3. PCR Polimerase Chain Reaction

8/17/2019 3. PCR Polimerase Chain Reaction

1/8

PCR - POLIMERASE CHAINREACTION


2/8

• p o l i m e r a z n a l a n č a n a r e a k c i j aŠta značiPCR

• ! l " # i z a a m p l i $ k a c i j " o % r e & e n o ' % i j e l a n e k o ' ' e n a i l i č i t a ( o ' ' e n a ) i l i č a k ' e n o m a *

+em" !l"#iPCR

• t o z n a č i % a p o m o , " P C R r e a k c i j e m o # e m o " m n o # i t i ) a m p l i $ c i r a t i ) " m n o ' o ! t r " č i t i o % r e & e n i - r a ' m e n t ' e n a ) % a . i n a m p o ! t a o ( i % l j i ( *Šta to

zapra(o

znači

• r a % i n a p r i n c i p " t e m p e r a t " r n i / r a z l i k a ) a o ! n o ( n a / e m i k a l i j a z a " ! p j e 0 n " P C R r e a k c i j " j e T a 1 p o l i m e r a z a *Na kojem

princip"ra%i PCR


3/8

O!no(ne premi!e PCR 2a3

" nati(nom !tanj" 4N5 je %(o!tr"ki /elik!) !a!toji!e o% %(a antiparalelna polin"kleoti%na lanca

me&"!o.no po(ezana (o%iko(im (ezama)n"kleoti%i je%no' polin"kleoti%no' lanca !"me&"!o.no po(ezani ko(alentnom (ezom izme&"%ezok!iri.oze je%no' n"kleoti%a i o!atne 'r"pe!"!je%no' n"kleoti%a)(o%iko(e (eze koje o%r#a(aj" %(a polin"kleoti%nalanca zaje%no "(ijek !e ormiraj" izme&"komplementarni/ .aza tj* A-a%enin !e "(ijek (e#eza T-timin a C-citozin za 6-'"anin)


4/8

ko(alentne (eze !" !ta.ilne i pri za'rija(anj" !e o%r#a(aj")%ok !" (o%iko(e (eze ener'et!ki !la.e i lako !e remete

za'rija(anjem 7%enat"racija8)

/la&enje %o(o%i %o pono(no' "!po!ta(ljanja (o%iko(i/(eza izme&" komplementarni/ .aza 7renat"racija8)

4N5 replikacij" in (i(o inicira RN5 Pol I !intetiziraj",ikratke RN5 !ek(ence) time kreiraj",i !"p!trat za 4N5 Pol I7!lo.o%n" -OH- 'r"p" %ezok!iri.oze na 9: kraj"8)

na optimalnoj temperat"ri) 4N5 Pol I katalizira "'ra%nj"!lo.o%ni/ %ezok!iri.on"kleoti%-9-o!ata na po!toje,ioli'on"kleoti%ni lanac !a !lo.o%nom -OH- 'r"pom na 9:kraj" ka%a je i!ti (o%iko(im (ezama po(ezan za matric"*


5/8

Selekcija !peci$čno' %ijela 4N5 molek"le po!ti#e !eprimjenom oli'on"kleoti%ni/ prajmera) kratki/ 4N5!ek(enci 7;:-9: pra(c" tako %a !e na nji/o(om 9:kraj" nalazi %ezok!iri.oza !a !lo.o%nom -OH-'r"pom*


6/8

TIPI+NA PCR REA5CI?A

• Tipična reakcija enzimat!ke ampli$kacije 4N5 ra'menta o%(ija !e "pla!tičnim t".icama !a poklopcem) (ol"mena ;


7/8


8/8

DA4ATA5

Napravite PCR i uzmite uobzir sljedeće postavke: Imate 8 uzorka, tenegativnu i pozitivnu probu.

Volumen ukupne reakijetreba biti !" ul, a dodajete# ul $N% svakog uzorka.

3. PCR Polimerase Chain Reaction

Documents

Transcript of 3. PCR Polimerase Chain Reaction