AT9 20- 20Identification 20de 202 20germes

8/17/2019 AT9 20- 20Identification 20de 202 20germes

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AT 9 Biotechnologies

Bactériurie et Identification dedeux germes par Macrométhode

Yves DABAT Ste-Anne ANGLET

Semaine 1 :


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Q1 : Bactériurie

Dénombrement des bactériesdans une urine infectée


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J1 : Bactériurie

On met en œuvre deux techniques :

1- Technique de l’ Uriline®

2- Technique de l’ öse calibrée sur CLED


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J2 : BactériurieLecture des résultats :1- Uriline®

Par comparaison auxabaques de lecture, ontrouve un nombre debactéries entre 10 6 et10 7 / mL d’urine.

Il y a donc infectioncar résultat > 10 5 bactéries/mL urine.


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J2 : BactériurieLecture des résultats :1- Uriline®

La bactérie est lactoseplus et elle a poussésur le milieuMcConkey,

C’est donc un BGNlactose plus.

Probablement une

Entérobactérie.


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J2 : BactériurieLecture des résultats :2- Technique de l’ öse calibréesur CLED

Par comparaison auxabaques de lecture, ontrouve un nombre debactéries entre 10 5 et10 6 / mL d’urine. Il y a donc infectioncar résultat > 10 5

bactéries/mL urine.


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Q2 : Bactériologie

Identification de deux germesPar Macrométhode


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J1 : Galerie d’identification On ensemence une macro- galerie d’identificationà partir de la souche pure présentée sur unegélose lactosée au BCP ou gélose CLED.

A la macroscopie, on observe des colonies de typeS, lactose plus postes pairs, lactose moins postesimpairs.

Au Gram, on observe des BGN polymorphes,

asporulés, acapsulés.A l’état frais , la bactérie est mobile.

On trouve une oxydase négative.


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J1 : Galerie d’identification Orientation de l’identification :

BGN

Oxydase moins

Orientation vers la famille desEnterobacteriaceae


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J1 : Galerie d’identification


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VF HLO MMN KH CL CS


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UT LDC ODC ADH Gélatine


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Résultats obtenus avec la souche paire


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J2 : Galerie d’identification Résultats obtenus avec la souche paire

Aspect de la GNO :La souche est donc pureLe germe est non-exigeant


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Résultats obtenus avec la souche paire


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J2 : Galerie d’identification GNO : Souche pure, germe non-exigeantVF : AAFHLO : OFMMN : Mannitol +

Mobilité ++Nitratase +

KH : Lactose +Glucose +Gaz +H2S –

CS : Citrate – CL : VP- , RM-UT : Uréase –

Indole +TDA –

LDC et ODC +

ADH et Gélatinase –


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Résultats obtenus avec la souche impaire


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J2 : Galerie d’identification Résultats obtenus avec la souche impaire

Aspect de la GNO :La souche est donc pureLe germe est non-exigeant


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Résultats obtenus avec la souche impaire


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J2 : Galerie d’identification GNO : Souche pure, germe non-exigeantVF : AAFHLO : OFMMN : Mannitol +/-

Mobilité +Nitratase +

KH : Lactose - , ONPG -Glucose +Gaz -H2S +

CS : Citrate – CL : VP- , RM-UT : Uréase ++

Indole +TDA +

LDC, ODC et ADH -

Gélatinase –


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J2 : Galerie d’identification Etude du milieu de Kligler Hajna :

Lactose

Glucose

Voir page 28 du polycop

H2S


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Lactose +

Glucose +

H2S -


Glucose ----> Energie + acides

Lactose ----> Glucose + GalactoseGalactose ----> GlucoseGlucose ----> Energie + acides


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Pour que le lactose soit utilisé par la bactérie, il fautqu’elle possède deux enzymes :

Première enzyme : la bactérie doit posséder une« lactose perméase » dans la paroi.Cette enzyme est constitutive .

Enzyme Constitutive : elle est toujours synthétiséequelque soit la composition du milieu.


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Pour que le lactose soit utilisé par la bactérie, il fautqu’elle possède deux enzymes :

Deuxième enzyme : la bactérie doit posséder une« béta-galactosidase » dans le cytoplasme.Cette enzyme est inductible .

Enzyme Inductible : la bactérie ne synthétise cetteenzyme que lorsque le substrat est présent dans lemilieu.


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Lactose +

Glucose +

H2S -


Cette bactérie possèdedonc les deux enzymes.


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Glucose +Glucose ----> Energie + acides

Lactose -

Lactose ----> // Glucose + Galactos e

H2S +


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Glucose +Glucose ----> Energie + acides

Lactose -Lactose ----> // Glucose + Galactos e

Cette bactérie :1- ne possède aucune des deuxenzymes.

2- possède seulement une desdeux enzymes.

H2S +


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Pour savoir quelle enzyme est manquante, on fait le

test de l’ONPG .L’ortho-nitro-phényl-galactoside est un substratincolore de la béta-galactosidase :

ONPG (incolore) + H2O -----> ortho-nitro-phénol (jaune)


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Etude du milieu de Kligler Hajna :

On fait une suspension épaisse à partirde la tranche lactose moins du KH.

On met à incuber au bain-marie à 37°Cpendant 30 minutes.

On observe la couleur de la suspension.


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ONPG

ONPG


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ONPG


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Résultat du test à l’ONPG :

Bactérie ONPG +

La bactérie est en réalitéBéta-galactosidase PLUS.


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ONPG

ONP

ONP


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CONCLUSION

Conclusion à la semaine 1


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Conclusion Semaine 1

Identification du germe responsable de l’infection :

Caractères de familleBGNOxydase moinsNitratase plusAéro-anaérobie facultatif

Oxydo-facultatif du glucose

Famille desEnterobacteriaceae


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Caractères de Genre etd’espèce Voir diapositives 16 et 20

Postes pairs :

Escherichia coli

Revoir la démarche avec utilisation des clés

d’identification dans le cahier de TP


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Caractères de Genre etd’espèce Voir diapositives 16 et 20

Postes impairs :

Proteus vulgaris

Revoir la démarche avec utilisation des clés

d’identification dans le cahier de TP


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Galerie d’identification

Semaine 1 : Bactériurie

FIN

Yves DABAT Ste-Anne ANGLET

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