Alkaloid
-
Upload
lutfi-anggraini -
Category
Documents
-
view
102 -
download
0
Transcript of Alkaloid
PENGARUH PEMBEgraecum L)
DAN GAMBARAN YANG
FAKUNIV
MAUL
BERIAN EKSTRAK BIJI KLABET (Trigonella TERHADAP KADAR GLUKOSA DARAH
N HISTOLOGI PANKREAS MENCIT ( Mus muNG TERPAPAR STREPTOZOTOCIN
SKRIPSI
Oleh: FIDZARO
NIM. 05520016
JURUSAN BIOLOGI KULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI IVERSITAS ISLAM NEGERI (UIN)
ULANA MALIK IBRAHIM MALANG 2010
lla foenum-
musculus)
PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK BIJI KLABET (Trigonella foenum- graecum L) TERHADAP KADAR GLUKOSA DARAH DAN
GAMBARAN HISTOLOGI PANKREAS MENCIT (Mus musculus) YANG TERPAPAR STREPTOZOTOCIN
SKRIPSI
Diajukan Kepada : Fakultas Sains dan Teknologi
Universitas Islam Negeri (UIN) Maulana Malik Ibrahi m Malang Untuk Memenuhi Salah Satu Persyaratan
Dalam Memperoleh Gelar Sarjana Sains (S.Si)
Oleh :
FIDZARO NIM : 05520016
JURUSAN BIOLOGI FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI UNIVERSITAS ISLAM NEGERI (UIN)
MAULANA MALIK IBRAHIM MALANG 2010
SURAT PERNYATAAN
ORISINILITAS PENELITIAN
Saya yang betanda tangan di bawah ini :
Nama : Fidzaro
NIM : 05520016
Fakultas/Jurusan : Sains dan Teknologi /Biologi
Judul Penelitian :Pengaruh Pemberian Ekstrak Biji Klabet (Trigonella
foenum graecum L) terhadap Kadar Glukosa Darah dan
Gambaran Histologi Pankreas Mencit (Mus musculus)
yang Terpapar Streptozotocin
Menyatakan dengan sebenar-benarnya bahwa hasil penelitian saya ini
tidak terdapat unsur-unsur penjiplakan karya penelitian atau karya ilmiah yang
pernah dilakukan atau dibuat oleh orang lain, kecuali yang secara tertulis dikutip
dalam naskah ini dan disebutkan dalam sumber kutipan dan daftar pustaka.
Apabila ternyata hasil penelitian ini terbukti terdapat unsur-unsur jiplakan,
maka saya bersedia untuk mempertanggung jawabkan, serta diproses sesuai
peraturan yang berlaku.
Malang, 12 Januari 2010
Yang Membuat Pernyataan
Fidzaro
NIM. 05520016
PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK BIJI KLABET (Trigonella foenum-graecum L) TERHADAP KADAR GLUKOSA DARAH DAN
GAMBARAN HISTOLOGI PANKREAS MENCIT (Mus musculus) YANG TERPAPAR STREPTOZOTOCIN
SKRIPSI
Oleh:
FIDZARO NIM. 05520016
Telah Disetujui oleh:
Pembimbing I
Dra. Retno Susilowati, M.Si NIP. 1967113 199402 2 001
Pembimbing II
Dr. Ahmad Barizi, MA NIP. 19731212 199803 1 001
Tanggal, 12 Januari 2010 Mengetahui
Ketua Jurusan Biologi
Dr. Eko Budi Minarno, M.Pd NIP. 19630114 199903 1 001
PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK BIJI KLABET (Trigonella foenum- graecum L) TERHADAP KADAR GLUKOSA DARAH DAN
GAMBARAN HISTOLOGI PANKREAS MENCIT (Mus musculus) YANG TERPAPAR STREPTOZOTOCIN
SKRIPSI
Oleh:
FIDZARO NIM. 05520016
Telah Dipertahankan Di depan Dewan Penguji Skripsi dan
Dinyatakan Diterima Sebagai Salah Satu Persyaratan Untuk Memperoleh Gelar Sarjana Sains (S.Si)
Tanggal, 12 Januari 2010
Susunan Dewan Penguji Tanda Tangan
1. Penguji Utama
: Dr. drh. Bayyinatul M, M.Si NIP. 19710919 200003 2 001
( )
2. Ketua : Kiptiyah, M.Si NIP. 19731005 200212 2 003
( )
3. Sekretaris : Dra. Retno Susilowati, M.Si NIP. 1967113 199402 2 001
( )
4. Anggota : Dr. Ahmad Barizi, MA NIP. 19731212 199803 1 001
( )
Mengetahui dan mengesahkan
Ketua Jurusan Biologi
Dr. Eko Budi Minarno, M.Pd NIP. 19630114 199903 1 003
Assalamu'alaikum Wr. W
Segala puji bagi
penulis dapat menyelesa
memperoleh gelar Sarja
yang telah berpartisipas
ini, iringan doa dan ucap
khususnya kepada:
1. Prof. Dr. H. Imam S
Maulana Malik Ibra
2. Prof. Drs. H. Sutim
Sains dan Teknolog
Malang.
3. Dr. Eko Budi Mina
dan Teknologi Uni
Malang.
4. Dra. Retno Susilo
memberikan arahan
skripsi ini.
5. Dr. Ahmad Barizi, M
yang selalu member
6. Ir. Liliek Harianie,
saran serta nasehat k
7. Segenap Dosen Jur
Islam Negeri (UIN)
8. Seluruh Dosen Un
Malang.
KATA PENGANTAR
. Wb.
gi Allah SWT karena atas rahmat, taufiq dan hid
lesaikan penulisan skripsi sebagai salah satu sya
rjana Sains (S.Si). Penulis menyadari bahwa ban
asi dan membantu dalam menyelesaikan penulis
apan terima kasih yang sebesar-besarnya penulis s
Suprayogo selaku Rektor Universitas Islam Neg
rahim Malang.
iman Bambang Sumitro, SU., DSc. selaku Dekan
ogi Universitas Islam Negeri (UIN) Maulana Mal
inarno, M.Pd. selaku Ketua Jurusan Biologi Faku
niversitas Islam Negeri (UIN) Maulana Malik
silowati, M.Si. selaku dosen pembimbing y
an bimbingan kepada penulis sehingga dapat ter
i, M.A, selaku Dosen pembimbing integrasi Sains
erikan bimbingan kepada penulis.
e, M.Si. selaku Dosen wali yang telah memberik
t kepada penulis.
Jurusan Biologi Fakultas Sains dan Teknologi U
N) Maulana Malik Ibrahim Malang.
Universitas Islam Negeri (UIN) Maulana Malik
hidayah-Nya,
syarat untuk
anyak pihak
lisan skripsi
is sampaikan
egeri (UIN)
kan Fakultas
alik Ibrahim
akultas Sains
alik Ibrahim
yang telah
terselesaikan
ins dan Islam
rikan banyak
i Universitas
alik Ibrahim
9. Bapak, Ibu dan keluarga besarku tercinta yang dengan sepenuh hati
memberikan dukungan moril maupun spirituil serta ketulusan do'anya
sehingga penulisan skripsi dapat terselesaikan.
10. Teman-teman yang kami banggakan, BIOLOGI angkatan 2005 Universitas
Islam Negeri (UIN) Maulana Malik Ibrahim Malang.
11. Serta semua pihak yang telah bersedia membantu demi terselesainya
penyusunan skripsi ini.
Tiada yang dapat penulis lakukan selain berdo’a semoga Allah SWT
memberikan imbalan yang lebih baik. Semoga skripsi ini dapat bermanfaat dan
menambah khasanah ilmu pengetahuan.
Wassalamu'alaikum Wr. Wb.
Malang, 12 Januari 2010
Penulis
DAFTAR ISI
KATA PENGANTAR ........................................................................................ i DAFTAR ISI .................................................................................................... iii DAFTAR TABEL ............................................................................................. v DAFTAR GAMBAR ........................................................................................ vi DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................... vii ABSTRAK . .................................................................................................... viii BAB I PENDAHULUAN 1.1 Latar belakang ............................................................................................... 1 1.2 Rumusan masalah ......................................................................................... 6 1.3 Tujuan penelitian .......................................................................................... 6 1.4 Hipotesis ........................................................................................................ 6 1.5 Manfaat penelitian ......................................................................................... 6 1.6 Batasan masalah ............................................................................................. 7 BAB II TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Mencit (Mus musculus) ................................................................................. 8 2.2 Biji Klabet (Trigonella foenum graecum L) .................................................. 11 2.2.1 Ciri-ciri dan klasifikasi biji klabet(Trigonella foenum graecum L) ............ 11 2.2.2 Kandungan kimia dan manfaat biji klabet (Trigonella foenum graecum L) 13 2.3 Diabetes mellitus......................................................................................... 15 2.3.1 Pengertian diabetes mellitus ...................................................................... 15 2.3.2 Patofisiologi diabetes mellitus................................................................... 16 2.3.3 Macam-macam diabetes mellitus .............................................................. 17 2.3.4 Gejala diabetes mellitus ............................................................................ 19 2.3.5 Diagnosis diabetes mellitus ....................................................................... 20 2.4 Keterlibatan hormone pada penderita diabetes mellitus ............................... 21 2.4.1 Pankreas ................................................................................................... 21 2.4.2 Insulin ...................................................................................................... 24 2.4.3 Pengaturan kadar glukosa darah ................................................................ 26 2.4.4 Radikal bebas, oksidan dan antioksidan .................................................... 29 2.5 Pengobatan diabetes mellitus ...................................................................... 31 2.5.1 Obat hiperglikemik ................................................................................... 32 2.5.2 Terapi Insulin ........................................................................................... 32 2.5.3 Pengobatan dengan bahan alam................................................................. 33 2.6 Streptozotocin ............................................................................................. 34 2.7 Pencegahan penyakit ................................................................................... 36 BAB III METODE PENELITIAN 3.1 Rancangan penelitian ................................................................................... 37 3.2 Variabel penelitian ....................................................................................... 37 3.3 Waktu dan tempat ........................................................................................ 37 3.4 Populasi dan sampel ..................................................................................... 38 3.5 Alat dan bahan ............................................................................................. 38
3.6 Kegiatan penelitian ..................................................................................... 38 3.6.1 Persiapan hewan coba ............................................................................... 38 3.6.2 Pembuatan ekstrak biji klabet ................................................................... 39 3.6.3 Penghitungan dosis ................................................................................... 40 3.6.4 Prosedur perlakuan ................................................................................... 41 3.6.5 Pembuatan preparat sayatan pankreas ....................................................... 42 3.7 Analisis data ............................................................................................... 44 BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN 4.1 Hasil ............................................................................................................ 45 4.1.1 Histologi pankreas mencit (Mus musculus) diabetes .................................. 45 4.1.2 Kadar glukosa darah pada mencit (Mus musculus) diabetes ....................... 46 4.2 Pembahasan ................................................................................................ 49 BAB V KESIMPULAN DAN SARAN 5.1 Kesimpulan .................................................................................................. 56 5.2 Saran ..... ...................................................................................................... 56 DAFTAR PUSTAKA ...................................................................................... 57 LAMPIRAN ..................................................................................................... 61
DAFTAR TABEL
Tabel 2.1. Data biologi mencit (Mus musculus) .................................................... 8
Tabel 4.1 Ringkasan uji BNT 5% kadar glukosa darah mencit diabetes .............. 47
Tabel 4.2 Ringkasan uji BNT terhadap kadar glukosa darah mencit diabetes ...... 48
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1 a. Tanaman Klabet (Trigonella foenum-graecum L) ........................ 11 b. Biji Klabet (Trigonella foenum-graecum L) ................................. 11
Gambar 2.2. Pankreas ........................................................................................ 22
Gambar 2.3. Kumpulan sel-sel pankreas ............................................................ 23
Gambar 2.4. Keseimbangan glukosa peran insulin, glukagon, amylin, dan GLP-1 ..................................................................................... 27
Gambar 2.5. Struktur kimia streptozotocin ......................................................... 34
Gambar 4.1. Penampang melintang pankreas perbesaran 10×40 ......................... 45 Gambar 4.2. Diagram batang nilai rerata perubahan kadar glukosa darah
sebelum dan sesudah pemberian ekstrak biji klabet (Trigonela foenum graecum L) ...................................................... 49
Gambar 4.3 Reaksi penghambatan antioksidan primer terhadap radikal lipida .... 51 Gambar 4.4. Antioksidan bertindak sebagai prooksidan pada
konsentrasi tinggi .......................................................................... 52
DAFTAR LAMPIRAN Lampiran 1. Kerangka konsep penelitian ........................................................... 61 Lampiran 2. Diagram alur penelitian .................................................................. 62 Lampiran 3. Prosedur ekstraksi biji klabet .......................................................... 63 Lampiran 4. Skor tingkat kerusakan pankreas .................................................... 64 Lampiran 5. Data kadar gukosa darah (mg/dl) mencit sebelum dan sesudah
perlakuan satu bulan ...................................................................... 66 Lampiran 6. Perhitungan Analisis Kovarian (ANKOVA) kadar glukosa darah
mencit diabetes .............................................................................. 68 Lampiran 7. Gambar alat penelitian ................................................................... 76 Lampiran 8. Gambar bahan penelitian ................................................................ 77 Lampiran 9. Gambar perlakuan penelitian .......................................................... 78
ABSTRAK
Fidzaro, 2010. Pengaruh Pemberian Ekstrak Biji Klabet (Trigonella Foenum-Graecum L) terhadap Kadar Glukosa Darah dan Gambaran Histologi Pankreas Mencit (Mus Musculus) yang Terpapar Streptozotocin. Skripsi. Jurusan Biologi Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Islam Negeri (UIN) Maulana Malik Ibrahim Malang.
Pembimbing: Dra. Retno Susilowati, M.Si.
Kanta Kunci: Diabetes mellitus, Trigonella foenum graecum L, radikal bebas, antioksidan
Diabetes mellitus adalah gangguan metabolisme yang secara genetis dan
klinis termasuk heterogen dengan manifestasi berupa hilangnya toleransi karbohidrat. Jika berkembang penuh secara klinis, maka diabetes mellitus ditandai dengan hiperglikemia puasa dan prostpandial, aterosklerotik dan penyakit vaskular mikroangiopati dan neuropati. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh pemberian ekstrak biji klabet (Trigonella foenum-graecum L.) terhadap kadar glukosa darah dan gambaran histologi pankreas pada mencit (Mus musculus) diabetes yang diinduksi dengan steptozotocin.
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental dengan menggunakan Rancangan Acak Kelompok (RAK) dengan 5 perlakuan dan 5 ulangan. Perlakuan yang digunakan adalah mencit kontrol negatif (tanpa perlakuan), mencit kontrol positif (diabetes tanpa pemberian ekstrak biji klabet) dan mencit diabetes yang diberi ekstrak biji klabet dengan 3 dosis yang berbeda (dosis I= 0,88 mg/ekor/hr, dosis II= 1,76 mg/ekor/hr, dosis III= 3,52 mg/ekor/hr). Data dengan perhitungan Analisis kovarians jika menunjukkan beda nyata maka diuji lanjut dengan uji BNT 5%, untuk mengetahui derajat insulitis skor = 0, jika tidak terdapat kerusakan. Nilai skor = 1 jika terdapat ¼ kerusakan, nilai skor = 2 untuk ½ kerusakan, dan nilai skor = 3 untuk kerusakan lebih dari ½ dari islet. Kemudian data skor tingkat kerusakan islet pankreas dianalisis dengan non-parametrik Kruskal Wallis.
Hasil uji penelitian ini menunjukkan bahwa ekstrak biji klabet (Trigonella foenum graecum L) memberikan pengaruh terhadap penurunan kadar glukosa darah pada mencit (Mus musculus) diabetes yang diinduksi dengan streptozotocin. Kadar glukosa darah mencit diabetes kelompok perlakuan ekstrak biji klabet (dosis I,II,III) kembali normal sedangkan dosis optimum yang menurunkan kadar glukosa darah adalah dosis 2 (1,76 mg/ekor/hr). Perbaikan struktur islet pankreas tampak pada kelompok perlakuan jika dibandingkan dengan kelompok mencit diabetes kontrol positif, hal tersebut dapat diketahui dari skor kerusakan pankreas setiap preparat.
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Manusia merupakan makhluk ciptaan Allah yang paling sempurna dari
makhluk yang lain. Tubuhnya tersusun sedemikian rupa sehingga dapat
melakukan berbagai proses metabolisme didalamnya. Oleh karena itu, manusia
hendaknya selalu menjaga keseimbangan tubuhnya agar selalu dalam keadaan
sehat dan homeostatis. Menurut Campbell (2004), homeostatis adalah suatu
keadaan dinamis, suatu keterkaitan antara gaya luar yang cenderung mengubah
lingkungan internal dan mekanisme kontrol internal yang melawan perubahan
tersebut. Apabila terdapat ketidakseimbangan, maka akan terjadi suatu kelainan
yang disebut dengan penyakit.
Dalam Islam juga telah dijelaskan bagaimana seharusnya manusia hidup
menjaga keseimbangan pola makan dan minum, seperti firman Allah dalam surat
Al-A’raf ayat 31:
�#θè=à2�ρ��#θç/��õ° �# �ρ��ω�ρ��#þθ èùÎ� ô£è@�4�…ç� ‾ΡÎ)��ω��=Ït ä†��Ïù Î� ô£ßϑø9 �#�∩⊂⊇∪�
Artinya: Makan dan minumlah tetapi jangan berlebih-lebihan. Sesungguhnya Allah tidak menyukai orang-orang yang berlebih-lebihan (QS. Al-A’raf:31).
Menurut Al-Jauziah (2008), Rasulullah juga memberi petunjuk kepada
ummatnya mengenai makanan dan minuman yang meliputi pencegahan ‘over
dosis’(�� �# þθ èùÎ� ô£è@ω �ρ), menghindari makanan berlebihan, dan aturan-aturan lain yang
harus diperhatikan karena sepertiga perut digunakan untuk makanan, sepertiga
untuk air, dan sepertiga lagi untuk udara. Ini adalah cara makan terbaik, baik
untuk tubuh maupun untuk hati. Makanan dapat menyerang, merugikan, dan
merubah fungsi normal tubuh jika jumlahnya berlebihan. Sebagian besar penyakit
terjadi karena konsumsi makanan yang berlebihan atau melebihi kebutuhan tubuh.
Saat ini, banyak orang yang masih menganggap penyakit diabetes
merupakan penyakit orang tua atau penyakit yang hanya timbul karena faktor
keturunan. Padahal, setiap orang dapat mengidap diabetes, baik tua maupun muda.
Menurut data WHO, Indonesia menempati urutan ke-4 terbesar dalam jumlah
penderita diabetes mellitus di dunia setelah India, Cina, dan Amerika Serikat.
Pada tahun 2000 lalu, terdapat sekitar 5,6 juta penduduk Indonesia yang mengidap
penyakit diabetes (Maulana, 2008).
Diabetes mellitus (DM) adalah suatu penyakit metabolik yang ditandai
oleh hiperglikemia. Penyakit ini dapat terjadi sekunder akibat respon abnormal
jaringan perifer terhadap insulin. Insulin merupakan salah satu hormon dalam
tubuh manusia yang dihasilkan oleh sel β pulau Langerhans. Pulau-pulau
Langerhans (islets of Langehans) adalah suatu kumpulan sel-sel endokrin yang
terdiri dari beberapa tipe sel, yang terbanyak adalah sel beta penghasil insulin
membentuk 70% populasi sel. Sel-sel alfa mensekresikan glukagon, sel-sel delta
yang mensekresikan somatostatin dan polipeptida usus vasoaktif (vasoactive
intestinal polypeptide, VIP); dan sel-sel PP mensekresikan polipeptida pankreas
(Damjanov, 2000).
Dalam keadaan normal bila kadar glukosa darah naik maka insulin akan
dikeluarkan dari kelenjar pankreas dan masuk ke dalam aliran darah. Didalam
aliran darah insulin akan menuju ke tempat kerjanya (reseptor) yaitu 50% ke hati;
10-20% ke ginjal; dan 30-40% bekerja pada sel darah, otot, dan jaringan lemak
(Dalimartha, 2007). Jika tubuh tidak memproduksi insulin dalam jumlah yang
cukup atau insulin yang tersedia tidak bekerja sebagaimana mestinya, maka sel-sel
jaringan tubuh tidak dapat terbuka dan ini akan menyebabkan glukosa terkumpul
dalam darah sehingga terjadilah diabetes mellitus (Maulana, 2008).
Streptozotocin merupakan derivat nitrosuria yang diisolasi dari
Streptomyces achromogenes yang mempunyai aktivitas anti-neoplasma dan
antibiotik spektrum luas. Streptozotosin dapat secara langsung merusak masa
kritis sel β Langerhans atau menimbulkan proses autoimun terhadap sel β
sehingga lebih banyak digunakan dalam pembuatan hewan uji diabetes mellitus.
DM tipe 1 juga dapat dirancang pada hewan uji melalui pankreatektomi total
ataupun secara genetik sehingga mengakibatkan disfungsi pankreas dalam
mensekresi insulin (Rowland dan Bellush; 1989; Rees dan Alcolado, 2005 dalam
Nugroho, 2006).
Menurut Radji (2005), tanaman telah lama kita ketahui merupakan salah
satu sumber daya yang sangat penting dalam upaya pengobatan dan upaya
mempertahankan kesehatan masyarakat. Menurut perkiraan badan kesehatan
dunia (WHO), 80% penduduk dunia masih menggantungkan pada pengobatan
tradisional termasuk penggunaan obat yang berasal dari tanaman. Sampai saat ini,
satu per-empat dari obat-obat modern yang beredar di dunia berasal dari bahan
aktif yang diisolasi dan dikembangkan dari tanaman. Indonesia yang dikenal
sebagai salah satu dari 7 negara yang keanekaragaman hayatinya terbesar ke-2,
sangat potensial dalam mengembangkan obat herbal yang berbasis pada tanaman
obat kita sendiri. Tumbuhan tersebut menghasilkan metabolit sekunder dengan
struktur molekul dan aktivitas biologik yang beraneka ragam, memiliki potensi
yang sangat baik untuk dikembangkan menjadi obat berbagai penyakit.
Pada zaman Rasulullah telah direkomendasikan yang dikenal sebagai
Thibbunnabawi (kedokteran nabi), telah ditulis buku terkenal oleh Ibnul Qoyyim
Al Jauzi tentang semua jenis obat dan pengobatan berbasis sunnah Rasulullah
diantaranya Habbah Sauda, Fanugreek, Madu, Zaitun. Dari Abu Qasim bin
Abdurrahman, Rasulallah SAW bersabda: "Berobatlah dengan hulba". Para tabib
mengatakan: “kalau saja manusia mengetahui khasiat hulbah, niscaya mereka
akan membelinya sekalipun seharga emas” (Mahmud, 2007).
Imam Muslim meriwayatkan dalam kitab Shahih-nya dari hadist Abu
Zubair yang meriwayatkan dari Jabir bin Abdullah bahwa nabi bersabda, yang
artinya sebagai berikut: “Setiap penyakit ada obatnya. Jika obat yang tepat
diberikan, dengan izin Allah, penyakit itu akan sembuh”. (HR. Ahmad dan
Hakim). Hadist shahih tersebut mengandung makna bahwa segala hal yang terjadi
di dunia ada sebab dan cara untuk menghilangkannya. Rasulullah menyatakan
bahwa ketika penyakit bertemu obat yang tepat, maka penyakit dapat
disembuhkan. Sebaliknya, obat yang diberikan melebihi dosis atau tidak sesuai
dengan penyakitnya dapat menimbulkan jenis penyakit lain (Al-Juziah, 2008).
Trigonella foenum-graecum L (fenugreek, hulbah) di Indonesia dikenal
dengan nama klabet, banyak digunakan sebagai obat tradisional. Tanaman ini
pertama kali ditemukan di wilayah Mediteran dan banyak dikultivasi di Afrika
Utara dan India. Di India, varietas kerdil ditanam untuk bumbu dapur, dan yang
tumbuh tinggi digunakan sebagai makanan. Bijinya berwarna kuning dan rasanya
pahit (Widowati, 1989). Biji klabet mempunyai kandungan kimia antara lain
alkoloid trigonelina, steroida, saponin, diogenin, gitogenin, trigogenin,
yamomogenin, trilin diosin, flavonoid vitexin, enzim (Utami, 2008).
Kegunaannya selain untuk meringankan sakit ginjal, gangguan usus,
aprodisiaka, demam dan rematik juga digunakan sebagai anti diabetes,
hipokolesterolemik, hipoglikemik, dan hipolipidemik. Aktivitas menurunkan
glukosa darah (hipoglikemik) adalah bijinya daripada daunnya, karena getahnya
masih terdapat dalam biji yang tidak hilang waktu proses pemasakan. Diduga
kandungan alkaloid dan flavonoid dalam biji klabet yang mempunyai aktivitas
hipoglikemik (Widowati, 1989).
Biji klabet mudah didapat dan harganya relatif terjangkau oleh semua
masyarakat, yang telah dipercaya kaya akan manfaat. Kandungan alkoloid dan
flavonoid dalam biji klabet diduga berfungsi sebagai alternatif pengobatan bagi
penderita diabetes mellitus. Atas dasar tersebut, dilakukan penelitian tentang
pengaruh ekstrak biji klabet menggunakan tiga dosis berbeda terhadap kadar
glukosa darah dan gambaran histologi pankreas mencit yang terpapar
streptozotocin.
1.2 Rumusan masalah
Berdasarkan latar belakang tersebut maka rumusan masalah pada
penelitian ini adalah: apakah pemberian ekstrak biji klabet (Trigonella foenum-
graecum L.) berpengaruh terhadap kadar glukosa darah dan gambaran histologi
pankreas mencit (Mus musculus) yang terpapar streptozotocin?
1.3 Tujuan
Tujuan dari penelitian ini adalah: untuk mengetahui pengaruh pemberian
ekstrak biji klabet (Trigonella foenum graecum L.) terhadap kadar glukosa darah
dan gambaran histologi pankreas mencit (Mus musculus) yang terpapar
streptozotocin.
1.4 Hipotesis
Ada pengaruh pemberian ekstrak biji klabet (Trigonella foenum graecum
L.) terhadap kadar glukosa darah dan gambaran histologi pankreas mencit (Mus
musculus) diabetes yang terpapar steptozotocin.
1.5 Manfaat
Manfaat dari penelitian ini adalah memberikan informasi kepada
masyarakat luas tentang ekstrak biji klabet (Trigonella foenum graecum L) dapat
digunakan sebagai alternatif dalam pengobatan diabetes melitus dan memperbaiki
histologi sel-sel beta pankreas.
1.6 Batasan Masalah
a. Pengamatan pada penelitian ini meliputi pengukuran kadar glukosa darah
dan gambaran histologi pankreas mencit
b. Hewan coba yang digunakan adalah mencit (Mus musculus) galur Balb/c
jenis kelamin jantan, umur 2 bulan dengan berat badan rata-rata 20 g
c. Dosis ekstrak biji klabet (Trigonella foenum graecum L.) yang digunakan
pada penelitian ini adalah 0,88 mg/ekor/hari, 1,76 mg/ekor/hari dan 3,52
mg/ekor/hari.
BAB II
KAJIAN PUSTAKA
2.1 Mencit (Mus musculus)
Mencit termasuk dalam genus Mus, sub famili murinae, famili muridae,
order rodentia. Mencit yang sudah dipelihara di laboratorium sebenarnya masih
satu famili dengan mencit liar. Sedangkan mencit yang paling sering dipakai
untuk penelitian biomedis adalah Mus musculus. Berbeda dengan hewan-hewan
lainnya, mencit tidak memiliki kelenjar keringat. Pada umur empat minggu berat
badannya mencapai 18-20 gram. Jantung terdiri dari empat ruang dengan dinding
atrium yang tipis dan dinding ventrikel yang lebih tebal. Hewan ini memiliki
karakter lebih aktif pada malam hari daripada siang hari. Diantara spesies-spesies
hewan lainnya, mencit yang paling banyak digunakan untuk tujuan penelitian
medis (60-80%) karena murah dan mudah berkembang biak (Kusumawati, 2004).
Table 2.1 Data Biologi Mencit Kriteria Jummlah
Berat badan (jantan) 20-40 gram Lama hidup 1-3 tahun Temperature tubuh 36.5 0C Kebutuhan air Ad libtum Kebutuhan makan 4-5 g/hari Pubertas 28-49 hari Glukosa 62,8-176 mg/dL Kolesterol 26,0-82,4 mg/dL SGOT 23,2-48,4 IU/I SGPT 2,10-23,8 IU/I
Sumber: Kusumawati, 2004
Allah telah berfirman dalam surat An-Nuur ayat 45 tentang penciptaan
hewan, sebagai berikut:
�! �#�ρ��,�=�{�¨≅ ä.�7π−/# �Š�ÏiΒ�& $ ¨Β�(�Νåκ÷] Ïϑ ù�Β�Å ôϑ �ƒ��’ �?�ã�Ï�ÏΖ ôÜ�/�Νåκ÷] ÏΒ �ρ�Β�Å ôϑ �ƒ��’ �?�ã�
È÷� �ô_ Í‘�Νåκ ÷] ÏΒ�ρ�Β�Å ôϑ�ƒ��’ �?�ã�8ì �/ ö‘ &�4�ß, è=øƒ †��! �#�$ �Β�â $ �± �„�4�¨βÎ)��!�#��’ �? �ã�Èe≅à2�& ó�«�Ö�ƒ ω%�
∩⊆∈∪�
Artinya: Dan Allah Telah menciptakan semua jenis hewan dari air, Maka
sebagian dari hewan itu ada yang berjalan di atas perutnya dan sebagian berjalan dengan dua kaki sedang sebagian (yang lain) berjalan dengan empat kaki. Allah menciptakan apa yang dikehendaki-Nya, Sesungguhnya Allah Maha Kuasa atas segala sesuatu (QS. an-Nuur:45).
Ayat tersebut menggambarkan tentang sebagian dari cara hewan berjalan.
Ada yang berjalan dengan perutnya, ada yang berjalan dengan kaki. Dan diantara
hewan yang berjalan diatas kakinya tersebut, ada yang berkaki dua dan ada yang
berkaki empat. Sebagian hewan ada yang berkaki enam atau bahkan berkaki
banyak. Fenomena keanekaragaman hewan tersebut sangat unik untuk dikaji guna
membedakan antara hewan yang satu dengan yang lainnya. Umumnya manusia
membedakan hewan berdasarkan ciri-ciri yang diamati, penampilan, makanan,
tingkah laku, cara berkembang biak, habitatnya dan lain-lain (Rossidy, 2008).
Az-Zabidi (1997) menyatakan bahwa Nabi Muhammad saw bersabda:
�������إ��ا����� �رى�ل�ر��:�ه� �ة�ل����أ������ل�ا%�&"��ا%��"�$�و�"!� ��ت�أ
�� 4"�3و��أراه�إ��ا(2ر�أ��/�و1*�إذا�و,+�(*�أ()ن�ا���0(!�/.��$�واذا�و,+�(*�ا()ن�
7��6$�ا(.ء
Artinya: Satu kaum dari Bani Israil telah hilang lenyap tanpa diketahui sebab apa yang dikerjakan dan tidak terlihat kecuali (dalam bentuk) tikus. Tidaklah
kamu lihat jika (tikus itu) diberi susu unta ia tidak meminumnya, tetapi jika diberi susu kambing ia meminumnya (HR. Bukhari & Muslim).
Hadist tersebut menyatakan bahwa jika (tikus itu) diberi susu unta ia tidak
meminumnya, tetapi jika diberi susu kambing ia meminumnya, hal tersebut
mengisyaratkan tentang sifat dari seekor tikus yang bisa memilih makanan yang
lebih disukainya. Terbukti dengan pemberian pakan pada tikus tidaklah
sembarangan, akan tetapi diberikan pakan yang biasa tikus itu makan atau
kesukaannya, misalkan diberikan pellet biasa dan pellet yang kandungan
jagungnya lebih banyak maka tikus akan cenderung memakan pellet yang
mengandung jagung yang lebih banyak.
Mencit dipilih menjadi subyek eksperimental sebagai bentuk relevansinya
pada manusia. Walaupun mencit mempunyai struktur fisik dan anatomi yang jelas
berbeda dengan manusia, tetapi mencit adalah hewan mamalia yang mempunyai
beberapa ciri fisiologi dan biokomia yang hampir menyerupai manusia terutama
dalam aspek metabolisme glukosa melalui perantaraan hormon insulin.
Disamping itu, mempunyai jarak gestasi yang pendek untuk berkembang biak
(Syahrin, 2006).
2.2 Biji Klabet (Trigonella foenum graecum L)
2.2.1 Ciri-ciri dan Klasifikasi Biji Klabet (Trigonella foenum graecum L)
Terna tahunan, tumbuh tegak, tinggi 30-60 cm. Daun berbentuk bulat
telur terbalik sampai bentuk baji. Bunga tunggal atau sepasang, keluar di ketiak
daun, mahkota berwarn
berbentuk lanset. Buah b
Berikut ini adalah gamba
a Gambar 2.1 a. Tana
Berikut ini adalah klasifi
Kingdom plantae Divisi magnoliophyt
Kelas magnoliopOrdo fabale
FamilG
Allah telah berfir
bijian, sebagai berikut:
Artinya: Lalu kami tumb
rna kuning terang. Buah polong gundul, meman
h berisi 10 sampai 20 biji (Soedibyo, 1998).
bar dari tumbuhan dan biji klabet:
b naman Klabet b. Biji Klabet ( Trigonella foenum-graecum
(Savitri, 2008)
sifikasi klabet:
hyta liopsida ales mili fabaceae
Genus trigonella Spesies Trigonella foenum graecum (Savi
rfirman dalam surat Abasa ayat 27 tentang penci
$$ {7 �m∩⊄∠∪
mbuhkan biji-bijian di bumi itu (QS. Abasa: 27)
anjang atau
um L)
avitri, 2008)
nciptaan biji-
$ �Ζ÷K�7�Ρ ' ù$ �κ�Ïù
Ayat tersebut menyebutkan tentang biji yang berkulit. Itu bukan berarti
al-Qur’an membatasi hanya pada biji yang berkulit saja, tetapi merupakan bukti
bahwa perhatian yang istimewa terhadap biji sebagai syarat ilmiah agar biji dikaji
dan dipelajari. Isyarat yang diberikan al-Qur’an tidak terbatas itu, tetapi juga
menunjukkan bahwa biji itu ada yang dapat dimakan dan ada yang tidak (Rossidy,
2008). Selain itu Allah SWT juga firman dalam surat Asy-Syu’ara ayat 7 sebagai
berikut:
öΝ9 �ρ &��#÷ρ���ƒ�’ �<Î)�ÇÚ ö‘ �{�#�ö��.�$�Ψ ÷G�;�Ρ &�$�κ�Ïù�ÏΒ�Èe≅ä.�8l÷ρ �—�AΟƒÍ��.�∩∠∪�
Artinya: Dan apakah mereka tidak memperhatikan bumi, berapakah banyaknya
kami tumbuhkan di bumi itu pelbagai macam tumbuh-tumbuhan yang baik? (QS. Al-Syu’ara’: 7).
Ayat tersebut telah menjelaskan bahwa fenomena tumbuhan yang
beranekaragam secara morfologi menampakkan gambaran yang unik tersendiri.
Morfologi tumbuhan tidak hanya menguraikan bentuk dan susunan tumbuh-
tumbuhan saja, tetapi juga menentukan fungsi masing-masing bagian dalam
kehidupan tumbuhan, dan untuk mengetahui dari mana asal bentuk dan susunan
yang sedemikian itu. Maha besar Allah SWT yang telah menciptakan
keanekaragaman dunia tumbuhan dengan berbagai perbedaan dan persamaannya.
Ada tumbuahan yang sama sekali berbeda dengan tumbuhan lain, ada yang mirip
tetapi berbeda, ada yang sedikit perbedaan dan banyak persamaannya (Rossidy,
2008).
2.2.2 Kandungan Kimia dan Manfaat Biji Klabet (Trigonella foenum-graecum
L)
Biji klabet mengandung beberapa minyak esensial. Dalam minyak
esensial terdapat 40 komponen yang berbeda, yaitu n-alkanes, sesquiterpen,
alkanoles, dan laktone. Komponen aroma yang dominan pada biji klabet adalah
heiterpenoid a-laktone, setolone (3-hydroxy4,5-dimethyl-2 (5H)-furanone),
dengan konsentrasi lebih dari 25 ppm (Savitri, 2008). Biji klabet digunakan
sebagai bahan obat anti diabetik karena biji klabet mengandung berbagai senyawa
kimia yaitu lendir, protein, saponin, alkaloid, flavonoid dan steroid (Widowati,
1989).
Biji fenugreek mengandung 45-60% karbohidrat, terutama mucilaginous
serat (galactomannans); 20-30% protein tinggi lisin dan triptofan; 5-10% minyak
tetap (lipid); piridina-jenis alkaloid, terutama trigonelline (0,2-0,36%), kolin
(0,5%), gentianine dan carpaine; yang flavonoid apigenin, luteolin, orientin,
quercetin, vitexin dan isovitexin; asam amino bebas, seperti 4 --
hydroxyisoleucine (0,09%); arginin, histidin dan lisin, kalsium dan besi; saponin
(0,6-1,7%); menghasilkan steroid glikosida sapogenins pada hidrolisis (diosgenin,
yamogenin, tigogenin, neotigogenin); kolesterol dan sitosterol; vitamin A, B, C
dan nikotinat asam senyawa coumarin dan 0,015% volatile oils (nalkanes dan
sesquiterpenes) (El-Soud, 2007).
Golongan flavonoid dapat digambarkan sebagai deretan senyawa C6 – C3
– C6. Artinya, kerangka karbonnya terdiri atas dua gugus C6 (cincin benzene
substitusi) disambungkan oleh rantai alifatik. Flavonoid mencakup banyak
pigmen yang paling umum dan terdapat pada seluruh dunia tumbuhan mulai dari
fungus sampai angiospermae. Efek flavonoid terhadap macam-macam organisme
sangat banyak macamnya, oleh karena itu dapat dipakai dalam pengobatan
tradisional. Flavonoid bekerja sebagai inhibitor kuat pernapasan, flavonoid
bertindak sebagai penampung yang baik radikal hidroksi dan superoksida dan
dengan demikian melindungi lipid membran terhadap reaksi yang merusak
(Robinson, 1995).
Beberapa khasiat biji klabet yaitu untuk mengobati asma, batuk, haid
tidak teratur membangkitkan nafsu makan, pencernaan tidak baik, radang
lambung, sakit kerongkongan, wasir, bisul (obat luar), rambut rontok (obat luar),
rematik, nyeri otot (obat luar), pelembut kulit (kosmetika) (Soedibyo, 1998).
Allah SWT berfirman dalm al-Qur’an surat Thaha ayat 53-54, sebagai
berikut:
“Ï� ©��#��≅ �è �_�ãΝä3 9��Ú ö‘ �{�#�#Y‰ ôγ�Β��7 �= �™�ρ�öΝä39�$�κ�Ïù�Wξç7 ß™��Α�“Ρ &�ρ��ÏΒ�Ï $ �ϑ ¡¡9�#�[ $ �Β�
$ �Ψ ô_��÷z 'ù�ÿÏ�Î/�%[`≡ �ρø— &�ÏiΒ�;N$ �7‾Ρ��®L�©�∩∈⊂∪��#θ è=ä.��# öθ�ã ö‘ �#�ρ�öΝä3�ϑ≈�è ÷Ρ &�3�¨β Î)�’Îû��7 Ï9≡Œ�;M≈�ƒ �ψ�
’ Í< �ρ��{��‘�‘Ζ9 �#�∩∈⊆∪�
Artinya: 53. Yang Telah menjadikan bagimu bumi sebagai hamparan dan yang
Telah menjadikan bagimu di bumi itu jalan-ja]an, dan menurunkan dari langit air hujan. Maka kami tumbuhkan dengan air hujan itu berjenis-jenis dari tumbuh-tumbuhan yang bermacam-macam. 54. Makanlah dan gembalakanlah binatang-binatangmu. Sesungguhnya pada yang demikian itu, terdapat tanda-tanda kekuasaan Allah bagi orang-orang yang berakal (QS. Thaha: 53-54).
Ayat di atas dengan jelas menerangkan bahwa tumbuhan diciptakan
berjenis-jenis dan bermacam-macam. Tidak dapat dipungkiri bahwa
keanekaragaman tumbuhan adalah fenomena alam yang harus dikaji dan
dipelajari, untuk dimanfaatkan sepenuhnya bagi kesejahteraan manusia. Secara
ekologis tumbuh-tumbuhan sebagai produsen memiliki peranan yang sangat
penting. Kemampuan tumbuhan untuk merubah energi dari matahari berupa
cahaya menjadi energi kimia yang tidak dapat dilakukan oleh organisme lain.
Perubahan itu hanya dapat dilakukan oleh tumbuhan melalui peristiwa
fotosintesis. Itupun hanya dapat dilakukan oleh tumbuhan yang memiliki klorofil.
Hal tersebut fenomena alam yang merupakan bagian dari tanda-tanda kekuaaan
Allah SWT. Dan jelas bahwa tanda-tanda itu hanya dapat diketahui oleh orang-
orang yang berakal (Rossidy, 2008).
2.3 Diabetes Mellitus
2.3.1 Pengertian Diabetes Mellitus
Diabetes mellitus (DM) berasal dari kata Yunani diabetes artinya
mengalir terus, mellitus berarti madu atau manis. Istilah tersebut menunjukkan
tentang keadaan tubuh penderita, yaitu adanya cairan manis yang terus mengalir
(Dalimartha, 2007). Diabetes mellitus adalah gangguan metabolisme yang secara
genetis dan klinis termasuk heterogen dengan manifestasi berupa hilangnya
toleransi karbohidrat. Jika berkembang penuh secara klinis, maka diabetes
mellitus ditandai dengan hiperglikemia puasa dan prostpandial, aterosklerotik dan
penyakit vaskular mikroangiopati dan neuropati. Penderita dengan kalainan
toleransi glukosa ringan (gangguan glukosa puasa dan gangguan toleransi
glukosa) dapat tetap beresiko mengalami komplikasi metabolik diabetes (Price
dan Lorraine, 1999).
2.3.2 Patofisiologi Diabetes Melllitus
Sebagian besar patologi diabetes mellitus dapat dikaitkan dengan satu
dari tiga efek utama kekurangan insulin sebagai berikut: 1) pengurangan
penggunaan glukosa oleh sel-sel tubuh, dengan akibat peningkatan konsentrasi
glukosa darah setinggi 300-1200 mg/100 ml, 2) peningkatan nyata mobilisasi
lemak dari daerah-daerah penyimpanan lemak, menyebabkan kelainan
metabolisme lemak maupun pengendapan lipid pada dinding vaskular yang
mengakibatkan aterosklerosis, dan 3) pengaturan protein dalam jaringan tubuh.
Akan tetapi, selain itu terjadi beberapa masalah patofisiologis pada diabetes
mellitus yang tidak mudah tampak, yaitu kehilangan glukosa ke dalam urine
penderita diabetes (Setiadi, 2007).
Glukosa mewakili kira-kira 80% dari hasil pencernaan karbohidrat yang
terdiri dari galaktosa dan fruktosa. Kegagalan pengambilan glukosa oleh sel target
menjadi masalah utama gangguan metabolisme glukosa sehingga menyebabkan
hiperglisemia. Keadaan ini menyebabkan glukosa diekskresi dalam urin yang
biasa disebut sebagai glikosuria. Hiperglisemia tidak mengganggu kesehatan
tubuh, akan tetapi jika kadar glukosa plasma melebihi nilai ambang batas yaitu
kira-kira 10 mmol/L dan ginjal gagal menyerap kembali glukosa yang dihasilkan
di glomerulus ginjal, akibatnya terjadi diuresis osmotik. Selain itu, poliuria,
dehidrasi dan kenaikan osmolaritas cair intrasel dan ekstrasel yang berfungsi
merangsang pusat haus di otak untuk minum air lebih dari keadaan normal untuk
menggantikan air yang hilang dari tubuh (Catherine, 1999 dalam Syahrin 2006).
2.3.3 Macam-macam Diabetes Mellitus
Pada kenyataannya ada 2 bentuk diabetes dengan sebab yang berbeda,
yaitu sebagai berikut:
a. Insulin-dependent diabetes mellitus (IDDM), atau diabetes tipe I
Diabetes tipe I (diabetes terkait insulin) adalah suatu gangguan autoimun,
dimana sistem kekebalan melancarkan serangan pada sel-sel pankreas. IDDM
merupakan penyakit yang terjadi akibat cidera pulau Langerhans dan rusaknya
sel-sel beta penghasil insulin. Kadang-kadang hipoglikemia dapat berkaitan
dengan suatu penyakit virus akut. Faktor-faktor autoimun diperkirakan
memperantai cidera sel pulau Langerhans ini, tetapi patogenesis pasti dari
penyakit ini belum diketahui (Campbell, 2000).
Jika insulin tidak ada maka produk sampingan hasil penghancuran lemak
dan otot akan menumpuk dalam darah dan menghasilkan suatu zat yang disebut
keton. Jika hal ini dibiarkan terus-menerus, jumlahnya akan meningkat hingga
seseorang tersebut mengalami ketoasidosis koma. Kadar insulin plasma sangat
rendah dan terjadi ketoasidosis jika pasien tidak mendapat insulin eksogen. Pada
stadium awal diabetes tipe I masih terdapat insulin yang cukup untuk mencegah
ketoasidosis dan penderita tidak bergantung insulin (Rudy W, 2003).
Penyakit ini mengenai penderita yang berusia muda (kurang dari 30
tahun). Biasanya penderita akan menunjukkan ciri-ciri klinikal seperti polidipsia,
poliuria, ketoasidosis koma, berat badan turun yang progresif, letih, polifagia dan
hilang kontrol pundi kencing pada anak-anak. Selain itu, IDDM dicirikan oleh
kekurangan insulin secara nyata akibat kerusakan atau penyusutan bilangan sel β
yang parah. Keadaan ini disebabkan oleh tiga mekanisme yang saling berkaitan
yaitu persekitaran, vulnerabiliti genetik dan keautoimunan (Syahrin, 2006).
b. Non-insulin dependent diabetes mellitus (NIDDM), atau diabetes tipe II
Menurut Chandrasoma (2006), diabetes yang tidak bergantung pada
insulin ini, bahkan lebih sulit dimengerti. Dua faktor yang telah diidentifikasi
yaitu:
1) Gangguan pelepasan insulin: sekresi basal insulin sering kali normal, tetapi
pelepasan cepat setelah makan sangat terganggu sehingga terjadi kegagalan
pengolahan muatan karbohidrat. Sekresi insulin fase lambat juga normal pada
stadium awal, tetapi terganggu pada stadium lanjut. Namun, masih ada insulin
yang bertahan pada kadar tertentu dalam sebagian besar penderita sehingga
kelainan metabolisme glukosa terbatas, dan ketoasidosis jarang terjadi. Pada
penderita ini memiliki pola pewarisan gen tunggal autosomal dominan.
Diperkirakan bahwa pewarisan pola sekresi insulin yang cacat menyebabkan
kecenderungan diabetes pada keluarga. Mekanisme pewarisan ini sangat rumit
dan mungkin melibatkan gen-gen multipel.
2) Resistensi insulin: kecacatan pada respon jaringan terhadap insulin yang
disebabkan oleh kecacatan reseptor insulin pada sel target. Resistensi insulin
terjadi pada keadaan hamil dan obesitas. Pada orang normal yang hamil atau
obesitas, sel β meningkatkan sekresi insulin sebagai kompensasi. Penderita
yang mempunyai kerentanan genetik tehadap diabetes tidak dapat
berkompensasi karena cacat warisan pada sekresi insulin. Jadi, diabetes tipe II
sering dipicu oleh obesitas dan kehamilan. Pada penderita dengan dengan
resistensi insulin yang ekstrem, antibodi terhadap reseptor insulin ditemukan di
dalam plasma. Pengurangan jumlah resptor insulin, kerusakan ikatan antara
insulin dan reseptor, dan kelainan pada proses selular terjadinya ikatan juga
dipostulasikan sebagai penyebab resistensi insulin.
Diabetes mellitus tipe II terjadi karena kombinasi dari kecacatan dalam
produksi insulin dan resistensi terhadap insulin atau berkurangnya sensifitas
terhadap insulin (adanya defekasi respon jaringan terhadap insulin) yang
melibatkan reseptor insulin di membran sel (Maulana, 2008). Karena suplai
insulin berkurang atau tidak cukup efektif sebagaimana mestinya, tingkat gula
darah naik lebih lamban. Tidak banyak protein dan lemak yang dihancurkan,
sehingga produksi keton tidak banyak, dan resiko terkena ketoasidosis koma juga
kecil (Rudy W, 2003).
2.3.4 Gejala Diabetes Mellitus
Pada awalnya diabetes mellitus bisa muncul tiba-tiba pada anak dan
orang dewasa muda. Namun, pada orang tua (>40 tahun) gejala dapat muncul
tanpa disadari. Mereka umumnya baru mengetahui mengidap diabetes mellitus
pada saat medical check-up atau pemeriksaan kesehatan rutin (Dalimartha, 2007).
Tiga serangkai klasik mengenai gejala kencing manis adalah poliuri (urinasi yang
sering), polidipsi (banyak minum akibat tingkat kehausan) dan polifagi
(meningkatnya hasrat untuk makan). Gejala awalnya berhubungan dengan efek
langsung dari kadar gula darah yang tinggi. Jika kadar gula darah sampai diatas
160-180 mg/dL, maka glukosa akan sampai ke air kemih. Jika kadarnya lebih
tinggi lagi, ginjal akan membuang air tambahan untuk mengencerkan sejumlah
besar glukosa yang hilang. Karena ginjal menghasilkan air kemih dalam jumlah
yang berlebihan, maka penderita sering berkemih dalam jumlah yang banyak
(poliuri) (Maulana, 2008).
2.3.5 Diagnosis Diabetes Mellitus
Menurut Dalimartha (2007), tindakan diagnosis dilakukan untuk
menentukan apakah seseorang telah menderita penyakit diabetes mellitus atau
belum. Diagnosis umumnya ditegakkan berdasarkan keluhan penderita yang khas
dan adanya peninggian kadar glukosa darah yang ditentukan berdasarkan
pemeriksaan laboratorium. Dokter biasanya menemukan gejala khas seperti yang
telah disebutkan diatas.
Maulana (2008), menambahkan bahwa kepastian diagnosis diabetes
mellitus jika memenuhi kriteria sebagai berikut:
1. Seseorang menderita gejala khas beserta keluhan seperti disebutkan diatas
ditambah dengan kadar glukosa darah sewaktu lebih besar atau sama dengan
200 mg/dl (plasma vena)
2. Seseorang memiliki kadar glukosa darah puasa (plasma vena) lebih besar atau
sama dengan 126 mg/dl sebanyak dua kali pemeriksaan dengan waktu yang
berbeda.
Jika pemeriksaan kadar glukosa darah sewaktu masih meragukan, maka
perlu dilakukan tes toleransi glukosa oral (TTGO) dengan tujuan untuk
memastikan diagnosis. Semua uji diatas memberikan informasi mengenai
metabolisme glukosa pasien hanya pada saaat itu. Untuk perkiraan derajat
pengendalian diabetes jangka panjang dipakai perkiraan kadar hemoglobin
terglikosilasi (HbA1c) didalam darah. Kadar HbA1c bergantung pada kadar glukosa
serum dan meningkat pada diabetes yang tidak terkontrol. HbA1c sekali terbentuk,
tetap berada dalam eritrosit selama 120 hari umur sel. Jadi, kadar HbA1c
mengindikasikan peningkatan kadar glukosa darah 2-3 bulan terakhir. HbA1c
normal adalah sekitar 4% hemoglobin total (Chandrasoma, 2005).
2.4 Keterlibatan Hormon pada Penderita Diabetes Mellitus
2.4.1 Pankreas
Pankreas adalah kelenjar majemuk bertandan, strukturnya sangat mirip
dengan kelenjar ludah. Panjangnya kira-kira 15 cm, mulai dari duodenum sampai
limpa, dan dilukiskan sebagai terdiri atas tiga bagian yaitu kepala pankreas, yang
paling lebar terletak disebelah kanan rongga abdomen dan di dalam lekukan
duodenum, dan melingkarinya. Badan pankreas, merupakan bagian utama pada
organ itu dan letaknya dibelakang lambung dan didepan vertebra lumbalis
pertama. Ekor pankreas adalah bagian yang runcing disebelah kiri, dan yang
sebenarnya menyentuh limpa (Pearce, 1979).
Gambar 2.2 (a) struktur dari pankreas (b) atas, sel-sel pankreas yang terdiri dari pulau-
pulau Langerhans dan bawah sel asinus pankreas
Pankreas terdiri atas dua jaringan utama yaitu: 1) asini, yang mensekresi
getah pencernaan ke dalam duodenum dan 2) pulau Langerhans yang tidak
mengeluarkan sekretnya keluar, tetapi mensekresi insulin dan glukagon langsung
ke darah (Guyton, 1990). Banyak organ, seperti pankreas, melakukan fungsi
endokrin maupun fungsi eksokrin. Sel-sel eksokrin hanya meliputi 1-2% dari
bobot pankreas. Sisa organ lainnya adalah jaringan yang menghasilkan ion
bikarbonat dan enzim-enzim pencernaan yang dibawa oleh usus halus melalui
duktus pankreas. Tersebar diantara jaringan eksokrin ini adalah pulau-pulau
Langerhans (islets of Langerhans), suatu kumpulan sel-sel endokrin yang
mensekresikan hormon secara langsung ke dalam sistem sirkulasi. Masing-masing
pulau mempunyai populasi sel-sel alfa (alpha cells), yang mensekresikan hormon
peptida glukagon, dan populasi sel-sel beta (beta cells), yang mensekresikan
hormon insulin (Campbell, 2000).
Gambar 2.3 Kumpulan sel-sel pankreas
(Bilous, 1999)
2.4.2 Insulin
Insulin adalah polipeptida yang terdiri dari suatu rantai A dengan 21
asam amino dan rantai B dengan 30 asam amino. Insulin dilepaskan dari sel B
oleh berbagai stimulus, diantaranya yang terpenting dari segi fisiologis adalah
glukosa. Asam amino dan obat golongan sulfonylurea juga merangsang pelepasan
insulin. Insulin diangkut didalam dengan globulin alfa dan beta, tidak ada protein
pengangkut spesifik yang telah diidentifikasi (Chandrasoma, 2005).
Sekresi insulin oleh sel beta tergantung oleh 3 faktor utama yaitu, kadar
glukosa darah, ATP-sensitive K channels dan Voltage-sensitive Calcium Channels
sel beta pankreas. Mekanisme kerja ketiga faktor ini sebagai berikut: Pada
keadaan puasa saat kadar glukosa darah turun, ATP sensitive K channels di
membran sel beta akan terbuka sehingga ion kalium akan meninggalkan sel beta
(K-efflux), dengan demikian mempertahankan potensial membran dalam keadaan
hiperpolar sehingga Ca-channels tertutup, akibatnya kalsium tidak dapat masuk
ke dalam sel beta sehingga perangsangan sel beta untuk mensekresi insulin
menurun. Resistensi insulin berarti ketidaksanggupan insulin memberi efek
biologik yang normal pada kadar gula darah tertentu. Dikatakan resisten insulin
bila dibutuhkan kadar insulin yang lebih banyak untuk mencapai kadar glukosa
darah yang normal (Merentek, 2006).
Insulin dan glukagon adalah hormon yang bekerja secara antagonis
dalam mengatur konsentrasi glukosa dalam darah. Hal ini merupakan fungsi
bioenergetik dan homeostatis yang sangat penting, karena glukosa merupakan
bahan bakar utama untuk respirasi seluler dan sumber kunci kerangka karbon
untuk sintesis senyawa organik lainnya. Keseimbangan metabolisme bergantung
pada pemeliharaan glukosa darah pada konsentrasi yang dekat dengan titik
pasang, yaitu sekitar 90 mg/100 mL pada manusia. Ketika glukosa darah melebihi
kadar tersebut, insulin dilepaskan dan bekerja menurunkan konsentrasi glukosa.
Ketika glukosa darah turun dibawah titik pasang, glukagon meningkatkan
konsentrasi glukosa. Melalui umpan balik negatif, konsentrasi glukosa darah
menentukan jumlah relatif insulin dan glukagon yang disekresikan oleh sel-sel
pulau Langerhans. Baik insulin maupun glukagon mempengaruhi konsentrasi
glukosa darah melalui berbagai mekanisme. Insulin menurunkan kadar glukosa
darah dengan cara merangsang hampir semua sel tubuh kecuali sel-sel otak untuk
mengambil glukosa dari darah. Insulin juga menurunkan glukosa darah dengan
memperlambat perombakan glikogen dalam hati dan menghambat konversi atau
perubahan asam amino dan asam lemak menjadi gula (Campbell, 2000).
Pada orang dewasa normal, setiap hari insulin dikeluarkan oleh sel β
pankreas sebanyak 20-60 unit. Bila kebutuhan insulin dalam satu hari melebihi 60
unit, maka kemungkinan terjadi kekurangan insulin. Apabila tubuh kekurangan
insulin atau terjadi penurunan efektivitas insulin yang kerap terjadi pada orang
gemuk, maka sebagian glukosa darah tidak dapat masuk kedalam jaringan tubuh
akibatnya glukosa darah tetap tinggi. Keadaan ini disebut hiperglikemia. Gula
darah atau glukosa yang berlebihan ini sebagian akan dikeluarkan bersama
kencing (urine) (Dalimartha, 2007). Defisiensi insulin menyebabkan hambatan
transport asam amino kedalam sel serta hambatan inkorporasi asam amino
menjadi molekul protein. Selain itu, glukoneogenesis bertambah, sehingga terjadi
imbangan nitrogen negative. Hal ini memperhebat penurunan berat badan
penderita diabetes yang tidak terobati (Suharto, 2001).
Insulin mempunyai beberapa efek berbeda yang menyebabkan
penyimpanan lemak didalam jaringan adiposa. Salah satu kenyataan yang
sederhana adalah bahwa insulin meningkatkan kecepatan penggunaan glukosa
oleh banyak jaringan tubuh, dan fungsi ini sebagai suatu “pelindung lemak”.
Tetapi insulin juga meningkatkan sintesis asam lemak. Kebanyakan sintesis ini
terjadi dalam sel hati dan kemudian asam lemak ditranspor ke sel-sel adiposa
untuk disimpan. Tetapi sebagian kecil sintesis ini terjadi didalam sel-sel lemak itu
sendiri (Guyton, 1990).
2.4.3 Pengaturan Kadar Glukosa Darah
Pada orang normal, konsentrasi glukosa darah diatur sangat sempit,
biasanya berkisar antara 80 dan 90 mg/100 ml selama satu jam pertama atau lebih
setelah makan, tetapi sistem umpan balik yang mengatur glukosa darah
mengembalikan konsentrasi glukosa dengan cepat sekali ke tingkat pengaturan,
biasanya dalam dua jam setelah absorbsi karbohidrat yang terakhir. Sebaliknya
pada kelaparan, fungsi glukoneogenesis hati menyediakan glukosa yang
dibutuhkan untuk mempertahankan kadar glukosa darah puasa (Guyton, 1990).
Pengaturan fisiologis kadar glukosa darah sebagian besar bergantung
pada hati yang (1) mengekstraksi glukosa (2) mensintesis glikogen dan (3)
melakukan glikogenesis. Dalam jumlah yang lebih sedikit, jaringan perifer (otot
dan adiposa) juga mempergunakan ekstrak glukosa sebagai sumber energi
sehingga jaringan-jaringan ini ikut berperan dalam mempertahankan kadar
glukosa darah (Price, 1999). Pengendalian kadar glukosa darah dan metabolisme
glukosa selanjutnya tergantung pada fungsi dari pulau-pulau Langerhans dalam
pankreas untuk menghasilkan tiga hormon. Dalam pulau-pulau Langerhans
terdapat sel-α yang mensekresi glukagon, sel-β yang menghasilkan insulin dan
sel- δ yang menghasilkan somatostatin. Letak ketiga jenis sel ini secara anatomis
berdekatan sehingga terdapat koordinasi sekresi hormon-hormon polipeptida ini,
terutama antara kedua antagonis, glukagon dan insulin. Jadi kadar glukosa darah
dipertahankan melalui interaksi sekresi insulin dan glukagon. Sekresi keduanya
dihambat oleh somatostatin. Sekresi somatostatin sendiri dirangsang oleh
glukagon. Rangsangan primer untuk interaksi ini adalah kadar glukosa dalam
darah (Montgomery, 1993).
Kadar glukosa darah yang tinggi setelah makan akan merangsang sel β
pulau Langerhans untuk mengeluarkan insulin. Sebelum ada insulin, glukosa yang
ada dalam darah ini tidak dapat masuk kedalam sel-sel jaringan tubuh seperti otot
dan jaringan lemak ibarat sebuah kunci, insulin berguna untuk membuka pintu sel
jaringan, memasukkan glukosa kedalam sel, dan selanjutnya menutup pintu sel
kembali (Dalimartha, 2007).
Gambar 2.4 Keseimbangan glukosa peran insulin, glukagon, amylin, dan GLP-1.
(Aronoff dkk, 2004)
Ketika mekanisme homeostatis glukosa agak menyimpang, terdapat
konsekuensi yang serius. Daibetes mellitus, kemungkinan merupakan gangguan
endokrin yang paling baik diketahui, disebabkan oleh defisiensi insulin atau
hilangnya respon terhadap insulin pada jaringan target. Hasilnya adalah kadar
glukosa yang tinggi bahkan sedemikian tingginya, sehingga ginjal orang yang
menderita diabetes mengekskresikan glukosa, yang menjelaskan mengapa
kehadiran gula dalam urin merupakan salah satu uji untuk diabetes. Semakin
banyak gula terkosentrasi dalam urin, semakin banyak air yang disekresikan
bersamanya, yang menyebabkan urin dengan volume berlebihan dan rasa haus
yang terus menerus (Campbell, 2000).
2.4.4 Radikal Bebas, Oksidan dan Antioksidan
Allah berfirman dalam surat al-mulk ayat 3-4 tentang penciptaan alam
secara seimbang, yaitu sebagai berikut:
“Ï� ©��#��, �= �{��ì ö7�™�;N≡ �θ≈�ϑ �™�$]%$�7 ÏÛ�(�$Β��“��?��Îû�È, ù=�z�Ç≈ �Η÷q§�9 �#�ÏΒ�;Nâθ≈�4 ?�(�Æì Å_ö‘ �$ù�
���Ç �7 ø9 �#�ö≅ �δ��“��?�ÏΒ�9‘θäÜ èù�∩⊂∪�§ΝèO�Æì Å_ö‘ �#����Ç �7 ø9 �#�È÷?§� �.�ó= Î=)Ζ �ƒ��7 ø‹9Î)�ç��Ç �7ø9 �#�$ Y∞ Å™%{�
�θ èδ �ρ�×��Å¡ �m�∩⊆∪�
Artinya : 3. Yang Telah menciptakan tujuh langit berlapis-lapis. kamu sekali-kali
tidak melihat pada ciptaan Tuhan yang Maha Pemurah sesuatu yang tidak seimbang. Maka Lihatlah berulang-ulang, Adakah kamu lihat sesuatu yang tidak seimbang? 4. Kemudian pandanglah sekali lagi niscaya penglihatanmu akan kembali kepadamu dengan tidak menemukan sesuatu cacat dan penglihatanmu itupun dalam keadaan payah. (QS. al-Mulk:3-4).
Pada kenyataannya, segala sesuatu dalam hidup ini memang diciptakan
sang pencipta yakni Allah secara seimbang, seperti apa yang telah Allah jelaskan
pada ayat diatas. Keseimbangan ini juga terlihat pada fenomena antioksidan dan
radikal bebas. Dalam hal ini, sistem defensif dianugerahkan terhadap setiap sel
berupa perangkat antioksidan enzimatis. Sebenarnya radikal bebas, termasuk ROS
(reactive oxygen species) penting artinya bagi kesehatan dan fungsi tubuh
manusia yang normal dalam memerangi peradangan, membunuh bakteri, dan
mengendalikan tonus otot polos pembuluh darah dan organ-organ dalam tubuh
kita. Namun apabila dihasilkan melebihi batas kemampuan proteksi antioksidan
seluler maka akan menyerang sel itu sendiri. Struktur sel yang berubah turut
merubah fungsinya, yang akan mengarah pada proses munculnya penyakit
(Minarno dan Hariani, 2008).
Radikal bebas merupakan suatu molekul yang sangat reaktif karena
mempunyai satu atau lebih elektron yang tidak berpasangan. Untuk
mengembalikan keseimbangannya maka radikal bebas berusaha mendapatkan
elektron dari molekul lain atau melepas elektron yang tidak berpasangan tersebut.
Radikal bebas dalam jumlah berlebih didalam tubuh sangat berbahaya karena
menyebabkan kerusakan sel, asam nukleat, protein dan jaringan lemak. Radikal
bebas terbentuk didalam tubuh akibat produk sampingan proses metabolisme
ataupun karena tubuh terpapar radikal bebas melalui pernapasan (Prapti, dkk,
2006).
Luasnya komplikasi pada diabetes tampaknya berkorelasi dengan
konsentrasi glukosa darah sehingga glukosa berlebih diduga menjadi penyebab
utama kerusakan jaringan. Fenomena ini dapat disebabkan oleh kemampuan
hiperglikemia secara in vivo dalam modifikasi oksidatif berbagai substrat. Selain
itu, hiperglikemia juga terlibat dalam proses pembentukan radikal bebas. Untuk
meredam kerusakan oksidatif tersebut diperlukan antioksidan. Peningkatan suplai
antioksidan yang cukup akan membantu pencegahan komplikasi klinis diabetes
melitus. Dalam pengertian kimia, antioksidan adalah senyawa pemberi elektron,
sedangkan antioksidan dalam arti biologis adalah semua senyawa yang dapat
meredam dampak negatif oksidan, termasuk dalam penghambatan dan
penghentian kerusakan oksidatif terhadap suatu molekul target (Setiawan dan Eko,
2005).
Senyawa-senyawa polifenol seperti flavonoid dan galat mampu
menghambat reaksi oksidasi melalui mekanisme penangkapan radikal (radical
scavenging) dengan cara menyumbangkan satu elektron pada elektron yang tidak
berpasangan dalam radikal bebas sehingga banyaknya radikal bebas menjadi
berkurang. Secara in vitro, flavonoid merupakan inhibitor yang kuat terhadap
peroksidasi lipid, sebagai penangkap spesies oksigen atau nitrogen yang reaktif,
dan juga mampu menghambat aktivitas enzim lipooksigenase dan
siklooksigenase. Beberapa studi epidemiologi menunjukkan bahwa peningkatan
konsumsi antioksidan fenolik alami yang terdapat dalam buah, sayur mayur, dan
tanaman serta produk-produknya mempunyai manfaat besar terhadap kesehatan
yakni dapat mengurangi resiko terjadinya penyakit jantung koroner. Hal ini
disebabkan karena adanya kandungan beberapa vitamin (A,C,E dan folat), serat,
dan kandungan kimia lain seperti polifenol yang mampu menangkap radikal bebas
(Gill et al., 2002 dalam Rohman dan Sugeng, 2005).
2.5 Pengobatan Diabetes Mellitus
Tujuan pengobatan melalui makanan dan pemberian obat-obatan untuk
penderita diabetes adalah untuk mencegah hiperglisemia, seperti diketahui bahwa
hal tersebut bertanggung jawab menurunkan beberapa konsekuensi patologis
jangka panjang dari penyakit tersebut (Linder, 1992). Berikut ini adalah macam-
macam obat yang dapat digunakan dalam menurunkan kadar glukosa darah:
2.5.1 Obat Hiperglikemik
Golongan sulfonilurea sering kali dapat menurunkan kadar gula darah
secara mencukupi pada penderita diabetes tipe II, tetapi tidak efektif pada diabetes
tipe I. contohnya adalah glipizid, gliburid, tolbutamid, dan klorpropamid. Obat ini
menurunkan kadar gula darah dengan cara merangsang pelepasan insulin oleh
pankreas dan meningkatkan efektivitasnya (Maulana, 2008). Ada 2 macam obat
hipoglikemik, yaitu berupa suntikan dan berupa tablet yang dapat diminum. Yang
berupa tablet, biasa disebut juga obat hipoglikemik oral (OHO) atau antidiabetes
(OAD). Pemakaian istilah obat antidiabetes (OAD) sudah mulai ditinggalkan,
karena memang tidak ada obat yang dapat menyembuhkan diabetes mellitus. Ada
2 golongan obat hipoglikemik oral, yaitu golongan sulfonylurea dan golongan
biguanid. Obat ini sebaiknya tidak digunakan penderita diabetes mellitus yang
disertai dengan gangguan fungsi ginjal dan hati (Dalimartha, 2007).
2.5.2 Terapi Insulin
Menurut Maulana (2008), pada diabetes tipe I, pankreas tidak dapat
menghasilkan insulin sehingga harus diberikan insulin pengganti. Pemberian
insulin hannya dapat dilakukan melalui suntikan, insulin dihancurkan didalam
lambung sehingga tidak dapat diberikan per-oral (ditelan). Insulin disuntikkan di
dalam kulit dibawah lapisan lemak, biasanya di lengan, paha atau dinding perut.
Insulin terdapat dalam 3 bentuk besar, masing-masing memiliki kecepatan dan
lama kerja yang berbeda:
a. Insulin kerja cepat
Contohnya adalah insulin reguler, yang bekerja paling cepat dan paling
sebentar. Insulin ini sering kali mulai menurunkan kadar gula dalam waktu 20
menit, mencapai puncakanya dalam waktu 2-4 jam dan bekerja selama 6-8
jam. Insulin kerja cepat sering kali digunakan oleh penderita yang menjalani
beberapa kali suntikan setiap harinya dan disuntikkan 15-20 menit sebelum
makan.
b. Insulin kerja sedang
Contohnya adalah insulin suspensi seng atau suspensi insulin isofan. Mulai
bekerja dalam waktu 1-3 jam, mencapai puncak maksimum dalam waktu 6-10
jam, dan bekerja selama 18-26 jam. Insulin ini bisa disuntikkan pada pagi hari
untuk memenuhi kebutuhan selama sehari dan dapat disuntikkan pada malam
hari untuk memenuhi kebutuhan sepanjang malam.
c. Insulin kerja lambat
Contohnya adalah insulin suspensi seng yang telah dikembangkan. Efeknya
baru timbul setelah 6 jam dan bekerja selama 28-36 jam.
2.5.3 Pengobatan Dengan Bahan Alam
Tumbuhan obat terbukti merupakan salah satu sumber bagi bahan baku
obat anti diabetes mellitus karena diantara tumbuhan tersebut memiliki senyawa-
senyawa yang berkhasiat sebagai anti diabetes mellitus. Senyawa anti diabetes
mellitus yang berasal dari tumbuhan obat diantaranya christinin A, xanthone,
bellidifolin, thysanolacton, TAP (suatu polisakarida asam) dan lain-lain. Diantara
250.000 spesies tumbuhan obat di seluruh dunia diperkirakan banyak yang
mengandung senyawa anti diabetes mellitus yang belum diketemukan. Untuk
mendapatkan obat anti diabetes mellitus dari tumbuhan diperlukan suatu cara-cara
pengujian yang memadai mulai dari uji pre-skrining, uji skrining dan berakhir
pada uji klinik. Berikut ini adalah nama tanaman obat yang banyak mengandung
senyawa anti diabetes mellitus: Momordica charantia, Juniper communis L,
Zizyphus spina-christi, Swertia japonica, Allium cepa, Allium sativum, Trigonella
foenum graecum, Tremella aurantia, Salacia macrosperma, Aralia elata,
Anemarrhena asphodeloides Bunge, Rehmania glutinosa Liboschict, Cimifuga
simplex Wormskjord, Saposhnikovia divaricata Schischkin, Prunus persica
Batsch, Prunus armeniaca Linne, dan masih banyak lagi tanaman yang berfungsi
sebagai obat anti diabetes (Suharmiati, 2003).
2.6 Streptozotocin (STZ)
Streptozotosin (STZ) atau 2-deoksi-2-[3-(metil-3-nitrosoureido)-D-gluko
piranose] diperoleh dari Streptomyces achromogenes dapat digunakan untuk
menginduksi baik DM tipe 1 maupun tipe 2 pada hewan uji. Struktur kimia
streptozotosin dapat dilihat pada gambar 2.5 Dosis yang digunakan untuk
menginduksi DM tipe 1 untuk intravena adalah 40-60 mg/kg, sedangkan dosis
intraperitoneal adalah lebih dari 40 mg/kg BB. STZ juga dapat diberikan secara
berulang, untuk menginduksi DM tipe 1 yang diperantarai aktivasi sistem imun.
Untuk menginduksi DM tipe 2, STZ diberikan intravena atau intraperitoneal
dengan dosis 100 mg/kg BB pada tikus yang berumur 2 hari kelahiran, pada 8-10
minggu tikus tersebut mengalami gangguan respon terhadap glukosa dan
sensitivitas sel β terhadap glukosa. Di lain pihak, sel α dan δ tidak dipengaruhi
secara signifikan oleh pemberian streptozotosin pada neonatal tersebut sehingga
tidak membawa dampak pada perubahan glukagon dan somatostatin.
Patofisiologis tersebut identik pada DM tipe II (Szukudelsi, 2001).
Gambar 2.5 Struktur kimia streptozotosin
(Nugroho, 2006)
Streptotozotocin menginduksi terjadinya diabetes mellitus pada mencit
melalui perusakan DNA sel beta pankreas. Didalam sel beta pankreas,
streptozotocin merusak DNA melalui pembentukan NO, radikal hidroksil dan
hydrogen perioksida. Perusakan DNA ini menstilmulasi ribosilasi poli ADP yang
selanjutnya menyebabkan deplesi NAD+ dan ATP didalam sel. Akibatnya
produksi insulin terganggu dan jumlah yang dihasilkan berkurang atau bahkan
dapat menyebabkan apoptosis sel. Peningkatan defosforilasi ATP akan memacu
peningkatan substrat untuk enzim xantin oksidase (sel β pankreas mempunyai
aktivitas tinggi terhadap enzim ini), lebih lanjut meningkatkan produksi asam urat.
Xantin oksidase mengkatalisis reaksi pembentukan anion superoksida aktif. Dari
pembangkitan anion superoksida, terbentuk hidrogen peroksida dan radikal
superoksida. NO dan oksigen reaktif tersebut adalah penyebab utama kerusakan
sel β pankreas (Szukudelsi, 2001).
2.7 Pencegahan Penyakit
Menurut al-Jauziah (1994), sesuai dengan kaedah ilmu kedokteran,
pencegahan merupakan obat yang paling utama dan mencegah lebih baik dari
pada mengobati. Pencegahan terbagi menjadi 2:
a. Mencegah timbulnya penyakit. Ini dilakukan pada orang yang sehat
b. Mencegah bertambahnya penyakit. Hal ini dilakukan terhadap orang yang telah
ditimpa penyakit
Program pencegahan diabetes dengan mengatur pola makan dan olahraga
yang teratur, termasuk penurunan 5-7% dari berat badan total dapat menurunkan
resiko terkena diabetes tipe 2 sebesar 60%. Caranya adalah dengan mengurangi
asupan lemak serta dengan berjalan setidaknya 30 menit sehari (Maulana, 2008).
Dalam penanggulannya diabetes, obat hanya merupakan pelengkap dari diet. Obat
hanya perlu diberikan, bila pengaturan diet secara maksimal tidak berhasil
mengendalikan kadar gula darah.penurunan berat badan merupakan tindakan yang
sangat penting dalam mengendalikan diabetes. Usaha penurunan berat badan
harus dilakukan secara intensif terlepas dari obat apa yang diberikan (Suharto,
2001).
BAB III
METODE PENELITIAN
3.1 Rancangan Penelitian
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental menggunakan
Rancangan Acak Kelompok (RAK) dengan 5 perlakuan dan 5 ulangan. Perlakuan
yang digunakan adalah mencit kontrol negatif (tanpa perlakuan), mencit kontrol
positif (diabetes tanpa pemberian ekstrak biji klabet) dan mencit diabetes yang
diberi ekstrak biji klabet dengan 3 dosis yang berbeda.
3.2 Variable penelitian
Variabel pada penelitian ini meliputi:
1. Variabel bebas: biji klabet (Trigonella foenum-graecum L) dengan dosis yang
berbeda.
2. Variabel terikat: kadar glukosa darah dan gambaran histologi pankreas mencit.
3. Variabel kendali: mencit jantan galur Balb/c umur 2 bulan dengan berat badan
rata-rata 20 g
3.3 Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Fisiologi Hewan Jurusan
Biologi, Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Islam Negeri (UIN) Maulana
Malik Ibrahim Malang, pada bulan Agustus sampai Oktober 2009.
3.4 Populasi dan Sampel
Hewan uji yang digunakan adalah mencit (Mus musculus) galur Balb/c
jenis kelamin jantan, umur 2 bulan dengan berat badan rata-rata 20 g sebanyak 25
ekor.
3.5 Alat dan Bahan
3.5.1 Alat
Alat yang digunakan pada penelitian ini adalah kandang hewan coba (bak
plastik), kawat, tempat pakan, minum mencit, Erlenmeyer 50 mL, gelas ukur,
beacker glass, kaca pengaduk, kertas saring, objek glass, deck glass, timbangan
digital, ayakan tepung, mikrokom, corong Buchner, perangkat evaporator,
glukometer (Accu Ceck Active), strip glukotest alat pencekok oral (gavage).
3.5.2 Bahan
Biji klabet (Trigonella foenum-graecum L), pakan mencit (pellet), serbuk
kayu, Streptozotocin, Buffer sitrat pH=4,5, air PAM, Formalin 10%, Etanol (50%,
70%, 75%, 80%, 90%, 96%), xyline, xilol, alkohol 70%.
3.6 Kegiatan Penelitian
3.6.1 Persiapan Hewan Coba
Mencit diaklimatisasi di laboratorium selama 3 minggu kemudian dibagi
menjadi 2 kelompok yaitu kelompok kontrol mencit normal (tidak diabetes) dan
kelompok mencit diabetes. Untuk menjadi diabetes, mencit diinduksi dengan
streptozotocin dengan dosis tunggal yaitu 50 mg/kg bb diinjeksikan 1 kali dengan
cara intraperitonial. Mencit dengan kadar glukosa melebihi 140 mg/dl dianggap
diabetes (Dalimartha, 2007).
Sebelum diinjeksikan, streptozotocin dilarutkan dalam buffer sitrat
(0,05M Sodium sitrat pada pH=4,5) dan dihomogenkan dengan menggunakan
stirer. Pembuatan larutan STZ dilakukan dengan penghitungan sesuai dosis injeksi
dengan konsentrasi 50 mg STZ setiap 2,5 mL buffer sitrat. Injeksi sebanyak 0,05
mL tiap ekor mencit (Suharmiati, 2003).
3.6.2 Pembuatan Ekstrak
Pembuatan ekstrak biji klabet (Trigonella foenum-graecum L) dilakukan
melalui tahapan sebagai berikut:
a. Menyiapkan biji klabet
b. Dilakukan penyortiran dengan mengambil biji yang terbaik
c. Biji klabet yang telah disortir kemudian dicuci dengan air mengalir
d. Biji klabet yang sudah dicuci kemudian dikeringkan dengan cara diangin-
anginkan. Dalam pengeringan ini hendaknya dihindarkan dari panas matahari
langsung
e. Biji klabet yang telah kering kemudian diblender
f. Biji klabet yang telah halus dimaserasi dengan pelarut ethanol 70% sampai
residu berubah menjadi bening, sambil sesekali diaduk
g. Ekstrak yang dihasilkan disaring dengan corong bunchner
h. Ekstrak yang diperoleh dipekatkan dengan menggunakan rotary evaporator
pada suhu 700C sampai diperoleh ekstrak kental
3.6.3 Penghitungan Dosis
Biji klabet yang digunakan pada penelitian ini diperoleh dari Balai
Materia Medica, Batu. Gambaran atau model penentuan dosis pada perlakuan
dengan mendasarkan pada hasil ekstraksi penelitian El-Soud (2007), bahwa biji
klabet yang diekstrak diperoleh 2,74%. Sedangkan pada penelitian Widowati
(1989), menyatakan bahwa pengkonsumsian serbuk biji klabet oleh manusia
setiap hari untuk pengobatan tradisional mulai dari 25 g dibagi dalam 2 kali
pengkonsumsian, masing-masing 12,5 g (± 1 sendok makan).
Berdasarkan angka konversi tersebut diperoleh dosis biji klabet untuk
mencit adalah 2,74% × 25 g = 0,68 g ekstrak. Sedangkan angka konversi dari
manusia 70 kg ke mencit 20 g = 0,0026, maka dosis untuk mencit 20 g = 0,0026 ×
0,68 g = 1,76 mg/ekor/hari. Pada penelitian ini menggunakan 3 dosis uji dengan
menurunkan dan menaikkan dari dosis optimal menurut deret hitung:
Dosis I = 0,88 mg/ekor/hari
Dosis II = 1,76 mg/ekor/hari
Dosis III = 3,52 mg/ekor/hari
3.6.3 Prosedur Perlakuan
Sebelum perlakuan pemberian ekstrak biji klabet, dilakukan pengukuran
kadar glukosa darah sebelum perlakuan. Pengukuran kadar glukosa darah
dilakukan menggunakan glukometer dengan prosedur sebagai berikut:
a. Persiapan glukometer, strip dipersiapkan untuk mengukur
b. Pengambilan sampel darah, mencit diletakkan pada sungkup, ekor mencit
dipegang, diurut, dan diberi alkohol. Kemudian ujung ekor dipotong, darah
diambil dan diteteskan pada strip glukotest
c. Hasil penghitungan kadar glukosa darah yang terbaca pada glukometer dicatat
sebagai data
Pemberian ekstrak biji klabet untuk perlakuan, ditimbang 500 mg
Carboxyl Methyl Cellulose (CMC) Na kemudian ditaburkan pada akuades panas,
diaduk sampai CMC Na mengembang, setelah itu ditambahkan 0,88 mg ekstrak
biji klabet dan diaduk sampai homogen. Kemudian, ditambah dengan aquadest
sampai volumenya 100 ml Sedangkan untuk sediaan kelompok kontrol negatif
dan positif hanya diberi suspensi CMC Na 0,5 ml tanpa ekstrak biji klabet
(Studiawan dan Mulja, 2005). Ekstrak biji klabet diberikan pada mencit perlakuan
setiap hari sesuai dengan dosis I, II, dan III selama 30 hari. Kadar glukosa darah
sesudah perlakuan diukur pada hari ke-1 dan 30 setelah perlakuan. Prosedur
pengukuran kadar glukosa darah sama seperti diatas. Sedangkan derajat insulitas
diamati pada akhir penelitian (30 hari).
3.6.4 Pembuatan Preparat Sayatan Pankreas
1. Tahap pertama adalah coating, dimulai dengan menandai obyek glass yang
akan digunakan dengan kikir kaca pada bagian tepi, kemudian direndam dalam
alkohol 70% minimal semalam. Kemudian obyek glass dikeringkan dengan
tissue dan dilakukan perendaman dalam larutan gelatin 0,5% selama 30-40
detik/slide, lalu dikeringkan dengan posisi disandarkan hingga gelatin yang
melapisi kaca dapat merata
2. Tahap kedua, organ pankreas yang telah disimpan dalam larutan formalin 10%
dicuci dengan alkohol selam 2 jam, dan dilanjutkan dengan pencucian secara
bertingkat dengan alkohol yaitu dengan alkohol 90%, 95%, etanol absolut (3
kali), xylol (3 kali), masing-masing selama 20 menit
3. Tahap ketiga, adalah proses infiltrasi yaitu dengan menambahkan parafin
sebanyak 3 kali selama 30 menit
4. Tahap keempat, embedding. Bahan beserta parafin dituangkan kedalam kotak
karton atau wadah yang telah disiapkan dan diatur sehingga tidak ada udara
yang terperangkap didekat bahan. Blok parafin dibiarkan semalam dalam suhu
ruang kemudian diinkubasi dalam freezer sehingga blok benar-benar keras
5. Tahap pemotongan dengan mikrotom. Cutter dipanaskan dan ditempelkan pada
dasar blok sehingga parafin sedikit meleleh. Holder dijepitkan pada mikrotom
putar dan ditata sejajar dengan mata pisau mikrotom. Pengirisan atau
penyayatan diawali dengan mengatur ketebalan irisan. Untuk pankreas
dipotong dengan ukuran µm, kemudian pita hasil irisan diambil dengan
menggunakan kuas dan dimasukkan air dingin untuk membuka lipatan lalu
dimasukkan air hangat dan dilakukan pemilihan irisan yang terbaik. Irisan yang
terpilih diambil dengan gelas obyek yang sudah dicoating kemudian
dikeringkan diatas hot plate.
6. Tahap diparafisasi, yaitu preparat dimasukkan dalam xylol sebanyak 2 kali 5
menit.
7. Tahap rehidrasi, preparat dimasukkan dalam larutan etanol bertingkat mulai
dari etanol absolut (2 kali), etanol 95%, 90%, 80%, dan 70% masing-masing 5
menit. Kemudian preparat direndam dalam aquadest selama 10 menit.
8. Tahap pewarnaan, preparat ditetesi dengan hematoxylin selam 3 menit atau
sampai didapatkan hasil warna yang terbaik. Selanjutnya dicuci dengan air
mengalir selama 30 menit dan dibilas dengan aquadest selama 5 menit. Setelah
itu preparat dimasukkan dalam pewarna eosin alkohol selam 30 menit dan
dibilas dengan aquadest selama 5 menit.
9. Tahap dehidrasi, preparat direndam dalam etanol bertngkat 80%, 90%, 95%
dan etanol absolut (2 kali) masing-masing selama 5 menit.
10. Tahap clearing, dalam larutan xylol 2 kali selama 5 menit, kemudian
dikeringkan.
11. Tahap mounting dengan etilen.
12. Hasil akhir diamati dibawah mikroskop, untuk setiap ekor mencit, satu
preparat dengan tiga bidang pandang pengamatan, dipotret kamudian dicatat
data skor kerusakan islet pankreas
3.7 Analisis Data
Untuk mengetahui pengaruh pemberian biji klabet terhadap kadar gula
darah mencit diabetes mellitus yang diinduksi streptozotocin, data hasil
pengamatan yang sudah ditabulasi diuji statistik dengan ANKOVA (Analysis Of
Covarianse). Apabila terdapat perbedaan, dilanjutkan dengan pengujian BNT 5%.
Untuk mengetahui derajat insulitis dilakukan melalui penghitungan tingkat
kerusakan pulau Langerhans pada tiga luas bidang pandang setiap satu ekor
mencit. Pemberian skor dapat dilakukan dengan cara memprosentase jumlah
kerusakan yang terdapat setiap satu preparat. Nilai skor = 0, jika tidak terdapat
kerusakan. Nilai skor = 1 jika terdapat ¼ kerusakan, nilai skor = 2 untuk ½
kerusakan, dan nilai skor = 3 untuk kerusakan lebih dari ½ dari islet. Kemudian
data skor tingkat kerusakan pankreas dianalisis dengan non-parametrik Kruskal
Wallis.
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil penelitian pada penurunan kadar glukosa darah dan histology
pancreas mencit (Mus musculus) diabetes yang diinduksi streptozotocin, dengan
perlakuan pemberian ekstak biji klabet (Trigonella foenum-graecum L) secara oral
menggunakan pencekok (gavage) dengan tiga dosis berbeda yang dikonversikan
dari manusia ke mencit dapat diuraikan sebagai berikut:
4.1 Hasil
4.1.1 Histologi pankreas mencit (Mus musculus) diabetes
Pada penelitian ini diamati histologi pankreas mencit diabetes yang
diambil setelah satu bulan perlakuan ekstrak biji klabet (Trigonella foenum
graecum L). Preparat histologi dibuat dengan metode blok paraffin dengan
pewarnaan Hemotoxylen-Eosin. Untuk mengetahui skor kerusakan setiap preparat
dapat dilihat pada lampiran 4. Berikut ini adalah gambar histologi pankreas tiap
perlakuan:
a b
1
c d
e
Gambar 4.1 Penampang melintang pankreas perbesaran 10×40 a) kontrol negative, b) kontrol positif, c) dosis 1, d) dosis 2, e) dosis 3, sel beta ditandai denagan anak panah, sel
nekrosis ditandai angkai 1
Keterangan:
1. Kontrol negatif dengan skor = 0 2. Kontrol positif dengan skor rata-rata = 2,53 3. Perlakuan dosis 1 dengan skor rata-rata = 1, 13 4. Perlakuan dosis 2 dengan skor rata-rata = 1, 06 5. Perlakuan dosis 3 dengan skor rata-rata = 1,33
4.1.2 Kadar glukosa darah mencit (Mus musculus) diabetes
Dari tabel pada lampiran 5 dapat diketahui bahwa kisaran rerata kadar
glukosa darah mencit diabetes sebelum perlakuan ekstrak biji klabet (Trigonella
foenum graecum L) pada kelompok mencit dosis 1, dosis 2, dan dosis 3 adalah
222,6 mg/dl, 148,8 mg/dl dan 175,8 mg/dl. Kadar glukosa darah sesudah
1
1
1
perlakuan dengan ekstrak biji klabet (Trigonella foenum graecum L) selama satu
bulan mengalami penurunan pada kelopmok dosis 1, dosis 2, dan dosis 3 yaitu
berkisar antara 114,4 mg/dl, 77,2 mg/dl dan 120,8 mg/dl.
Data yang diperoleh selanjutnya diuji dengan menggunakan Analisis
Kovarian (ANKOVA) yang dilakukan untuk mengoreksi atau membandingkan
pengaruh sebelum dan sesudah pemberian ekstrak biji klabet (Trigonella foenum-
graecum L) terhadap kadar glukosa darah mencit (Mus musculus) diabetes. Hasil
ANKOVA dengan taraf signifikansi 5% menunjukkan bahwa pemberian ekstrak
biji klabet (Trigonella foenum-graecum L.) memberikan hasil yang signifikan
dalam menurunkan kadar glukosa darah mencit (Mus musculus) diabetes. Berikut
adalah tabel ringkasan hasil perhitungan ANKOVA:
Tabel 4.1 Ringkasan uji BNT 5% kadar glukosa darah mencit diabetes SK Db JK KT F hitung F 5%
Perlakuan 4 2850,09 7125,27 29,75 2,84 Galat 20 3591,113 239,44
Dari tabel ringkasan ANKOVA tersebut, dapat diketahui bahwa F hitung >
F tabel pada taraf signifikansi 5%. Dengan demikian, hipotesis nol (H0) ditolak
dan hipotesis 1 (H1) diterima. Jadi dapat disimpulkan bahwa pemberian ekstrak
biji klabet (Trigonella foenum-graecum L) dapat menurunkan kadar glukosa darah
mencit (Mus musculus) diabetes. Untuk mengetahui ada tidaknya perbedaan pada
tiap perlakuan dan dosis yang efektif dari setiap perlakuan, maka perlu dilakukan
Uji Lanjut dengan menggunakan uji BNT pada taraf signifikansi 5% seperti yang
terdapat pada lampiran 6.
Berdasarkan hasil Uji Beda Nyata Terkecil (BNT) 5% yang sudah
dikonfirmasikan dengan nilai rata-rata kadar glukosa darah, maka didapatkan
notasi BNT pada tabel berikut:
Tabel 4.2 Ringkasan Uji BNT Terhadap kadar glukosa darah mencit diabetes
Perlakuan Rerata Notasi BNT 5% D2 77,2 a K- 83,8 a D1 114,4 b D3 120,8 b K+ 184 c Berdasarkan hasil uji BNT tersebut, menunjukkan bahwa terjadi perbedaan
yang nyata pada penurunan kadar glukosa darah pada mencit diabetes yang
diinduksi dengan streptozotocin kelompok mencit negatif, kelompok mencit
positif, dan kelompok mencit perlakuan (D1, D2, D3). Perlakuan ekstrak biji
klabet (Trigonella foenum-graecum L) dengan dosis 1 (0,88 mg/ekor/hr) berbeda
nyata dengan dosis 2 (1,76 mg/ekor/hari). Sedangkan antara kontol negatif dengan
dosis 2 tidak menunjukkan perbedaan yang nyata. Hal ini berarti bahwa nilai
kadar glukosa darah pada mencit perlakuan dosis 2 sama dengan kadar glukosa
darah kontrol negatif (normal).
Berikut ini adalah diagram rerata kadar glukosa darah mencit (Mus
musculus) sebelum dan sesudah diberi perlakuan ekstrak biji klabet (Trigonella
foenum graecum L):
Gambar 4.2 Diagram basesudah pembe
4.2 Pembahasan
Induksi diabete
streptozotocin pada do
glukosa darah menjadi
glukosa darah bagi me
penelitian ini kadar glu
karena menurut Maulan
(plasma vena) berkisar a
Streptozotocin di
yang menyebabkan keru
insulin menjadi tergan
hiperglikemia, glukosur
merupakan obat pengaru
0
50
100
150
200
250
K-
KA
DA
R G
LUK
OS
A D
AR
AH
(m
g/d
l)
batang nilai rerata perubahan kadar glukosa darah sebeberian ekstrak biji klabet (Trigonela foenum graecum L)
etes pada mencit (Mus musculus) dengan
dosis 50 mg/kg BB telah berhasil meningkatk
di diabetes. Menurut Kusumowati (2004), bah
mencit normal ialah 62,8 ± 176 mg/dl. Sedang
lukosa darah yang melebihi 140 mg/dl diangga
lana (2008), bahwa kadar glukosa darah manus
r antara 90 ± 140 mg/dl.
dilaporkan menyebabkan diabetes melalui meka
erusakan sel β pulau Langerhans dan akibatnya
anggu. Kekurangan insulin membawa kepada
suria dan selanjutnya ketoasidosis. Streptozotoc
aruh diabetes yang mempunyai kespesifikan terh
K+ D1 D2 D3
PERLAKUAN
sebel
sesud
belum dan
an suntikan
atkan kadar
ahwa kadar
angkan pada
gap diabetes
usia normal
ekanismenya
ya rembesan
ada keadaan
tocin (STZ)
rhadap sel β
sebelum
sesudah
pankreas dengan efek toksik yang minimum terhadap ginjal dan hepar.
Bagaimanapun juga, kerusakan sel β pankreas ini masih dapat dipulihkan dengan
pengobatan jika kerusakan parah.
Antioksidan terlibat dalam pencegahan kerusakan sel yang merupakan
situs jalan biasa bagi kanker dan berbagai jenis penyakit seperti diabetes. Untuk
menghindari kerusakan sel akibat radikal bebas, antioksidan berfungsi sebagai
agen penurun dan menurunkan oksidator sebelum merusak sel, kerusakan sel
dapat dikurangi (Sani dan dkk, 2008). Hal ini dapat menerangkan bagaimana
ekstrak biji klabet (Trigonella foenum graecum L) bertindak sebagai antioksidan
yang melindungi sebagai tindakan radikal bebas.
Mekanisme kerja antioksidan memiliki dua fungsi. Fungsi pertama
merupakan fungsi utama dari antioksidan yaitu sebagai pemberi atom hidrogen.
Antioksidan (AH) yang mempunyai fungsi utama tersebut sering disebut sebagai
antioksidan primer. Senyawa ini dapat memberikan atom hidrogen secara cepat
ke radikal lipida (R*, ROO*) atau mengubahnya ke bentuk lebih stabil,
sementara turunan radikal antioksidan (A*) tersebut memiliki keadaan lebih
stabil dibanding radikal lipida. Fungsi kedua merupakan fungsi sekunder
antioksidan, yaitu memperlambat laju autooksidasi dengan berbagai mekanisme
diluar mekanisme pemutusan rantai autooksidasi dengan pengubahan radikal
lipida ke bentuk lebih stabil (Jati, 2008).
Gambar 4.3. Reaksi Penghambatan antioksidan primer terhadap radikal lipida
(Jati, 2008)
Inisiasi : R* + AH ----------> RH + A*
Propagasi : ROO* + AH -------> ROOH + A*
Penambahan antioksidan (AH) primer dengan konsentrasi rendah pada
lipida dapat menghambat atau mencegah reaksi autooksidasi lemak dan minyak.
Penambahan tersebut dapat menghalangi reaksi oksidasi pada tahap inisiasi
maupun propagasi (gambar 4.3). Radikal-radikal antioksidan (A*) yang
terbentuk pada reaksi tersebut relatif stabil dan tidak mempunyai cukup
energi untuk dapat bereaksi dengan molekul lipida lain membentuk radikal
lipida baru.
Pada gambar 4.2 hasil foto preparat, telah menunjukkan bahwa terdapat
perbedaan tingkat kerusakan pankreas dengan skor rata-rata kelompok kontrol
negatif (skor = 0), kontrol positif (skor = 2,53), dosis 1 (skor = 1,13), dosis 2 (skor
= 1,06) dan dosis 3 (skor = 1,33). Pada pulau-pulau Langerhans dosis 1, dosis 2,
dosis 3 menunjukkan perbedaan dengan kontrol positif akan tetapi sedikit berbeda
dengan kontrol negatif. Hal ini menunjukkan bahwa terdapat pengaruh ekstrak biji
klabet (Trigonella foenum graecum L) dalam memperbaiki histologi sel-sel pulau
Langerhans (lampiran 4). Pada dosis 1, skor kerusakan lebih tinggi dibandingkan
dengan dosis 2, hal tersebut dimungkinkan bahwa jumlah flavonoid yang
terkandung pada dosis 1 belum cukup untuk menghasilkan antioksidan yang
dibutuhkan untuk mencegah kerusakan sel akibat radikal bebas pada hewan coba
diabetes.
Akan tetapi pada dosis tinggi yaitu dosis 3 skor rata-rata kerusakan
pankreas lebih tinggi dari pada dosis 1 atau 2. Hal ini dimungkinkan karena terlalu
tinggi dosis yang diberikan. Menurut Jati (2008), menyatakan bahwa besar
konsentrasi antioksidan yang ditambahkan dapat berpengaruh pada laju oksidasi.
Pada konsentrasi tinggi, aktivitas antioksidan grup fenolik sering lenyap bahkan
antioksidan tersebut menjadi prooksidan (Gambar 4.4). Pengaruh jumlah
konsentrasi pada laju oksidasi tergantung pada struktur antioksidan, kondisi dan
sampel yang akan diuji. Sedangkan menurut Hudson (1990) dalam penelitian
Septiana, dkk (2002) menyatakan bahwa kadang-kadang aktivitas fenolik
(senyawa flavonoid) berkurang dan berubah menjadi prooksidan karena
keterlibatannya pada reaksi inisiasi seperti pada gambar 4.4. Jadi, dapat diambil
kesimpulan bahwa dosis optimum yang mampu bertindak sebagai antioksidan
yaitu flavonoid yang terkandung pada ekstrak biji klabet pada dosis 2 (1,76
mg/ekor/hr).
Gambar 4.4. Antioksidan bertindak sebagai prooksidan pada konsentrasi tinggi (Septiana, dkk, 2002)
Dengan pewarnaan Hemotosilin-Eosin pada preparat tikus diabetes tanpa
perlakuan, dalam histologi pankreas tampak pulau-pulau Langerhans. Inti sel
menunjukkan adanya nekrosis baik piknosis maupun hiperkromasi marginal.
Dalam sitoplasma sel nekrosis terjadi penurunan hidrofik dan degranulasi,
sedangkan sebagian dari inti sel piknotik yang mempunyai sitoplasma eosinofilik
ditandai dengan warna gelap (pembekuan nekrosis). Sel yang berkurang
menandakan adanya ketidakhadiran lipid dan glikogen. Tikus diabetes dengan
perlakuan terdapat perubahan nekrotik dan adanya penurunan didalam parenkim
pulau Langerhans, karena beberapa sel dengan inti piknotik sebagian besar sel
AH + O2 -----------> A* + HOO*
AH + ROOH ---------> RO* + H2O + A*
menunjukkan penurunan hidrofilik yang signifikan dibandingkan dengan tikus
kontrol potitif dan sebagian menandakan pembutiran atau pembentukan kembali
pulau Langerhans, dan pulau Langerhans dengan jelas memperbesar ukurannya
(Kanter dkk, 2003).
Hal tersebut sesuai dengan penelitian yang telah dilakukan tentang
pengaruh ekstrak biji klabet terhadap kadar glukosa darah dan gambaran histologi
pankreas mencit yang terpapar STZ. Perlakuan ekstrak biji klabet selam 30 hari,
didapatkan hasil bahwa terjadi penurunan kadar glukosa darah dan peningkatan
konsentrasi hormon insulin. Mencit diabetes dengan perlakuan ekstrak biji klabet
terdapat perubahan nekrotik, serta terdapat suatu perbaikan sel β pulau
Langerhans yang ditunjukkan dengan adanya pembentukan kembali pulau
Langerhans (memperbesar ukurannya) (gambar 4.). Telah dijelaskan bahwa
prinsip yang aktif dari tumbuhan mungkin bertindak dengan beberapa mekanisme
seperti merangsang pengeluaran hormon insulin, meningkatkan
perkembangbiakan sel β pankreas dan meningkatkan kemampuan oksidatif. Hasil
yang menunjukkan bahwa konsentrasi glukosa darah menurun dengan perlakuan
ekstrak biji klabet dimungkinkan terjadi regenerasi atau poliferasi yang parsial
didalam sel β pankreas. Bagaimanapun, mekanisme ekstrapankreatik seperti
glukosa ditingkatkan mengangkut ke dalam sel dan meningkatkan pembentukan
glikogen didalam hati, dimungkinkan ekstrak biji klabet merangsang penurunan
konsentrasi glukosa darah pada mencit diabetes. Disimpulkan bahwa tindakan
hipoglikemik ekstrak biji klabet dapat berkaitan dengan ameliration didalam sel β
pankreas yang menyebabkan suatu peningkatan dalam pengeluaran hormon
insulin.
Kerusakan sel-sel β pankreas tersebut, membawa pengaruh terhadap
pensekresian insulin darah sehingga kadar dalam glukosa akan meningkat. Hal ini
terlihat pada mencit kelompok positif, akan tetapi berbeda dengan kelompok
perlakuan dengan biji klabet (Trigonella foenum graecum L). Setelah dilakukan
terapi selama satu bulan, kerusakan pankreas menjadi berkurang dan kadar
glukosa darah yang tinggi menjadi menurun (lampiran 5). Menurut Widowati
(1989), menyatakan bahwa diduga ekstrak biji klabet (Trigonella foenum graecum
L) mempunyai aktifitas hipoglikemik karena mengandung berbagai senyawa
kimia diantaranya adalah flavonoid dan alkaloid sebagai antioksidan. Hal ini
terbukti bahwa dengan terapi ekstrak biji klabet telah memberikan efek dalam
menurunkan kadar glukosa darah pada mencit (Mus musculus) diabetes secara
berarti.
Flavonoid merupakan suatu senyawa yang banyak ditemukan dalam buah-
buahan dan sayuran yang berfungsi memberi efek antioksidan. Tindakan
antioksidatif oleh flavonoid dapat mencegah radikal bebas untuk melepaskan sel ß
pankreas dalam mensekresikan insulin. Antioksidan merupakan molekul yang
berinteraksi dengan radikal bebas dan mengakhiri reaksi rantai sebelum molekul
penting mengalami kerusakan (Sani, dkk, 2008).
Beberapa studi memang menunjukkan adanya efek hipoglikemik dari biji
klabet (Trigonella foenum graecum L) yang mengandung senyawa aktif
flavonoid, alkaloid, trigonelin, asam nikotinat, dan coumarin. Mekanisme
utamanya adalah penghambatan enzim alfa-glukosidase di usus dan stimulasi
sekresi insulin. Beberapa mekanisme tambahan adalah perlambatan penyerapan
glukosa, penghambatan transpor glukosa dari kandungan serat, peningkatan
reseptor insulin dan modulasi sekresi pankreatik eksokrin. Salah satu cara untuk
mengendalikan kadar glukosa darah pada penderita diabetes mellitus adalah
dengan menghambat aktivitas enzim alfa glukosidase, yaitu enzim didalam
pencernaan yang bertanggung jawab terhadap konversi karbohidrat menjadi
glukosa. Karbohidrat yang kita makan sehari-hari misalnya nasi, kentang, roti dan
pasta, akan dicerna oleh enzim-enzim didalam mulut dan usus menjadi gula.
Proses pencernaan karbohidrat tersebut menyebabkan pankreas melepaskan enzim
alfa-amilase ke dalam usus yang akan mencerna karbohidrat tersebut menjadi
oligosakarida yang kemudian dirombak lagi menjadi glukosa oleh enzim alfa-
glukosidase yang dikeluarkan oleh sel-sel usus kecil yang kemudian akan diserap
ke dalam tubuh. Dengan dihambatnya kerja enzim alfa glukosidase, kadar glukosa
dalam darah dapat dikendalikan dalam batas normal (Subroto, 2006).
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan
Berdasarkan hasil dan pembahasan pada bab sebelumnya, dapat
disimpulkan bahwa ekstrak biji klabet (Trigonella foenum graecum L)
berpengaruh dalam menurunkan kadar glukosa darah mencit (Mus musculus) yang
terpapar streptozotocin. Dosis optimal yang mampu menurunkan kadar glukosa
darah mencit diabetes adalah pada dosis 2 (1,76 mg/ekor/hari). Jadi, dosis yang
dapat digunakan manusia untuk terapi hiperglikemia adalah ekstrak biji klabet
1,76 mg/hari. Pemberian ekstrak biji klabet (Trigonella foenum graecum L)
selama satu bulan juga berpengaruh terhadap perbaikan histologi pankreas pada
mencit diabetes sebasar 30%.
5.2 Saran
1. Perlu diteliti besar kandungan antioksidan yang terdapat dalam ekstrak biji
klabet
DAFTAR PUSTAKA
Al-qur’anul Karim Akbar, Nurul. 2004. Ilmu Penyakit Dalam Jilid 1. Jakarta: Gaya Baru Al-jauziyah, Ibnu Qayyim. 2008. Praktek Kedokteran Nabi, penerjemeh Abu
firly. Jogjakarta: Hikam Putra Al-Jauziah, Ibnu Qoyyim. 1994. Sistem Kedokteran Nabi. Semarang: Dina Utama
Semarang (DIMAS) Aronoff, Stephen L, dkk. 2004. Glucose Metabolism and Regulation: Beyond
Insulin and Glucagon. Feature Article Feature Article: Volume 17 Ardiansyah, 2008. Antioksidan dan peranannya bagi kesehatan. Jepang: Tohoku
University Sendai, Jepang dan anggota ISTECS chapter Jepang Astrian, R Tanita. 2009. Pengaruh Antioksidan Polifenol Terhadap Kadar Glukosa
Darah dan Insulin Mencit (Mus musculus L.) S.W. Jantan yang Dikondisikan Diabetes Mellitus. Skripsi
Az-Zabidi, Imam. 1997. Ringkasan Shahih Al-Bukhari. Bandung: Mizan. Bilous, Rudy W. 2003. Diabetes. Alih bahasa: Pangemanan, Christine. Jakarta:
Dian Rakyat Campbell, Neil A, dkk. 2004. Biologi, (Terj.): Manalu, W. Biologi. Edisi ke lima
jilid III. Jakarta: Erlangga.
Chandrasoma, Parakrama. 2005. Ringkasan Patologi Anatomi. Alih bahasa: Roem Soedoko. Jakarta: EGC
Dalimartha, Setiawan. 2007. Tanaman Tradisional Untuk Pengobatan Diabetes
Mellitus. Jakarta: Penebar Swadaya. Damjanov, Ivan. 2000. Histopatologi: Buku Teks dan Atlas berwarna. Alih
bahasa: Brahm, U. Jakarta: Widya Medika
El-Soud, Neveen HA, dkk. 2007. Antidiabetic Effects Of Fenugreek Alkaloid Extract In Streptozotocin Induced Hiperglikemic Rats. Journal of applied sciences reaserch, 3 (10): 1073-1083
Guyton, Arthur C. 1990. Fisiologi Manusia dan Mekanisme Penyakit. Jakarta: Penerbit buku kedokteran EGC
Jati, Siswono H. 2008. Efek antioksidan ekstrak etanol 70% daun Salam (syzygium polyanthum [wight.] Walp.) Pada hati Tikus putih jantan galur wistar yang diinduksi Karbon tetraklorida (ccl4). Fakultas farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta. Skripsi
Junqueira, Luis C. 1980. Histology Dasar. Jakarta: EGC
Kusumawati, Diah. 2004. Bersahabat dengan Hewan Coba. Yogyakarta: Gajah Mada University Press
Kanter, Mahmet, dkk. 2003. Partial Regeneration/Proliferation of the β-Cells in the Islets of Langerhans by Nigella sativa L. in Streptozotocin-Induced Diabetic Rats. Tohoku J.Exp. Med, 2003, 201, 213-219
Linder, Maria. 1992. Biokimia Nutrisi dan Metabolism. Jakarta: UI Press
Maulana, Mirza. 2008. Mengenal Diabetes Mellitus: Panduan Praktis Menangani Kencing Manis. Jogjakarta: Katahati
Mahmud, Mahir Hasan. 2007. Mukjizat Kedokteran Nabi. Jakarta: Qultum Media Merentek, Enrico. 2006. Resistensi Insulin Pada Diabetes Melitus Tipe 2.
http://www.kalbefarma.com/cdk. akses: 20 Agustus 2009 Minarno, Eko B dan Lilik H. 2008. Gizi dan Kesehatan Perspektif Al-Qur’an.
Malang: UIN Malang Press Montgomery, Conway. 1993. Biokomia: Berorientasi Pada Kasus Klinik. Alih
bahasa: staf pengajar FKUI. Jakarta: Binarupa Aksara Nugroho, Agung Endro. 2006. Review Hewan Percobaan Diabetes Mellitus:
Patologi Dan Mekanisme Aksi Diabetogenik. Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada
Pearce, evelyn. 1979. Anatomi dan Fisiologi Untuk Paramedis. Alih bahasa: Sri Yuliana. Jakarta: PT. Gramedia Pustaka
Price, Sylvia A dan Lorraine M Wilson. 1999. Patofisiologi. Konsep klinis proses-proses penyakit. Jakarta: EGC
Radji, Maksum. 2005. Peranan Bioteknologi dan Mikroba Endofit Dalam
Pengembangan Obat Herbal. Vol. II. No.3 Desember 2005, 113-126. Majalah ilmu kefarmasian. Departemen farmasi, FMIPA-UI
Robinson, Trevor. 1995. Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi. Bandung: Penerbit ITB
Rossidy, Imron. 2008. Fenomena Flora dan Fauna dalam Pesspektif Al-Qur’an.
Malang: UIN Press. Sani, Halimah A, dkk. 2008. Ekstrak Akues Gynura procumbens Menurunkan
Aras Glukosa Darah dan Meningkatkan Kualiti Sperma Tikus Teraruh Diabetis. Sains Malaysiana 37(4): 435-441
Savitri, Evika S. 2008. Rahasia Tumbuhan Berkhasiat Obat Perspektif Islam.
Malang: UIN-Malang Press Setiadi. 2007. Anatomi dan Fisiologi Manusia. Jogjakarta: Graha Ilmu
Septiana, Aisyah, dkk. 2002. Ekstrak Jahe (Zingiber officinale roscoe) Penghambat Oksidasi LDL. Jurnal teknologi dan industri pangan, Vol XIII, No.1 Th 2002
Syahrin, Ahmad. 2006. Kesan Ekstrak Etanol Andrographis Paniculata (burm. F.)
Nees ke atas Tikus betina diabetik aruhan streptozotosin. Malaisia: Universiti Sains Malaysia. Skripisi
Soewolo. 2000. Pengantar Fisiologi Hewan. Jakarta: Departemen Pendidikan
Nasional Stiawan, Bambang dan Eko S. 2005. Stres Oksidatif dan Peran Antioksidan pada
Diabetes Melitus. Dokter Muda-Asisten Kimia Kedokteran, Bagian Kimia Kedokteran, Fakultas Kedokteran Universitas Lambung Mangkurat, Banjarbaru, Kalimantan Selatan. Volum: 55, Nomor: 2
Studiawan, Herra dan Muldja. 2005. Uji aktivitas Penurun Kadar Glukosa Darah
Ekstrak Daun Eugenia polyantha pada Mencit yang Diinduksi Aloksan. Bagian Ilmu Bahan Alam, Fakultas Farmasi, Universitas Airlangga Surabaya. Vol. 21, no 2
Subroto, M Ahkam. 2006. Ramuan Herbal Untuk Diabetes Mellitus. Jakarta:
Penebar Swadaya Suharmiati. 2003. Pengujian Bioaktivitas Anti Diabetes Mellitus Tumbuhan Obat.
Surabaya: Balai Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Pusat Penelitian dan Pengembangan Pelayanan dan Teknologi Kesehatan. DEPKES RI
Suharto B dan Tony H. 2001. Farmakologi dan Terapi. Jakarta: EGC
Szkudelski, k. Szkudelska. 2002. Streptozotocin Induces Lipolysis in Rat Adipocytes in Vitro. Department of Animal Physiology and Biochemistry, University of Agriculture, Poznań, Poland. Physiol. Res. 51: 255-259
Utami, Prapti. 2008. Buku Pintar, Tanaman Obat. Jakarta selatan: PT. Agromedia
Pustaka Widowati, Lucie B. Dzulkarnain. 1989. Pengaruh Biji Klabet (Trigonella foenum-
graecum Linn) terhadap Kadar Gula Darah. Pusat Penelitian dan Pengembangan Farmasi, Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan, Departemen Kesehatan R.I., Jakarta.
Lampiran 1. Kerangka Konsep Penelitian
Ekstrak biji klabet
Flavonoid, alkaloid sebagai
antioksidan
Mencit diinduksi diabetes dengan
streptozotocin
Memperbaiki sel beta pankreas
Kadar glukosa turun
Kadar glukosa darah tinggi
Defisiensi/resistensi insulin
Terjadi kerusakan sel beta pankreas
Lampiran 2. Diagram A
Kelompokpositif
Dosismg/eko
Alur Penelitian
Mencitdiaklimatisasi 2
minggu
penimbangan berat badan
Kelompok mencitDM yg diinduksi dg
STZ 50 mg/kg bb
pengukuran kadar glukosa darah
elompok kontrolpositif DM
Perlakuan
Dosis I (0,89 ekor/hari
Dosis II (1,76 mg/ekor/hari)
dosis III (3,52 mg/ekor/hari)
Kelompok kontrolnegatif DM
Lampiran 3. Prosedur Ekstraksi biji klabet
Serbuk klabet
Ditimbang 100 g
Ditambahkan ethanol 70% 150 mL
Didiamkan selama 12 jam, Tiap 6 jam diaduk.
Setiap 12 jam sekali disaring
Filtrasi I Residu
Ditampung dalam erlenmeyer
Dilarutkan lagi dengan ethanol 70% 150 mL
Langkah sama seperti langka di atas
Filtrasi II Residu
Dilarutkan lagi dengan ethanol 70% 150 mL
(Idem)
Filtrasi III Residu
Digabung
Dibuang Di evaporasi
Lampiran 4. Data pengamatan kerusakan pankreas mencit
Tabel 1. Skor kerusakan pankreas
Perlakuan Data Ulangan
1 2 3 4 5 1 0 0 0 0 0
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
2 3 2 3 2 3 3 3 2 3 3 2 3 3 3 2
3 1 0 2 2 0 1 1 2 1 1 1 1 1 1 1
4 1 0 2 1 0 1 1 1 2 1 2 1 1 2 1
5 1 1 1 1 1 2 0 1 2 2 2 1 1 1 3
NPAR TESTS
/K-W=perlakuan BY data(0 3)
/MISSING ANALYSIS.
NPar Tests
[DataSet0]
Kruskal-Wallis Test
Ranks
data N Mean Rank
perlakuan 0 20 18.48
1 28 52.30
2 16 44.44
3 10 23.00
Total 74
Test Statisticsa,b
perlakuan
Chi-Square 36.590
df 3
Asymp. Sig. .000
a. Kruskal Wallis Test
b. Grouping Variable: data
Kesimpulan: sig 0,000 (p<0,05), berarti H1 diterima, H0 ditolak, maka ada
pengaruh pemberian ekstrak biji klabet (Trigonella foenum graecum L) terhadap perbaikan sel-sel pankreas
Lampiran 5. Data kadar gukosa darah (mg/dl) mencit sebelum dan sesudah perlakuan satu bulan
Tabel 1. Data Kadar Glukosa Darah (mg/dl) Mencit Sebelum Perlakuan
Perlakuan Ulangan Total Rerata
X1 X2 X3 X4 X5
K- 92 81 72 93 78 416 83,2
K+ 190 159 194 183 157 883 176,6
D1 245 310 157 220 181 1113 222,6
D2 153 141 151 141 158 744 148,8
D3 196 175 148 175 185 879 175,8
Total 876 866 722 812 759 4035 807
Tabel 2. Data Kadar Dlukosa Darah (mg/dl) Mencit Sesudah Perlakuan
Ekstrak Biji Klabet (Trigonella foenum graecum L.) Satu Bulan
Perlakuan Ulangan Total Rerata
Y1 Y2 Y3 Y4 Y5
K- 87 79 81 89 83 419 83,8
K+ 187 172 188 197 176 920 184
D1 89 146 112 124 101 572 114,4
D2 91 89 79 65 62 386 77,2
D3 138 107 114 100 145 604 120,8
Total 592 593 574 575 567 2901 580,2
Tabel 3. Data kadar gukosa darah (mg/dl) mencit sebelum dan sesudah perlakuan ekstrak biji klabet (Trigonella foenum graecum L.) satu bulan
Perlakuan ulangan Total Rerata
X1 Y1 X2 Y2 X3 Y3 X4 Y4 X5 Y5 X Y X Y
K- 92 87 81 79 72 81 93 89 78 83 416 419 83,2 83,8
K+ 190 187 159 172 194 188 183 197 157 176 883 920 176,6 184
D1 245 89 310 146 157 112 220 124 181 101 1113 572 222,6 114,4
D2 153 91 141 89 151 79 141 65 158 62 744 386 148,8 77,2
D3 196 138 175 107 148 144 175 100 185 145 879 604 175,8 120,8
Total 876 592 866 593 722 574 812 575 759 567 4035 2901 807 580,2
Keterangan:
X = sebelum perlakuan
Y = sesudah perlakuan
Lampiran 6. Perhitungan Analisis Kovarian (ANKOVA) kadar glukosa darah mencit diabetes
A. Pengamatan XX (Sebelum Perlakuan)
1. Menghitung Faktor Koreksi (FK)
FK = ��������
= ������ �
= 651249
2. Menghitung Jumlah Kuadrat (JK)
JK Total = Σ X2 – FK
= (922 + 1902 + 2452 + …+ 1852) – 651249
= 720763 – 651249
= 69514
JK perlakuan = ��������������������������������������� � � ���
= ������������������������
� � ���� !"
= 703538,2 – 651249
= 52289,2
JK galat = JK Total – JK Perlakuan
= 651249 - 52289,2
= 17224,8
3. Menghitung JK perlakuan + JK galat (JK p+g)
JK p+g = JK perlakuan + JK galat
= 52289,2 + 17224,8
= 69514
B. Pengamatan XY (Sebelum dan Sesudah Perlakuan)
1. Menghitung Faktor Koreksi (FK)
FK = �����#�
���
= ���� "$��
� �
= 468221,4
2. Menghitung Jumlah Kuadrat (JK)
JK Total = Σ (X.Y) – FK
= [(92x87)+(190x187) + (245x89)+ …+(185x145)] -
468221,4
= 492561 – 468221,4
= 24339,6
JK Perlakuan = ������%��������� #�������� � #��������� � #�
� � ���
= ���� ���������� �����&�������� ��
� � �!�' �(!
= 488280 – 468221,4
= 20058,6
JK Galat = JK Total – JK Perlakuan
= 24339,6 – 20058,6
= 4281
3. Menghitung JK perlakuan + JK galat (JK p+g)
JK p+g = JK perlakuan + JK galat
= 20058,6 + 4281
= 24339,6
C. Pengamatan YY (Sesudah Perlakuan)
1. Menghitung Faktor Koreksi (FK)
FK = ��#�����
= ������� �
= 336632
2. Menghitung Jumlah Kuadrat (JK)
JK Total = Σ Y2 – FK
= (872 + 1872 + 892 + …+ 1452) - 336632
= 377247 – 336632
= 40614,96
JK perlakuan = ��#������%��������%������%���
� � �)*
= ������������������������������������
� � ���
= �������
� � �++��+
= 35959,36
JK Galat = JK Total – JK Perlakuan
= 406164,96 – 35959,36
= 4655,6
4. Menghitung JK perlakuan + JK galat (JK p+g)
JK p+g = JK perlakuan + JK galat
= 35959,36 + 4655,6
= 40614,96
D. Menghitung db Awal
1. Db perlakuan = t-1 = 5-1 = 4
2. Db galat = (rt-1) – (t-1) = 24 – 4 =20
3. Db total = (rt-1) = 25 – 1 = 24
E. Menghitung JK Regresi
1. JKR galat = �,-�./0/���%��,-�./0/����
= ��������(�
=1063,987
2. JKR p+g = �,-123�,-423��
122�422
= �����(����"��!
= 8522,26
F. Menghitung JK galat Regresi Terkoreksi (JKGTR)
1. JKGTR galat = 566 �� �789�5::
= JKyy – JKregresi
= 4655,6 – 1063,98
= 3591,61
2. JKGTR p+g = ;<< = ><< �� �?89�789��
;@@�788
= JKyy (p+g) – JK regresi yy (p+g)
= 60614,96 – 8522,26
= 32092,7
G. Menguji Perlakuan Terkoreksi
MPT = A;<< = ><< �� �;@<�789��
122B422 C � �566 � 423422
= JKGT p+g – JKGT galat
= 32092,7 – 3591,61
= 28501,09
H. Menghitung db Terkoreksi
1. Db galat = (r-1) (t-1) – 1
= (5-1) (5-1) – 1
=15
2. Db p+g = r (t-1) – 1
= 5 (5-1) -1
=19
3. Db perlakuan = db p+g – db galat
= 19 – 15
= 4
I. Menghitung KT Galat Murni (KTGM)
1. KTGM galat = >� 423B��789��789DE�./0/�
= FG�HIJKILM�NIKOPKIOLM
DE�./0/�
= +�"�(���
��
= 239,44
2. KT perlakuan terkoreksi = Q�5RDE
= ����(��
=7125,27
J. Tabel ANKOVA
SK db JK JK
regresi
db JK galat
terkoreksi
db KTGM
XX XY YY
Perlakuan 4 52289,2 20058,6 35959,36 - - - - -
Galat 20 17224,8 4281 4655,6 1063,987 1 3591,613 15 239,44
p+g 24 69514 24339,6 40614,96 8522,26 1 32092,7 19 -
Menguji
perlakuan
- - - - - - 28501,09 4 7125,27
K. Mencari F hitung
F hitung = -S4T��T1S�-S4T��4�
= ����(�����(��
= 29,75
F tabel = 2,84
Maka F hitung > F tabel, dengan kesimpulan H1 diterima dan H0 ditolak
L. Mencari BNT 5%
BNT 5% = t 0,05 (dbg) Sd
= 2,1 UGV7W
K � �� = ,-�XY�0/Z[/\��B���,-�./0/���
= 2,1 ���(
� �� = �����(� �]] !(�
= 2,1 !]('"��� = $(]��
= 2,1 !"(��
= 2,1 7,04
= 14, 78
M. Menghitung perlakuan rata-rata terkoreksi
1. b = 423>@@
= ���
�] !(�
= 0,25
2. Menghitung :_ (rata-rata)
:_ = �2���
= ��� �
=161,4
N. Tabel perlakuan rata-rata terkoreksi
Perlakuan Rata-rata
KDG sebelum
perlakuan (ai)
Penyimpangan
( ai - a) Koreksi
by.x(ai - a) Rerata
KDG
sesudah
perlakuan
ba i
Rerata
KDG
terkoreksi
(ba i-koreksi)
K- 83,2 78,2 19,55 83,8 64,25
K+ 176,6 15,2 3,8 184 180,2
D1 222,6 61,2 15,3 114,4 99,1
D2 148,8 -12,6 3,15 77,2 75,05
D3 175,8 14,4 3,6 120,8 117,2
Keterangan: KDG = Kadar Glukosa Darah
O. Ringksan uji BNT 5% dari penurunan kadar glukosa darah dengan ekstrak biji klabet (Trigonella foenum graecum L)
Perlakuan Rerata Notasi BNT
5%
D2 77,2 a
K- 83,8 a
D1 114,4 b
D3 120,8 b
K+ 184 c
Lampiran 7. Gambar alat-alat yang digunakan dalam penelitian
Gambar 1. Timbangan digital Gambar 2. Glukometer dan strip glukotest
Gambar 3. Seperangkat alat bedah Gambar 4. Rotary evaporator
Lampiran 8. Gambar Bahan-bahan Penelitian
Gambar 1. Streptozotocin dan buffer sitrat pH=4,5
Gambar 2. Ethanol 70%, ekstrak biji klabet, CMC