Curso Taller REDCAM 2020: Estandarización de las mediciones analíticas requeridas para la estimación del Índice de Calidad de Aguas Marinas y Costeras
– ICAM.
2-13 de noviembre de 2020, Santa Marta D.T.C.H., Colombia
DETERMINACIÓN DE COLIFORMES TERMOTOLERANTES POR FERMENTACIÓN EN TUBOS MÚLTIPLES
(SM 9221 E) Tania Liceth Córdoba Meza
INVEMAR – Investigador científico
With the support of the Government of
Flanders, Belgium
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Cambio climático: Carbono azul y adaptación basada en ecosistemas marinos y costerosSanta Marta, Julio 6-10 de 2020
DETERMINACIÓN DE COLIFORMES TERMOTOLERANTES POR FERMENTACIÓN EN TUBOS MÚLTIPLES
(SM 9221 E)
Anaerobias facultativas.
Gram negativas, no
esporuladas.
Capaces de fermentar la
lactosa como fuente de
energía con producción de
gas y acido en presencia de
sales biliares a una
temperaturas de 45,5°C
por un periodo de 24h.
¿Que son los
Coliformes?
• Indicadores de la calidad
sanitaria del agua.
• Tracto intestinal
• Enteropatógenos.
• Contaminación fecal
reciente.
• E. coli
Importancia Biológica
Cuantificación de
coliformes
Matrices Ambientales.
La densidad bacteriana se
puede estimar mediante la
tabla NMP usando el
número de tubos positivos
en las diluciones múltiples.
Técnica de Fermentación
De Múltiples Tubos
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(SM 9221 E)
ASPECTOS
IMPORTANTESColiformes termotolerantes
(SM 9221 E)
01Una vez recolectada la muestra, se recomienda que
se analice dentro de las siguientes 2 horas, en caso de
no poderse, se debe mantener bajo refrigeración (4 -
8 °C) por un tiempo máximo de 24 h.
02 Para todas las muestras se emplearán como
mínimo tres series de cinco tubos.
03Todos los tubos empleados en esta técnica
contendrán campanas de Durham, de forma
invertida en su interior, con el fin de retener el gas
producido en el proceso de fermentación.
04 Para aguas con concentraciones bajas, se
recomienda siempre iniciar a partir de porciones
de 10 mL de la muestra.
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1FASE
PRESUNTIVA
En esta fase se busca la recuperación y
rápido desarrollo de los microorganismos
capaces de fermentar la lactosa como
fuente de energía, para ello se emplea el
Caldo Lauril Triptosa el cual contiene
este azúcar.
2FASE
CONFIRMATIVA
En la fase confirmativa, se busca
determinar los coliformes termotolerantes
fundamentado en la capacidad que
poseen estas bacterias para fermentar la
lactosa presente en el Caldo EC y
producir gas a una temperatura de 44,5
°C por un periodo de 24 horas.
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DILUCIONES
RECOMENDADAS SEGÚN EL
TIPO DE MUESTRAS 10mL – 1 mL – 0,1 mL
Para aguas superficiales limpias(Marinas o Estuarinas)
10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5
Para aguas de moderada contaminación o aguas
residuales tratadas
10-3, 10-4, 10-5, 10-6
Aguas contaminadas o aguas residuales sin
tratamiento
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Fase Confirmativa
• Se agita la muestra vigorosamente 25 veces aprox.
Fase Presuntiva
• Se inocula en caldo Lauril doble y sencillo cada serie de cinco tubos (mínimo 3 series) con los
volúmenes de muestras determinados.
Fase presuntiva
• Se lleva a incubar a 35°C ± 0,5°C por 24 ± 2h o 48 ± 3h. Pasado el tiempo, se selecciona los tubos positivos (Producción de gas y turbidez )
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Fase Confirmativa
•A partir de cada tubo positivo proveniente de la fase de pre-
enriquecimiento o fase presuntiva se toman 2 asadas y se transfiere al tubo
con Caldo EC
Fase Confirmativa
• Se lleva a incubar a 44,5°C ± 0,2 °C por 24 ± 2h, Pasado el tiempo, se selecciona los tubos positivos (Producción
de turbidez y gas dentro de la campana de Durham o por efervescencia).
Confirmación con agares selectivos
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Fase Confirmativa
•Calcular la concentración en NMP según la tabla y registrar su valor.
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¡Gracias!
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