organismos toman este colorante, luego se cubre el

extendido con la solución yodada de gram. Después de un enjuague con agua y una

decoloración con acetona, se lava el preparado minuciosamente en agua y se contratiñe

con un colorante rojo, generalmente saframina. El preparado teñido se enjuaga entonces

con agua, se seca y se examina bajo el microscopio.

Las bacterias pueden diferenciarse con esta tinción en dos grupos, según lo

implementara a comienzo del siglo XVIII el bacteriólogo danés Cristian Gram.

a). Microorganismos Gram.-positivos

Estos microorganismos se tiñen de color azul o violeta intensa

b). Microorganismos Gram.-negativos

Estos microorganismos pierden el cristal violeta y se vuelven a teñir con la

saframina, apareciendo el color rojo.

2.10. NUEVO COLORANTE DE CÉLULAS

La técnica de tinción celular o coloración de las células facilita el estudio de la

composición y estructura microscópica de tejidos orgánicos. El proceso consiste en teñir

una muestra del tejido a observar y cuando éste tiene contacto con el colorante o

pigmento, los núcleos y el citoplasma de las células resaltan, con lo que se simplifica la

localización de cualquier tipo de daño. (Sanboh, 1996).

En la estructura celular de los seres vivos es posible observar y detectar la existencia de

anomalías o patologías, que generalmente se relacionan con enfermedades. Este método

ha permitido a los científicos localizar padecimientos múltiples

III. MATERIALES Y METEDOS.

3.1 Lugar y fecha de ejecución de la práctica.

Esta practica fue realizada el 19 junio y el 26de julio del 2004, en el laboratorio de la

UNAS, que se encuentra ubicado en el distrito de Rupa Rupa, provincia de Leoncio

Prado, Departamento de Huanuco, con una temperatura promedio de 24 C, con una

altitud de 660m.s.n.m.; con una precipitación anual de 3100mm, con una humedad

relativa aproximada de 85% en promedio.

Materiales.

- Mucosa labial.

- Laminas de porta y cubre objetos.

- Eosina.

- Fucsina.

- Cristal violeta.

- Aceite de cedro.

- Lugol.

- Mechero.

- Agua destilada.

- Azul de metileno.

- Microscopio compuesto,

- frotis sanguíneo.

- Agua estancada.

- Lamina porta y cubre objetos.

- Gotero.

- Bisturí.

-Testículo de animal

-Estiletes

-Espermatozoide humano

Equipos

-Microscopio compuesto

Metodología

La práctica fue visual-experimental, se empezó poniendo las muestras en los

portaobjetos, luego se tiñeron dichas muestras para ser observadas en el microscopio.

. 3.2. Procedimiento.

a) Observación de la mucosa labial

-

Se usa un solo colorante puede ser acido o base (azul de metileno)

- En este tipo de preparado se uso como muestra la mucosa labial, para observar

en el microscopio su morfología, y para ello se siguió los siguientes pasos.

- Se coloco la mucosa labial en una lámina porta objeto, luego con otra lámina se

hizo un frotis, para extenderla sobre la primera lamina.

- Una vez extendida se hizo una fijación, flameándole sobre el fuego de manera

vaivén, para que la fijación sea uniforme y rápida para matar a las células.

- Después de la fijación pasamos a la coloración de la muestra, en nuestra mesa

usamos el colorante azul de metileno; también se puede usar otros colorantes

como son: Eosina, Fucsina, Cristal violeta, Verde de metileno, etc.

- Después de una pequeña tinción se paso al lavado para quitar el exceso de

colorante y para que se visualice, mejor en el microscopio.

- Luego se observo al microscopio en 10X y 40X, dependiendo de la muestra, para

una mejor visualización de la mucosa labial..

b) Preparado de la cebolla

- Hacer un raspado con bisturí y sacar la catafila de la cebolla de una a quince

centímetros

- Toma una pequeña porción de muestra y colocarla en el centro de un

portaobjeto limpio

- Extender una muestra mediante movimiento concéntrico hasta una capa fina y

uniforme

- Después echar una gota de alcohol con un gotero teñir la extensión fijada

cubriéndola con azul metileno

- Después poner el cubreobjeto y ver en el microscopio 10x y 40x

c). Tejido sanguíneo

- Se limpio el brazo de una persona con alcohol.

- Con una lancetilla se hizo una punción en el brazo, eliminándolo la primera

gota que salga.

- Luego se coloco la sangre en la lámina portaobjeto y se coloreo con azul

metileno

- Se lavo y se dejo secar a temperatura de ambiente

- Luego se hecho aceite de cedro y se le puso el cubreobjeto

- Colocar en la platina del microscopio una lámina con frotis sanguíneo teñido

(coloración Wright).

- Observar.

- Se observó que el tejido sanguíneo tenía pequeños círculos y alrededor una

coloración roja continua llamado plasma.

d) Agua estancada

- En este proceso se uso agua estancada o de charco para ello se siguió los

siguientes pasos

- Se saco con un gotero una gota y se puso la muestra, en una lamina de porta

objeto.

- Luego se cubrió la muestra con una lamina de cubre objeto.

- Luego se llevo al microscopio para observar, de manera directa, se observo a

10X y a 40X,

e) Muestra de semen

- Extraer con el gotero una gota de semen

- Colocar la gota del semen en el portaobjeto

- Hacer un frotis y luego agregar solución de salina para que este emulsione

- Colocar el cubreobjeto y observar a 10x y 40x

g). Observación de tejido nervioso

-Colocar la platina del microscopio una lámina montada con corte

Histológico de medula.

- Observar con el objetivo 40x.

- Se observó que la forma de la célula era estrellada, habían abundantes células

estrelladas.

h) Tejido muscular estriado

- Colocar en la platina del microscopio una lámina montada un corte histológico

de músculo estriado (lengua).

- Observar

- Se observó que la forma de las células eran rectangulares y alargaciones en

abundante.

- Se observó que las células estaban delimitadas por pequeños espacios, por ende

no estaban plegadas entre sí.

i) Tallo de begonia

j) Modulo de ratón

k) Coloración Doble.-

Se usa dos clases de colorantes (Coloración Gram.).

- Azul de metileno.

- Saframina (color rojo).

- Se usa la misma muestra y procedimiento que el anterior

IV. RESULTADOS

V. DISCUSIÓN

Según Ville (1988) y Otto (1993), nos mencionan de que para realizar el tipo de

coloración o preparado en fresco cumple con lo que se realizo en la practica; también

menciona que para el preparado en seco, también cumple con lo realizado a la practica,

solo con la inferencia de algunos colorantes

En la muestra de tejido sanguíneo, según la guía nos dice que debemos usar aceite de

inmersión para el objetivo de 10 x y 100 x. por lo tanto no se usó este material ya que de

ello nos habría permitido una mayor visualización.

Según Vázquez Urday (1992), existe una pequeña comparación de la mucosa labial y de

la laga vista y existe cierta relación, por lo tanto la práctica realizada fue un éxito.

Las laminas montadas, teñidas están lista para la observación, pero nosotros no lo

hemos visualizado como era el proceso de realizar una lamina montada y como se

realiza en tejido y también no pudimos observar tejidos vegetales.

En la observación de células del Lycopersicum esculentum en mayor aumento objetivo

40x no se pudo observar claramente los pigmentos carotenoides.

Las muestras puestas en diferentes microscopios de igual aumento no se pudo observar

la uniformidad de células presentes en un mismo material (Lycopersocum esculentum).

VI. CONCLUSIONES

- Se pudo realizar los preparados en fresco y en seco, conforme a lo establecido

por la práctica.

- Se conoció las técnicas más comunes de coloración que son coloración simple

y compuesto.

- Se pudo observar los pigmentos carotenoides

- Se pudo observar la morfología que presenta la célula.

- Se realizo las muestras establecidas (Lycopersicum esculentum y agua

estancada) conforme lo establecido en la practica

-Se observó los diferentes tejidos animales vegetales

-Se observó el tejido muscular estriado con una claridad y se pudo observar la

forma de células que estaban ordenados.

VII. REFERENCIA BIBLIOGRAFICA

VILLE, C. 1988. Biología. 7ª edic. Edit. Interamericana. S.A. México. 875p.

OTTO, J.Y.A. TOWLE. 1993. Biología Moderna. 11ª edic. Edit McGraw – Hill, S.A

México. 621p. .

SANBOH LEE, H-Y Lee, I-F Lee, C-Y. 1996. Teeng. Ink diffusion in water. Eur. J. .

Phys. 25. (2004) pp. 331-336

SHERMAN, I. Y V. SHERMAN. 1994. Biología. 3ra edic. Edit. Mc Graw-Hill,.

S.A. México. 704p GERARD. J. Tortora. Introducción a la Microbiología. Editorial Acribia S.A. Zaragoza - España. 792pBotánica general I: Teoría y práctica. Facultad de recursos naturales renovables-UNAS.

Tingo María.

NASON, A. 1968. Biología. 1ra Edición. Edit. Limusa S.A. México. 726p.

VILLE, C. 1992. Biología. 2da Edición. Edit. Interamericana. S.A. México. 1404p.