Metode de ggStudiu a Genelor

8/18/2019 Metode de ggStudiu a Genelor

http://slidepdf.com/reader/full/metode-de-ggstudiu-a-genelor 1/55

Metode deanaliză a genelor

Expresia genelor

Proteină

Caracter 5’-ATTGCAAGATTACCATGT-’ Catena codogenă !netranscrisă"

’-TAACGTTCTAATGGTACA-5’ Catena anticodogenă !transcrisă"

Transcripţie

5’-A##GCAAGA##ACCA#G#-’ ARNm

Translaţie

$e% & Ala & Arg & $e% & Pro & C's polipeptid

Maturizare

Caracter (enotipic normal

Expresia genelor

ADNm%t

ARNmm%t

Proteinăan

Caracter an

5’-ATTACAAGATTACCATGT-’ m%ta)ie G*+A’-TAATGTTCTAATGGTACA-5’

Transcripţie

5’-A##ACAAGA##ACCA#G#-’ ARNmm%t

Translaţie

$e% & T,r & Arg & $e% & Pro & C's polipeptidan

Caracter (enotipic anormal

Analiza genelor

ec.en)iere

o%t,ern-/lot

0i/ridare in situ

ADN ProteineARN

Nort,ern-/lot

RT&PCR

0i/ridare in situ

1estern-/lot

ec.en)iere

Analiza (%nc)iei

Analiza,istoc,imică

2/)inerea 3R & (ragmentelor de restric)ie prinac)i%nea speci(ică a ER !enzimelor de restric)ie"

RFLPs – polimorfismul FR la două persoane X şi Z

:;5 7/

Etapele te,nicii PCR

• Denat%rarea ADN la <9oC

A= Pregătirea amestec%l%i c% toate componentele reactant

• Răcirea p>nă la temperat%ra de renat%rare a primerilor • Elongarea catenelor ADN la ?:oC

@= Repetarea a%tomată a proced%rilor de denat%rare-renat%rare-elongare de 6-5 ori

C= Analiza prod%ilor PCR - electro(oreza

- colorarea - interpretarea rez%ltatelor

Extragerea ADN Pregătireacomponentelor pentr%

Ampli(icarea

ADN-)intă

Electro(oreza

prod%ilor PCR

Colorarea i

.iz%alizarea prod%ilorPCR

Bnterpretarea

rez%ltatelor

Identificarea inserţiilor / deleţiilor

Identificarea mutaţiilor punctiforme

Identificarea agenţilor infecţioşi

Stabilirea paternităţii filiaţiei!

Optimizarea condiţiilor de desfăşurare a PCR

"ependenţa cantităţii de produse amplificate de concentraţia #"$ genomic utili%ată &n P'R(S)a utili%at #"$ &n cantitate de* + – ,-. g- 0 – ,-0. g- 1 – ,-+ g- 2 – ,-,0 g

'oncentraţiile critice ale substanţelor pentru in3ibarea acti4ităţii 5a6)polimera%ei

Substanţa 'oncentraţia critică

SDS >0.005% (m/v)

Fenol >0.2% (v/v)

Etanol >1% (v/v)

Isopropanol >1% (v/v)

CH3COOa >5 m!

aCl >25 m!

ED"# >0.5 m!

Optimizarea condiţiilor dedesfăşurare a PCR

'aracteristica primerilor utili%aţi &n P'R

7ena Sec4enţa Lungimea- ba%e 8 79' 5m- o'

#': 5$C"&&#&#CC#C"CCC#"CC"""C"3$ 2' 5' 5

5$&#"&"&&CC#"C#C#""C&"C#&#"3$ 25 ' 5

#5+ R 5$C"&&C"CC""&C"&&"&"&&3$ 20 *5 5

5$&&&C##&C&"#"#""""C"&&"&3$ 23 ' 55

$;S 5+##&&C#&&#&#C#&"&&#"&&#3+ 22 55 5,

5+CCC#&"C##"CCC"""&&"&C"C#3+ 2' 5' 5

"ependenţa cantităţii produselor P'R de temperatura de renaturare a primerilor(<n condiţiile P'R s)a utili%at* + – to' optimală ).o'= 0 – to' optimală= 1 – to' optimală 9.o'(

Optimizarea condiţiilor de desfăşurare a PCR

"ependenţa cantităţii produselor P'R de concentraţia ionilor >g09(

'oncentraţia utili%ată de >g'l0* + – 0-.m>= 0 – .m>(

"ependenţa cantităţii de #"$ amplificat de numărul de cicluri P'R(+ – 1, cicluri= 0 – 1. cicluri= 3 – 40 cicluri.

Analiza polimorfismului I/D pentru ena AC!

#nali%a electroforetică &n gel de agaro%ă de 08 a produselor P'R re%ultatedin amplificarea #"$ uman cu primeri corespun%ători genei #':(

> – marc3er al lungimii= + – genotip I/"= 0 – genotip "/"= 1 – genotip I/I(

Analiza polimorfismului "/T pentru ena #O$

! 1 2 3

Re%ultatele amplificării #"$ uman cu primeri corespun%ători genei $;S(> – marc3er al lungimii= + – genotip 7/7= 0 – genotip 5/5= 1 – genotip 7/5(

Analiza polimorfismului A/C pentru ena AT% R

Re%ultatele amplificării #"$ uman cu primeri corespun%ătorigenei #5+ R digerate cu a?utorul en%imei "de I(

> – marc3er al lungimii= + – genotip #/#= 0 – genotip #/'

Te&nica Real'time'PCR

ARM$'PCR

5e3nica Sout3ern)blot

:@tragerea #"$ Restriţia #"$ :lectrofore%a #"$

"enaturarea şitransferul #"$pe membrane

#utoradiografiaAibridare cu sonda

Bi%uali%area şiinterpretarea

re%ultatelor

R()Ps şi analiza enotipului

!lectroforeza (R a * persoane A+, şi C

Alela #ormală cu * $R Alela mutantă cu - $R+ mutaţie .n $R-

@ !Nm"

C !mm"

A !NN"

5e3nica $ort3ern)blot

:@tragerea #R$ :lectrofore%a #R$

5ransferul #R$pe membrane

#utoradiografiaAibridare cu sonda

Bi%uali%area şiinterpretarea

re%ultatelor

Bdenti(icarea ni.el%l%ide expresie i a .arianteide splicing

5’-ATTACAAGATTACCATGT-’ catena codogenă’-TAATGTTCTAATGGTACA-5’ catena anticodogenă matriţă0

’-TAATGTTCTAATGGTACA-5’5’-ATTAC-’

’-TAATGTTCTAATGGTACA-5’5’-ATTACAA-’

’-TAATGTTCTAATGGTACA-5’5’-ATTACAAG-’

’-TAATGTTCTAATGGTACA-5’5’-ATTACAAGA-’

’-TAATGTTCTAATGGTACA-5’5’-ATTACAAGATT-’

’-TAATGTTCTAATGGTACA-5’5’-ATTACA-’

’-TAATGTTCTAATGGTACA-5’5’-ATTACAAGAT-’

A; T; C; T & ddNTP !:’;’-ddNTP"

pentru stoparea sintezei

5’-ATTA -- primer marcat P*-

pentru AD#'polimerază

A; T; C; T & dNTP !:’-dNTP"pentru sinteza noilor catene

5’-ATTACA-’

5’-ATTACAA-’

5’-ATTACAAG-’

5’-ATTACAAGA-’

5’-ATTACAAGATT-’

5 -ATTACA-

5’-ATTACAAGAT-’

5’-ATTACAAGATTA-’

5’-ATTACAAGATTACCA-’

5’-ATTACAAGATTACCAT-’

5’-ATTACAAGATTACCATG-’

5’-ATTACAAGATTACCATGT-’

'A T C G

5’-ATTAC-’

5’-ATTACAAGATTAC-’

5’-ATTACAAGATTACC-’ 5’-ATTACAAGATTACCATGT-’

10 23 TAAATGGCTA4444444*3'0

Metoda a%tomată

0i/ridarea in situ c%%tilizarea preparatelor

de cromozomi meta(azici

0i/ridarea in situ c%%tilizarea preparatelor

c% n%clei inter(azici

0i/ridarea in situ pentr%depistarea sec.en)elor ADN

Aib id i it

Aibridareain situ

cuutili%area probei sens stCnga!şi antisens dreapta!

Aibridarea in situ pentru depistareasec4enţelor #R$

#nali%a3istoc3imică –identificarea

proteinelor &n ţesut

Metode de ggStudiu a Genelor

Documents

Transcript of Metode de ggStudiu a Genelor

Metode Active de Grup

Rosca M, Metode de Psihodiagnostic

Metode de Cercetare Si Dezvoltare Organizationala

Culegere de Metode de Educatie Non Formal A

Metode Interactive de preadre-invatare

Strategii Si Metode de Cercetare Calitativa

Metode de Caracterizare a Materialelor Nanostructurate

Aparate Si Metode de Masurat Electrice

Metode Endoscopice de Hemostaza

Metode Interactive de Grup

Aparate Si Metode de Masurat Si Control

Metode de Diagnosticare in URO

Metode de consolidare.pdf

Metode Spectrale de Analiza a Medicamentelor

Cuprins - referateok.ro file2 3.5.1.2 Metode de scalare.....20 3.6 Metode şi tehnici de cercetare utilizate în marketing .....26

2 Metode de Invatamant

Metode Moderne de Constructje

Metode de Epurare Biologica a Apelor

Metode de calculatie

Metode de dezvoltare software