4. 1998. 1980. V. 288. P. 373 376. (1). 97. 5. Michel J.-B ... ·...

Экспериментальная биология и медицина

10

4. Furchgott, R.E., Zawadzki, J.V. Biology of nitric

oxide // Nature. – 1980. – V. 288. – P. 373–376.

5. Michel J.-B. NO (Nitric oxide) and Cardiovascu-

lar Homeostasis. – 1999. – Menarini International

Industrie Farmaceutiche Riunite. – S.R.l., Paris.

6. Faraci F.M., Heistad D.D. Regulation of the cer-

ebral circulation: role of endothelium and potas-

sium channels // Physiol Rev. – 1998. – Vol. 78

(1). – P. 53–97.

7. Laursen J.B., Rajagopalan S., Galis Z. et al. Role

of superoxide in angiotensin II–induced but not

catecholamine-induced hypertension // Circula-

tion. – 1997. – Vol. 95. – P. 588-593.

Курский научно-практический вестник "Человек и его здоровье", 2007, № 3

11

УДК 615:076.9:59:615.213

ДОКЛИНИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ПРОТИВОСУДОРОЖНОЙ АКТИВНОСТИ

И ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ПРЕПАРАТА С АКТИВНОЙ СУБСТАНЦИЕЙ

ЛАМОТРИДЖИН

© Лучкина Е.В., Гуреев В.В., Покровский М.В.

НИИ экологической медицины Курского государственного медицинского университета

Сравнительное изучение препаратов "Трилам" производства ОАО "Фармстандарт-Лексредства" и "Ла-

миктал" производства "ГлаксоСмитКляйн Фармасьютикалз СА" показало, что препарат отечественного

производителя по своим токсическим качествам и противосудорожной активности не отличается от зару-

бежного аналога.

Ключевые слова: доклиническое исследование, Ламотриджин, токсичность, противосудорожная ак-

тивность, животные.

PRECLINICAL INVESTIGATING THE ANTICONVULSANT ACTIVITY AND TOXICOLOGICAL

PROPERTIES OF A PREPARATION WITH AN ACTIVE SUBSTANCE LAMOTRIGINE

Luchkina E.V., Gureev V.V., Pokrovsky M.V.

SRI of Ecological Medicine of the Kursk State Medical University

The comparative study of the preparations "Trilam" manufactured by JSC "Pharmstandart-Leksredstva" and

"Lamictal" manufactured by "GlaxoSmithClain Pharmaceutical SA" has shown that the home-made preparation

does not differ from foreign analogue in terms of toxic qualities and anticonvulsant activity.

Key words: preclinical research, Lamotrigine, toxicity, anticonvulsant activity, animals.

Эпилепсия – самое старое из известных на

сегодняшний день нарушение функций го-

ловного мозга, она сопровождает человече-

ский род на всем протяжении его существо-

вания. Достижения современной фармаколо-

гии позволили достичь значительных успехов

терапии данного заболевания. Однако требо-

вания, предъявляемые к противоэпилептиче-

ским препаратам, ставят все новые и новые

задачи перед исследователями.

Терапия данного заболевания, нередко,

продолжается на протяжении многих лет, по-

этому, наряду с высокой эффективностью,

препараты должны обладать минимумом по-

бочных эффектов [1].

Одним из препаратов наиболее удовле-

творяющим эти требования является Ламот-

риджин. Его противосудорожный эффект

обусловлен главным образом двумя механиз-

мами. Препарат стабилизирует пресинапти-

ческую нейрональную мембрану, блокируя

вольтажзависимые натриевые каналы [10, 11,

13, 14, 15]. Кроме того, он ограничивает вы-

свобождение возбуждающих нейромедиато-

ров – глутамата и аспартата [12]. Эффек-

тивность данного препарата доказана приме-

нением его в зарубежных клиниках более

10 лет [5, 6, 7, 8, 9].

Длительность лечения и социально-

экономическая обстановка, сложившаяся в

стране на протяжении последних 20 лет, де-

лает немаловажным и экономический аспект

терапии данного заболевания.

Наиболее перспективным направлением в

этой области является создание отечествен-

ных генерических аналогов зарубежным

наиболее удачным препаратам. Одной из по-

пыток является создание отечественного про-

тивоэпилептического препарата, активной

субстанцией которого является Ламотри-

джин.

В настоящей работе приведены результа-

ты сравнительного исследования противосу-

дорожной активности и токсикологических

свойств отечественного противоэпилептиче-

ского препарата "Трилам" с активной суб-

станцией ламотриджин производства ОАО

"Фармстандарт-Лексредства" и препарата

"Ламиктал" производства "ГлаксоСмитКляйн

Фармасьютикалз СА" (Польша).


12

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

ИССЛЕДОВАНИЯ

Противосудорожную активность препара-

тов исследовали на крысах Wistar массой 180-

220 г и оценивали по результатам проведен-

ного теста максимального электрошока

(МЭШ). Через краниальные электроды жи-

вотные получали электрические стимулы в

220 V, 50 Hz длительностью 0,1 с. Использу-

емый показатель – максимальная тоническая

экстензия задних конечностей. Для дальней-

шего эксперимента отбирались животные с

данным явлением. Их рандомизировали на 3

группы. Через 3 дня тест повторяли с живот-

ными, которым предварительно за 2 часа

вводились препараты или 1% крахмальный

клейстер (контрольная группа). Эффект оце-

нивали по уменьшению количества животных

с максимальной тонической экстензией зад-

них конечностей.

Исследование острой токсичности прово-

дили на беспородных мышах массой 18-22 г.

Препараты вводились внутрижелудочно од-

нократно в объеме 0,1 мл крахмального клей-

стера на 10 г веса животного в дозах

250 мг/кг, 200 мг/кг, 150 мг/кг. О токсиче-

ском действии препарата судили по общему

состоянию животных, развитию картины ток-

сических проявлений и смертности. Результа-

ты учитывались в течение двух недель. LD50

рассчитывали методом пробит-анализа.

Эксперименты по изучению субхрониче-

ской токсичности проводили на обоеполых

крысах Wistar. Масса животных к началу экс-

перимента составляла 180-220 г.

Через 14 дней после нахождения крыс в

виварии в стандартных условиях содержания

и кормления определяли массу тела, оцени-

вали общее состояние животных (двигатель-

ную активность, поведение, состояние види-

мых слизистых, кожи, подкожной жировой

ткани и волосяного покрова).

Отечественный препарат, как и зарубеж-

ный аналог, вводили утром натощак одно-

кратно внутрижелудочно в дозах 0,33 и

0,83 таб./кг. Межвидовой расчет доз прово-

дили по Р.У. Хабриеву с соавт. [2], исходя из

терапевтической дозы для человека.

Наблюдение за животными проводили в

течение 14 суток во время кормления и

14 суток во время "отсидки", регистрируя

клиническую картину. Для характеристики

функционального состояния внутренних ор-

ганов после 14-дневного перорального при-

менения препаратов и после последующей

2-недельной "отсидки" делали развернутый

анализ крови и в сыворотке венозной крови

определяли ряд биохимических параметров,

используемых в токсикологии в качестве

маркеров повреждения внутренних органов:

общий белок сыворотки крови, мочевину,

глюкозу, аспартатаминотрансферазу (АСТ),

аланинаминотрансферазу (АЛТ).

Поведенческие реакции, двигательную

активность и психоэмоциональное состояние

животных оценивали при наблюдении за ни-

ми на протяжении всего эксперимента и при

проведении теста "открытое поле" на 14 и

28 день. В течение 3 мин. регистрировались

такие параметры, как количество пересечен-

ных квадратов, акты дефекации.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

При повторном проведении теста МЭШ у

животных контрольной группы максимальная

тоническая экстензия задних конечностей

возникала в 100% случаев. При введении ис-

следуемых препаратов в дозе 0,04 таб./кг (при

пересчете соответствует начальной рекомен-

дуемой дозе) количество животных с макси-

мальной тонической экстензией в обеих

группах составило 30% (табл. 1). При увели-

чении дозы вводимых препаратов до

0,16 таб./кг (максимальная рекомендуемая

терапевтическая доза) максимальной тониче-

ской экстензии задних конечностей у живот-

ных обеих группах не наблюдалось.

Таким образом, оба исследуемых препа-

рата обладают одинаковой противосудорож-

ной активностью на модели максимального

электрошока.

Проведенные исследования острой ток-

сичности показали, что LD50 препарата "Ла-

миктал" составило 233,72±16,8 мг/кг, что со-

ответствует литературным данным. LD50 пре-

парата "Трилам" составило 200±10,07 мг/кг.

Результаты более детального анализа с ис-

пользованием метода пробит-анализа пред-

ставлены в табл. 2.


13

Таблица 1

Влияние препарата "Трилам" и "Ламиктал" на возникновение максимальной экстензии задних

конечностей (%, n=10)

Дозировка

Препарат

0,04 таб./кг 0,16 таб./кг

Трилам 30* 0*

Ламиктал 30* 0*

Интактные 100 100

Примечание. * – при р<0,05 по сравнению с контролем.

Таблица 2

Исследование LD50 препаратов "Трилам" и "Ламиктал"

Трилам

LD50 200 мг/кг

Стандартная ошибка LD50 10,07мг/кг

Нижняя граница LD50 179,4 мг/кг

Верхняя граница LD50 220,6мг/кг

Ламиктал

LD50 233,72 мг/кг

Стандартная ошибка LD50 16,8 мг/кг

Нижняя граница LD50 199,36 мг/кг

Верхняя граница LD50 268,08 мг/кг

Таблица 3

Динамика токсических проявления при определении LD50 препарата "Трилам" в сравнении

с препаратом "Ламиктал" (M±m, n=10)

Препарат

Двигательные

нарушения,

(с)

Потеря

вертикального

положения тела,

(с)

Летальность,

(%)

Трилам 250 мг/кг 540±62 3302±571 90

Ламиктал 250 мг/кг 649±72 4635±586 60

Трилам 200 мг/кг 734±57 4253±262 50

Ламиктал 200 мг/кг 954±86 4768±256 30

Трилам 150 мг/кг 836±99 4844±437 10

Ламиктал 150 мг/кг 999±111 4827±407 10

При введении обоих препаратов у живот-

ных всех групп отмечались выраженные ток-

сические явления: атаксия, тремор, гипокине-

зия и ригидность – явления обратимого изо-

лированного паркинсонизма, связанного с

угнетением высвобождения глутаминовой

кислоты из пресинаптических окончаний

нейронов. В дальнейшем животные утрачи-

вали способность поддерживать естествен-

ную позу, наступала кома и гибель животно-

го. Проявления интоксикации носили как

четко выраженный стадийный, так и дозоза-

висимый характер (табл. 3).

Приведенные данные позволяют сделать

вывод об отсутствии статистически значимой

разницы между LD50 препаратов, так как пе-

рекрываются не только доверительные ин-

тервалы, но и полученное значение LD50 пре-

парата "Трилам" находится в пределах дове-

рительного интервала LD50 препарата срав-

нения.

При 14-дневном пероральном введении

препаратов "Трилам" производства ОАО


14

"Фармстандарт-Лексредства", "Ламиктал"

производства "ГлаксоСмитКляйн Фармась-

ютикалз СА" в 2- и 5-кратной терапевтиче-

ских дозах наблюдается увеличение массы

тела крыс, одинаковое во всех изучаемых

группах (табл. 4). Более медленное увеличе-

ние масса тела животных в период введения

препаратов объясняется некоторой травмати-

зацией пищевода зондом.

Результаты ежедневного наблюдения за

экспериментальными животными свидетель-

ствуют о том, что 14-дневное пероральное

введение препаратов "Трилам" и "Ламиктал"

в обеих дозах не оказывает влияния на состо-

яние интактных участков кожи, видимых

слизистых, подкожной жировой ткани, воло-

сяного покрова.

На протяжении всего эксперимента у

крыс в опытах с исследуемыми препаратами,

так же, как и у животных контрольной серии,

видимые слизистые оставались бледно-

розового цвета, были влажными, чистыми,

без признаков воспаления. Отсутствовали

симптомы бронхита, конъюнктивита и рини-

та. Шерсть была густой, гладкой и блестя-

щей, признаков очаговой или общей алопе-

ции не зарегистрировано. У всех животных

(контрольной и опытных серий) в течение

всего периода эксперимента визуально и

пальпаторно изменений кожи и подкожной

жировой ткани не выявлено. У небольшой

части животных, получавших препараты в

дозе, в 5 раз превышающей терапевтическую,

наблюдались патологические изменения

неврологического характера в виде наруше-

ния походки и повышенного мышечного то-

нуса, что связано со специфическим действи-

ем препаратов. Данные явления стали наблю-

даться с 11 дня кормления животных отече-

ственным препаратом и с 12 дня кормления

животных препаратом зарубежного произво-

дителя через 15 минут после введения.

При проведении теста "открытое поле"

было выявлено, что через 14 дней после вве-

дения препаратов у животных контрольной

группы и групп, получавших препараты в до-

зе, в 2 раза превышающей терапевтическую,

происходит равнозначное снижение двига-

тельной активности, что связано с повышен-

ным внимание к экспериментатору (табл. 5).

Более выраженное снижение исследователь-

ской активности происходит у животных, по-

лучавших препараты в дозе, в 5 раз превы-

шающей терапевтическую. Данное явление

можно объяснить специфическим действием

препаратов. К концу периода "отсидки" уро-

вень двигательной активности животных

приближается во всех группах к исходному

уровню.

На протяжении всего эксперимента коли-

чество животных в группах с актами дефека-

ции остается практически неизменным, по-

этому можно предположить, что введение

исследуемых препаратов в дозах, в 2 и 5 раз

превышающих терапевтическую, на протя-

жении 14 дней и в последующий период "от-

сидки" не приводит к изменению вегетатив-

ных функций.

После 14-дневного перорального введе-

ния препаратов "Трилам" и "Ламиктал" в

обеих дозах, а также в период "отсидки" не

происходило изменения как абсолютных зна-

чений, так и относительных гематологиче-

ских показателей.

Таблица 4

Динамика массы тела животных при исследовании субхронической токсичности препарата

"Трилам" производства ОАО "Фармстандарт-Лексредства" (г, M±m, n=6)

Дни

Группа

1

14

28

Контроль 197,5±6,16 218,33±9,97 253,33±8,23

Трилам 0,33 таб./кг 200,83±5,23 217,5±6,02 248,33±8,63

Трилам 0,83 таб./кг 202,5±5,12 222,5±6,29 249,17±9,87

Ламиктал 0,33 таб./кг 197,5±5,44 219,17±4,55 256,67±9,01

Ламиктал 0,83 таб./кг 195,83±6,11 217,5±9,01 253,33±5,43



15

Таблица 5

Показатели двигательной активности и вегетативных функций животных при исследовании

субхронической токсичности препарата "Трилам" производства ОАО "Фармстандарт-

Лексредства" (тест "открытое поле") (n=6)

Кол-во пересеченных квадратов, (M±m) Кол-во животных с

актом дефекации, %

Сутки

Препарат

1

14

28

1

14

28

Контроль 74,83 2,84 41,17 5,53 55,5 5,4 100 100 83

Трилам

0,33 таб./кг 66,83 4,57 39,17 4,48 54,83 5,06 100 83 100

Трилам

0,83 таб./кг 68,83 4,47 22,67 3,68

* 53,5 4,79 83 100 100

Ламиктал

0,33 таб./кг 69,83 9,68 36,83 4,35 50 5,57 100 83 100

Ламиктал

0,83 таб./кг 71,83 9,57 24,17 2,41

* 57,83 5,4 100 83 83


Таблица 6

Содержание общего белка, глюкозы и мочевины при исследовании субхронической токсичности

препарата "Трилам" производства ОАО "Фармстандарт-Лексредства" (M±m, n=6)

Общ. белок, г/л Глюкоза, mМ/л Мочевина, mM/л

Дни

Группа

14

28

14

28

14

28

Контроль 65,05±2,73 64,42±1,72 4,43±0,42 5,62±0,44 4,63±0,32 4,88±0,46

Трилам

0,33 таб./кг 66,58±1,08 67,43±2,24 4,52±0,33 5,42±0,9 4,3±0,27 4,98±0,68

Трилам

0,83 таб./кг 65,88±2,08 64,25±1,73 5,12±0,5 5,33±0,37 4,87±0,48 5,4±0,4

Ламиктал

0,33 таб./кг 66,1±1,15 62,67±1,74 5,65±0,33 5,82±0,42 5,17±0,49 4,8±0,32

Ламиктал

0,83 таб./кг 68,03±2,34 63,22±2,08 4,98±0,4 5,52±0,42 4,87±0,41 5,18±0,46


Определение в крови биохимических по-

казателей показало, что средние значения

общего белка в сыворотке эксперименталь-

ных животных, получавших изучаемые пре-

параты в обеих дозах, практически не отли-

чаются от зарегистрированных в контроль-

ных (табл. 6).

Во время проведения настоящего иссле-

дования у экспериментальных животных

наблюдались колебания концентрации глю-

козы крови, связанные с приемом пищи, од-

нако за границы физиологических норм дан-

ный показатель не выходил. Статистически

значимых различий между животными, полу-

чавшими изучаемые препараты, и группой

контрольных животных зарегистрировано не

было (табл. 6).

Данные, приведенные в табл. 6, свиде-

тельствуют о том, что уровень мочевины в

крови экспериментальных животных, кото-

рым в течение 14-ти дней вводили препарат

"Трилам" производства ОАО "Фармстандарт-

Лексредства", а также препарат сравнения –

"Ламиктал" производства "ГлаксоСмитКляйн

Фармасьютикалз СА" в исследуемых дозах,

не претерпевает существенных изменений


16

Таблица 7

Активность АСТ и АЛТ сыворотки крови животных при исследовании субхронической

токсичности препарата "Трилам" производства ОАО "Фармстандарт-Лексредства"

(ед/л, M±m, n=6)

Ферменты

АСТ АЛТ

Дни

Группа

14 28 14 28

Контроль 183,17±8,11 181,67±12,15 112,58±11,52 105±9,29

Трилам

0,33 таб./кг 164,5±11,84 188±12 107±8,29 104,5±4,46

Трилам

0,83 таб./кг 175,83±16,6 187,5±15,88 102,67±12,55 99,33±6,35

Ламиктал

0,33 таб./кг 189,83±7,46 190,17±19,06 110,33±13,76 112,33±9,99

Ламиктал

0,83 таб./кг 173,5±13,91 187±13,45 109±9,75 104,83±7,36


и находится в пределах физиологических

норм.

Исследования активности АСТ и АЛТ по-

казали, что в группах животных, получавших

"Трилам" и препарат сравнения, статистиче-

ски значимого увеличения активности фер-

ментов по сравнению с контролем отмечено

не было (табл. 7).

Данные исследования фармакологической

активности "Трилам" производства ОАО

"Фармстандарт-Лексредства" и "Ламиктал"

производства "ГлаксоСмитКляйн Фармась-

ютикалз СА" свидетельствуют о соответствии

противосудорожной активности препарата

отечественного производителя зарубежному

аналогу.

Обобщая приведенные эксперименталь-

ные данные, можно сделать заключение о

том, что при изучении как острой токсично-

сти, так и при длительном пероральном вве-

дении (в течение 2-х недель) крысам обоего

пола препарат "Трилам" производства ОАО

"Фармстандарт-Лексредства" (г. Курск, Рос-

сия) проявляет одинаковые токсические

свойства, как и препарат сравнения "Ламик-

тал" производства "ГлаксоСмитКляйн Фар-

масьютикалз СА" (Польша). Пероральное

введение в течение 2-х недель крысам препа-

ратов в дозах, в 2 и 5 раза превышающих те-

рапевтическую, не оказывали отрицательного

влияния на динамику массы тела, внутренних

органов, гематологические и биохимические

показатели функционирования внутренних

органов. При введении исследуемых препара-

тов в дозе, превышающей терапевтическую в

5 раз, были зарегистрированы однотипные

нарушения в поведении животных как при

тесте "открытое поле", так и при наблюдении

во время кормления препаратами, связанные

с их специфическим действием.

Таким образом, сравнительное изучение

препаратов показало, что препарат "Трилам"

производства ОАО "Фармстандарт-Лексред-

ства" по своим токсическим качествам и про-

тивосудорожной активности не отличается от

препарата "Ламиктал" производства

"ГлаксоСмитКляйн Фармасьютикалз СА".

Принимая во внимание вышесказанное, мож-

но говорить о том, что препарат "Трилам"

производства ОАО "Фармстандарт-

Лексредства" можно рекомендовать к исполь-

зованию в качестве противосудорожного

препарата.

ЛИТЕРАТУРА

1. Петрухин А.С., Бурд Г.С., Мухин К.Ю. и др.

Ламиктал в лечении эпилепсии у детей // Со-

циальная и клиническая психиатрия. – 1996. –

Т. 6, № 3. – С. 121–124.

2. Руководство по экспериментальному (докли-

ническому) изучению новых фармакологиче-

ских веществ / Под общ. ред. чл.-корр. РАМН,

4. 1998. 1980. V. 288. P. 373 376. (1). 97. 5. Michel J.-B ... ·...

Documents

Transcript of 4. 1998. 1980. V. 288. P. 373 376. (1). 97. 5. Michel J.-B ... ·...