8/3/2019 asam sialic

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I N F E C T I O N AND I M M U N I T Y , O C t . 1 9 8 7 , p . 2 3 6 4 - 2 3 6 9 V o l . 5 5 , N o . 1 00 0 1 9 - 9 5 6 7 / 8 7 / 1 0 2 3 6 4 - 0 6 $ 0 2 . 0 0 / 0C o p y r i g h t 1 9 8 7 , A m e r i c a n S o c i e t y f o r M i c r o b i o l o g y

R o l e o f S i a l i c A c i d i n S a l i v a - M e d i a t e d A g g r e g a t i o n o f P s e u d o m o n a sa e r u g i n o s a I s o l a t e d f r o m C y s t i c F i b r o s i s P a t i e n t sKUNIO KOMIYAMA,1* BRIAN F . HABBICK,2 A ND SATWANT K . TUMBER1D e p a r t m e n t o f O r a l B i o l o g y , C o l l e g e o f D e n t i s t r y , ' a n d D e p a r t m e n t o f P e d i a t r i c s , C o l l e g e o f M e d i c i n e , 2 U n i v e r s i t y o fS a s k a t c h e w a n , S a s k a t o o n , S a s k a t c h e w a n , C a n a d a S7N OWO

R e c e i v e d 2 O c t o b e r 1 9 8 6 / A c c e p t e d 1 9 J u n e 1 9 8 7T h e m e c h a n i s m o f s a l i v a - m e d i a t e d a g g r e g a t i o n o f P s e u d o m o n a s a e r u g i n o s a i n s u b j e c t s w i t h a n d w i t h o u tc y s t i c f i b r o s i s ( C F ) w a s i n v e s t i g a t e d . V i r t u a l l y a l l s a l i v a f r o m CF p a t i e n t s t h a t we t e s t e d s t r o n g l y a g g l u t i n a t e dt h e P s e u d o m o n a s c e l l s a n d w a s h e a t s t a b l e t o 5 6 C , w h e r e a s s a l i v a f r o m s u b j e c t s w i t h o u t CF h a d a d e c r e a s e da g g r e g a t i n g a b i l i t y a n d w a s h e a t s e n s i t i v e . When s a l i v a w a s t r e a t e d w i t h n e u r a m i n i d a s e a n d p r o t e a s e s , a n d a l s ow h e n P . a e r u g i n o s a c e l l s w e r e t r e a t e d w i t h m i x e d g a n g l i o s i d e s , t h e r e w a s a d e c r e a s e i n a g g r e g a t i n g a c t i v i t i e s .H o w e v e r , n e i t h e r t h e a d d i t i o n o f t h e a c i d - h y d r o l y z e d g a n g l i o s i d e n o r t h e t r e a t m e n t o f t h e P . a e r u g i n o s a c e l l sb y s u g a r s h a d a n y e f f e c t o n s u b s e q u e n t a g g r e g a t i n g a c t i v i t i e s . T h e r e f o r e , t h e r e l e a s e o f s i a l i c a c i d b y e n z y m a t i ct r e a t m e n t s o f s a l i v a , a s w e l l a s t h e b l o c k a g e o f t h e s i a l i c a c i d - b i n d i n g s i t e s o n t h e c e l l w a l l b y m i x e d g a n g l i o s i d e s ,r e s u l t e d i n t h e p a r a l l e l l o s s o f s a l i v a - m e d i a t e d a g g r e g a t i n g a c t i v i t y o f P . a e r u g i n o s a . T h e l e v e l o f f r e e s i a l i c a c i d

r e l e a s e d b y e n d o g e n o u s n e u r a m i n i d a s e w a s h i g h e r i n t h e s a l i v a f r o m CF p a t i e n t s t h a n i n t h a t f r o m t h e n o n - C Fs u b j e c t s e x a m i n e d . T h e i n c r e a s e d a g g r e g a t i o n o f P . a e r u g i n o s a m e d i a t e d b y s a l i v a f r o m p a t i e n t s w i t h CF s e e m st o b e d i r e c t l y r e l a t e d t o t h e s i a l i c a c i d c o n t e n t p r e s e n t , s u g g e s t i n g t h a t t h i s a c i d m o l e c u l e a c t s a s t h e s a l i v a r yr e c e p t o r f o r P . a e r u g i n o s a .

C y s t i c f i b r o s i s ( C F ) i s a n i n h e r i t e d d i s o r d e r o f C a u c a s i a n sa n d i s c h a r a c t e r i z e d b y p r o g r e s s i v e c h r o n i c l u n g i n f e c t i o n( 1 4 , 2 7 , 2 9 , 4 4 ) . T h e m o s t common p a t h o g e n i n s u c h a ni n f e c t i o n i s P s e u d o m o n a s a e r u g i n o s a , e s p e c i a l l y i t s m u c o i dv a r i a n t s ( 4 , 1 3 , 1 4 , 2 0 , 2 7 , 2 9 , 4 4 ) . H o w e v e r , t h e m e c h a n i s mo f P . a e r u g i n o s a c o l o n i z a t i o n i n CF p a t i e n t s i s s t i l l n o tc o m p l e t e l y u n d e r s t o o d .T h e r e i s i n c r e a s i n g e v i d e n c e w h i c h s u g g e s t s t h a t o r a lc o l o n i z a t i o n b y b o t h g r a m - p o s i t i v e a n d g r a m - n e g a t i v e p u l -m o n a r y p a t h o g e n s i s a p r e r e q u i s i t e f o r t h e i r c o l o n i z a t i o n i nt h e r e s p i r a t o r y t r a c t a n d f o r s u b s e q u e n t p u l m o n a r y i n f e c t i o n( 1 , 2 , 1 5 , 4 0 , 4 6 , 4 8 ) . I n a s t u d y o f C F , Woods ( 4 5 ) s u g g e s t e dt h a t a s p i r a t i o n o f o r a l s e c r e t i o n s , s u c h a s s a l i v a , c o n t a i n i n gP . a e r u g i n o s a i s t h e m o s t l i k e l y m e c h a n i s m f o r c o l o n i z a t i o no f t h e l o w e r r e s p i r a t o r y t r a c t . T h e r e f o r e , t h e p r e s e n c e o fs i g n i f i c a n t n u m b e r s o f P . a e r u g i n o s a i n t h e s a l i v a o f CFp a t i e n t s may b e a p r e r e q u i s i t e f o r t h i s p a t h o g e n t o c o l o n i z et h e l o w e r r e s p i r a t o r y t r a c t .Human s a l i v a h a s b e e n k n o w n t o i n d u c e a g g r e g a t i o n o fs o m e o r a l b a c t e r i a ( 5 , 7 , 1 1 , 1 2 , 1 6 , 2 6 , 2 8 ) . S a l i v a - m e d i a t e da g g r e g a t i o n may f u n c t i o n i n v i v o b y c a u s i n g a d h e r e n c e o fb a c t e r i a t o o r a l t i s s u e s o r d i s s i m i l a r b a c t e r i a ( 1 0 , 3 6 , 3 7 , 4 3 ) .A l t e r n a t i v e l y , t h i s a c t i v i t y may f u n c t i o n i n v i v o b y a g g r e g a t -i n g b a c t e r i a i n t o m a s s e s , t h e r e b y a l l o w i n g e a s i e r r e m o v a lf r o m t h e o r a l c a v i t y b y s w a l l o w i n g o r f l u s h i n g a c t i o n s ( 1 0 ,2 2 ) .B o t h m u c o i d a n d n o n m u c o i d s t r a i n s o f P . a e r u g i n o s a h a v eb e e n c o n s i s t e n t l y i s o l a t e d f r o m v a r i o u s o r a l e c o l o g i c a l s i t e s( e . g . , t h e b u c c a l m u c o s a , t o n g u e d o r s u m , a n d d e n t a l p l a q u e )a n d f r o m s a l i v a o f p a t i e n t s w i t h C F , b u t n o t f r o m s u b j e c t sw i t h o u t CF ( 1 8 , 1 9 , 2 5 , 4 8 ) . H o w e v e r , t h e m e c h a n i s m o f P .a e r u g i n o s a c o l o n i z a t i o n i n t h e o r a l c a v i t y i s n o t k n o w n . I n as t u d y o f o r a l s t r e p t o c o c c i , M c B r i d e a n d G i s s l o w ( 2 8 )s h o w e d t h a t t h e r e w a s a c o r r e l a t i o n b e t w e e n t h e a m o u n t o fs i a l i c a c i d r e l e a s e d f r o m n o r m a l s a l i v a a n d i t s a g g r e g a t i n g

* C o r r e s p o n d i n g a u t h o r .

a c t i v i t y . T h e y s u g g e s t e d t h a t t h e p r e s e n c e o f s i a l i c a c i dm u c i n s i n s a l i v a may b e r e s p o n s i b l e f o r t h e a g g r e g a t i o n o fs t r e p t o c o c c i .F u r t h e r e x p l o r a t i o n o f t h e u n i q u e c h a r a c t e r i s t i c s o f CFs a l i v a may l e a d t o a b e t t e r u n d e r s t a n d i n g o f t h e m e c h a n i s mo f P . a e r u g i n o s a c o l o n i z a t i o n i n CF p a t i e n t s . T h e r e f o r e , t h ep r e s e n t i n v e s t i g a t i o n was c a r r i e d o u t t o s u r v e y t h e i n c i d e n c eo f P . a e r u g i n o s a a g g r e g a t i o n m e d i a t e d b y CF o r n o n - C Fs a l i v a a n d t o d e t e r m i n e t h e u n i q u e c h a r a c t e r i s t i c s o f t h es a l i v a r y a g g r e g a t i n g f a c t o r b y c h e m i c a l a n d e n z y m a t i c m o d -i f i c a t i o n s .

MATERIALS A N D METHODSS u b j e c t s . A t o t a l o f s i x CF p a t i e n t s ( t w o f e m a l e a n d f o u rm a l e ) a t t e n d i n g t h e CF c l i n i c a t t h e U n i v e r s i t y H o s p i t a l ,S a s k a t o o n , S a s k a t c h e w a n , C a n a d a , w e r e e x a m i n e d . T h ep a t i e n t s w e r e i n g e n e r a l l y g o o d h e a l t h a n d a t t h e t i m e o fs a m p l i n g w e r e n o t u n d e r g o i n g a n y d r ug t h e r a p y . T h e a v e r -a g e a g e o f t h e s i x CF p a t i e n t s w a s 1 8 . 8 y e a r s . S i x n o n - C Fs u b j e c t s s e r v e d a s a c o n t r o l g r o u p . T h i s i n v e s t i g a t i o n h a db e e n a p p r o v e d b y t h e U n i v e r s i t y o f S a s k a t c h e w a n A d v i s o r yC o m m i t t e e o n E t h i c s i n Human E x p e r i m e n t a t i o n , a n d i n -f o r m e d c o n s e n t was o b t a i n e d f r o m t h e p a t i e n t s o r f r o m t h e i rp a r e n t s .A s s a y f o r s a l i v a - m e d i a t e d a g g r e g a t i o n o f P . a e r u g i n o s a . ( i )B a c t e r i a l s t r a i n s a n d b a c t e r i o l o g i c a l p r o c e d u r e s . A t o t a l o f 2 0s t r a i n s ( 7 m u c o i d a n d 1 3 n o n m u c o i d ) o f f r e s h l y i s o l a t e d P .a e r u g i n o s a w e r e s t u d i e d . T h e s e s t r a i n s w e r e d e r i v e d f r o mv a r i o u s o r a l e c o l o g i c a l s i t e s , s u c h a s b u c c a l m u c o s a , t o n g u ed o r s u m , a n d d e n t a l p l a q u e . T h e P . a e r u g i n o s a s t r a i n s i s o -l a t e d f r o m t h e o r a l c a v i t y w e r e o f t e n f o u n d t o b e o f ad i f f e r e n t p y o c i n e t y p e o r s e r o t y p e t h a n t h o s e f o u n d i n s a l i v ao r s p u t u m , t h e r e b y d e m o n s t r a t i n g t h a t t h e y w e r e n o t s i m p l yp r e s e n t a s t r a n s i e n t s . T h u s , t h e s e s t r a i n s w e r e d e t e r m i n e d t ob e a s i g n i f i c a n t c o m p o n e n t o f t h e f l o r a c o l o n i z i n g t h e o r a lc a v i t y o f CF p a t i e n t s ( 1 8 ) . T h e m e t h o d s u s e d t o i s o l a t e a n di d e n t i f y P . a e r u g i n o s a w e r e d e s c r i b e d p r e v i o u s l y ( 1 7 , 1 8 ) .

2 3 6 4

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SALIVARY SIALIC ACID I N P . AERUGINOSA AGGREGATION 2 3 6 5S t r a i n s i d e n t i f i e d a s P . a e r u g i n o s a w er e t r a n s f e r r e d i n t os e v e r a l v i a l s c o n t a i n i n g s e r u m - c o a t e d g l a s s b e a d s a n d werei m m e d i a t e l y f r o z e n a t - 7 0 C ( 6 ) . T h e s e b e a d s were r o u t i n e l yu s e d f o r s u b c u l t u r i n g t o a v o i d f u r t h e r l a b o r a t o r y passage,w h i c h may r e s u l t i n a l t e r a t i o n o f c h a r a c t e r i s t i c s o f t h eo r i g i n a l i s o l a t e s t h r o u g h i n v i t r o t r a n s f e r . T h e P . a e r u g i n o s as t r a i n s w e r e g r o w n i n T r y p t i c a s e s oy b r o t h (BBL M i c r o b i -o l o g y S y s t e m s , C o c k e y s v i l l e , M d . ) a t 3 7 C f o r 2 4 h . T h ec e l l s r e q u i r e d f o r t h e a g g r e g a t i o n as say w e re h a r v e s t e d b yc e n t r i f u g a t i o n a t 1 0 , 0 0 0 x g f o r 1 0 mi n a n d were w a s h e dt h r e e t i me s w i t h TC b u f f e r ( 0 . 0 5 M T r i s h y d r o c h l o r i d e - 0 . 0 0 5M C a C l 2 b u f f e r [ p H 7 . 2 ] ) , w h i c h w a s d e s c r i b e d b y M c B r i d ea n d G i s s l o w ( 2 8 ) . The c e l l s were s u s p e n d e d i n t h e sameb u f f e r a n d d i s p e r s e d w i t h a 1 - c m 3 ( 2 5 - g a u g e , f i v e - e i g h t h s - i n .n e e d l e ) s y r i n g e .( i i ) S a l i v a c o l l e c t i o n a n d t r e a t m e n t . P a r a f f i n - s t i m u l a t e dw h o l e s a l i v a was c o l l e c t e d i n t o i c e - c h i l l e d v i a l s a n d c l a r i f i e db y c e n t r i f u g a t i o n a t 1 0 , 0 0 0 x g f o r 1 0 mi n a t 4 C . F o re x p e r i m e n t s l a s t i n g l o n g e r t h a n 2 0 min, t h e c l a r i f i e d s a l i v aw a s h e a t e d a t 5 6 C f o r 3 0 mi n t o d e s t r o y enzymes w h i c h mayi n a c t i v a t e t h e a g g r e g a t i n g f a c t o r . F o r s h o r t - t e r m e x p e r i -m e n t s , s a l i v a was n o t t r e a t e d . I f t h e s a l i v a was n o t u s e di m m e d i a t e l y , i t w as s t o r e d a t - 2 0 C u n t i l n e e d e d . Some o ft h e e n z y m a t i c s t u d i e s were p e r f o r m e d on a s a l i v a r y p e l l e to b t a i n e d b y c e n t r i f u g i n g t h e h e a t - c l a r i f i e d s a l i v a a t 1 0 , 0 0 0 xg a t 4 C f o r 1 h ( 2 8 ) . T h i s p e l l e t was e x a m i n e d b y g e le l e c t r o p h o r e s i s a n d f o u n d t o b e f r e e o f p r o t e i n .( i i i ) A g g r e g a t i n g a s s a y . The r e a c t i o n m i x t u r e c o n t a i n e d 5 0R I e a c h o f P . a e r u g i n o s a c e l l s ( 1 0 1 0 c e l l s p e r m l ; A 5 5 0 =1 . 5 ) ,TC b u f f e r , a n d s e r i a l l y d i l u t e d s a l i v a i n m i c r o t i t e r p l a t e s a n dw a s i n c u b a t e d a t room temperature w i t h g e n t l e r o t a t i o n f o r3 0 m i n . C o n t r o l s o f s a l i v a o r P . a e r u g i n o s a c e l l s i n TC b u f f e ra l o n e w e r e i n c l ud e d w i t h e a c h e x p e r i m e n t . T h e d e g r e e o fa g g r e g a t i o n was e x a m i n e d w i t h a d i s s e c t i n g m i c r o s c o p e , a n dt h e l a s t w e l l s h o w i n g v i s u a l l y d e t e c t a b l e a g g r e g a t i o n wast a k e n a s t h e e n d p o i n t . I f u n d i l u t e d s a l i v a was u s e d , aggre-g a t i o n w a s s c o r e d f r o m 0 f o r no v i s i b l e a g g r e g a t i o n t o +4 f o rm a x i m a l a g g r e g a t i o n .S t u d i e s o f t h e a g g r e g a t i n g f a c t o r . The m o d i f i c a t i o n s t u d i e sw e r e c o n d u c t e d by e s s e n t i a l l y t h e same methods d e s c r i b e db y M c B r i d e a n d G i ss l o w ( 2 8 ) .( i ) E f f e c t o f h e a t on a g g r e g a t i n g a c t i v i t y . To e x a m i n e t h eh e a t s e n s i t i v i t y o f P . a e r u g i n o s a s a l i v a r y a g g r e g a t i n g f a c t o r ,c l a r i f i e d s a l i v a w as h e a t e d a t 5 6 C or b o i l e d f o r 1 5 m i n i n aw a t e r b a t h ( 5 ) . P . a e r u g i n o s a c e l l s a n d u n h e a t e d , h e a t e d , o rb o i l e d s a l i v a w e r e t h e n a s s a y e d t o d e t e r m i n e t h e i r a g greg a-t i o n a b i l i t y .( i i ) G a n g l i o s i d e s a n d s u g a r t r e a t m e n t s . V a r i o u s c o n c e n t r a -t i o n s ( 0 t o 5 0 0 , u g / m l ) o f m i x e d g a n g l i o s i d e s a n d a c i d -h y d r o l y z e d g a n g l i o s i d e s were p r e i n c u b a t e d w i t h P . a e r u g i -n o s a c e l l s f o r 6 0 m i n a t room temperature. A c i d - h y d r o l y z e dg a n g l i o s i d e w as p r e p a r e d by i n c u b a t i n g t y pe I I I g a n g l i o s i d e( S i g m a C h e m i c a l C o . , S t . L o u i s , M o . ) i n HCI ( 0 . 0 5 N ) a t8 0 C f o r 9 0 m i n ( 2 8 ) . S u g a r s a n d s u g a r a m i n e s ( S i g m aC h e m i c a l C o . ) w e r e a l s o p r e i n c u b a t e d w i t h t h e c e l l s a n da s s a y e d f o r a g g r e g a t i o n a c t i v i t y ( 5 ) . I n e a c h a s s a y , 5 0 p 1 o fs a l i v a w a s a d d e d t o t h e m i x t u r e i n m i c r o t i t e r p l a t e s a n di n c u b a t e d a t room t e m p e r a t u r e f o r 3 0 min.( i i i ) N - A c e t y l n e u r a m i n i c a c i d . P . aeruginosa s t r a i n s weret r e a t e d w i t h v a r i o us c o n c e n t r a t i o n s ( 0 . 0 0 1 , 0 . 0 1 , 0 . 1 0 , or 1 . 0m g / m l ) o f N - a c e t y l n e ur a m i n i c a c i d ( s i a l i c a c i d ) type IV( S i g m a C h e m i c a l C o . ) . The c e l l s w er e t h e n i n c u b a t e d f o r 3 0m i n a t 3 7 C , washed t h r e e t i m es , a n d s u s p e n d e d i n TC b u f f e rf o r u s e i n t h e a g g r e g a t i o n s t u d i e s . As a c o n t r o l , b a c t e r i aw e r e t r e a t e d w i t h TC b u f f e r i n s t e a d o f w i t h N - a c e t y l n e u r -a m i n i c a c i d .

( i v ) P r o t e a s e . A f t e r c e n t r i f u g a t i o n o f c l a r i f i e d s a l i v a ( 1 0 , 0 0 0x g , 1 h a t 4 C ) , t h e p e l l e t w a s r e a d i l y d i s p e r s e d i n TC b u f f e rb y v o r t e x i n g f o r 1 5 s , a d d i n g 1 . 2 mg o f p r o t e o l y t i c e n z y m e( S i g m a C h e m i c a l C o . ) , a n d t h e n i n c u b a t i n g t h e m i x t u r e a tr o o m t e m p e r a t u r e f o r 1 h . T o i n a c t i v a t e t h e p r o t e a s e s , t h em i x t u r e w a s h e a t e d i n b o i l i n g w a t e r f o r 1 5 m i n . T h i s m i x t u r ew a s t h e n u s e d f o r a n a g g r e g a t i o n a s s a y . E n z y m a t i c d i s r u p -t i o n w a s s t u d i e d b y a d d i n g t h e e n z y m e s t o p r e f o r m e d P .a e r u g i n o s a - s a l i v a a g g r e g a t e s a n d e x a m i n i n g f o r d i s p e r s i o nb y v i s u a l a s s e s s m e n t o f t h e m i c r o t i t e r p l a t e s o v e r a p e r i o d o ft i m e .B o t h t h e e f f e c t i v e n e s s o f i n a c t i v a t i o n o f p r o t e a s e s a n d a l lt h e o t h e r e n z y m e s u s e d i n t h e s e e x p e r i m e n t s , a n d a l l e n -z y m e a c t i v i t i e s , w a s m e a s u r e d b y t h e m e t h o d s d e s c r i b e d b yM c B r i d e a n d G i ss l o w ( 2 8 ) .( v ) G l y c o s i d a s e . T h e s a l i v a r y p e l l e t w a s e a s i l y s u s p e n d e di n 1 m l o f c i t r a t e b u f f e r ( 0 . 0 5 M ; pH 4 . 6 ) b y v o r t e x i n g f o r 1 5s . P o r t i o n s ( 1 U e a c h ) o f t h e g l y c o s i d a s e s ( P 3 - g a l a c t o s i d a s e ,a - m a n n o s i d a s e , a n d P - N - a c e t y l h e x o s a m i n i d a s e ) ( S i g m aC h e m i c a l C o . ) w e r e a d d e d , a n d t h e m i x t u r e w a s i n c u b a t e d a tr o o m t e m p e r a t u r e f o r 4 8 h . A d r o p o f C H C l 3 w a s a d d e d t op r e v e n t g r o w t h o f b a c t e r i a . T h e m i x t u r e w a s t h e n u s e d f o ra n a g g r e g a t i o n a s s a y .( v i ) A l k a l i n e p h o s p h a t a s e . C l a r i f i e d s a l i v a ( 3 m l ) w a sa d j u s t e d t o p H 8 . 0 w i t h 1 N NaOH, a n d t h e n 4 0 U o f a l k a l i n ep h o s p h a t a s e w a s a d d e d . A f t e r i n c u b a t i o n a t r o o m t e m p e r a -t u r e f o r 2 h , t h e a l k a l i n e p h o s p h a t a s e w a s i n a c t i v a t e d b yh e a t i n g i n a b o i l i n g w a t e r b a t h f o r 5 m i n . T h e m i x t u r e w a su s e d i n a n a s s a y t o d e t e r m i n e i t s a b i l i t y t o a g g r e g a t e P .a e r u g i n o s a c e l l s .( v i i ) N e u r a m i n i d a s e . T h e s a l i v a r y p e l l e t w a s r e a d i l y s u s -p e n d e d b y v o r t e x i n g f o r 1 5 s i n 5 m l o f 0 . 0 5 M s o d i u ma c e t a t e - 0 . 0 0 5 M C a C l 2 ( p H 5 . 5 ) , a n d n e u r a m i n i d a s e t y p e I I I( 1 0, u l / m l ( 0 . 0 9 U / m l ] ; S i g m a C h e m i c a l C o . ) w a s a d d e d . T h em i x t u r e w a s i n c u b a t e d a t 3 7 C , a n d 1 - m l s a m p l e s w e r er e m o v e d p e r i o d i c a l l y . T h e s e s a m p l e s w e r e h e a t e d i n b o i l i n gw a t e r f o r 5 m i n a n d t h e n a s s a y e d f o r f r e e s i a l i c a c i d b y t h et h i o b a r b i t u r i c a c i d a s s a y ( 4 2 ) a n d f o r a g g r e g a t i n g a b i l i t y .( v i i i ) A c i d h y d r o l y s i s . A m i x t u r e o f 5 m l o f 0 . 1 N H 2 S O 4a n d 5 m l o f s a l i v a w a s p l a c e d i n a 8 0 C w a t e r b a t h . A td e s i g n a t e d i n t e r v a l s , s a m p l e s w e r e r e m o v e d a n d a s s a y e d f o rf r e e s i a l i c a c i d a n d f o r a g g r e g a t i n g a c t i v i t y .( i x ) E n d o g e n o u s n e u r a m i n i d a s e . C l a r i f i e d s a l i v a t h a t h a dn o t b e e n h e a t t r e a t e d w a s i n c u b a t e d a t 3 0 C . A t d e s i g n a t e di n t e r v a l s , 1 - m l s a m p l e s w e r e r e m o v e d a n d a s s a y e d f o r f r e es i a l i c a c i d a n d a l s o f o r a g g r e g a t i o n o f P . a e r u g i n o s a c e l l s .

RESULTSS a l i v a - m e d i a t e d a g g r e g a t i o n o f P . a e r u g i n o s a . When CFa n d n o n - C F s a l i v a w e r e n o t h e a t t r e a t e d , a l m o s t a l l o f t h em u c o i d a n d n o n m u c o i d P . a e r u g i n o s a s t r a i n s w e r e a g g r e -g a t e d . H o w e v e r , w h e n h e a t e d a t 5 6 C , t h e CF s a l i v a s t i l ls t r o n g l y a g g r e g a t e d m o s t P . a e r u g i n o s a s t r a i n s , b u t n o n - C Fs a l i v a b i n d i n g a b i l i t y w a s a l mo s t c o m p l e t e l y d e s t r o y e d ( T a -b l e 1 ) . T h e r e w e r e n o s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e s b e t w e e n t h ea g g r e g a t i n g a c t i v i t y b y CF o r n o n - C F s a l i v a o f t h e m u c o i da n d n o n m u c o i d P . a e r u g i n o s a s t r a i n s . B o t h CF a n d n o n - C Fs a l i v a w e r e s e n s i t i v e t o b o i l i n g a n d l o s t a l m o s t a l l a g g r e g a -t i o n p r o p e r t i e s . T h e h e a t t r e a t m e n t o f P . a e r u g i n o s a c e l l s d i dn o t h a v e a n i n h i b i t o r y e f f e c t o n a g g r e g a t i o n b y s a l i v a . T h ec o n t r o l s s h o w e d t h a t t h e r e w e r e n o s e l f - a g g r e g a t i n g s t r a i n so f P . a e r u g i n o s a .S i n c e t h e r e w a s s t r o n g P . a e r u g i n o s a a g g r e g a t i o n b y CFs a l i v a , t h e n a t u r e o f t h e a g g r e g a t i n g f a c t o r w a s f u r t h e ri n v e s t i g a t e d . T h i s f a c t o r w a s c h a r a c t e r i z e d i n t h e f o l l o w i n g

VOL. 5 5 , 1 9 8 7

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2 3 6 6 KOMIYAMA ET A L .TABLE 1 . A g g r e g a t i o n a b i l i t y o f P . a e r u g i n o s a b y CF a n d n o n - C F s a l i v a a f t e r h e a t t r e a t m e n t a t 5 6 C

A g g r e g a t i o n b y :P . a e r u g i n o s a s t r a i n CF s a l i v a s a m p l e s Non-CF s a l i v a s a m p l e s

A B C D E F A 1 B 1 C 1 D i E l FN o n m u c o i dH S S 1 a +4 +4 +3 + 4 + 4 +3 0 0 0 0 +2 0TYT3a +4 +3 +4 +4 +4 + - 3 +2 0 +3 0 0 0TYT2a +4 +2 +4 +3 +4 +3 0 0 0 +2 0 +1H S T 2 a +4 +4 +4 +3 +3 +3 +1 0 0 0 +2 0TYS2 +2 +2 +4 +3 +4 +3 0 +2 0 0 0 0HST1 +2 +2 +3 +2 +3 +3 0 0 0 0 +1 +1HSB1 +3 +1 +3 +3 0 +1 +1 0 0 0 +2 +2TYB2 +2 +1 0 +3 +1 +2 0 0 +2 0 0 0TYS1 +4 +3 +4 +3 +4 +2 0 0 0 0 0 0CWP1 +2 0 +4 +4 +2 +2 0 0 0 0 0 0HSP2 +4 +3 +3 +4 +4 +3 0 0 0 0 +1 0TYB1 +4 +4 +4 +3 +2 +4 0 0 0 +3 0 0HSS3 +3 0 +3 +2 +1 +2 0 +2 0 0 0 0M u c o i dC P T 1 a +3 +3 +3 +3 + 4 +4 +2 0 0 +2 +2 0TYT1a +4 +3 +4 +4 +2 +3 0 0 +1 0 0 0KBB2a +3 +3 + 4 +4 +4 +4 +1 0 0 0 0 +2C Z T 1 a +4 +2 +4 +3 +4 +2 0 0 0 +2 0 0KBP1 +2 +2 +3 +2 +3 +4 0 0 0 0 0 0KBP2 +2 +4 +2 +1 +3 +3 0 0 0 0 0 0KKB1 +3 +3 +2 +3 +3 +4 0 +1 0 0 0 0

a S t r a i n s u s e d i n m o d i f i c a t i o n s t u d i e s .

m o d i f i c a t i o n s t u d i e s w i t h e i g h t r e p r e s e n t a t i v e s t r a i n s o f P .a e r u g i n o s a w h i c h s h o w e d s t r o n g a g g r e g a t i n g a c t i v i t y b y CFs a l i v a ( T a b l e 1 ) .E f f e c t o f t r e a t m e n t o f P . a e r u g i n o s a c e l l s o n s a l i v a - m e d i a t e da g g r e g a t i o n . None o f t h e s u g a r s , s u g a r a m i n e s , m u c i n ( b o -v i n e s ub m a x i l l a r y t y p e I ) , o r d e x t r a n t e s t e d h a d a n a p p r e -c i a b l e i n h i b i t o r y e f f e c t o n t h e a g g r e g a t i n g a b i l i t y o f CF o rn o n - C F s a l i v a ( T a b l e 2 ) . A l t h o u g h a s l i g h t i n h i b i t o r y e f f e c tw a s s e e n w i t h t h e a d d i t i o n o f l e c i t h i n , t h i s e f f e c t w a sp r o b a b l y n o n s p e c i f i c a t t h e c o n c e n t r a t i o n t e s t e d ( 4 1 ) . T h e r e -f o r e , t h e r o l e o f l e c i t h i n may b e i n s i g n i f i c a n t i n d e f i n i n g t h ef r a c t i o n i n v o l v e d i n s a l i v a - m e d i a t e d P . a e r u g i n o s a a g g r e g a -t i o n . T h e a d d i t i o n o f a s l i t t l e a s 0 . 0 1 mg o f N - a c e t y l n e u r -a m i n i c a c i d p e r m l t o t h e P . a e r u g i n o s a c e l l s i n h i b i t e da g g r e g a t i o n b y b o t h CF a n d n o n - C F s a l i v a . T h i s f i n d i n gi n d i c a t e s t h a t t h e s i a l i c a c i d - b i n d i n g s i t e s o n t h e b a c t e r i a l c e l lTABLE 2 . A g g r e g a t i o n a b i l i t y o f P . a e r u g i n o s a b y CF s a l i v aa f t e r t r e a t m e n t w i t h v a r i o u s c o m p o u n d s

C o n c n A g g r e g a t i o nC o m p o u n d a d d e d ( m g / m l ) t i t e rG l u c o s e 9 . 0 0 1 6L - F u c o s e 9 . 0 0 1 6G a l a c t o s e 9 . 0 0 1 6G a l a c t o s a m i n e 9 . 0 0 1 6D - ( + ) - G l u c o s a m i n e 9 . 0 0 1 6a - M e t h y l - g a l a c t o s i d e 9 . 0 0 1 6, B - M e t h y l - g a l a c t o s i d e 9 . 0 0 1 6L a c t o s e 9 . 0 0 1 6N - A c e t y l g l u c o s a m i n e 2 2 . 0 0 8M u c i n ( b o v i n e s u b m a x i l l a r y t y p e I ) 4 . 2 5 1 6D e x t r a n T 2 0 0 0 0 . 2 0 1 6L e c i t h i n 0 . 2 5 4N - A c e t y l n e u r a m i n i c a c i d 0 . 0 1 0G a n g l i o s i d e 0 . 2 0 0B u f f e r c o n t r o l 1 6

w a l l may h a v e b e e n o c c u p i e d b y t h e a d d i t i o n o f N -a c e t y l n e u r a m i n i c a c i d a n d t h u s may h a v e p r e v e n t e d a g g r e -g a t i o n b y t h e s a l i v a r y a g g r e g a t i n g f a c t o r .S a l i v a - i n d u c e d a g g r e g a t i o n w a s g r e a t l y r e d u c e d w h e n P .a e r u g i n o s a c e l l s w e r e p r e t r e a t e d w i t h a m i x e d g a n g l i o s i d ep r e p a r a t i o n , b u t a g g r e g a t i o n w a s l e s s a f f e c t e d b y t h e a c i d -h y d r o l y z e d g a n g l i o s i d e ( T a b l e 3 ) . A s s u g g e s t e d b y M c B r i d ea n d G i s s l o w ( 2 8 ) , t h e r e m o v a l o f n e u r a m i n i d a s e - s e n s i t i v es i a l i c a c i d r e s i d u e s b y t h e m i x e d g a n g l i o s i d e s c r e a t e d am o l e c u l e w h i c h w a s l e s s e f f e c t i v e l y a b l e t o b i n d w i t h t h er e c e p t o r s i t e s w i t h i n s a l i v a .E f f e c t o f s a l i v a t r e a t m e n t o n P . a e r u g i n o s a a g g r e g a t i o n . T h es a l i v a r y f a c t o r s r e s p o n s i b l e f o r a g g r e g a t i o n o f P . a e r u g i n o s aw e r e e x p l o r e d b y c h e m i c a l a n d b i o c h e m i c a l m o d i f i c a t i o n s .I n c u b a t i o n w i t h t h e p r o t e o l y t i c e n z y m e s ( c h y m o t r y p s i n ,t r y p s i n , s u b t i l i s i n , a n d p r o n a s e ) d e c r e a s e d t h e b i n d i n g a b i l i t yo f P . a e r u g i n o s a b y CF a n d n o n - C F s a l i v a . N e u r a m i n i d a s ea l s o h a d a s i m i l a r e f f e c t . C o l l a g e n a s e , a l k a l i n e p h o s p h a t a s e ,a - m a n n o s i d a s e , , - g a l a c t o s i d a s e , P - N - a c e t y l g l u c o s a m i n i -d a s e , a n d l i p a s e h a d n o e f f e c t o n a g g r e g a t i n g a b i l i t y ( T a b l eTABLE 3 . A g g r e g a t i o n a b i l i t y o f P . a e r u g i n o s a b y CF s a l i v a

a f t e r t r e a t m e n t w i t h g a n g l i o s i d e a n d a c i d - h y d r o l y z e d g a n g l i o s i d eA g g r e g a t i o n t i t e rC o m p o u n d c o n c n( i g / m l ) G a n g l i o s i d e A c i d - h y d r o l y z e dg a n g l i o s i d e

5 0 0 0 42 5 0 0 81 2 5 4 85 0 8 82 5 8 1 62 0 8 1 61 5 1 6 1 60 1 6 1 6

I N F E C T . I M M U N .

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SALIVARY S I A L I C ACID I N P . AERUGINOSA AGGREGATION 2 3 6 7TABLE 4 . E f f e c t o f e n z y m e s o n a g g r e g a t i n g a b i l i t y o f CF s a l i v a

E n z y m e E n z y m e a c t i v i t y P r e t r e a t e d s a l i v a( U / m l ) a g g r e g a t i o n t i t e ra - C h y m o t r y p s i n 1 9 4T r y p s i n 4 . 4 6 2S u b t i l i s i n 3 . 4 0 8C o l l a g e n a s e 1 8 0 1 6, - G a l a c t o s i d a s e 3 4 5 1 6a - M a n n o s i d a s e 1 7 1 6P - N - A c e t y l h e x o s a m i n i d a s e 5 7 1 6P r o n a s e 7 0 8A l k a l i n e p h o s p h a t a s e 5 0 1 6N e u r a m i n i d a s e 1 . 0 0C o n t r o l 1 6

a A g g r e g a t i o n t i t e r o f a l l u n t r e a t e d s a l i v a w a s 1 6 .

4 ) . T h e d e c r e a s e i n P . a e r u g i n o s a a g g r e g a t i n g a b i l i t y b ys a l i v a t r e a t e d w i t h p r o t e o l y t i c enzymes was f u r t h e r e x p l o r e db y e x a m i n i n g t h e e f f e c t s o f t h e s e enzymes on p r e f o r m e d P .a e r u g i n o s a - s a l i v a a g g r e g a t e s . T h e p r o t e o l y t i c enzymes e a c hd i s p e r s e d t h e P . a e r u g i n o s a - s a l i v a a g g r e g a t e s , b u t t h e mostp r o n o u n c e d r e d u c t i o n o f a g g r e g a t i o n i n t h e s h o r t e s t amounto f t i m e was s e e n when n e u r a m i n i d a s e was a d d e d ( T a b l e 5 ) .R o l e o f n e ur a m i n i d a se . S a l i v a- m e di a t e d P . a e r u g i n o s aa g g r e g a t i o n s i g n i f i c a n t l y d e c r e a s e d w i t h t h e a d d i t i o n o fN - a c e t y l n e u r a m i n i c a c i d a n d m i x e d g a n g l i o s i d e s t o c e l l s( T a b l e 2 ) a n d n e u r a m i n i d a s e t o s a l i v a ( T a b l e s 4 a n d 5 ) . T h e s et r e a t m e n t s a f f e c t e d t h e s i a l i c a c i d m o l e c u l e i n s a l i v a , w h i c hr e s u l t e d i n a d e c r e a s e d b i n d i n g a b i l i t y o f P . a e r u g i n o s a . Tof u r t h e r e x p l o r e t h e r o l e o f s i a l i c a c i d , s a l i v a was t r e a t e d w i t hn e u r a m i n i d a s e a n d b y a c i d h y d r o l y s i s . T h e e n z y m a t i c orc h e m i c a l r e l e a s e o f s i a l i c a c i d f r o m h e a t - t r e a t e d CF s a l i v awas c o r r e l a t e d t o t h e s u b s e q u e n t l o s s o f a g g r e g a t i n g a b i l i t yb y s a l i v a ( T a b l e 6 ) . T h e c o n t r o l d i d n o t l o s e i t s a g g r e g a t i n ga c t i v i t y nor d i d i t r e l e a s e s i a l i c a c i d over a 6 0 - m i n p e r i o d .E n d o g e n o u s n e u r a m i n i d a s e . T h e r e was a s i g n i f i c a n t d i f f e r -e n c e b e t w e e n CF a n d n o n - C F s a l i v a P . a e r u g i n o s a aggrega-t i o n ( T a b l e 1 ) . To i n v e s t i g a t e t h e s e d i f f e r e n c e s f u r t h e r ,e n d o g e n o u s n e u r a m i n i d a s e a c t i v i t y o f s a l i v a f r o m b o t h CFa n d n o n - C F s u b j e c t s was e x a m i n e d . O v e r t i m e , e n d o g e n o u sn e u r a m i n i d a s e r e l e a s e d a s i g n i f i c a n t l y h i g h e r amount o fs i a l i c a c i d f r o m C F s a l i v a t h a n f r o m n o n - C F s a l i v a ( T a b l e 7 ) .F u r t h e r m o r e , as t h e s i a l i c a c i d was r e l e a s e d f r o m s a l i v a , t h i sr e l e a s e c o i n c i d e d w i t h a l o s s o f s al i v a- m e di a t ed P . a e r u g i -n o s a a g g r e g a t i n g a b i l i t y .

DISCUSSIONI n t h i s s t u d y , s a l i v a f r o m CF p a t i e n t s s h o w e d a s i g n i f i -c a n t l y h i g h e r a g g r e g a t i n g a b i l i t y o f P . a e r u g i n o s a t h a n d i ds a l i v a f r o m n o n - C F s u b j e c t s . H o w e v e r , t h e r e w e re n om a r k e d d i f f e r e n c e s b e t w e e n t h e a c t i v i t y o f m u c o i d a n d

TABLE 5 . D i s r u p t i o n b y e nz y m e s o f P . a e r u g i n o s as a l i v a - m e d i a t e d a g g r e g a t e sEnzyme Enzyme a ct i v i t y Aggregation~ ~ ~ ~ ( U / m i ) 45 mina

C h y m o t r y p s i n 8 0 + 2T r y p s i n 1 8 , 9 5 5 + 1S u b t i l i s i n 1 4 5 + 2S u b t i l o p e p t i d a s e 1 7 + 1P r o n a s e 1 8 . 4 + 1N e u r a m i n i d a s e 0 . 0 5 0 0C o n t r o l 0 + 4a A l l a g g r e g a t e s w e r e + 4 a t 0 m i n .

TABLE 6 . E f f e c t o f n e u r a m i n i d a s e a n d a c i d h y d r o l y s i s t r e a t m e n to n t h e a g g r e g a t i o n a b i l i t y o f P . a e r u g i n o s a b y CF s a l i v aT i m e F r e e s i a l i c a c i d A g g r e g a t i o pT r e a t m e n t ( m i n ) ( p L m o l , 1 0 2 / m l ) t i t e r

N e u r a m i n i d a s e 0 0 1 61 0 0 . 8 1 62 0 3 . 2 43 0 9 . 1 26 0 2 4 . 6 0

C o n t r o l 6 0 0 1 6A c i d h y d r o l y s i s 0 0 1 61 5 0 . 8 8 1 62 0 5 . 6 6 43 0 2 0 . 4 0 0

n o n m u c o i d P . a e r u g i n o s a s t r a i n s i n s a l i v a - i n d u c e d a g g r e g a -t i o n o r i n a n y o f t h e m o d i f i c a t i o n s t u d i e s c o n d u c t e d . T h i sf i n d i n g s u g g e s t s t h a t t h e r e may b e s o m e t h i n g u n i q u e a b o u tCF s a l i v a w h i c h a l l o w s b o t h v a r i a n t s o f P . a e r u g i n o s a t oa g g r e g a t e . T h e r e s u l t s o f t h i s i n v e s t i g a t i o n h a v e p r o v i d e ds t r o n g e v i d e n c e t h a t t h e d i f f e r e n c e i n s a l i v a r y a g g r e g a t i n ga c t i v i t y b e t w e e n CF a n d n o n - C F s u b j e c t s i s d u e t o t h ed i f f e r e n t a m o u n t s o f s i a l i c a c i d p r e s e n t .I t h a s b e e n s u g g e s t e d t h a t t h e r e may b e m o r e t h a n o n es a l i v a r y f a c t o r r e s p o n s i b l e f o r b a c t e r i a l a g g r e g a t i o n ( 5 , 3 7 ) .W e h a v e s h o w n t h a t t h e f a c t o r ( s ) i n CF s a l i v a w h i c h i sr e s p o n s i b l e f o r P . a e r u g i n o s a a g g r e g a t i o n i n c l u d e s a c o m -p o n e n t t h a t w a s r e s i s t a n t t o h e a t i n g t o 5 6 C ( T a b l e 1 ) b u t w a ss e n s i t i v e t o b o i l i n g . I n c o n t r a s t , t h e a g g r e g a t i n g a c t i v i t y o fn o n - C F s a l i v a w a s a l m o s t c o m p l e t e l y d e s t r o y e d a t 5 6 C( T a b l e 1 ) a n d a t 1 0 0 C . M o d i f i c a t i o n s t u d i e s w e r e c o n d uc t e dt o e x p l o r e f u r t h e r t h e f a c t o r s r e s p o n s i b l e f o r t h e s e a g g r e g a -t i o n d i f f e r e n c e s b e t w e e n CF a n d n o n - C F s a l i v a .When P . a e r u g i n o s a c e l l s w e r e p r e i n c u b a t e d w i t h s u g a r s ,t h e r e w a s n o a p p r e c i a b l e i n h i b i t o r y e f f e c t o n a g g r e g a t i o na b i l i t y b y s a l i v a ( T a b l e 2 ) . I t h a d b e e n s u g g e s t e d b y E l l e n e ta l . ( 5 ) t h a t s a l i v a - i n d u c e d b a c t e r i a l a g g r e g a t i o n may b em e d i a t e d b y t h e i n t e r a c t i o n o f s u g a r e n d g r o u p s w i t h l e c t i n -l i k e l i g a n d s o n t h e b a c t e r i a l c e l l s . T h i s d i d n o t o c c u r i n t h ep r e s e n t s t u d y , s i n c e s a l i v a - s p e c i f i c r e c e p t o r s i t e s o n t h e c e l lw a l l o f P . a e r u g i n o s a w e r e n o t b l o c k e d b y a n y s u g a r a c t i n ga s a n a n a l o g . T h i s r e s u l t was f u r t h e r s u b s t a n t i a t e d i n a s t u d yb y K o m i y a m a e t a l . ( 1 7 ) , w h i c h a l s o s h o w e d t h a t i n t e r b a c t e -r i a l a d h e s i o n b e t w e e n s t r a i n s o f P . a e r u g i n o s a a n d i n d i g e -n o u s o r a l b a c t e r i a i s o l a t e d f r o m CF p a t i e n t s was n o t i n h i b -i t e d b y a n y s u g a r s t e s t e d .

TABLE 7 . E n d o g e n o u s n e u r a m i n i d a s e a c t i v i t y i n c l a r i f i e dCF a n d n o n - C F s a l i v aFreei a l i cc i d F r e e s i a l i c a c i dT i m e a t F r e e s i a l i c a c i d A g g r e g a t i o n t i t e r f r o m n o n - C F3 0 " C ( m i n ) f r o m CF p a t i e n t s b y CF s a l i v a a s u b j e c t s l m o l ,( p . M O l . 1 0 2 / M l ) 1 t i 2 / M l )

0 0 1 6 01 0 1 . 9 7 0 . 5 5 2 1 6 1 . 4 2 t 0 . 3 3 93 0 2 . 6 9 0 . 5 9 2 8 1 . 9 5 0 . 2 8 36 0 3 . 4 7 0 . 4 1 4 8 2 . 2 4 0 . 0 9 69 0 3 . 9 5 0 . 3 4 1 8 2 . 8 4 0 . 3 2 51 2 0 4 . 5 2 0 . 5 2 0 8 3 . 0 6 0 . 4 3 81 8 0 4 . 8 0 0 . 4 4 3 4 3 . 3 0 0 . 4 9 52 4 0 5 . 4 8 0 . 4 8 9 4 3 . 7 9 0 . 8 2 3a A g g r e g a t i o n t i t e r o f a l l n o n - C F s a l i v a w as a m b i g u o u s .

V O L . 5 5 , 1 9 8 7

8/3/2019 asam sialic

5/6

2 3 6 8 KOMIYAMA ET A L .P . a e r u g i n o s a a g g r e g a t i n g a b i l i t y w a s r e d u c e d w h e n t h eb i n d i n g s i t e s o n t h e c e l l w a l l w e r e b l o c k e d b y t h e a d d i t i o n o fm i x e d g a n g l i o s i d e s a n d N - a c e t y l n e u r a m i n i c a c i d . F u r t h e r -m o r e , t h e a c i d - h y d r o l y z e d g a n g l i o s i d e , w h i c h h a d i t ss i a l i d a s e - s e n s i t i v e s i a l i c a c i d m o l e c u l e s r e m o v e d , h a d ad e c r e a s e d i n h i b i t o r y e f f e c t ( T a b l e 3 ) . T h e r e f o r e , t h e c a p a c i t yo f CF s a l i v a , a n d t o a l e s s e r e x t e n t n o n - C F s a l i v a , t o b i n d

w i t h t h e c e l l s u r f a c e o f P . a e r u g i n o s a may b e m e d i a t e d b y as i a l i c a c i d - c o n t a i n i n g m o l e c u l e .T h i s c o n c l u s i o n w a s s u b s t a n t i a t e d w h e n t h e r e m o v a l o fs a l i v a r y s i a l i c a c i d b y p r o t e o l y t i c e n z y m e s , a c i d h y d r o l y s i s ,a n d n e u r a m i n i d a s e r e s u l t e d i n a r e d u c e d a g g r e g a t i n g a b i l i t yb y CF s a l i v a ( T a b l e s 4 t o 6 ) . T r e a t m e n t o f n o n - C F s a l i v aw i t h t h e s e e n z y m e s a l s o r e d u c e d a g g r e g a t i n g a b i l i t y , b u t i tw a s d i f f i c u l t t o a s s e s s t h e d e g r e e o f d e c r e a s e d a c t i v i t yb e c a u s e o f l o w e r o v e r a l l a g g r e g a t i o n m e d i a t e d b y n o n - C Fs a l i v a . I n s i g h t i n t o t h e s e d i f f e r e n t a g g r e g a t i n g a b i l i t i e s o f CFa n d n o n - C F s a l i v a w a s g a i n e d b y e x a m i n i n g t h e c o n t e n t o fs a l i v a r y s i a l i c a c i d o f b o t h g r o u p s . E n d o g e n o u s n e u r a m i n i -d a s e a c t i v i t y o f CF s a l i v a r e l e a s e d a h i g h e r a m o u n t o f s i a l i ca c i d t h a n d i d n o n - C F s a l i v a , r e s u l t i n g i n a p a r a l l e l l o s s o fa g g r e g a t i n g a b i l i t y ( T a b l e 7 ) .T h e s e r e s u l t s i n d i c a t e t h a t t h e a c t i v i t y o f e n d o g e n o u sn e u r a m i n i d a s e o r t h e n u m b e r o f s i a l i c a c i d m o l e c u l e s may b et h e f a c t o r d e t e r m i n i n g t h e d e g r e e o f P . a e r u g i n o s a a g g r e g a -t i o n b y s a l i v a . I t i s a l s o p o s s i b l e t h a t a g g r e g a t i n g a b i l i t yd e p e n d s o n t h e i n t e r a c t i o n o f s i a l i c a c i d w i t h i t s s u r r o u n d i n gm o l e c u l e s , s o t h a t w i t h i t s r e l e a s e a n e n v i r o n m e n t a l c h a n g en o t c o n d u c i v e t o b i n d i n g may o c c u r . T h e a d d i t i o n o f m u c i n s( b o v i n e s u b m a x i l l a r y t y p e I ) , w h i c h c o n t a i n s i a l i c a c i d a s at e r m i n a l s u g a r , d i d n o t a f f e c t a g g r e g a t i o n ( T a b l e 2 ) . T h e r e -f o r e , t h e p r o x i m i t y o f s i a l i c a c i d i n i t s s u r r o u n d i n g s may b ea s i m p o r t a n t a s t h e s i z e o f t h e a g g r e g a t i n g c o m p l e x .R e d d y e t a l . ( 3 5 ) s u g g e s t e d t h a t t h e r e a r e n o a p p a r e n ts t r u c t u r a l d i f f e r e n c e s b e t w e e n n e u t r a l a n d s i a l i c a c i d - c o n -t a i n i n g u n i t s o f n o r m a l a n d CF s a m p l e s . H o w e v e r , o u rr e s u l t s i n d i c a t e t h a t t h e s i a l i c a c i d - c o n t a i n i n g u n i t s i n CFs a l i v a a r e m o r e a v a i l a b l e f o r a g g r e g a t i o n t h a n a r e t h o s e i nn o n - C F s a l i v a . T h e s e o b s e r v a t i o n s may b e d u e t o a q u a n t i -t a t i v e d i f f e r e n c e i n t h e s i a l i c a c i d - c o n t a i n i n g u n i t s i n s a l i v ai n s t e a d o f a q u a l i t a t i v e d i f f e r e n c e . F u r t h e r m o r e , R e d d y e t a l .e x a m i n e d o l i g o s a c c h a r i d e s t r u c t u r e s o f s u b m a n d i b u l a r s a -l i v a f r o m o n l y o n e s u b j e c t i n e a c h g r o u p a n d d i d n o t d i s c u s st h e c o n t r i b u t i o n s o f p a r o t i d o r m i n o r m u c o u s g l a n d s . J u s t a st h e r e a r e s t r u c t u r a l d i f f e r e n c e s b e t w e e n t h e s i a l y l a t e dm u c i n s s y n t h e s i z e d b y g o b l e t c e l l s a n d t h o s e s y n t h e s i z e d b ym u c o u s c e l l s i n CF p a t i e n t s ( 2 1 ) , t h e r e may a l s o b e d i f f e r -e n c e s i n t h e s i a l i c a c i d u n i t c o n t r i b u t i o n s b y t h e s u b m a n d i b -u l a r - s u b l i n g u a l , p a r o t i d , a n d m i n o r m u c o u s g l a n d s o f CF a n dn o n - C F s a l i v a .O t h e r s a l i v a r y c o n s t i t u e n t s i m p l i c a t e d a s p o s s i b l y b e i n gi n v o l v e d i n a g g r e g a t i o n i n c l u d e s u c h m o l e c u l e s a s l y s o z y m e( 2 6 , 3 0 ) , s e c r e t o r y i m m u n o g l o b u l i n A ( 3 , 8 ) , a n d h i g h -

m o l e c u l a r - w e i g h t m u c i n o u s g l y c o p r o t e i n s ( 2 2 ) . I t i s t h e l a s ts i a l o g l y c o p r o t e i n s w h i c h s e e m t o b e t h e m o s t p r e d o m i n a n tc o m p o n e n t s i d e n t i f i e d i n s a l i v a r y a g g r e g a t i n g a c t i v i t i e s ( 7 ,1 6 , 2 3 ) . S a l i v a r y s i a l i c a c i d h a s b e e n i m p l i c a t e d i n t h ea g g r e g a t i o n o f S t r e p t o c o c c u s s a n g u i s ( 2 8 ) , A c t i n o m y c e sv i s c o s u s , a n d A c t i n o m y c e s n a e s l u n d i i ( 5 ) . T h e s i a l i c a c i dc o n s t i t u e n t i s a l s o a c o n t r i b u t i n g a g g r e g a t i n g f a c t o r f o rs e v e r a l o t h e r o r g a n i s m s , s u c h a s M y c o p l a s m a p n e u m o n i a e( 3 9 ) a n d E s c h e r i c h i a c o l i ( 2 4 ) , a n d s e r v e s a s a r e c e p t o r f o rv i r u s p a r t i c l e s i n v i r u s - i n d u c e d h e m a g g l u t i n a t i o n ( 3 8 ) . T h eo t h e r i m p o r t a n t f u n c t i o n o f s i a l i c a c i d h a s b e e n i t s a b i l i t y t of u r t h e r t h e a t t a c h m e n t a n d s u b s e q u e n t i n f e c t i v i t y o f v i r u s e s( 3 8 ) , w h i c h may p a r a l l e l a s i t u a t i o n i n CF i n w h i c h t h e

s a l i v a r y a c t i v i t y i n P . a e r u g i n o s a a g g r e g a t i o n may h a v e ar o l e i n t h e c o l o n i z a t i o n b y t h i s p a t h o g e n o f t h e r e s p i r a t o r yt r a c t .B a c t e r i a l a d h e r e n c e t o h o s t t i s s u e s i s a n e c e s s a r y r e q u i r e -m e n t f o r c o l o n i z a t i o n . H o w e v e r , l a r g e n u m b e r s o f c e l l sw o u l d n e e d t o b e p r e s e n t i n s a l i v a b e f o r e i t b e c o m e ss t a t i s t i c a l l y p r o b a b l e t h a t o n e c e l l w o u l d b e c o m e a t t a c h e d t oa n o r a l s u r f a c e ( 9 ) a n d n o t b e w a s h e d a w a y b y t h e c l e a r i n gm e c h a n i s m s ( 1 0 , 2 2 ) . O u r s t u d y s h o w e d t h a t t h e s i a l i c a c i dm o i e t y c o u l d p r o v i d e l a r g e n u m b e r s o f a g g r e g a t e d P . a e r u -g i n o s a i n s a l i v a . T h e r e f o r e , i t i s i n t e r e s t i n g t o s p e c u l a t e t h a ts i a l i c a c i d - i n d u c e d a g g r e g a t i o n may p l a y a r o l e i n t h e a d h e r -e n c e o f P . a e r u g i n o s a i n t h e o r a l c a v i t i e s o f CF s u b j e c t s .M o r e o v e r , s i n c e s i a l i c a c i d i s p r e s e n t i n m u c i n o u s c o a t i n g so f e p i t h e l i a l c e l l s , a d h e r e n c e may a l s o o c c u r b y t h i s m o l e -c u l e a c t i n g a s a r e c e p t o r f o r t h e a g g r e g a t e d b a c t e r i a . I t w asd e m o n s t r a t e d b y Woods e t a l . ( 4 7 ) t h a t r e m o v a l o f f i b r o -n e c t i n f a c i l i t a t e s a d h e r e n c e o f P . a e r u g i n o s a t o b u c c a l c e l l s .R a m p h a l e t a l . ( 3 1 , 3 4 ) a l s o s h o w e d t h a t i n j u r e d o r a l t e r e dt r a c h e a l c e l l s i n c r e a s e d a d h e r e n c e o f P . a e r u g i n o s a . T h u s ,t h e d i f f e r e n c e i n P . a e r u g i n o s a a d h e r e n c e a n d c o l o n i z a t i o ni n CF a n d n o n - C F s u b j e c t s may b e d u e t o b o t h t h e s i a l i c a c i dc o n t e n t a n d some o t h e r c h e m i c a l o r p h y s i c a l c h a n g e o n t h es u r f a c e s .R a m p h a l a n d P y l e ( 3 2 ) h y p o t h e s i z e d t h a t t h e s i t u a t i o n i nc y s t i c f i b r o s i s may i n v o l v e s t a g n a n t m u c i n s e n c o u r a g i n gp r o l i f e r a t i o n o f P . a e r u g i n o s a . H o w e v e r , i t i s j u s t a s l i k e l yt h a t c o l o n i z a t i o n b y P . a e r u g i n o s a i n CF p a t i e n t s may b ef a c i l i t a t e d b y i n c r e a s e d a d h e r e n c e t o o r a l s u r f a c e s ( 9 ) , b ys i a l i c a c i d a c t i n g a s a r e c e p t o r i n t h e l o w e r r e s p i r a t o r y t r a c t( 3 2 , 3 3 ) , o r b y t h e i n h a l a t i o n o f l a r g e c l u m p s o f P . a e r u g i n o s af o r m e d b y t h e s i a l i c a c i d s a l i v a r y a g g r e g a t i n g f a c t o r ( 4 5 ) .

ACKNOWLEDGMENTST h i s i n v e s t i g a t i o n w a s s u p p o r t e d b y a g r a n t f r o m t h e C a n a d i a nC y s t i c F i b r o s i s F o u n d a t i o n .W e t h a n k S . P a t o l a f o r h e r c l i n i c a l a s s i s t a n c e i n t h e CF c l i n i c ,

U n i v e r s i t y H o s p i t a l , S a s k a t o o n , S a s k a t c h e w a n , C a n a d a .LITERATURE CITED1 . A y a r s , G . H . , L . C . A l t m a n , a n d M. D . F r e t w e l l . 1 9 8 2 . E f f e c t o fd e c r e a s e d s a l i v a t i o n a n d p H o n t h e a d h e r e n c e o f K l e b s i e l l as p e c i e s t o h u m a n b u c c a l e p i t h e l i a l c e l l s . I n f e c t . I m m u n . 3 8 :1 7 9 - 1 8 2 .2 . B e a c h e y , E . H . 1 9 8 1 . A d h e s i o n - r e c e p t o r i n t e r a c t i o n s m e d i a t i n gt h e a t t a c h m e n t o f b a c t e r i a t o m u c o s a l s u r f a c e s . J . I n f e c t . D i s .1 4 3 : 3 2 5 - 3 4 5 .3 . B r a t t h a l l , D . , a n d A . C a r l e n. 1 9 7 8 . S a l i v a r y a g g l u t i n i n s a n ds e c r e t o r y I g A r e a c t i o n s w i t h o r a l s t r e p t o c o c c i . S c a n d . J . D e n t .R e s . 8 6 : 4 3 0 - 4 4 3 .4 . D i a z , F . , L . L . M o s o v i c h , a n d E . N e t e r . 1 9 7 0 . S e r o g r o u p s o fP s e u d o m o n a s a e r u g i n o s a a n d t h e i m m u n e r e sp o n se o f p a t i e n t sw i t h c y s t i c f i b r o s i s . J . I n f e c t . D i s . 1 2 1 : 2 6 9 - 2 7 4 .5 . E l l e n , R . P . , D . B r a t t h a l l , M. B o r g s t r o m , a n d T . P . H o w l e y .1 9 8 3 . A c t i n o m y c e s v i s c o s u s a n d A c t i n o m y c e s n a e s l u n d i i i nh u m a n s a l i v a . S c a n d . J . D e n t . R e s . 9 1 : 2 6 3 - 2 7 3 .6 . E l l e n , R . P . , E . D . F i l l e r y , a n d K . S e c k i n g t o n . 1 9 8 3 . I n f r e q u e n tp o l y s a c ch a r id e c o h e si o n a m o n g A c t i n o m y c e s v i s c o s u s a n dA c t i n o m y c e s n a e s l u n d i i f r e s h i s o l a t e s a t h u m a n o r i g i n . J .P e r i o d o n t a l R e s . 1 8 : 5 0 - 5 5 .7 . E r i c k s o n , T . , A . C a r l e n , a n d E . D a g e r s k o g . 1 9 7 6 . S a l i v a r ya g g r e g a t i n g f a c t o r s , p . 1 5 1 - 1 6 2 . I n H . M . S t i l e s , W. J . L o e s c h e ,a n d T . C . O ' B r i e n ( e d . ) , M i c r o b i a l a s p e c t s o f d e n t a l c a r i e s , v o l .2 . I n f o r m a t i o n R e t r i e v a l , I n c . , W a s h i n g t o n , D . C .8 . G a h n b e r g , L . , J . O l s s o n , B . K r a s s e , a n d A . C a r l i n . 1 9 8 2 .I n t e r f e r e n c e o f s a l i v a r y i m m u n o g l o b u l i n A a n t i b o d i e s a n d o t h e rs a l i v a r y f r a c t i o n s w i t h a d h e r e n c e o f S t r e p t o c o c c u s m u t a n s t oh y d r o x y a p a t i t e . I n f e c t . I m m u n . 3 7 : 4 0 1 - 4 0 6 .9 . G i b b o n s , R . J . 1 9 7 7 . A d h e r e n c e o f b a c t e r i a t o h o s t t i s s u e s , p .

I N F E C T . IMMUN.

8/3/2019 asam sialic

6/6

SALIVARY SIALIC ACID IN P . AERUGINOSA AGGREGATION 2 3 6 93 9 5 - 4 0 6 . I n D . S c h l e s s i n g e r ( e d . ) , M i c r o b i o l o g y - 1 9 7 7 . A m e r i -c a n S o c i e t y f o r M i c r o b i o l o g y , W a s h i n g t o n , D . C .1 0 . G i b b o n s , R . J . 1 9 8 2 . I n f l u e n c e o f s a l i v a r y c o m p o n e n t s o nb a c t e r i a l a d h e s i o n , p . 2 8 2 - 2 8 5 . I n D . S c h l e s s i n g e r ( e d . ) , M i c r o -b i o l o g y - 1 9 8 2 . A m e r i c a n S o c i e t y f o r M i c r o b i o l o g y , W a s h i n g -t o n , D . C .1 1 . G i b b o n s , R . J . , a n d D . M. S p i n e l l . 1 9 7 0 . S a l i v a r y i n d u c e da g g r e g a t i o n o f p l a q u e b a c t e r i a , p . 2 0 7 - 2 1 5 . I n W. B . McHugh( e d . ) , D e n t a l p l a q u e . L i v i n g s t o n , E d i n b u r g h .1 2 . G o l u b , E . E . , M. T h a l e r , C . D a v i s , a n d D . M a l a m u d . 1 9 7 9 .B a c t e r i a l a g g r e g a t i n g a c t i v i t y i n h u m a n s a l i v a : s i m u l t a n e o u sd e t e r m i n a t i o n o f f r e e a n d b o u n d c e l l s . I n f e c t . I m m u n . 2 6 :1 0 2 8 - 1 0 3 4 .1 3 . H o i b y , N . 1 9 7 4 . P s e u d o m o n a s a e r u g i n o s a i n f e c t i o n i n c y s t i cf i b r o s i s . R e l a t i o n s h i p b e t w e e n m u c o i d s t r a i n s o f P s e u d o m o n a sa e r u g i n o s a a n d t h e h u m o r a l r e s p o n s e . A c t a P a t h o l . M i c r o b i o l .S c a n d . S e c t . B 8 2 : 5 5 1 - 5 5 8 .1 4 . H o i b y , N . 1 9 8 2 . M i c r o b i o l o g y o f l u n g i n f e c t i o n s i n c y s t i c f i b r o s i sp a t i e n t s . A c t a P a e d i a t r . S c a n d . S u p p l . 3 0 1 : 3 3 - 5 4 .1 5 . J o h a n s o n , W. G . , J r . , D . E . W o o d s , a n d T . C h a u d h u r i . 1 9 7 9 .A s s o c i a t i o n o f r e s p i r a t o r y t r a c t c o l o n i z a t i o n w i t h a d h e r e n c e o fg r a m - n e g a t i v e b a c i l l i t o e p i t h e l i a l c e l l s . J . I n f e c t . D i s . 1 3 9 :6 6 7 - 6 7 3 .1 6 . K a s h k e t , S . , a n d C . G . D o n a l d s o n . 1 9 7 2 . S a l i v a - i n d u c e d a g g r e -g a t i o n o f o r a l s t r e p t o c o c c i . J . B a c t e r i o l . 1 1 2 : 1 1 2 7 - 1 1 3 3 .1 7 . K o m i y a m a , K . , B . F . H a b b i c k , a n d R . J . G i b b o n s . 1 9 8 7 . I n t e r -b a c t e r i a l a d h e s i o n b e t w e e n P s e u d o m o n a s a e r u g i n o s a a n d i n d i g -e n o u s o r a l b a c t e r i a i s o l a t e d f r o m p a t i e n t s w i t h c y s t i c f i b r o s i s .C a n . J . M i c r o b i o l . 3 3 : 2 7 - 3 2 .1 8 . K o m i y a m a , K . , B . F . H a b b i c k , T . M a r t i n , a n d S . K . T u m b e r .1 9 8 7 . C h a r a c t e r i z a t i o n b y p y o c i n e t y p i n g a n d s e r o t y p i n g o f o r a la n d s p u t u m s t r a i n s o f P s e u d o m o n a s a e r u g i n o s a i s o l a t e d f r o mc y s t i c f i b r o s i s p a t i e n t s . C a n . J . M i c r o b i o l . 3 3 : 2 2 1 - 2 2 5 .1 9 . K o m i y a m a , K . , J . J . T y n a n , B . F . H a b b i c k , D . E . D u n c a n , a n dD . J . L i e p e r t . 1 9 8 5 . P s e u d o m o n a s a e r u g i n o s a i n t h e o r a l c a v i t ya n d s p u t u m o f p a t i e n t s w i t h c y s t i c f i b r o s i s . O r a l S u r g . O r a lM e d . O r a l P a t h o l . 5 9 : 5 9 0 - 5 9 4 .2 0 . L a m , J . , R . C h a n , K . L a m , a n d J . W. C o s t e r t o n . 1 9 8 0 . P r o d u c -t i o n o f m u c o i d m i c r o c o l o n i e s b y P s e u d o m o n a s a e r u g i n o s aw i t h i n i n f e c t e d l u n g s i n c y s t i c f i b r o s i s . I n f e c t . Immun.2 8 : 5 4 6 - 5 5 6 .2 1 . L a m b l i n , G . , A . B o e r s m a , A . K l e i n , P . R o u s s e l , H . v a n H a l b e e k ,a n d J . F . G . V l i e g e n t h a r t . 1 9 8 4 . P r i m a r y s t r u c t u r e d e t e r m i n a t i o no f f i v e s i a l y l a t e d o l i g o s a c c h a r i d e s d e r i v e d f r o m b r o n c h i a l mucusg l y c o p r o t e i n s o f p a t i e n t s s u f f e r i n g f r o m c y s t i c f i b r o s i s . J . B i o l .C h e m . 2 5 9 : 9 0 5 1 - 9 0 5 8 .2 2 . L e v i n e , M. J . , M. C . H e r z b e r g , M. S . L e v i n e , S . A . E l l i s o n ,M. W. S t i n s o n , H . C . L i , a n d T . Va n D y k e . 1 9 7 8 . S p e c i f i c i t y o fs a l i v a r y - b a c t e r i a l i n t e r a c t i o n s : r o l e o f t e r m i n a l s i a l i c a c i d r e s i -d u e s i n t h e i n t e r a c t i o n o f s a l i v a r y g l y c o p r o t e i n s w i t h S t r e p t o -c o c c u s s a n g u i s a n d S t r e p t o c o c c u s m u t a n s . I n f e c t . I m m u n .1 9 : 1 0 7 - 1 1 5 .2 3 . L i l j e m a r k , W. F . , C . G . B l o o m q u i s t , a n d J . C . O f s t e h a g e . 1 9 7 9 .A g g r e g a t i o n a n d a d h e r e n c e o f S t r e p t o c o c c u s s a n g u i s : r o l e o fhuman s a l i v a r y i m m u n o g l o b u l i n A . I n f e c t . I m m u n . 2 6 :1 1 0 4 - 1 1 1 0 .2 4 . L i n d a h l , M . , A . F a r i s , a n d T . W a d s t r o m . 1 9 8 2 . C o l o n i z a t i o nf a c t o r a n t i g e n o n e n t e r o t o x i g e n i c E s c h e r i c h i a c o l i i s a s i a l i ca c i d - s p e c i f i c l e c t i n . L a n c e t i i : 2 8 0 .2 5 . L i n d e m a n n , R . A . , M. G . N e w m a n , A . K . K a u f m a n , a n d T . V .L e . 1 9 8 5 . O r a l c o l o n i z a t i o n a n d s u s c e p t i b i l i t y t e s t i n g o f P se u -d o m o n a s a e r u g i n o s a o r a l i s o l a t e s f r o m c y s t i c f i b r o s i s p a t i e n t s .J . D e n t . R e s . 6 4 : 5 4 - 5 7 .2 6 . M a l a m u d , D . , B . A p p e l b a u m , R . K l i n e , a n d E . E . G o l u b . 1 9 8 1 .B a c t e r i a l a g g r e g a t i n g a c t i v i t y i n human s a l i v a : c o m p a r i s o n s o fb a c t e r i a l s p e c i e s a n d s t r a i n s . I n f e c t . I m m u n . 3 1 : 1 0 0 3 - 1 0 0 6 .2 7 . M a r k s , M. I . 1 9 8 1 . T h e p a t h o g e n e s i s a n d t r e a t m e n t o f p u l m o -n a r y i n f e c t i o n s i n p a t i e n t s w i t h c y s t i c f i b r o s i s . J . P e d i a t r .9 8 : 1 7 3 - 1 7 9 .2 8 . M c B r i d e , B . C . , a n d M. T . G i s s l o w . 1 9 7 7 . R o l e o f s i a l i c a c i d i ns a l i v a - i n d u c e d a g g r e g a t i o n o f S t r e p t o c o c c u s s a n g u i s . I n f e c t .

I m m u n . 1 8 : 3 5 - 4 0 .2 9 . P i e r , G . B . 1 9 8 5 . P u l m o n a r y d i s e a s e a s s o c i a t e d w i t h P s e u d o m o -n a s a e r u g i n o s a i n c y s t i c f i b r o s i s : c u r r e n t s t a t u s o f t h e h o s t -b a c t e r i u m i n t e r a c t i o n . J . I n f e c t . D i s . 1 5 1 : 5 7 5 - 5 8 0 .3 0 . P o l l a c k , J . J . , V . J . I a c o n o , H . G . B i c k e r , B . J . M a c K a y , L . I .K a t o n a , L . B . T a i c h m a n , a n d E . T h o m a s . 1 9 7 6 . T h e b i n d i n g ,a g g r e g a t i o n , a n d l y t i c p r o p e r t i e s o f l y s o z y m e , p . 3 2 5 - 3 5 2 . I nH . M . S t i l e s , W. J . L o e s c h e , a n d T . C . O ' B r i e n ( e d . ) , M i c r o b i a la s p e c t s o f d e n t a l c a r i e s , v o l . 2 . I n f o r m a t i o n R e t r i e v a l , I n c . ,W a s h i n g t o n , D . C .3 1 . R a m p h a l , R . , a n d M. P y l e . 1 9 8 3 . A d h e r e n c e o f m u c o i d a n dn o n m u c o i d P s e u d o m o n a s a e r u g i n o s a t o a c i d - i n j u r e d t r a c h e a le p i t h e l i u m . I n f e c t . I m m u n . 4 1 : 3 4 5 - 3 5 1 .3 2 . R a m p h a l , R . , a n d M. P y l e . 1 9 8 3 . E v i d e n c e f o r m u c i n s a n d s i a l i ca c i d a s r e c e p t o r s f o r P s e u d o m o n a s a e r u g i n o s a i n t h e l o w e rr e s p i r a t o r y t r a c t . I n f e c t . I m m u n . 4 1 : 3 3 9 - 3 4 4 .3 3 . R a m p h a l , R . , a n d M. P y l e . 1 9 8 5 . F u r t h e r c h a r a c t e r i z a t i o n o f t h et r a c h e a l r e c e p t o r f o r P s e u d o m o n a s a e r u g i n o s a . E u r . J . C l i n .M i c r o b i o l . 4 : 1 6 0 - 1 6 2 .3 4 . R a m p h a l , R . , P . M. S m a l l , J . W. S h a n d s , J r . , W. F i s c h l s c h -w e i g e r , a n d P . A . S m a l l , J r . 1 9 8 0 . A d h e r e n c e o f P s e u d o m o n a sa e r u g i n o s a t o t r a c h e a l c e l l s i n j u r e d b y i n f l u e n z a i n f e c t i o n o r b ye n d o t r a c h e a l i n t u b a t i o n . I n f e c t . I m m u n . 2 7 : 6 1 4 - 6 1 9 .3 5 . R e d d y , M. S . , M. J . L e v i n e , a n d A . P r a k o b p h o l . 1 9 8 5 . O l i g o s a c -c h a r i d e s t r u c t u r e s o f t h e l o w - m o l e c u l a r - w e i g h t s a l i v a r y m u c i ni n a n o r m a l i n d i v i d u a l a n d o n e w i t h c y s t i c f i b r o s i s . J . D e n t . R e s .6 4 : 3 3 - 3 6 .3 6 . R o s a n , B . , B . A p p e l b a u m , E . G o l u b , D . M a l a m u d , a n d I . D .M a n d e l . 1 9 8 2 . E n h a n c e d s a l i v a - m e d i a t e d b a c t e r i a l a g g r e g a t i o na n d d e c r e a s e d b a c t e r i a l a d h e s i o n i n c a r i e s - r e s i s t a n t v e r s u sc a r i e s - s u s c e p t i b l e i n d i v i d u a l s . I n f e c t . I m m u n . 3 8 : 1 0 5 6 - 1 0 5 9 .3 7 . R o s a n , B . , D . M a l a m u d , B . A p p e l b a u m , a n d E . G o l u b . 1 9 8 2 .C h a r a c t e r i s t i c d i f f e r e n c e s b e t w e e n s a l i v a - d e p e n d e n t a g g r e g a -t i o n a n d a d h e s i o n o f s t r e p t o c o c c i . I n f e c t . I m m u n . 3 5 : 8 6 - 9 0 .3 8 . S c h l o e m e r , R . H . , a n d R . R . W a g n e r . 1 9 7 4 . S i a l o g l y c o p r o t e i n o fv e s i c u l a r s t o m a t i t i s v i r u s : r o l e o f t h e n e u r a m i n i c a c i d i n i n f e c -t i o n . J . V i r o l . 1 4 : 2 7 0 - 2 8 1 .3 9 . S o b e s l a v s k y , O . , B . P r e s c o t t , a n d R . M. C h a n o c k . 1 9 6 8 , A b s o r p -t i o n o f M y c o p l a s m a p n e u m o n i a e t o n e u r a m i n i c a c i d r e c e p t o r so f v a r i o u s c e l l s a n d p o s s i b l e r o l e i n v i r u l e n c e . J . B a c t e r i o l .9 6 : 6 9 5 - 7 0 5 .4 0 . V a l e n t i , W. M . , R . G . T r u d e l l , a n d D . W. B e n t l e y . 1 9 7 8 . F a c t o r sp r e d i s p o s i n g t o o r o p h a r y n g e a l c o l o n i z a t i o n w i t h g r a m - n e g a t i v eb a c i l l i i n t h e a g e d . N . E n g l . J . M e d . 2 9 8 : 1 1 0 8 - 1 1 1 1 .4 1 . v a n H e y n i g e n , W. E . , a n d J . M e l l a n b y . 1 9 7 3 . A n o t e on t h es p e c i f i c f i x a t i o n , s p e c i f i c d e a c t i v a t i o n a n d n o n - s p e c i f i c i n a c t i v a -t i o n o f b a c t e r i a l t o x i n s b y g a n g l i o s i d e s . N a u n y n - S c h m i e d e b e r g sA r c h . P h a r m a k o l . 2 7 6 : 2 9 7 - 3 0 2 .4 2 . W a r r e n , L . 1 9 5 9 . T h e t h i o b a r b i t u r i c a c i d a s s a y o f s i a l i c a c i d s . J .B i o l . C h e m . 2 3 4 : 1 9 7 1 - 1 9 7 5 .4 3 . W e e r k a m p , A . H . , a n d B . C . M c B r i d e . 1 9 8 0 . A d h e r e n c e o fS t r e p t o c o c c u s s a l i v a r i u s H B a n d HB-7 t o o r a l s u r f a c e s a n ds a l i v a - c o a t e d h y d r o x y a p a t i t e . I n f e c t . I m m u n . 3 0 : 1 5 0 - 1 5 8 .4 4 . W o o d , R . E . , T . F . B o a t , a n d C . F . D o e r s h u k . 1 9 7 6 . C y s t i cf i b r o s i s . Am. R e v . R e s p i r . D i s . 1 1 3 : 8 3 3 - 8 7 8 .4 5 . W o o d s , D . E . 1 9 8 3 . P u l m o n a r y i n f e c t i o n i n c y s t i c f i b r o s i s , p .4 - 1 5 . I n C y s t i c F i b r o s i s F o u n d a t i o n ( e d . ) , P u l m o n a r y i n f e c t i o ni n c y s t i c f i b r o s i s . G u i d a n c e , A c t i o n , P r o j e c t i o n ( G A P ) c o n f e r -e n c e p r o c e e d i n g s . C y s t i c F i b r o s i s F o u n d a t i o n , R o c k v i l l e , M d .4 6 . W o o d s , D . E . , J . A . B a s s , W. G . J o h a n s o n , J r . , a n d D . C . S t r a u s .1 9 8 0 . R o l e o f a d h e r e n c e i n t h e p a t h o g e n e s i s o f P s e u d o m o n a sa e r u g i n o s a l u n g i n f e c t i o n i n c y s t i c f i b r o s i s p a t i e n t s . I n f e c t .I m m u n . 3 0 : 6 9 4 - 6 9 9 .4 7 . W o o d s , D . E . , D . C . S t r a u s , W. G . J o h a n s o n , J r . , a n d J . A . B a s s .1 9 8 1 . R o l e o f f i b r o n e c t i n i n t h e p r e v e n t i o n o f a d h e r e n c e o fP s e u d o m o n a s a e r u g i n o s a t o b u c c a l c e l l s . J . I n f e c t . D i s . 1 4 3 :7 8 4 - 7 9 0 .4 8 . W o o d s , D . E . , D . C . S t r a u s , W. G . J o h a n s o n , J r . , V . K . B e r r y ,a n d J . A . B a s s . 1 9 8 0 . R o l e o f p i l i i n a d h e r e n c e o f P s e u d o m o n a sa e r u g i n o s a t o m a m m a l i a n b u c c a l e p i t h e l i a l c e l l s . I n f e c t . I m -mun. 2 9 : 1 1 4 6 - 1 1 5 1 .

V O L . 5 5 , 1 9 8 7