3gAllergy™ Specific IgE Universal Kit...IMMULITE 2500 3gAllergy Specific IgE Universal Kit...

3gAllergy™ Specific IgEUniversal Kit

IMMULITE® 2500 3gAllergy™Specific IgE Universal Kit

2 IMMULITE 2500 3gAllergy™ Specific IgE Universal Kit (PIL5KUN-5, 2005-09-14)

English

Intended Use: For in vitro diagnostic usewith the IMMULITE 2500 Analyzer — forthe quantitative measurement of allergen-specific IgE in human serum, as an aid inthe clinical diagnosis of IgE-mediatedallergic disorders.Catalog Number: L5KUN6 (600 tests)Test Code: SPE Color: Light Gray

Summary and ExplanationMany allergies are mediated byimmunoglobulins of the IgE class. Insensitized individuals suffering from thisimmediate (atopic or anaphylactic) type ofallergy, IgE molecules act as points ofcontact between the allergen andspecialized cells that release histamineand other agents upon exposure to theallergen; this initiates the events which werecognize as allergic reactions.5,9 Whenevaluated in the light of other clinical andlaboratory findings, in vitro allergen-specific IgE tests can help the physicianidentify the allergen (or allergens) to whichan individual is sensitive.

Principle of the ProcedureIMMULITE 2500 3gAllergy Specific IgE isa solid-phase, two-step, chemiluminescentimmunoassay that exploits liquid phasekinetics in a bead format.10,11 (U.S. PatentNo. 4,778,751) It represents a significantadvance over conventional methodsrelying on allergens attached to a solid-phase support, such as a paper disk.

The allergens are covalently bound to asoluble polymer/co-polymer matrix, whichin turn is labeled with a ligand. The use ofan amino acid co-polymer amplifies theamount of allergen that the matrix cansupport.Incubation: 60 minutes.

Specimen CollectionThe use of an ultracentrifuge isrecommended to clear lipemic samples.

Hemolyzed samples may indicatemistreatment of a specimen before receiptby the laboratory; hence the results shouldbe interpreted with caution.Centrifuging serum samples before acomplete clot forms may result in thepresence of fibrin. To prevent erroneousresults due to the presence of fibrin,ensure that complete clot formation hastaken place prior to centrifugation ofsamples. Some samples, particularlythose from patients receivinganticoagulant therapy, may requireincreased clotting time.Blood collection tubes from differentmanufacturers may yield differing values,depending on materials and additives,including gel or physical barriers, clotactivators and/or anticoagulants.IMMULITE 2500 3gAllergy™ Specific IgEhas not been tested with all possiblevariations of tube types. Consult thesection on Alternate Sample Types fordetails on tubes that have been tested.Volume Required: 50 µL serum.Storage: 7 days at 2–8°C, or6 months at –20°C.13

Warnings and PrecautionsFor in vitro diagnostic use.Reagents: Store at 2–8°C. Dispose of inaccordance with applicable laws.

Follow universal precautions, and handleall components as if capable oftransmitting infectious agents. Sourcematerials derived from human blood weretested and found nonreactive for syphilis;for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitisB surface antigen; and for antibodies tohepatitis C.Sodium azide, at concentrations less than0.1 g/dL, has been added as apreservative. On disposal, flush with largevolumes of water to prevent the buildup of

IMMULITE 2500 3gAllergy™ Specific IgE Universal Kit (PIL5KUN-5, 2005-09-14) 3

potentially explosive metal azides in leadand copper plumbing.

Chemiluminescent Substrate: Avoidcontamination and exposure to directsunlight. (See insert.)Water: Use distilled or deionized water.

Materials SuppliedComponents are a matched set. Labels onthe inside box are needed for the assay.

3gAllergy™ Specific IgE Bead Pack(L2UN12)With barcode. 200 beads, coated withanti-ligand. Stable at 2–8°C untilexpiration date.L5KUN6: 3 packs.

3gAllergy™ Specific IgE Reagent Wedge(L2UNA6)With barcode. 28 mL alkalinephosphatase (bovine calf intestine)conjugated to monoclonal murine anti-human IgE antibody in ahuman/nonhuman serum buffer matrix.Stable at 2–8°C until expiration date.L5KUN6: 1 wedge.Before use, tear off the top of the label atthe perforations, without damaging thebarcode. Remove the foil seal from the topof wedge; snap the sliding cover down intothe ramps on the reagent lid.

3gAllergy™ Specific IgE Adjustors(L2UNJ3, L2UNJ4)Two vials (Low and High), 2.0 mL each, ofhuman IgE in a nonhuman serum matrix,with preservative. Stable at 2–8°C for 30days after opening, or for 6 months(aliquotted) at –20°C.L5KUN6: 2 sets.Before making an adjustment, place theappropriate Aliquot Labels (supplied withthe kit) on test tubes so that the barcodescan be read by the on-board reader.

3gAllergy™ Specific IgE AdjustorAntibody (L2UNS1)Two tubes, 2.75 mL each of liquid, ready-to-use ligand-labeled polyclonal goat anti-human IgE antibody, with preservative.Stable at 2–8°C until expiration date. Thisreagent is placed in the Allergen HolderWedge when running the Specific IgEAdjustors.L5KUN6: 2 sets.

3gAllergy™ Specific IgE (SPE) UniversalKit Controls (L2UNC1, L2UNC2)Two vials, 2 mL each of human IgE in anonhuman serum matrix, withpreservative. Stable at 2–8°C for 30 daysafter opening, or for 6 months (aliquotted)at –20°C.L5KUN6: 2 sets.Refer to the control insert forconcentration levels.Before use, place the appropriate AliquotLabels (supplied with the kit) on test tubesso that the barcodes can be read by theon-board reader.

3gAllergy™ Specific IgE Control Antibody(L2UNS2)Two tubes, 2.75 mL each of liquid, ready-to-use ligand-labeled polyclonal goat anti-human IgE antibody, with preservative.Stable at 2–8°C until expiration date. Thisreagent is placed in the Allergen HolderWedge when running the IMMULITE 2500IgE Controls.L5KUN6: 2 sets.

Kit Components SuppliedSeparately

3gAllergy™ Specific IgE SampleDiluent (L2UNZ)For on-board dilution of samples. One vial,concentrated (ready-to-use), human serumalbumin matrix, with preservative. Storage:30 days (after opening) at 2–8°C or 6months (aliquotted) at –20°C. Dispose of inaccordance with applicable laws.L2UNZ: 25 mLBarcode labels are provided for use withthe diluent. Before use, place anappropriate label on a 16 × 100 mm testtube, so that the barcodes can be read bythe on-board reader.L2UNZ: 3 labelsL2SUBM: Chemiluminescent SubstrateL2PWSM: Probe WashL2KPM: Probe Cleaning KitLRXT: Reaction Tubes (disposable)L2AW1-3: Allergen Holder Wedges(barcoded)L2AW1: serially coded 1-33L2AW2: serially coded 34-66L2AW3: serially coded 67-99L2ATC: Allergen Tube CapsL2ATS: Allergen Tube Septa


Also AvailableMC6L, DC1L, DC2L, L2SNC: Humanserum-based allergen-specific IgE controlsAlso RequiredDistilled or deionized water; test tubes;controls.

3gAllergy™ Specific Allergens andMixed Allergen PanelsIndividual allergens and mixed allergenpanels in liquid phase, with preservative,are packaged and sold in 40 and 20 testmodules, and are intended for use withboth the IMMULITE 2000 and IMMULITE2500 platforms. (For catalog numbers, seethe 3gAllergy™ Product Catalog). Storerefrigerated: stable at 2–8°C until theexpiration date marked on the label. Donot use if signs of microbial contaminationsuch as a cloudy appearance have beenobserved.

Assay ProcedureNote that for optimal performance, it isimportant to perform all routinemaintenance procedures as defined in theIMMULITE 2500 Operator's Manual.

See the IMMULITE 2500 Operator'sManual for: preparation, setup, dilutions,adjustment, assay and quality controlprocedures.

Allergen Loading1 Select an open position on the

Reagent Carousel through thesoftware.

2 Replace caps on Allergen Tubes withsepta. Do not invert the Allergen Tubeonce the septum is installed.

3 Place Allergen Tubes containingIMMULITE 2500 specific allergens,specific allergen panels, Specific IgEAdjustor Antibody, and/or Specific IgEControl Antibody in the AllergenHolder Wedge, with the barcodesfacing the open side of the wedge.

4 Close the wedge and scan theallergen barcodes with the hand-heldimaging scanner.

5 Once scanning is complete, load theAllergen Holder Wedge into thereagent carousel.

6 Repeat this procedure to loadsubsequent Allergen Holder Wedges.

The Allergen Holder Wedge must bescanned prior to installation into theinstrument to ensure correct instrumentoperation. Removing or replacing any vialswithin the allergen wedge will requirerescanning of the wedge with the barcodescanner to update the allergeninformation.

Recommended Adjustment Interval:2 weeks.Quality Control Samples: To monitoradjustment, use the controls supplied withthe kit. Specific allergen controls are alsoavailable, see “Kit Components SuppliedSeparately” section. The specific allergencontrols (DC1L, DC2L, MC6L and L2SNC)should be tested to monitor allergenperformance.

Interpretation of Results

Individual Allergen Results:The class number is an indication of theamount of endogenous IgE specific for theselected allergen. Quantitative values(kU/L) and interpretation of class resultsfor two scoring systems (standard andextended) are provided in the tablesbelow.The standard classification systemutilizes the following class cutoffs:

Class kU/L

Reactivity forIndividual/Component

Allergen(s)

< 0.10 Absent or ND†0*

0.10 – 0.34 Very Low

I 0.35 – 0.69 Low

II 0.70 – 3.49 Moderate

III 3.50 – 17.49 High

IV 17.5 – 52.49

V 52.5 – 99.99

VI ≥ 100

Very High

* Class 0 in the standard system signifies: notdetectable by second-generation assays.† ND: not detectable by IMMULITE 25003gAllergy.


The extended classification systemutilizes the following class cutoffs.

Class kU/L

Reactivity forIndividual/Component

Allergen(s)

0 < 0.1 Absent or ND†

0/1 0.11 – 0.24 Very Low

I 0.25 – 0.39 Low

II 0.40 – 1.29 Moderate

III 1.30 – 3.89 High

IV 3.90–14.99

V 15.00– 24.99

VI ≥ 25

Very High

† ND: not detectable by IMMULITE 25003gAllergy.The choice of classification systems canbe made by the user within theIMMULITE 2500 operational software.

Mixed Allergen Panel ResultsA positive result (Class I or greater) with aMixed Allergen Panel indicates thatantibodies to one or more of thecomponent allergens in the panel arepresent in elevated amounts in the patientserum sample. To identify the allergen-specific IgE, the sample should beretested with individual allergenscorresponding to components of thepanel.A negative result (Class 0) indicates theabsence or very low levels of IgE specificfor the panel's components.

Panel results cannot be compared withresults based on testing for individualallergens, nor can they be considered thecumulative total of individual allergenresults.

LimitationsA definitive clinical diagnosis should notbe made solely on the basis of an in vitroallergen-specific IgE result. Diagnosisshould be made by the physician onlyafter all clinical and laboratory findingshave been evaluated.2,4

In vitro allergen-specific IgE results shouldnot be used as a definitive guide toselecting an initial dose forimmunotherapy. A skin test with theproposed initial dilution of the allergenicextract should be performed first to

demonstrate the patient's ability to toleratethe dose.

In food allergy, circulating IgE antibodiesmay remain undetectable if directedtowards allergens which are revealed oraltered during processing or digestion andwhich therefore do not exist in the originalfood for which the patient is tested.1,3

Identical results for different allergens maynot be associated with clinically equivalentmanifestations, due to differences in IgE-binding capacity.6

The user should be aware of thepossibility of clinical crossreactivity withinan allergen family.7,8

The following special considerations applyto latex allergy testing:

• The possibility of clinicalcrossreactivity exists between latexand certain foods including avocado,banana, chestnut, and kiwi.12

• Since the latex assay measuresallergen-specific IgE, type IV delayedreaction or irritation from latex will notbe detected.

Class 0 results for insect venoms indicateabsent or very low levels of circulatingvenom-specific IgE antibodies. Suchresults do not preclude existence ofcurrent or future clinical hypersensitivity toinsect sting.Heterophilic antibodies in human serumcan react with the immunoglobulinsincluded in the assay components causinginterference with in vitro immunoassays.[See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilicantibodies: a problem for allimmunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinelyexposed to animals or animal serumproducts can demonstrate this type ofinterference potentially causing ananomalous result. These reagents havebeen formulated to minimize the risk ofinterference; however, potentialinteractions between rare sera and testcomponents can occur. For diagnosticpurposes, the results obtained from thisassay should always be used incombination with the clinical examination,patient medical history, and other findings.


Performance DataSee Tables and Graphs for datarepresentative of the assay's performance.Results are expressed in kU/L. (Unlessotherwise noted, all were generated onserum samples collected in tubes withoutgel barriers or clot-promoting additives.)The IMMULITE 2500 assay employs thesame bead, reagent, adjustor, and controlformulation as IMMULITE 2000 assay. Allperformance characteristics are equivalentbetween the two platforms.All performance data except MethodComparison 1 were generated on theIMMULITE 2000 analyzer.

IMMULITE 2500 3gAllergy Specific IgEhas been the subject of a number ofpublished studies.14,15

Working Range: 0.1 – 100 kU/L(WHO 2nd IRP 75/502).Analytical Sensitivity: 0.1 kU/L.Functional Sensitivity: 0.2 kU/LPrecision: Samples were assayed induplicate over the course of 20 days, tworuns per day, for a total of 40 runs and 80replicates. (See “Precision” table.)

Linearity: Samples were assayed undervarious dilutions. (See "Linearity" table forrepresentative data.)Specificity: The antibodies are highlyspecific for human IgE and exhibit nocrossreactivity to other humanImmunoglobulin classes.Bilirubin: Presence of conjugated andunconjugated bilirubin in concentrationsup to 200 mg/L has no effect on results,within the precision of the assay.Hemolysis: Presence of hemoglobin inconcentrations up to 500 mg/dL has noeffect on results, within the precision of theassay.Lipemia: Presence of triglycerides inconcentrations up to 3,000 mg/dL has noeffect on results, within the precision of theassay.Alternate Sample Type: To assess theeffect of alternate sample types, bloodwas collected from 18 volunteers intoplain, heparinized, EDTA and BectonDickinson SST® vacutainer tubes. Allsamples were assayed by the

IMMULITE 2000 3gAllergy™ Specific IgEprocedure, with the following results.(Heparin) = 1.10 (Serum) + 0.16 kU/Lr = 0.986

(EDTA) = 0.81 (Serum) + 0.01 kU/Lr = 0.996

(SST) = 0.91 (Plain Tubes) + 0.15 kU/Lr = 0.992

Means:7.1 kU/L (Serum)8.0 kU/L (Heparin)5.8 kU/L (EDTA)6.6 kU/L (SST)

Method Comparison 1: IMMULITE 25003gAllergy™ Specific IgE was compared toIMMULITE 2000 3gAllergy™ Specific IgEon 289 samples. (Concentration range:approximately up to 89 kU/L. Seegraph 1.) By linear regression:(IML 2500) = 0.97 (IML 2000) + 0.06 kU/Lr = 0.989

Means:9.35 kU/L (IMMULITE 2500)9.54 kU/L (IMMULITE 2000)

Method Comparison 2: IMMULITE 20003gAllergy™ Specific IgE was compared toDPC's AlaSTAT Microplate Allergen-Specific IgE, a standard scoring assay, on7,520 samples.

6 1 3 31 42 303

5 11 76 33 35

4 3 178 168 26 10

3 1 292 604 49 2 2

2 16 229 886 98

1 108 172 94 4IM

MU

LITE

200

0

0 3,912 118 11 20 1 2 3 4 5 6

AlaSTAT Microplate

Total Agreement: 97%Relative Sensitivity: 96%Relative Specificity: 97%Total Identical: 81%Class 1 Identical: 99%Class 2 Identical: 100%

Means of Class Scores:1.29 (AlaSTAT)1.37 (IML 2000)

The same data was analyzed in aregression analysis, with the followingresults:(IML 2000) = 0.989 (AlaSTAT) + 1.21 kU/L

r = 0.87


Means:8.53 kU/L (AlaSTAT)9.64 kU/L (IMMULITE 2000)

References1) Aas K. The diagnosis of hypersensitivity toingested foods. Clin Allergy 1978;8:39–50. 2) Barbee RA, et al. Longitudinal changes inallergen skin test reactivity in a communitypopulation sample. J Allergy Clin Immunol1987;79:16–24. 3) Bleumink E. Food allergy:the chemical nature of the substance elicitingsymptoms. World Rev Nutr Diet 1970;12:505–70. 4) Bloch K, Salvaggio J. Use andinterpretation of diagnostic immunologiclaboratory tests. JAMA 1982; 246:2734–58. 5) Halpern GM. Markers of human allergicdisease. J Clin Immunoassay 1983;6:131–8. 6) Lichtenstein LM, et al. IgE antibodymeasurements in ragweed hay fever;relationship to clinical severity and the results ofimmunotherapy. J Clin Invest 1973; 52:472–82. 7) Lowenstein H. Cross reactions among pollenantigens. Allergy 1980;35:198–200. 8) WeberRW, Nelson HS. Pollen allergens and theirinterrelationships. Clin Rev Allergy 1985;3:291–318. 9) Wide L, Bennich H, Johansson SGO.Diagnosis of allergy by an in vitro test forallergen antibodies. Lancet 1967;2:1105–7. 10)El Shami AS, Alaba O. Liquid-phase in vitroallergen-specific IgE assay with in situimmobilization. Adv Biosci 1989;74:191–201. 11) Alaba O, El Shami AS. Evaluation of non-specific IgE binding: comparison of two in vitroallergen assays. Adv Biosci 1989;74:203–14. 12) Pecquet C. IgE-mediated allergy to latex in80 patients. Presented at the XVth EuropeanCongress of Allergology and ClinicalImmunology, Paris, 12 May 1992. 13) Tietz NW,editor. Clinical guide to laboratory tests. 3rd ed.Philadelphia: WB Saunders, 1995:358. 14) LiTM, Chuang T, Tse S, Hovanec-Burns D, ElShami AS. Development and validation ofa third generation allergen-specific IgEassay on the continuous random accessIMMULITE 2000 analyzer. Ann Clin Lab Sci2004;34(1):67-74. Available viawww.AnnClinLabSci.org. 15) Guilloux L,Hamberger C. Évaluation du dosage desIgE spécifiques sur l'IMMULITE® 2000DPC. Immuno-analyse & BiologieSpécialisée. 2004;19(1):71-80. Available viawww.sciencedirect.com.

Technical AssistanceIn the United States, contact DPC'sTechnical Services department.Tel: 800.372.1782 or 973.927.2828Fax: 973.927.4101. Outside the UnitedStates, contact your National Distributor.The Quality System of Diagnostic ProductsCorporation is registered to ISO 13485:2003.

Tables and Graphs

Precision (kU/L)

Within-Run1 Total2

Mean3 SD4 CV5 SD CV

1 0.5 0.05 10% 0.06 12%

2 0.7 0.07 10% 0.08 11%

3 1.1 0.04 3.6% 0.05 4.5%

4 1.1 0.08 7.3% 0.08 7.3%

5 1.5 0.08 5.3% 0.09 6.0%

6 1.6 0.15 9.4% 0.16 10%

7 1.8 0.10 5.6% 0.10 5.6%

8 1.9 0.14 7.4% 0.16 8.4%

9 2.1 0.12 5.7% 0.14 6.7%

10 2.4 0.10 4.2% 0.14 5.8%

11 3.0 0.15 5.0% 0.17 5.7%

12 3.4 0.12 3.5% 0.16 4.7%

13 3.6 0.20 5.6% 0.24 6.7%

14 4.1 0.28 6.8% 0.32 7.8%

15 6.1 0.28 4.6% 0.36 5.9%

16 8.9 0.44 4.9% 0.56 6.3%

17 9.5 0.53 5.6% 0.65 6.8%

18 10 0.36 3.6% 0.50 5.0%

19 12 0.56 4.7% 0.76 6.3%

20 15 0.67 4.5% 0.67 4.5%

21 19 1.7 8.9% 1.9 10%

22 43 1.9 4.4% 2.6 6.0%


Linearity (kU/L)

Dilution1 Observed2 Expected3 %O/E4

1 32 in 32 96.6 – –

16 in 32 53.8 48.3 111%

8 in 32 26.6 24.2 110%

4 in 32 12.1 12.1 100%

2 in 32 5.74 6.04 95%

1 in 32 3.04 3.02 101%

2 32 in 32 53.7 – –

16 in 32 30.1 26.8 112%

8 in 32 13.8 13.4 103%

4 in 32 6.81 6.71 102%

2 in 32 3.40 3.35 101%

1 in 32 1.70 1.68 101%

3 32 in 32 36.4 – –

16 in 32 17.3 18.2 94%

8 in 32 9.48 9.11 104%

4 in 32 4.78 4.55 106%

2 in 32 2.48 2.28 109%

1 in 32 1.21 1.14 106%

Method Comparison 1

0

20

40

60

80

100

0 20 40 60 80 100

IML 2000 3gAllergy Specific IgE, kU/L

IML

2500

3gA

llerg

y S

peci

fic Ig

E

(IML 2500) = 0.97 (IML 2000) + 0.06 kU/Lr = 0.989

Deutsch. Precision: 1Intra-Assay, 2Gesamt,3Mittelwert, 4SD (Standardbereich), 5CV(Variationskoeffizient).

Español. Precision: 1 Intraensayo, 2Total,3Media, 4DS, 5CV.

Français. Precision: 1Intraessai, 2Total,3Moyenne, 4SD, 5CV.

Italiano. Precision: 1Intra-serie, 2Totale, 3Media,4SD (Deviazione Standard), 5CV (Coefficiente diVariazione).

Português. Precision: 1Entre-ensaios, 2Total,3Média, 4Desvio padrão, 5Coeficiente devariação.

Deutsch

IMMULITE 2500 3gAllergySpezifisches IgE Universal KitAnwendung: Zur in vitro-Diagnostik unterVerwendung des IMMULITE 2500Systems – zur quantitativen Bestimmungvon allergenspezifischem IgE inHumanserum als Hilfe zur klinischenDiagnosestellung IgE-vermittelterAllergien.Artikelnummer: L5KUN6 (600 Tests)Testcode: SPE Farbe: hellgrau

Klinische RelevanzHäufig sind Allergien durch IgE-Antikörpervermittelt. Bei bereits sensibilisiertenPersonen kommt es zwischen den auf denhistaminhaltigen (Mast)zellen sitzendenIgE-Antikörpern und den entsprechendenAllergenen zu einer Zellreaktion, die zurFreisetzung von Histamin und anderenMediatoren führt. Die Folge davon sind dietypischen klinischen Erscheinungen(Juckreiz, Quaddeln, Atemnot u.a.).5,9Zusammen mit der Anamnese undweiteren Laboruntersuchungen kann mitHilfe der spezifischen IgE-Bestimmungdas Allergen/die Allergene identifiziertwerden, gegen die der Patientsensibilisiert ist.

MethodikDer IMMULITE 2500 3gAllergy™Spezifisches IgE ist ein 2-Schritt-,Chemilumineszenz-Enzymimmunoassay(Flüssigphase-Kinetik) im Kugelformat10,11(U.S Patent Nr. 4 778 751). DieseTechnologie stellt einen großen Fortschrittgegenüber konventionellen Methoden dar,die Allergene an eine Festphase, wiebeispielsweise an Papierscheibengekoppelt, nutzen.

Die Allergene sind an eine löslichepolymer/copolymer Matrix kovalentgebunden, die wiederum mit einemLiganden verbunden ist. Mit Hilfe einerAminosäure Kopolymers können mehrere


Allergene molekular an die Matrixgekoppelt werden, was einenVerstärkereffekt hat.Inkubation: 60 Minuten

ProbengewinnungDer Einsatz einer Ultrazentrifuge wird zurKlärung von lipämischen Probenempfohlen.

Bei hämolysierten Proben besteht dieMöglichkeit einer unsachgemäßenHandhabung vor Eintreffen im Labor,daher sind die Ergebnisse zurückhaltendzu interpretieren.

Die Zentrifugation der Serumproben vordem völligen Abschluss der Gerinnungkann zu Fibringerinnseln führen. Umfehlerhaften Analysenergebnissen infolgevon Gerinnseln vorzubeugen, istsicherzustellen, dass die Gerinnung vorder Zentrifugation der Proben vollständigabgeschlossen ist. Insbesondere Probenvon Patienten unter Antikoagulantien-therapie können eine verlängerteGerinnungszeit aufweisen.Blutentnahmeröhrchen von verschiedenenHerstellern können differierende Werteverursachen. Dies hängt von denverwendeten Materialien und Additiven(Gel oder physische Trennbarrieren,Gerinnungsaktivatoren und /oderAntikoagulantien) ab. IMMULITE 25003gAllergy™ Spezifisches IgE sind nicht mitallen möglichen Röhrchenvariationenausgetestet worden. Details dergetesteten Röhrchenarten sind demKapitel "Alternative Probenarten" zuentnehmen.Probenvolumen: 50 µl Serum.Lagerung: 7 Tage bei 2–8°C, oder6 Monate bei –20°C.13

Hinweise undVorsichtsmaßnahmenZur In-vitro Diagnostik.

Reagenzien: Bei 2–8°C lagern. UnterEinhaltung der geltenden gesetzlichenVorschriften entsorgen.Die generell geltendenVorsichtsmaßnahmen sind einzuhaltenund alle Komponenten als potenziellinfektiös zu behandeln. Alle ausmenschlichem Blut gewonnenen

Materialien wurden auf Syphilis,Antikörper gegen HIV-1 und HIV-2,Hepatitis-B-Oberflächenantigen undHepatitis-C-Antikörper untersucht undnegativ befundet.

Bestimmten Komponenten wurdeNatriumazid (


sonst 6 Monate (portioniert) bei –20°Chaltbar.L5KUN6: 2 Sets.Vor der Kalibrierung die entsprechendenAufkleber (dem Kit beiliegend) aufRöhrchen kleben, so dass die Barcodesvom Barcodereader des Systems gelesenwerden können.

3gAllergy™ Spezifisches IgE KalibratorAntikörper (L2UNS1)2 Röhrchen, je 2,75 ml, mit Ligandmarkiertem, polyklonalen antihumaner-IgEZiegen-Antikörper, mitKonservierungsstoffen. Gekühlt (2–8°C)haltbar bis zum angegebenenVerfallsdatum; zur Kalibration in einemAllergenhalter zu platzieren.L5KUN6: 2 Sets.

3gAllergy™ Spezifisches IgE (SPE)Universal Kit-Kontrollen (L2UNC1,L2UNC2)2 Flaschen, je 2 ml, mit humanen IgE-Antikörpern in einer nichthumanenSerummatrix, mit Konservierungsstoffen.30 Tage nach dem Öffnen bei 2–8°Chaltbar, oder für 6 Monate (portioniert) bei–20°C.L5KUN6: 2 Sets.Aktuelle Kontrollwerte entnehmen Sie bittedem Informationsblatt.Kleben Sie den im Kit enthaltenenvorgedruckten Barcode auf das Röhrchenmit der Kontrolle, so dass er vomBarcodereader im Gerät gelesen werdenkann.

3gAllergy™ Spezifisches IgE Kontroll-Antikörper (L2UNS2)2 Röhrchen, je 2,75 ml, mit Liganden-markiertem polyklonalen antihumaner-IgEZiegen-Antikörper, mitKonservierungsmitteln. Gekühlt (2–8°C)haltbar bis zum angegebenenVerfallsdatum; zur Kontrolle in einemAllergenhalter zu platzieren.L5KUN6: 2 Sets.

Separat erhältliche Testsystem-Komponenten

Probenverdünnungsreagenz 3gAllergy™Spezifisches IgE (L2UNZ)Zum automatischen Verdünnen derProben. Eine Flasche mit einem

gebrauchsfertigen Konzentrat aus einerhumanen serum Albumin-Matrix versetztmit Konservierungsstoffen. Lagerung: 30Tage (nach Öffnen) bei 2–8°C oder 6Monate bei –20°C (aliquotiert). UnterEinhaltung der geltenden gesetzlichenVorschriften entsorgen.L2UNZ: 25 mlZum Einsatz des Verdünnungsreagenz(Diluents) werden Barcode Etikettenmitgeliefert. Vor Verwendung einentsprechendes Etikett so auf ein16×100 mm Teströhrchen kleben, dass esvom eingebauten Barcode Readergelesen werden kann.L2UNZ: 3 Etiketten.L2SUBM: Chemilumineszenz-SubstratmodulL2PWSM: WaschmodulL2KPM: ReinigungsmodulLRXT: Einweg-ReaktionsgefäßeL2AW1-3: Allergenhalter (barcodiert)L2AW1: Allergenhalter Nr. 1-33L2AW2: Allergenhalter Nr. 34-66L2AW3: Allergenhalter Nr. 67-99L2ATC: Allergen StandardverschlussL2ATS: Allergen Septum (zumpipettieren)Ebenfalls erhältlich:Allergen spez. IgE-Kontrollen: DC1L,DC2L, MC6L, L2SNCEbenfalls benötigtDestilliertes bzw. deionisiertes Wasser;Teströhrchen; Kontrollen.

3gAllergy™ Spezifische Allergene undAllergen-MischungenFlüssigphasen-Einzelallergene und -Allergenmischungen, mitKonservierungsstoffen, werden als 40erund 20er Testeinheiten verpackt undverkauft. Sie sind sowohl zur Verwendungim IMMULITE 2000 als auch imIMMULITE 2500 System geeignet.(Katalognummer siehe 3gAllergy™Produktkatalog). Gekühlt bei 2–8°C biszum Verfallsdatum auf der Packunghaltbar. Bei Anzeichen von mikrobiellerKontamination (Trübung) nicht mehrverwenden.

TestdurchführungFür eine optimale Funktion des Gerätes istunbedingt zu beachten, dass dieWartungen, wie im IMMULITE 2500-


Handbuch beschrieben, regelmäßigdurchgeführt werden.

Die Angaben zur Vorbereitung,Einrichtung, Kalibration, Test- undQualitätskontrollverfahren entnehmen Siebitte dem IMMULITE 2500 Handbuch.

Allergenbeladung1 Wählen Sie eine freie Position auf

dem Reagenzienkarussell mit Hilfeder Software.

2 Tauschen Sie denStandardverschluss des Allergensgegen das Septum aus. Das Allergenmit dem Septum nicht schwenken.

3 Platzieren Sie die Allergenröhrchenmit: IMMULITE 2500 spez.Allergenen, spez. Allergenpanels,spez. IgE-Adjuster-Allergen und / oderspez. IgE-Kontroll-Allergen imAllergenhalter. Die Barcodes derRöhrchen sollten dabei imAllergenhalter lesbar sein.

4 Schließen Sie den Allergenhalter undscannen Sie die Allergenbarcodes mitHilfe des Hand-Scanners ein.

5 Nach Beendigung des Scan-Vorgangssetzen Sie den Allergenhalter in dasReagenzienkarussell.

6 Wiederholen Sie diesen Vorgang umweitere Allergenhalter mit Allergenenzu platzieren.

Bitte beachten Sie, dass derAllergenhalter vor dem Einsetzen in dasReagenzienkarussell gescannt werdenmuss um eine korrekte Abarbeitung zugarantieren. Das Entfernen oder Ersetzenjeglicher Röhrchen im Allergenhaltererfordert ein erneutes Scannen desAllergenhalters mit dem Barcodescanner,um die aktuelle Platzierung der Allergenezu gewährleisten.Empfohlenes Kalibrationsintervall:2 Wochen.Proben zur Qualitätskontrolle: Um dieKalibration auf Gültigkeit zu überprüfenbenutzen Sie die Adjuster-Kontrollen dieim Kit enthalten sind. Ebenso stehenKontrollen für spezifische Einzelallergenezur Verfügung (siehe unter Separaterhältliche Testsystem-Komponenten).Diese Kontrollen (DC1L, DC2L für Milben,MC6L für Schimmelpilz und L2SNC alsNegativkontrolle) sollten der Überprüfung

von spezifischen Einzelallergen-Messungenen dienen.

Interpretation der Ergebnisse

Einzelallergene:Neben der quantitativen Angabe derErgebnisse in internationen Einheiten kU/lfür das IgE (WHO 75/502) kann eineZuordnung in Klassen erfolgen. DieAllergie-Klasse ist ein Hinweis auf dieMenge endogen zirkulierender IgE-Antikörper, die gegen das jeweiligeAllergen.Das Standardklassifizierungs-Systemnutzt folgende Einteilung der Klassen.

Klasse kU/lReaktivität mit Einzel-/Gruppenallergen(en)

< 0,10 Fehlend oder n.n.†0*

0,10 – 0,34 Sehr Niedrig

I 0,35 – 0,69 Niedrig

II 0,70 – 3,49 Moderat

III 3,50 – 17,49 Hoch

IV 17,5 – 52,49

V 52,5 – 99,99

VI ≥ 100

Sehr Hoch

* Klasse 0 im Standardsystem bedeuted: nichtnachweisbar mit Assays der zweitenGeneration.† n.n.: nicht nachweisbar mit IMMULITE 25003gAllergy.

Das erweiterte Klassensystem basiertauf den nachfolgenden Klassengrenzen.

Klasse kU/l

Reaktivität mit Einzel-/Gruppenallergen(en)

0 < 0,1 Fehlend oder n.n.†

0/1 0,11 – 0,24 Sehr Niedrig

I 0,25 – 0,39 Niedrig

II 0,40 – 1,29 Moderate

III 1,30 – 3,89 Hoch

IV 3,90–14,99

V 15,00– 24,99

VI ≥ 25

Sehr Hoch

† n.n.: nicht nachweisbar mit IMMULITE 25003gAllergy.

Die Entscheidung für eines der beidenKlassifizierungssysteme obliegt dem


Anwender und kann direkt in derGerätesoftware des IMMULITE 2500voreingestellt werden.

Gruppenallergen (Panels):Bei Gruppenallergenen weist einpositives Ergebnis, Klasse I odergrößer, auf das Vorhandensein spez. IgE-Antikörper gegenüber einem odermehreren, der im Extrakt enthaltenenEinzelallergene hin. Zur genauenIdentifizierung des Allergens, sollten dieim Gruppenallergen enthaltenen Allergenenochmals als spezifische Einzelallergenemit dem Patientenserum nachgetestetwerden.Ein negatives Ergebnis (Klasse 0) weistauf fehlende oder sehr niedrige Spiegel anspez. IgE für die Komponenten desPanels hin.Bedingt durch kumulative Effekte könnendie Ergebnisse für die jeweiligenEinzelallergene nicht mit dem Resultat desGruppenallergens verglichen werden.

Grenzen der MethodeEine abschließende klinische Diagnosesollte sich nicht ausschließlich auf dieErgebnisse des in-vitro Nachweisesallergen-spezifischer IgE-Anikörperstützen, sondern vielmehr alle klinischenBefunde und Laborergebnisseeinbeziehen.2,4

Das Ergebnis der in vitro-Diagnostik vonspezifischem IgE sollte nicht Grundlageder Dosierung einer medikamentösenTherapie sein. Der Hauttest, mit dervorgeschlagenen Verdünnung desAllergenextraktes durchgeführt, sollte zurFeststellung der Toleranz des Patientengegenüber dem Allergen vorgeschaltetwerden.

Bei Nahrungsmittelallergien könnenzirkulierende IgE-Antikörper unterUmständen nicht nachgewiesen werden,wenn die Allergene der Nahrungsmitteldurch die Verdauung oder Zubereitung soverändert sind, dass sie nicht mehr demnativen Allergen entsprechen auf das derPatient reagiert.1,3

Identische Ergebnisse für verschiedeneAllergene können nicht mit den gleichenklinischen Symptome gleichgesetztwerden. Sie beruhen auf unterschiedlicheIgE- Bindungskapazitäten.6

Der Anwender sollte sich möglicherKreuzreaktionen innerhalb einerAllergenfamilie bewusst sein.7,8

Besonders bei Tests auf eineSensibilisierung gegenüber Latex ist zuberücksichtigen, daß

• gegenüber einigen Nahrungsmitteln,wie Avocado, Banane, Kiwi undKastanie Kreuzreaktivitäten bestehenkönnen.12

• ausschließlich IgE-vermittelteReaktionen des Soforttyps im Latex-Test nachgewiesen werden können,während verzögerte Spätreaktionen(zellvermittelte, Typ IV) unentdecktbleiben.

Klasse 0 Ergebnisse für Insektengifteweisen auf fehlende oder sehr niedrigeSpiegel an zirkulierenden spez. IgEAntikörpern gegen Insektengifte hin. DieseErgebnisse schließen eine bestehendeoder zukünftig klinische Reaktion gegenInsektengift jedoch nicht aus (Toxizität).Heterophile Antikörper in Humanserenkönnen mit Immunglobulinen aus denAssaykomponenten reagieren undInterferenzerscheinungen in vitroImmunoassays verursachen. (Clin. Chem.1988:34:27-33) Proben von Patienten, diehäufig mit Tier- bzw. Tierserumproduktenzu tun haben, können die erwähntenInterferenzen verursachen und zuanomalen Resultaten führen. Dieverwendeten Reagenzien sind sokonzipiert, dass das Risiko einerInterferenz mit den zu messenden Probenminimiert ist. Dennoch können potentiellInteraktionen zwischen seltenen Serenund den Testkomponenten auftreten. Zudiagnostischen Zwecken sollten die mitdem Assay erhaltenen Ergebnisse immerin Kombination mit der klinischenUntersuchung, der Patientenanamneseund anderen Befunden gesehen werden.

LeistungsdatenSiehe Tabellen und Grafiken mitrepräsentativen Daten für den Assay.Ergebnisse sind im kU/l dargestellt. Sofernnicht anders angegeben, wurden hierfürSerumproben in Röhrchen ohneGeltrennung und Gerinnungshilfeneingesetzt.Der IMMULITE 2500 Assay verwendet diegleichen Kugeln, Reagenzien,


Kalibratoren und Kontrollen wie derIMMULITE 2000 Assay. Dadurch ist dieAssaycharakteristik auf beiden Systemengleichwertig.Alle Leistungsdaten, mit Ausnahme desMethodenvergleichs 1, wurden auf demIMMULITE 2000 System generiert.IMMULITE 2500 3gAllergy SpezifischesIgE ist Inhalt mehrerer publizierterStudien.14,15

Arbeitsbereich: 0,1 – 100 kU/l(WHO 2 IRP 75/502).Analytische Sensitivität: 0,1 kU/l.Funktionell Sensitivität: 0,2 kU/l.Präzision: Proben wurden an 20 Tagenmit jeweils zwei Testansätzen inDoppelbestimmung gemessen (insgesamt40 Testläufe und 80Doppelbestimmungen). (Siehe “Precision”Tabelle.)Linearität: Die Proben wurden nachunterschiedlicher Vorverdünnungbestimmt. (Siehe Tabelle "Linearity" fürrepräsentative Daten.)Spezifität: Die verwendeten Antikörpersind hochspezifisch für humanes IgE undzeigen keine Kreuzreaktivität mit anderenhumanen Immunglobulinen.Bilirubin: Unkonjugiertes undkonjugiertes Bilirubin hat inKonzentrationen bis zu 200 mg/l keinenEinfluss auf die Ergebnisse, der größer alsdie Impräzision des Assays selbst ist.

Hämolyse: Hämoglobin hat inKonzentrationen bis zu 500 mg/dl keinenEinfluss auf die Ergebnisse, der größer alsdie Impräzision des Assays selbst ist.

Lipämie: Triglyceride hat inKonzentrationen bis zu 3 000 mg/dlkeinen Einfluss auf die Ergebnisse, dergrößer als die Impräzision des Assaysselbst ist.

Alternativer Probentyp: Um dieAuswirkungen von verschiedenenProbenarten zu untersuchen, wurde Blutvon 18 Freiwilligen in Röhrchen ohneAdditiva, in Heparin-, EDTA- und BectonDickinson SST® Vacutainer-Rörchengesammelt. Alle Proben wurden mit demIMMULITE 2000 3gAllergy™ SpezifischesIgE Assay mit den nachfolgendaufgeführten Ergebnissen bestimmt.

(Heparin) = 1,10 (Serum) + 0,16 kU/lr = 0,986

(EDTA) = 0,81 (Serum) + 0,01 kU/lr = 0,996

(SST) = 0,91 (einfachen Röhrchen) + 0,15 kU/lr = 0,992

Mittelwerte:7,1 kU/l (Serum)8,0 kU/l (Heparin)5,8 kU/l (EDTA)6,6 kU/l (SST)

Methodenvergleich 1: Der IMMULITE2500 3gAllergy™ Spezifisches IgE Assaywurde unter Verwendung von 259Patientenproben mit dem IMMULITE 20003gAllergy™ Spezifisches IgE Assayverglichen. Konzentrationsbereich bis ca.89 kU/l. (Siehe Grafik.) Berechnung derlinearen Regression:(IML 2500) = 0,97 (IML 2000) + 0,06 kU/lr = 0.989

Mittelwerte:9,35 kU/l (IMMULITE 2500)9,54 kU/l (IMMULITE 2000)

Methodenvergleich 2: IMMULITE 20003gAllergy™ Spezifisches IgE wurdeanhand von 7 520 individuellenPatientenergebnissen mit dem DPC'sAlaSTAT Microplate Allergen-spezifischenIgE verglichen. Die Ergebnisse wurdenentsprechend dem StandardKlassensystem ausgewertet undgegenübergestellt.

6 1 3 31 42 303

5 11 76 33 35

4 3 178 168 26 10

3 1 292 604 49 2 2

2 16 229 886 98

1 108 172 94 4IM

MU

LITE

200

0

0 3 912 118 11 20 1 2 3 4 5 6

AlaSTAT Microplate

Totale Übereinstimmung: 97%Relative Sensitivität: 96%Relative Spezifität: 97%Total identisch: 81%Klasse 1 identisch: 99%Klasse 2 identisch: 100%

Mittelwerte der Allergie Klassen1,29 (AlaSTAT)1,37 (IML 2000)


Mit denselben Daten wurde anhand derermittelten Konzentrationen eine lineareRegressionsanalyse durchgeführt:(IML 2000) = 0,989 (AlaSTAT) + 1,21 kU/l

r = 0,87

Mittelwerte:8,53 kU/l (AlaSTAT)9,64 kU/l (IMMULITE 2000)

AnwendungsberatungBei Rückfragen wenden Sie sich bitte anIhre DPC Niederlassung.Das Qualitätssystem der Diagnostic ProductsCorporation ist nach ISO 13485:2003 registriert.

Español

IMMULITE 2500 3gAllergy IgEEspecífica Kit UniversalUtilidad del test: Para diagnóstico in vitrousado con el Analizador IMMULITE 2500,para la determinación cuantitiva de la IgEAlérgeno-Específica en suero humano,como ayuda en el diagnóstico clínico delas alteraciones alérgicas mediadas porIgE.Número de Catálogo: L5KUN6 (600 tests)Código del Test: SPE Color: Gris Claro

Resumen y Explicación delTestMuchas alérgias estan mediadas porinmunoglobulinas de tipo IgE. Enindividuos sensibilizados que sufren estetipo de alergia inmediata (atópicas oanafilácticas) las moléculas de IgE actuancomo puntos de unión entre los alérgenosy células especializadas que liberanhistamina y otros agentes tras laexposición al alérgeno; esto inicia losprocesos que son conocidos comoreacciones alérgicas.5,9 Cuando sonevaluados a la luz de otras observacionesclínicas y de laboratorio, los análisis invitro de la IgE Alérgeno-Específicapueden ayudar al médico a identificar elalérgeno (o alérgenos) al cual un individuoes sensible.

Principio del TestIMMULITE 2500 3gAllergy™ IgE Específicaes un análisis enzimoinmunométricoquimioluminiscente en fase sólida, en dospasos, que se basa en cinéticas en faselíquida en formato de bola10,11 (U.S. PatentNo. 4 778 751). Representa un avancesignificativo sobre los métodosconvencionales basados en la unión delos alérgenos a un soporte sólido, comolos discos de papel.Los alérgenos se unen covalentemente auna matriz polímero/copolímero soluble, lacual a su vez está marcada con unligando. El uso de un copolímeroaminoacídico aumenta la cantidad dealérgeno que puede soportar la matriz.Incubación: 60 minutos.

Recogida de la muestraSe recomienda el uso de unaultracentrífuga para aclarar las muestraslipémicas.Muestras hemolizadas pueden indicar unamala recogida de la misma antes de serremitida al laboratorio. Estos resultadosdeberían ser interpretados conprecaución.

La centrifugación de las muestras desuero antes de que se formecompletamente el coagulo puedeocasionar la presencia de fibrina. Paraevitar resultados erróneos debidos a lapresencia de fibrina, asegurarse que seha formado el coagulo completamenteantes de centrifugar las muestras.Algunas muestras, particularmenteaquellas de pacientes sometidos a terapiaanticoagulante, pueden requerir mayortiempo de coagulación.Los tubos para recoger sangre dedistintos fabricantes pueden producirvalores diferentes, dependiendo delmaterial del tubo y de los aditivos,incluyendo barreras de gel o barrerasfísicas, activadores de la coagulación y/oanticoagulantes. El 3gAllergy™ IgEEspecífica IMMULITE 2500 no ha sidoanalizado con todos los distintos tipos detubos. Para obtener detalles sobre lostipos tubos que se han analizado,consulte la sección de Tipos de MuestrasAlternativos.Volumen Requerido: 50 µl de suero.


Conservación: 7 días a 2–8°C, o6 meses a –20°C.13

Advertencias y Precauciones.Para uso diagnóstico in vitro.Reactivos: Mantener a 2–8°C. Desecharde acuerdo con las normas aplicables.Siga las precauciones universales ymanipule todos los componentes como sifueran capaces de transmitir agentesinfecciosos. Los materiales derivados desangre humana han sido analizados y sonnegativos para sífilis; para anticuerposfrente al HIV 1 y 2; para el antígeno desuperficie de hepatitis B y para losanticuerpos de hepatitis C.Se ha usado azida sódica, enconcentraciones menores de 0,1 g/dl,como conservante. Para su eliminacion,lavar con grandes cantidades de aguapara evitar la constitucion de residuos deazidas metálicas, potencialmenteexplosivas, en las cañerías de cobre yplomo.

Substrato quimioluminiscente: Evitar lacontaminación y exposición a la luzdirecta del sol. (Ver el prospecto).Agua: Usar agua destilada o desionizada.

Materiales SuministradosLos componentes representan un juegocompleto. Las etiquetas incluidas en lacaja son necesarias para el ensayo.

Cartucho de Bolas de 3gAllergy™ IgEEspecífica (L2UN12)Con código de barras. 200 bolas,recubiertas con anti-ligando. Estable a2–8°C hasta la fecha de caducidad.L5KUN6: 3 cartuchos.

Vial de Reactivos de 3gAllergy™ IgEEspecífica (L2UNA6)Con código de barras. 28 ml de Fosfatasaalcalina (de intestino de ternera)conjugada con anticuerpo monoclonalmurino anti-IgE humana en solucióntampón. Estable a 2–8°C hasta la fechade caducidad.L5KUN6: 1 vial.Antes de usar, cortar la parte superior dela etiqueta en la perforación, sin dañar elcódigo de barras. Quitar el precinto delorificio del vial; encajar la cubierta

deslizante en las rampas de la tapa delreactivo.

Ajustadores de 3gAllergy™ IgEEspecífica (L2UNJ3, L2UNJ4)Dos viales (bajo y alto) que contienen2,0 ml de IgE humana en una matriz nohumana de suero, con conservante.Estable a 2–8°C durante 30 días despuésde su apertura, o durante 6 meses(alicuotedos) a –20°C.L5KUN6: 2 juegos.Antes de hacer un ajuste, colocar lasetiquetas de las alicuotas apropiadas(suministradas con el kit) sobre tubos deensayo, de tal forma que los códigos debarras puedan ser leídos por el lector.

Anticuerpo Ajustador 3gAllergy™ IgEEspecífica (L2UNS1)Dos viales que contienen 2,75 ml delíquido cada uno de anticuerpo policlonalde cabra anti-IgE humana marcado conligando, listo para su uso y conconservante. Estable a 2–8°C hasta lafecha de caducidad. Este vial es colocadoen la cuña de alergenos cuando seprocesan los ajustadores de IgEespecífica del ensayo.L5KUN6: 2 juegos.

Kit Universal de Controles de3gAllergy™ IgE Específica (SPE)(L2UNC1, L2UNC2)Dos viales que contienen 2 ml de líquidocada uno de IgE humana en una matrizde suero no humano, con conservante.Estable a 2–8°C durante 30 dias despuésde su apertura, o durante 6 meses(alicuotados) a –20°C.L5KUN6: 2 juegos.Consultar el protocolo del control para verlas concentraciones de referencia de cadanivel.Antes de usar, colocar las etiquetas de lasalícuotas apropiadas (suministradas conel kit) sobre tubos de ensayo, de tal formaque los códigos de barras puedan serleídos por el lector.

Anticuerpo Control 3gAllergy™ IgEEspecífica (L2UNS2)Dos viales que contienen 2,75 ml delíquido cada uno de anticuerpo policlonalde cabra anti-IgE humana marcado conligando, listo para su uso y conconservante. Estable a 2–8°C hasta la


fecha de caducidad. Este vial es colocadoen la cuña de alergenos cuando seprocesan los controles de IgE específicadel ensayo.L5KUN6: 2 juegos

Compoenentes del kit que sesuministran por separado

Diluyente para muestras de 3gAllergy™IgE Específica (L2UNZ)Para diluciones en el instrumento demuestras. Un vial de un concentrado (listopara su uso) de una matriz albúminasérica humana, con conservantes.Conservación: 30 días (después de suapetura) a 2–8°C o 6 meses (alicuotado) a–20°C. Desechar de acuerdo con lasleyes aplicables.L2UNZ: 25 mlSe suministran etiquetas con códigos debarras para usarse con este diluyente.Antes de uso, colocar la etiqueta con elcódigo de barras en un tubo de ensayo de16 × 100 mm, así los códigos de barraspueden ser identificados por el lector delinstrumento.L2UNZ: 3 etiquetasL2SUBM: Substrato QuimoluminiscenteL2PWSM: Módulo de Lavado de SondaL2KPM: Kit de limpieza de sondaLRXT: Tubos de reacción (desechables)L2AW1-3: Cuñas para colocar alérgenos(con codigo de barras)L2AW1: codigos 1-33L2AW2: codigos 34-66L2AW3: codigos 67-99L2ATC: Tapones para alergenos.L2ATS: Septum para alergenosTambien disponible:MC6L, DC1L, DC2L, L2SNC: ControlesIgE Alérgeno-Específica en suero humanoTambién necesarios:Agua destilada o desionizada, tubos deensayo, controles.

3gAllergy™ Alérgenos específicos ypaneles de mezclas de alérgenos.Alérgenos específicos y paneles demezclas de alérgenos en fase líquida, conconservante, se embasan y se venden enmódulos de 20 y 40 tests, para su uso enlas plataformas IMMULITE 2000 eIMMULITE 2500. (Para referencias, vea elcatálogo de productos de 3gAllergy™).Almacenar refrigerado: estable a 2–8ºC

hasta la fecha de caducidad marcada enla etiqueta. No utilizar si muestra signosde contaminación bacteriana, tales comoturbidez

Procedimiento de EnsayoAviso: para obtener el funcionamientoóptimo, es importante realizar todos losprocedimientos del mantenimiento generalsegún lo definido en el manual deloperador de IMMULITE 2500.

Consulte el Manual del operador deIMMULITE 2500 para: la preparación,instalación, ajuste, ensayo yprocedimientos de control de calidad.

Carga de Alérgenos1 Seleccionar una posición libre en el

Carrusel de Reactivos a través delsoftware.

2 Reemplazar los tapones de los tubosde alergenos por los septum. Noinvertir el tubo de alergeno una vezque el septum ha sido colocado.

3 Colocar los Viales de Alérgenos quecontienen alérgenos específicos,paneles de alérgenos específicos,anticuerpo Ajustador IgE Específica,y/o anticuerpo Control IgE Específica,en el Soporte de Viales de Alérgenos,con los códigos de barras orientadoshacia el lado abierto del soporte.

4 Cerrar el Soporte de Viales deAlérgenos y escanear los códigos debarras de los alérgenos con el lectorde códigos de barras manual.

5 Una vez que la lectura de códigos debarras se ha completado, cargar elSoporte de Viales de Alérgenos en elcarrusel de reactivos.

6 Repetir este procedimiento paracargar los siguientes Soportes deViales de Alérgenos.

El Soporte de Viales de Alérgenos debeser escaneado antes de colocarlo en elcarrusel de reactivos, para asegurar unacorrecta operación del instrumento. Quitaro sustituir un Vial del Soporte de Viales deAlérgenos requiere volver a escanear elsoporte con el lector de códigos de barras,para actualizar la información de losalérgenos.Intervalo de ajuste recomendado:2 semanas.


Muestras de Control de calidad: Paramonitorizar el ajuste, utilizar los controlessuministrados con el kit. Tambien estándisponibles los controles de alérgenosespecíficos: consultar la sección. Loscontroles de alérgenos específicos (DC1L,DC2L, MC6L and L2SNC) deben serprocesados para monitorizar losresultados de los alérgenos.

Interpretación de losResultados.

Resultados de Alérgenos Individuales:Las clases es una indicación de lacantidad de IgE endógena para undeterminado alérgeno. En la siguientestablas, se muestran los resultadoscuantitativos (kU/l) y la interpretación delresultado en clases para los dos sistemasde clasificación (estandar y extendido).

El sistema de clasificación estandarutiliza los siguientes puntos de corte.

Clase kU/l

Reactividad paraalérgenos

Individuales/paneles

< 0,10 Ausencia oindetectable†0*0,10 – 0,34 Muy Bajo

I 0,35 – 0,69 Bajo

II 0,70 – 3,49 Moderado

III 3,50 – 17,49 Alto

IV 17,5 – 52,49

V 52,5 – 99,99

VI ≥ 100

Muy alto

* Clase 0 en el sistema estandar significa: nodetectable por ensayos de segunda generación.† ND: no detectable por IMMULITE 25003gAllergy.

El sistema de clasificación extendido usalos siguientes puntos de corte de clases.

Klasse kU/l

Reactividad paraalérgenos

individuales/paneles

0 < 0,1 Ausencia oindetectable†

0/1 0,11 – 0,24 Muy bajo

I 0,25 – 0,39 Bajo

II 0,40 – 1,29 Moderado

III 1,30 – 3,89 Alto

IV 3,90–14,99

V 15,00– 24,99

VI ≥ 25

Muy alto

† ND: no detectable por IMMULITE 25003gAllergy.

La elección del sistema de clasificaciónpuede realizarla el usuario dentro delsoftware IMMULITE 2500.

Resultados de Paneles de AlérgenosUn resultado positivo (Clase I o superior)con un Panel de Alérgenos indica que, enla muestra de suero del paciente, existencantidades elevadas de anticuerpos frentea uno o más de los alérgenos quecomponen el panel. Para identificar la IgEAlérgeno-Específica, la muestra debe serde nuevo procesada con cada uno de losalérgenos individuales que componen elpanel

Un resultado negativo (Clase 0) indica laausencia o niveles muy bajos de IgEespecífica para los componentes delpanel.

Los resultados obtenidos con Paneles deAlérgenos no pueden ser comparados conresultados obtenidos con alérgenosindividuales, y no pueden serconsiderados con una acumulación de losresultados obtenidos con alérgenosindividuales.

LimitacionesUn diagnóstico clínico definitivo no debehacerse sólo en base a los resultados invitro de IgE Alérgeno-Específica. Elmédico debe dar el diagnóstico despuésde que todas las observaciones clínicas yde laboratorio hayan sido consideradas.2,4

Los resultados In vitro de IgE Alérgeno-Específica no deben ser utilizados comoguía definitiva para la elección de unadosis inicial de inmunoterapia. Antes debe


realizarse un test cutáneo con la dilucióninicial propuesta para demostrar latoleracia del paciente a esa dosis.En alergias alimentarias, los anticuerposIgE circulantes pueden permanecerindetectables, si los alérgenos sondescubiertos o alterados durante ladigestión, y por tanto, no existen en laalimento original para el cual el pacienteesta siendo analizado.1,3

Resultados idénticos para diferentesalérgenos pueden no estar asociados amanifestaciones clínicas equivalentes,debido a la diferente capacidad de uniónde las IgEs.6

El usuario debería tener en cuenta laposibilidad de que existan reaccionescruzadas dentro de una misma familia dealergenos.7,8

Las siguientes consideracionesespeciales deben ser aplicadas al análisisde la alergia la latex:

• Hay posibilidad de reaccionescruzadas entre el latex y ciertosalimentos como aguacate, platano,castaña y kiwi.12

• Dado que el análisis de la alergia allatex mide IgE Alérgeno-Específica, lareccion retardada de tipo IV y lairritación por latex no será detectada.

Los resultados Clase 0 para los venenosde insectos indican ausencia o nivelesmuy bajos de anticuerpos IgE específicosde venenos. Estos resultados nodescartan la existencia de una futura oactual hipersensibilidad clínica frente a lapicadura de insectos.Los anticuerpos heterofílicos en el suerohumano pueden reaccionar con lasinmunoglobulinas de los componentes delensayo provocando interferencias con losinmunoanálisis in vitro. [Ver Boscato LM,Stuart MC. Heterophilic antibodies: aproblem for all immunoassays. Clin Chem1988:34:27-33.] Las muestras de lospacientes que frecuentemente estánexpuestos a animales o a productosséricos animales pueden presentar estetipo de interferencia que potencialmenteocasione un resultado anómalo. Estosreactivos han sido formulados paraminimizar el riesgo de interferencia, noobstante, pueden darse interaccionesanómalas entre sueros conflictivos y loscomponentes del ensayo. Con fines de

diagnóstico, los resultados obtenidos coneste ensayo siempre deben ser usados encombinación con el examen clínico, lahistoria médica del paciente y cualquierotro dato clínico relevante.

Características analíticasConsultar las tablas y gráficos de datosrepresentativos de las características delensayo. Los resultados son expresadosen kU/l. (A menos que se indique locontrario, los resultados de las muestrasfueron generados a partir de muestras desuero recogidas en tubos sin barrera degel o promotores de la coagulación)

El ensayo IMMULITE 2500 emplea lamisma formulación para bolas, reactivos,ajustadores y controles que el ensayoIMMULITE 2000. Todas las característicasanalíticas son equivalentes en las dosplataformas.Todos los datos excepto Comparación deMétodos 1 fueron generados con elanalizador IMMULITE 2000.El ensayo IgE específica IMMULITE 25003gAllergy ha sido objeto de un número deestudios publicados.14,15

Intervalo de trabajo: 0,1 – 100 kU/l(WHO 2 IRP 75/502).Sensibilidad Analítica: 0,1 kU/l.Sensibilidad Funcional: 0,2 kU/l.Precisión: Las muestras fueronanalizadas en duplicado durante 20 días,dos tandas por día, para un total de 40tandas y 80 replicados. (ver tabla“Precision”.)Linearidad: Las muestras fueronanalizadas con varias diluciones. (Vertabla "Linealidad" para los datos encuestión.)Especificidad: Los anticuerpos sonaltamente específicos para IgE humana yno muestran reacción cruzada a otrasclases de inmunoglobulinas.Bilirubina: La presencia de bilirrubinaconjugada y no conjugada, enconcentraciones hasta 200 mg/l, no tieneningún efecto sobre los resultados entérminos de precisión.Hemólisis: La presencia de hemoglobina,en concentraciones hasta 500 mg/dl,notiene ningún efecto sobre los resultadosen términos de precisión.


Lipemia: La presencia de triglicéridos enconcentraciones hasta 3.000 mg/dl notiene efecto alguno en los resultados, enlo correspondiente a la precisión delensayo.

Tipo de Muestra Alternativa: paraevaluar el efecto de los diferentes tipos demuestras alternativos, se recogió sangrede 18 voluntarios en tubo seco, tubos conHeparina, tubos con EDTA y tubosvacutainer SST® de Becton Dickinson.Todas las muestras fueron analizadas conel procedimiento 3gAllergy™ IgEEspecífica IMMULITE 2000, con lossiguientes resultados.(Heparina) = 1,10 (Suero) + 0,16 kU/lr = 0,986

(EDTA) = 0,81 (Suero) + 0,01 kU/lr = 0,996

(SST) = 0,91 (tubos simples) + 0,15 kU/lr = 0,992

Medias:7,1 kU/l (Suero)8,0 kU/l (Heparina)5,8 kU/l (EDTA)6,6 kU/l (SST)

Comparación de los métodos 1:IMMULITE 2500 3gAllergy™ IgE Específicase ha comparado con el IMMULITE 20003gAllergy™ IgE Específica en 259muestras de pacientes. (Intervalo deconcentración: aproximadamente hasta89 kU/l. Ver el gráfico). Por regresiónlineal:(IML 2500) = 0,97 (IML 2000) + 0,06 kU/lr = 0.989

Medias:9,35 kU/l (IMMULITE 2500)9,54 kU/l (IMMULITE 2000)

Comparación de Métodos 2: IMMULITE2000 3gAllergy™ IgE Específica fuécomparado con el sistema AlaSTATmicroplaca de DPC para la determinaciónde IgE específica de alérgeno en 7 520muestras.

6 1 3 31 42 303

5 11 76 33 35

4 3 178 168 26 10

3 1 292 604 49 2 2

2 16 229 886 98

1 108 172 94 4IM

MU

LITE

200

0

0 3 912 118 11 20 1 2 3 4 5 6

AlaSTAT Microplaca

Correlación: 97%Sensibilidad Relativa: 96%Especificidad Relativa: 97%Coincidencia: 81%Coincidencia Clase 1: 99%Coincidencia Clase 2: 100%

Media de los resultados de clases:1,29 (AlaSTAT)1,37 (IML 2000)

Los mismos datos fueron analizadosmediante análisis de regresión, con lossiguientes resultados:(IML 2000) = 0,989 (AlaSTAT) + 1,21 kU/l

r = 0,87

Medias:8,53 kU/l (AlaSTAT)9,64 kU/l (IMMULITE 2000)

Asistencia técnicaPóngase en contacto con el distribuidornacional.El Sistema de Calidad de Diagnostic ProductsCorporation está registrado para laISO 13485:2003.

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IMMULITE 2500 3gAllergy IgEspécifiques coffret universelDomaine d'Utilisation: Mesurequantitative des allergènes IgEspécifiques dans le sérum humain.Réservé à un usage diagnostique in vitroavec l'analyseur IMMULITE 2500, ce testconstitue une aide au diagnostic cliniquedes désordres allergiques IgE médiés.

Référence catalogue : L5KUN6(600 tests)Code produit : SPE.Code couleur : Gris clair.


IntroductionDe nombreuses allergies sont médiéespar des immunoglobulines de la classeIgE. Chez les personnes sensibiliséesatteintes d'un type d'allergie immédiate(atopique ou anaphylactique), lesmolécules d'IgE agissent comme despoints de contact entre l'allergène et lescellules spécialisées qui relarguentl'histamine et d'autres agents lors del'exposition à l'allergène; c'est l'initiationdes événements que nous reconnaissonscomme réactions allergiques.5,9 Etudiésconjointement à la clinique et aux autresrésultats de laboratoire, les dosages invitro d'IgE spécifiques peuvent aider leclinicien à identifier l'allergène (ou lesallergènes) auquel est sensibilisé lepatient.

Principe du testLe test IMMULITE 2500 3gAllergy™ IgEspécifiques est un immunodosagechimiluminescent, en phase solide et endeux étapes, qui utilise une cinétique enphase liquide sur un format de bille.10,11(Brevet U.S. No. 4 778 751) Celareprésente une avance significative parrapport aux méthodes conventionnellesreposant sur des allergènes fixés sur unephase solide, telle qu'un disque de papier.

Les allergènes sont fixés par covalence àune matrice polymère/copolymère qui estmarquée par un ligand. L'utilisation d'uncopolymère d'acides aminés amplifie ladensité d'allergènes que la matrice peutporter.Incubation : 60 minutes.

Recueil des échantillonsIl est recommandé de clarifier leséchantillons hyperlipémiques parultracentrifugation.

Des échantillons hémolysés peuvent êtresigne d'une souffrance du prélèvementavant son arrivée au laboratoire ; il faudradonc interpréter les résultats avecprudence.La centrifugation des échantillonssériques avant la formation complète ducaillot peut entraîner la présence defibrine. Pour éviter les résultats erronésdûs à la présence de fibrine, s'assurer dela formation complète du caillot avant decentrifuger les échantillons. Certains

échantillons, en particulier ceux provenantde patients sous anti-coagulants, peuventnécessiter un temps plus long pour laformation du caillot.Des tubes pour prélèvements sanguinsprovenant de fabricants différents peuventdonner des résultats différents, selon lesmatériaux et additifs utilisés, y comprisgels ou barrières physiques, activateursde la coagulation et/ou anticoagulants. Lecoffret IMMULITE 2500 IgE 3gAllergy™ IgEspécifiques n'a pas été testé sur tous lestypes de tubes possibles. Veuillezconsulter le chapitre intitulé Autres Typesd'Échantillons pour plus derenseignements sur les tubes qui ont étéévalués.Volume nécessaire : 50 µl de sérum.Conditions de conservation :7 jours à +2°C/+8°C ou 6 mois à–20°C.13

Précautions d'emploiRéservé à un usage diagnostique in vitro.Réactifs : conserver les réactifs à +2/+8 °C. Eliminer les déchets conformémentà la réglementation en vigueur.Respecter les précautions d'emploi etmanipuler tous les composants du coffretcomme des produits potentiellementinfectieux. Les réactifs dérivés de produitshumains et utilisés dans ce coffret ont subiun test sérologique pour la Syphilis et destests de dépistage pour les anticorps anti-VIH1 et 2, anti-VHC et pour l'antigène desurface de l'hépatite B, qui se sont tousavérés négatifs.De l'azide de sodium à des concentrationsinférieures à 0,1 g/dl a été ajouté commeconservateur ; lors de l'élimination,l'évacuer avec de grandes quantités d'eaupour éviter une accumulation d'azidesmétalliques explosifs dans lescanalisations.Substrat chimiluminescent : éviter toutecontamination et l'exposition directe à lalumière solaire (voir la fiche technique).

Eau : utiliser de l'eau distillée oudésionisée.

Matériel fourniLes composants de la trousse ne peuventêtre utilisés que conjointement. Les


étiquettes à l'intérieur du coffret sontnécessaires au dosage.

Cartouche de billes 3gAllergy™ IgEspécifiques (L2UN12)Avec code-barre. 200 billes revêtues d'unanti-ligand. Stable à +2°C/+8°C jusqu'à ladate d'expiration.L5KUN6: 3 cartouches.

Cartouche réactif 3gAllergy™ IgEspécifiques (L2UNA6)Avec code-barre. 28 ml d'anticorpsmonoclonal murin anti-IgE humainemarqué à la phosphatase alcaline(intestins de veau) dans un matrice traitéetampon/sérum humain/non-humain. Stableà +2°C/+8°C jusqu'à la date d'expiration.L5KUN6: 1 cartouche.Avant l'emploi, retirer la partie supérieurede l'étiquette au niveau des perforationsen ayant soin de ne pas endommager lecode-barres. Retirer le film protecteursitué sur la partie supérieure de lacartouche-réactif ; insérer le couverclecoulissant entre les glissières sur ledessus de la cartouche-réactif.

Ajusteurs 3gAllergy™ IgE spécifiques(L2UNJ3, L2UNJ4)Deux flacons (« bas » et « haut »)contenant chacun 2,0 ml d'IgE humainesdans une matrice de sérum non humainavec conservateur. Stable à +2°C/+8°Cpendant 30 jours après ouverture ou6 mois (aliquoté) à –20°C.L5KUN6: 2 jeux.Avant de réaliser un ajustement, placerl'étiquette correspondante (fournie dans lecoffret) sur les tubes de manière à ce quele code-barre puisse être lu par le lecteurcode-barre.

Anticorps de l'Ajusteur 3gAllergy™ IgEspécifiques (L2UNS1)Deux tubes, 2,75 ml chacun, contenant unliquide prêt à l'emploi composé d' unanticorps polyclonal de chèvre anti-IgEhumaine marqué par un ligand avecconservateur. Stable à +2°C/+8°C jusqu'àla date d'expiration. Ce réactif est placédans une cartouche d'allergènes lors dupassage des Ajusteurs IgE spécifiques.L5KUN6: 2 jeux.

Contrôles universels 3gAllergy™ IgEspécifiques (SPE) (L2UNC1, L2UNC2)Deux flacons contenant chacun 2 ml d'IgEhumaines dans une matrice de sérum nonhumain avec conservateur. Stable à+2°C/+8°C pendant 30 jours aprèsouverture ou 6 mois (aliquoté) à –20°C.L5KUN6: 2 jeux.Pour connaître les valeurs du contrôleactuel, se reporter à la fiche technique ducontrôle.Avant de réaliser un contrôle, placerl'étiquette correspondante (fournie dans lecoffret) sur les tubes de manière à ce quele code-barre puisse être lu par le lecteurcode-barre.

Anticorps du contrôle 3gAllergy™ IgEspécifiques (L2UNS2)Deux tubes de 2,75 ml de liquide prêt àl'emploi contenant un anticorps polyclonalde chèvre anti-IgE humaine marqué parun ligand avec conservateur. Stable à+2°C/+8°C jusqu'à la date d'expiration. Ceréactif est placé dans une cartouched'allergènes lors du passage desContrôles IMMULITE 2500 IgEspécifiques.L5KUN6: 2 jeux.

Composants du coffret fournisséparément

Diluant échantillon 3gAllergy™ IgEspécifiques (L2UNZ)Pour la dilution à bord des échantillons.Un flacon contenant une matriceconcentrée de albumine sérique humaineavec conservateur (prêt à l'emploi).Conservation: 30 jours (après ouverture) à+2°C/+8°C ou 6 mois (aliquoté) à –20°C.Éliminer les déchets conformément auxlois en vigueur.L2UNZ: 25 mlLes étiquettes code-barres sont fourniesavec le Diluant. Avant utilisation, placerl'étiquette appropriée sur un tube de16X100 mm de façon que le code-barrepuisse être lu par le lecteur de l'appareil.L2UNZ : 3 étiquettesL2SUBM : Substrat chimiluminescentL2PWSM : Solution de lavageL2KPM : Coffret de décontamination del'aiguille de prélèvementLRXT : Godets réactionnels (jetables)L2AW1-3 : Cartouche d'allergènes (avec


code-barre)L2AW1 : numérotée 1–33L2AW2 : numérotée 34–66L2AW1 : numérotée 67–99L2ATC : Bouchons pour tube d'allergèneL2ATS : Septum pour tube d'allergèneEgalement disponibleMC6L, DC1L, DC2L, L2SNC: ContrôlesIgE spécifiques à base de sérum humain.

Egalement nécessaire :Eau distillée ou désionisée ; tubes ;contrôles.

3gAllergy™ Allergènes isolés etmélangesLes allergènes isolés et les mélanges enphase liquide, avec conservateur, sontvendus conditionnés en coffrets de 20 et40 tests et sont destinés à être utilisésavec les systèmes IMMULITE 2000 etIMMULITE 2500. (Se reporter aucatalogue 3gAllergy™ pour lesréférences). Conserver réfrigéré : stable à+2°C/+8°C jusqu'à la date d'expirationindiquée sur l'étiquette. Ne pas utiliser sides signes de contamination microbienne,comme un aspect trouble, sont observés.

Protocole de dosageNoter que pour des performancesoptimales, il est important de réalisertoutes les procédures de maintenance deroutine selon les instructions du Manueld'Utilisation IMMULITE 2500.

Voir le manuel d'utilisation del'IMMULITE 2500 pour la préparation, ledémarrage du système, les ajustements,le dosage et les procédures de contrôlede qualité.

Chargement des allergènes1 Sélectionner par le logiciel une

position libre sur le CarrouselRéactifs.

2 Remplacer le bouchon des tubesd'allergènes par un septum. Ne pasretourner le tube d'allergène une foisle septum mise en place.

3 Place les tubes d'allergènes contenantles allergènes isolés, les mélangesd'allergènes, l'Anticorps de l'AjusteurIgE spécifiques et/ou l'Anticorps duContrôle IgE spécifiquesIMMULITE 2500 dans la Cartouche

d'Allergènes, les code-barres tournésvers le côté ouvert de la cartouche.

4 Refermer la Cartouche et lire lescode-barres des allergènes avec ladouchette code-barre.

5 Une fois la lecture terminée, chargerla Cartouche d'Allergènes sur lecarrousel réactifs.

6 Reprendre cette procédure pourcharger toutes les Cartouchesd'Allergènes suivantes.

La Cartouche d'Allergènes doit être lueavant chargement dans l'instrument afinde s'assurer un fonctionnement correct.Retirer ou remplacer tout tube de laCartouche d'Allergènes nécessitera larelecture de la Cartouche pour mettre àjour les informations concernant lesallergènes.Intervalle d'ajustement recommandé :2 semaines.Echantillons pour le contrôle dequalité : Les contrôles fournis dans lecoffret doivent être utilisés commecontrôle de qualité de l'ajustement. Descontrôles d'allergènes spécifiques sontégalement disponibles, voir le chapitre« Composants du coffret fournisséparément”. Les contrôles d'allergènesspécifiques (DC1L, DC2L, MC6L etL2SNC) doivent être utilisés commecontrôle de qualité pour assurer le suivides performances des allergènes.

Interprétation des Résultats

Résultats d'allergènes isolés :Le numéro de classe est une indicationsur la quantité d'IgE spécifiquesandogènes pour l'allergène sélectionné.Les résultats des valeurs quantitatives(kU/L) et interprétation de classe pourdeux systèmes (standard et étendu) sontreportés dans les tableaux ci-dessous.


Le système de classification standardutilise les seuils suivants pour les classes :

Classe kU/l

RéactivitéIndividu/Composant(s)

Allergénique(s)

< 0,10 Absence ouindétectable†0*0,10 – 0,34 Très bas

I 0,35 – 0,69 Bas

II 0,70 – 3,49 Moyen

III 3,50 – 17,49 Elevé

IV 17,5 – 52,49

V 52,5 – 99,99

VI ≥ 100

Très élevé

* Classe 0 dans un système standard signifie:non détectable par des dosages de 2ndegénération.† ND: non détectable avec le dosage IMMULITE2500 3gAllergy.

La classification étendue du systèmeutilise les seuils de classe suivants.

Classe kU/l

RéactivitéIndividu/Composant(s)

Allergénique(s)

0 < 0,1 Absence ouindétectable†

0/1 0,11 – 0,24 Très bas

I 0,25 – 0,39 Bas

II 0,40 – 1,29 Moyen

III 1,30 – 3,89 Elevé

IV 3,90–14,99

V 15,00– 24,99

VI ≥ 25

Très élevé

† ND: non détectable avec le dosage IMMULITE2500 3gAllergy.

Le choix du système de classification peutêtre fait par l'utilisateur via le logicielopérationnel IMMULITE 2500.

Résultats des mélanges d'allergènesUn résultat positif (Classe I ou supérieure)avec un mélange d'allergènes indique queles anticorps dirigés contre l'un ouplusieurs allergènes composant lemélange sont présents à un taux élevédans l'échantillon sérique du patient. Pouridentifier les IgE spécifiques, l'échantillondoit être retesté avec des allergènesindividuels correspondant au mélange.

Un résultat négatif (Classe 0) indiquel'absence ou des taux très bas d'IgEspécifiques pour les composants dupanel.Les résultats d'un mélange ne peuventpas être comparé aux résultats de testsavec les allergènes individuels, ils nepeuvent pas non plus être considéréscomme un total cumulé des résultats desallergènes individuels.

LimitesUn diagnostic clinique définitif ne doit pasdépendre uniquement d'un résultat d'IgEspécifiques in vitro. Le diagnostic doit êtreétabli seulement après avoir étudié lecontexte clinique du patient, lasymptomatologie et d'autres données delaboratoire. 2,4

Les résultats d'IgE spécifiques in vitro nedoivent pas être utilisés comme guidepour sélectionner une dose initialedéfinitive d'immunothérapie. Un testcutané à la dilution initiale proposée del'extrait allergènique doit être tout d'abordeffectué afin de démontrer la capacité dupatient à tolérer la dose.Dans le cas de l'allergie alimentaire, lesanticorps IgE circulants peuvent resterindétectables s'ils sont dirigés contre lesallergènes révélés ou transformés durantla préparation ou la digestion et donc quin'existe pas dans l'aliment d'origine pourlequel le patient est testé.1,3

Des résultats identiques pour différentsallergènes ne peuvent pas être associés àdes manifestations cliniques équivalentesà cause des différentes capacités deliaison des IgE.6

L'utilisateur doit être conscient de lapossibilité d'une réaction croisée cliniqueà l'intérieur d'une famille d'allergènes.7,8

Ces considérations spéciales s'appliquentau dosage de l'allergène latex :

• La possibilité d'une réaction croiséeclinique existe entre le latex etcertains aliments comprenant l'avocat,la banane, la châtaigne et le kiwi.12

• Puisque le test du latex dose les IgEspécifiques, les réactions retardées detype IV ou l'irritation par le latex neseront pas détectées.

Des résultats en classe 0 pour les veninsd'insectes indiquent l'absence ou des taux


très bas d'anticorps IgE spécifiques antivenin circulants. De tels résultatsn'excluent pas l'existence d'unehypersensibilité clinique présente oufuture pour la piqure d'insecte.

Les anticorps hétérophiles du sérumhumain peuvent réagir avec lesimmunoglobulines faisant partie descomposants du coffret et interférer avecles immunodosages in vitro. [Voir BoscatoLM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: aproblem for all immunoassays. Clin Chem1998:34:27-33.] Les échantillonsprovenant de patients fréquemmentexposés aux animaux ou aux produitssériques d'origine animale peuventprésenter ce type d'interférence pouvantpotentiellement donner un résultatanormal. Ces réactifs ont été mis au pointafin de minimiser le risque d'interférence,cependant des interactions potentiellesentre des sérums rares et les composantsdu test peuvent se produire. Dans un butdiagnostique, les résultats obtenus avecce dosage doivent toujours être utilisés enassociation avec un examen clinique,l'histoire médicale du patient et d'autresrésultats.

Performances du testConsulter les tableaux et graphiques pourobtenir les données représentatives desperformances de ce test. Les résultatssont exprimés en kU/l. (En l'absenced'indication contraire, tous les résultats ontété obtenus sur des échantillons sériquesrecueillis sur tubes, sans gel, ni activateurde la coagulation).Les dosages IMMULITE 2500 utilisent lesmêmes composants que l'IMMULITE2000: bille, réactif, ajusteur et contrôle.Toutes les caractéristiques desperformances sont équivalentes entre lesdeux plateformes.Tous les résultats de performance àl'exception de la Comparaison deméthode 1 ont été obtenus avecl'automate IMMULITE 2000.Les dosage IMMULITE 2500 3gAllergyIgE Specifiques a été l'objet d'un grandnombre d'études publiées.14,15

Intervalle opérationnel: 0,1 – 100 kU/l(OMS 2 IRP 75/502).Sensibilité analytique: 0,1 kU/l.Sensibilité fonctionnelle: 0,2 kU/l.

Précision: Les échantillons ont été dosésen doublets pendant 20 jours, deux sériespar jour, soit un total de 40 séries et de 80résultats. (Voir le tableau “Precision”.)Test de dilution: Les échantillons ont ététestés à différentes dilutions. (Voir letableau "Linearity" pour les donnéesreprésentatives.)Spécificité: Les anticorps sont hautementspécifiques des IgE humaines et neprésentent pas de réaction croisée avecles autres classes d'immunoglobulineshumaines.Bilirubine: La présence de bilirubineconjuguée ne présente aucun effet sur lesrésultats ni sur la précision du dosage si laconcentration ne dépasse pas 200 mg/l.Hémolyse: La présence d'hémoglobinene présente aucun effet sur les résultats nisur la précision du dosage si laconcentration ne dépasse pas 500 mg/dl.Lipémie : La présence de triglycéridesjusqu'à une concentration de 3 000 mg/dln'interfère ni sur la précision du dosage, nisur les résultats.Autres types d'échantillons: pourestimer l'effet de l'utilisation de différentstype d'échantillons, 18 volontaires ont étéprélevés sur tubes secs, héparinés, EDTAet sur tubes vacutainer SST® BectonDickinson. Tous les échantillons ont étédosés avec le protocole IMMULITE 20003gAllergy™ IgE spécifiques et ont donnéles résultats suivants.(Hépariné) = 1,10 (Sérum) + 0,16 kU/lr = 0,986

(EDTA) = 0,81 (Sérum) + 0,01 kU/lr = 0,996

(SST) = 0,91 (tubes ordinaires) + 0,15 kU/lr = 0,992

Moyennes :7,1 kU/l (Sérum)8,0 kU/l (Hépariné)5,8 kU/l (EDTA)6,6 kU/l (SST)

Comparaison de méthodes 1 : Le testIMMULITE 2500 3gAllergy™ IgEspécifiques a été comparé au testIMMULITE 2000 3gAllergy™ IgEspécifiques sur 588 échantillons (intervallede concentrations : jusqu'à 89 kU/lenviron. Voir graphique). Par régressionlinéaire: (IML 2500) = 0,97 (IML 2000) + 0,06 kU/lr = 0.989


Moyennes:9,35 kU/l (IMMULITE 2500)9,54 kU/l (IMMULITE 2000)

Comparaison de méthode 2 : le testIMMULITE 2000 3gAllergy™ IgEspécifiques a été comparé au dosage IgEspécifiques AlaSTAT Microplaque deDPC, un test de marquage standard, sur7 520 échantillons.

6 1 3 31 42 303

5 11 76 33 35

4 3 178 168 26 10

3 1 292 604 49 2 2

2 16 229 886 98

1 108 172 94 4IM

MU

LITE

200

0

0 3 912 118 11 20 1 2 3 4 5 6

AlaSTAT Microplaque

Concordance totale: 97%Sensibilité relative: 96%Spécificité relative: 97%Total de résultats identiques: 81%Résultats identiques en Classe 1: 99%Résultats identiques en Classe 2: 100%

Moyenne des classes:1,29 kU/l (AlaSTAT)1,37 kU/l (IML 2000)

Les mêmes données ont été étudiées lorsd'une analyse de regression et ont donnéles resultats suivants:(IML 2000) = 0,989 (AlaSTAT) + 1,21 kU/l

r = 0,87

Moyennes:8,53 kU/l (AlaSTAT)9,64 kU/l (IMMULITE 2000)

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IMMULITE 2500 Kit Universale3gAllergy IgE SpecificheUso: Ad uso diagnostico in vitro conl'Analizzatore IMMULITE 2500 — per la

determinazione quantitativa delle IgEAllergene Specifiche nel siero umanoquale ausilio nella diagnosi clinica deidisturbi allergici IgE mediati.Codice: L5KUN6 (600 test)Codice del Test: SPEColore: Grigio Chiaro

Riassunto e Spiegazione delTestMolte allergie sono mediate dalleimmunoglobuline della classe IgE. Inindividui sensibilizzati affetti da questo tipodi allergia (atopica o anafilattica), lemolecole IgE agiscono come punti dicontatto tra l'allergene e le cellulespecifiche che rilasciano istamina ed altriagenti in seguito ad esposizioneall'allergene; ciò innesca il processo cheva sotto il nome di reazione allergica.5,9 Sevalutati alla luce di altre indagini cliniche edi laboratorio, i test sulle IgE allergenespecifiche possono essere d'aiuto almedico nell'identificazione dell'allergene(allergeni) ai quali un soggetto è sensibile.

Principio del DosaggioIl dosaggio IMMULITE 2500 3gAllergy™IgE Specifiche è un immunodosaggio inchemiluminescenza a due step in fasesolida, che utilizza la cinetica in faseliquida sotto forma di sferetta.10,11(Brevetto U.S. No. 4 778 751) Questodosaggio rappresenta un miglioramentosignificativo rispetto ai metodiconvenzionali basati sugli allergeni adesiad un supporto in fase solida quale undischetto di carta.Gli allergeni sono adesi in manieracovalente ad una matrice di polimericopolimeri solubili a sua volta marcata conun ligando. L'utilizzo di un aminoacidocopolimero amplifica la quantità diallergene che la matrice può contenere.Cicli di Incubazione: 60 minuti.

Prelievo del CampioneSi consiglia l'utilizzo di un'ultracentrifugaper schiarire i campioni lipemici.

Campioni emolizzati possono indicare untrattamento non idoneo del campioneprima dell'arrivo al laboratorio; quindi irisultati devono essere interpretati concautela.


La centrifugazione dei campioni di sieroprima che la coagulazione sia completapuò provocare la formazione di fibrina. Perevitare risultati errati dovuti alla presenzadi fibrina, assicurarsi che la coagulazionesia completa prima di centrifugare icampioni. Alcuni campioni, in modoparticolare quelli di pazienti sottoposti aterapia con anticoagulanti, possonorichiedere un tempo di coagulazione piùlungo.

Provette per il prelievo di sangue diproduttori diversi possono dare valoridifferenti, a seconda dei materiali e degliadditivi usati, incluso gel o barriere fisiche,attivatori di coaguli e/o anticoagulanti.

Provette per il prelievo di sangue diproduttori diversi possono dare valoridifferenti, a seconda dei materiali e degliadditivi usati, incluso gel o barriere fisiche,attivatori di coaguli e/o anticoagulanti.L'IMMULITE 2500 3gAllergy™ IgESpecifiche non é stato verificato con tuttele possibili variazioni di tipi di provette.Consultare la sezione riguardanteCampioni Alternativi per dettagli sulleprovette testate.Volume Richiesto: 50 µL di siero.Conservazione: 7 giorni a 2–8°C, o6 mesi a –20°C.13

Avvertenze e PrecauzioniAd uso diagnostico in vitro.Reagenti: Conservare a 2–8°C. Eliminaresecondo le disposizioni di legge vigenti.

Seguire le precauzioni generali emanipolare tutti i componenti come sepotessero trasmettere agenti infettivi. Imateriali di origine umana sono statitestati e trovati non reattivi per la Sifilide;per gli Anticorpi anti-HIV 1 e 2; perl'Antigene di Superficie dell'Epatite B; eper gli anticorpi anti-Epatite C.

E' stata aggiunta sodio azide, aconcentrazioni inferiori a 0,1 g/dL, comeconservante. Al momentodell'eliminazione, irrorare con molta acquaper evitare la formazione di azidimetalliche nelle tubature di piombo e dirame.

Substrato Chemiluminescente: Evitarela contaminazione e l'esposizione alla lucesolare diretta. (Vedi metodica.)

Acqua: Utilizzare acqua distillata odeionizzata.

Materiali FornitiI componenti costituiscono un set misto.Le etichette all'interno della confezionesono necessarie per il dosaggio.

Confezione di Sferette 3gAllergy™ IgESpecifiche (L2UN12)Con codice a barre. 200 sferette coattatecon anti-ligando. Stabili a 2–8°C fino alladata di scadenza.L5KUN6: 3 confezioni.

Porta Reagente Universale 3gAllergy™IgE Specifiche (L2UNA6)Con codice a barre. 28 mL di fosfatasialcalina (intestino di vitello) coniugata conun anticorpo monoclonale IgE murino anti-umano in un tampone. Stabile a 2–8°Cfino alla data di scadenza.L5KUN6: 1 Porta Reagente.Prima dell'utilizzo rimuovere la partesuperiore dell'etichetta lungo laperforazione senza danneggiare il codicea barre. Togliere il foglio protettivo dallaparte superiore del flacone. Far scattarenella corretta posizione il coperchioscorrevole lungo le guide del coperchiodel reagente.

Calibratori 3gAllergy™ IgE Specifiche(L2UNJ3, L2UNJ4)Due flaconi (Basso e Alto), 2,0 mLciascuno di IgE umane in una matrice disiero non umano, con conservanti. Stabilia 2–8°C per 30 giorni dopo l'apertura, oper 6 mesi (aliquotati) a –20°C.L5KUN6: 2 set.Prima di ricalibrare collocare le etichettegiuste sulle provette delle aliquote (fornitecol kit) cosicché i codici a barre possanoessere registrati dal lettore.

Anticorpo del Calibratore 3gAllergy™IgE Specifiche (L2UNS1)Due provette, contenenti ciascuna2,75 mL di un anticorpo policlonale dicapra anti-umano-IgE marcato conligando, in forma liquida e pronto all'uso,con conservanti. Stabile a 2–8°C fino alladata di scadenza. Questo reagente ècollocato nel porta reagenti degli Allergeniquando si eseguono i Calibratori IgE


Specifiche.L5KUN6: 2 set.

Controlli del Kit Universale 3gAllergy™IgE Specifiche (SPE) (L2UNC1, L2UNC2)Due flaconi, 2 mL ciascuno di IgE umanein una matrice sierica non umana, conconservanti. Stabili a 2-8°C per 30 giornidopo l'apertura, o per 6 mesi (aliquotati) a–20°C.L5KUN6: 2 set.Fare riferimento alla metodica dei controlliper i livelli di concentrazione.Prima dell'utilizzo, collocare le etichettegiuste sulle provette delle aliquote (fornitecol kit) cosicché i codici a barre possanoessere registrati dal lettore.

Anticorpo di Controllo 3gAllergy™ IgESpecifiche (L2UNS2)Due provette, contenenti ciascuna2,75 mL di un anticorpo policlonale dicapra anti-umano-IgE marcato con ligandoin forma liquida, pronto all'uso, conconservanti. Stabili a 2–8°C fino alla datadi scadenza. Questo reagente vienecollocato sul porta reagenti degli Allergeniquando si eseguono i Controlli IgEIMMULITE 2500.L5KUN6: 2 set.

Componenti del kit fornitiseparatamente

Diluente 3gAllergy™ IgE Specifiche perCampioni (L2UNZ)Per la diluzione sul luogo dei campioni deipazienti. Un flacone concentrato prontoall'uso, una matrice albumi sierica umanacon conservanti. Conservazione: 30 giorni(dopo l'apertura) a 2–8°C oppure 6 mesi(in aliquote) a–20°C. Eliminare secondoquanto stabilito dalle relative leggi.L2UNZ: 25 mLVengono Fornite Le provette da utilizzarsicon il diluente. Prima dell'utilizzo,collocare un'etichetta appropriata su unaprovetta 16 × 100 mm cosicchè i codici abarre possano essere letti dal lettoreinternoL2UNZ: 3 etichetteL2SUBM: Substrato ChemiluminescenteL2PWSM: Soluzione di LavaggioL2KPM: Kit di Pulizia dell'AgoLRXT: Tubi di Reazione (monouso)L2AW1-3: Wedge allergeni (con codice a

barre)L2AW1: codificati serialmente 1–33L2AW2: codificati serialmente 34–66L2AW3: codificati serialmente 67–99L2ATC: Tappi per AllergeniL2ATS: Septum per AllergeniSono anche disponibiliMC6L, DC1L, DC2L, L2SNC: ControlliIgE Allergene Specifiche basati su sieroumano.Materiale RichiestoAcqua distillata o deionizzata; provette;controlli.

3gAllergy™ Pannelli di AllergeniSpecifici de Allergeni MistiPannelli di allergeni singoli e di allergenimisti in fase liquida, con conservanti, sonoconfezionati in moduli da 40 e 20 test epossono essere utilizzati sia con lapiattaforma dell'IMMULITE 2000 che conquella dell'IMMULITE 2500. (Per i codici,vedi il listino prezzi dei Prodotti3gAllergy™). Conservare refrigerati: stabilia 2–8°C fino alla data di scadenzaindicata sull'etichetta. Non utilizzare sesono presenti segni di contaminazionemicrobica quali aspetto torbido.

Procedura del DosaggioFare attenzione: per ottenere prestazioniottimali, è importante effettuare tutte leprocedure di manutenzione cosiccomedefinite nel Manuale dell'OperatoreIMMULITE 2500.Vedi Manuale dell'OperatoreIMMULITE 2500 per: preparazione, messaa punto, diluizioni, calibrazione, dosaggioe procedure di controllo di qualità.

Caricamento degli Allergeni1 Selezionare, attraverso il software una

posizione libera sul CaroselloReagenti.

2 Togliere i tappini dalle Provette degliAllergeni. Non invertire il tubodell'allergene una volta che il setto èinstallato.

3 Collocare le Provette contenenti gliallergeni specifici IMMULITE 2500, ipannelli Allergene Specifici,l'Anticorpo del Calibratore e/ol'Anticorpo del Controllo nel wedgedegli Allergeni, con il codice a barre


posto in modo tale che risulti visibiledall'esterno.

4 Chiudere il wedge ed eseguire lascannerizzazione dei codici a barrecon l'apposito scanner.

5 Al completamento dellascannerizzazione, caricare il wedgedegli Allergeni nel carosello reagenti.

6 Ripetere questa procedura percaricare tutti i successivi wedgenecessari.

Il wedge degli Allergeni deve esserescannerizzato prima dell'installazione nellostrumento per assicurare l'operativitàcorretta dello strumento. Rimuovere oricollocare un qualsivoglia flaconeall'interno del wedge degli allergeni verràrichiesta la riscannerizzazione del wedgeper aggiornare le informazioni relative agliallergeni.Intervallo di Calibrazione Consigliato:2 settimane.

Campioni per il Controllo di Qualità:Per monitorare la calibrazione, utilizzare icontrolli forniti con il kit. Sono anchedisponibili i controlli Allergene Specifiche,vedi sezione “Componenti del Kit FornitiSeparatamente”. Devono essere testati icontrolli Allergene Specifiche (DC1L,DC2L, MC6L and L2SNC) per monitorarele prestazioni degli allergeni.

Interpretazione dei Risultati

Risultati degli Allergeni Singoli:La classe indica il quantitativo di IgEendogene specifiche contenutenell'allergene selezionato. I valoriquantitativi (kU/L) e l'interpretazione deirisultati della Classe per due sistemi diconteggio (standard ed esteso) sonoforniti nelle tabelle seguenti.

Il sistema di classifica

3gAllergy™ Specific IgE Universal Kit...IMMULITE 2500 3gAllergy Specific IgE Universal Kit...

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