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Windows Mac 版...Compensation...
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Windows・Mac 版 V10 マニュアル 応用編 更新日：2018 年 3 月 日本ベクトン・ディッキンソン株式会社
Transcript of Windows Mac 版...Compensation...
Windows・Mac版
V10 マニュアル
応用編
更新日：2018 年 3 月
日本ベクトン・ディッキンソン株式会社
2
目次 はじめに .................................................................................................................................... 4
動作環境 ........................................................................................................................... 4
ご使用の際の注意 .............................................................................................................. 4
11. コンペンセーション ............................................................................................................... 5
11.1 コンペンセーションの意義 ...................................................................................... 5
11.2 コンペンセーションサンプルの表示 .......................................................................... 5
11.3 FlowJoでのソフトウエアコンペンセーション ........................................................... 5
11.4 コンペンセーションマトリックスの修正 ..................................................................... 9
11.5 新規のコンペンセーションマトリックスの作成と適用 ............................................... 10
11.6 コンペンセーションマトリックスファイルのエクスポート・インポート .............................. 11
12. Biexponential Transform ....................................................................................... 13
12.1 Biexponential Transform とは .................................................................. 13
12.2 Biexponential Transformの方法 ............................................................. 13
13. 新規パラメータの追加（Derived parameter） .......................................................... 15
13.1 一般的な新規パラメータの作成 ......................................................................... 15
13.2 比（FL1/FL3）パラメータの作成 ................................................................... 16
13.3 ゲイン（オフセット）調整パラメータの作成 ......................................................... 18
13.4 作成したパラメータのバッチ処理適用 ................................................................. 19
14. プレートエディター ............................................................................................................ 21
14.1 プレートエディターの起動 ................................................................................... 21
14.2 プレートエディターでの情報付加 ........................................................................ 22
14.3 希釈系列の情報を自動付加する ....................................................................... 24
14.4 プレートヒートマップ・Chernoff Face表示 ....................................................... 25
14.5 Csv ファイルからのメタデータのインポート ........................................................... 27
15. 集団比較 ........................................................................................................................ 30
15.1 集団を比較する................................................................................................. 30
15.2 統計計算の項目について ................................................................................... 32
15.3 複数パラメータのカイ二乗検定 .......................................................................... 33
15.4 バッチ処理 ........................................................................................................ 33
15.5 結果の出力 ...................................................................................................... 34
16. 細胞周期解析 ................................................................................................................. 35
16.1 細胞周期解析の方法 ........................................................................................ 35
16.2 フィッティングモデルについて ................................................................................ 36
16.3 手動での調整（Constraints） ...................................................................... 37
16.4 バッチ処理 ........................................................................................................ 37
16.5 テーブルエディターやレイアウトエディターへの出力 ............................................... 38
3
17. カイネティクス解析 ........................................................................................................... 40
17.1 カイネティクス解析の方法 .................................................................................. 40
17.2 表示グラフ設定 ................................................................................................. 41
17.3 解析一覧.......................................................................................................... 43
17.4 解析の出力方法 ............................................................................................... 43
17.5 カイネティクスプラットフォームに関する論文 ......................................................... 44
18. 細胞増殖解析（Proliferation） .................................................................................. 46
18.1 細胞増殖解析の方法 ........................................................................................ 46
18.2 解析一覧細胞増殖解析に関する論文 ................................................................ 46
18.3 細胞増殖解析に関する論文 .............................................................................. 46
19. 対応するファイル形式 ....................................................................................................... 48
19.1 CSV (Comma Separated Values)ファイル ............................................... 48
19.2 CLR (CLassification Results)ファイル ....................................................... 48
19.3 XML(Extensible Markup Language)ファイル .......................................... 48
19.4 Zip ファイル ...................................................................................................... 48
19.5 画像ファイル ...................................................................................................... 49
20. デフォルト設定（Preferences設定） ........................................................................... 57
20.1 Workspace ................................................................................................... 57
20.2 Output ........................................................................................................... 58
20.3 Platforms ..................................................................................................... 58
20.4 Tools .............................................................................................................. 58
トラブルシューティング .............................................................................................................. 59
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はじめに 動作環境
最小動作環境：
• 2GB RAM
• x86 or x64 dual core processor
• Windows Vista 以降
• Mac OSX 10.7.3 以降
推奨動作環境：
• 16GB RAM
• Intel i7 quad core processor 以上
• Windows 10
• Mac OSX 10.7.3 以降
ご使用の際の注意
FlowJo をお使いになる PC のユーザーアカウントは半角英数字のみ（ハイフンを含まない）で
作成してください。
FlowJo のワークスペースおよび読み込むデータは必ず、上位階層も含めフォルダ、ファイル名に
日本語・特殊文字を使用しないで保存してください。
FlowJo の作業ファイルである WSP ファイルを開いて再解析するためには、データとなる FCS
または LMD ファイルが同一フォルダ内に保管されている必要があります。
USB メモリや外付け HDD 等は FlowJo のライセンスおよび動作に干渉することがあります。こ
のため、FlowJoが呼び出す全てのファイルは PC本体に置き、全ての USB機器（ドング
ルライセンスの場合ドングル以外）は外してご使用ください。
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11. コンペンセーション
11.1 コンペンセーションの意義
フローサイトメーターでマルチカラーデータを計測する際、蛍光色素の励起および蛍光波長が重なり合う
場合は､ 漏れ込み量を補正する必要があります。
11.2 コンペンセーションサンプルの表示
フローサイトメーターでコンペンセーションを行い、FCS3.0 もしくは FCS3.1 で出力した場合、ワークスペー
スのサンプルセクションに表示されるサンプルデータの左側に格子のマークが表示されます。
コンペンセーションなし
FCM 機器上でコンペンセーション済
FlowJo 上でコンペンセーション済
また、グラフウィンドウで各軸の蛍光パラメータに Comp-が付きます。
11.3 FlowJoでのソフトウエアコンペンセーション
単染色のデータ(コンペンセーションコントロール)を用いて、FlowJo 上で蛍光の補正値を算出させることが
できます。
サンプル例：
コンペンセーションコントロール
サンプルファイル
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※FlowJo のソフトウェアコントロールでは、陰性ピークと陽性ピークの２つの蛍光ピークを持つコンペンセー
ションコントロールファイルが必要です。
1. コンペンセーションコントロールファイルをワークスペースにドラッグ&ドロップし、コンペンセーションコントロ
ールファイルを「Compensation」グループに追加します。
compensation グループを選択すると、 マークの Compensation ボタンがアクティブに
なります。
2. Compensation グループをクリックし、アクティブになった Compensation ボタンをクリック
し、Compensation editor 画面を表示させます。
3. パラメータとコンペンセーションコントールの確認
Compensation editor の Parameter と Sample で選択されているコンペンセーションコントロ
ールファイルが合っているか確認してください。
合っていない場合は、コンペンセーションコントロールファイル名のボックスをクリックして合うコンペンセー
ションコントロールファイルを選択してください。
Compensation グループに
コンペンセーションコント
ロールファイルを追加
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■必要ないパラメータがあった場合
必要ないパラメータ名の右のボックスをクリックし、「Remove this parameter」を選択してパラメータを
消します。
■パラメータが足りなかった場合
「Parameter」をクリックし、Choose parameter メニューを選択し、選択画面より、必要なパラメータ
を選択します。
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4. ゲート位置の修正
FSC vs SSC ゲートとパラメータの陽性ゲートと陰性ゲートを FlowJo が自動的にゲーティングしま
す。
FSC vs SSC ゲート、パラメータのヒストグラムの陽性・陰性ゲートの各ゲート位置が正しいかどうか
を、必ず確認してください。
ゲート位置を修正したいときは、各プロットをダブルクリックし、グラフウィンドウを表示させて移動しま
す。
陰性ゲートと陽性ゲートが作成されると、パラメータ名横のシグナルが赤色（不可）から黄色（可）また
は緑色（良）になります。シグナルが赤の場合、次に進めません。
＊ポジティブ陽性集団は２％以上必要です。
＜不可＞ ＜可・良＞
5. サンプルファイルへの適用
ゲート位置の修正が終わったら、これをサンプルファイルへ適用します。
Compensation editor の左上の「Apply To Group」をクリックし、適用させたいグループを選択
します。
プロットをダブルクリックする
と、グラフウィンドウが開く
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補正後のサンプル名の左には、格子状のマーク がつきます。
サンプル名をダブルクリックすると、コンペンセーションが適用されたグラフが表示されます。
11.4 コンペンセーションマトリックスの修正
フローサイトメトリー機器で設定したコンペンセーションマトリックスや現在データに適用しているコンペンセ
ーションマトリックスの補正値を FlowJo で修正することができます。
１． ワークスペースのサンプルセクションでファイル名の左横の格子マークをダブルクリックします。
２． マトリックスのウィンドウが表示されます。
３． Edit ボタンを押します。元のマトリックスのコピーが作成され、Workspace Matrices のリストに
別色で追加されます。
蛍光補正後のパラメータ名前に
は Comp がつきます。
例）Comp-FL1
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４． コピーマトリックスの補正値を変更します。
５． データに適用したいコンペンセーションマトリックスを Workspace Matrices で選択し、 のマー
クを適用したいグループまたはファイルへドラッグ＆ドロップします。
11.5 新規のコンペンセーションマトリックスの作成と適用
コンペンセーションなしのデータに新規のコンペンセーションマトリックスを作成し適用することができます。
１． ワークスペースのサンプル名横の□マークをダブルクリックします。
２． 空のマトリックスのウィンドウが開きます。
３． 左下の＋マークをクリックし、New Identity Matrix を選択します。
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４． Choose Selected parameter で、コンペンセーションする蛍光パラメータをすべて選択しま
す。
５． 補正値がすべてゼロのマトリックスが表示されます。
６． 補正値を入力します。
７． データに適用したいコンペンセーションマトリックスを Workspace Matrices で選択し、 のマー
クを適用したいグループまたはファイルへドラッグ＆ドロップします。
11.6 コンペンセーションマトリックスファイルのエクスポート・インポート
コンペンセーションマトリックスをファイルとしてエクスポートすることができます。
１． エクスポートしたいマトリックスを Workspace Matrices で選択します。
２． Save Matrix をクリックし、FlowJo Matrix File を選択します。
３． ファイルの保存先とファイル名を指定し、保存を押します。
エクスポートされたマトリックスファイルをインポートし、データに適用することができます。
４． マトリックスウィンドウの左下の＋ボタンを押し、From File を選択します。
５． マトリックスファイルを選択します。
６． Workspace Matrices にインポートしたマトリックスが追加されます。
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７． データに適用したいコンペンセーションマトリックスを Workspace Matrices で選択し、 のマークを
適用したいグループまたはファイルへドラッグ＆ドロップします。
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12. Biexponential Transform
12.1 Biexponential Transform とは
Biexponential 表示とは、グラフの０付近をリニアで、それ以上を Log で表すパラメータの表示法で
す。V９以前のバージョンの FlowJo では、コンペンセーション後に蛍光数値が負の値になってしまった集
団を見やすくする目的でこの Biexponential 表示を用いていたため、FCS3.0 で且つコンペンセーション
されたデータでのみ使用可能でした。
しかし、コンペンセーションの有無に関わらず、Biexponential 表示の方がデータの分布（特にネガテ
ィブ集団）が見やすいという理由から、v10 では FCS3.0 以降の全てのファイルで Biexponential 表
示ができます。
12.2 Biexponential Transformの方法
１． グラフウィンドウの X, Y 軸パラメータの隣にある ボタンをクリックし、Customize Axis…を選
択します。
２． Transform of ファイル名ウィンドウが表示されます。
３． Scale から Biex を選択します。
４． Max に最小値と最大値を入力するかパラメータ横の＋、－ボタンで範囲を調整します
（decades に反映されます）。
Log 表示 Biexponential 表示
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５． スライダーを使って Extra Nag. Decades（負の値の表示幅の設定）、Width Basis（0
付近の Linear 表示範囲の基底値）を調整します。
６． Apply を押します。
軸の最大値調整ボタン
軸の最小値調整ボタン
Log/Linear/Biexpon
ential の表示設定
適用するパラメータの選択
Width Basis:
０近傍の軸のリニア表示の
範囲指定の基底値
Extra Neg. Decades:
０近傍の表示幅を調
節
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13. 新規パラメータの追加（Derived parameter）
FlowJo にインポートされている fcs ファイルのパラメータを元に、パラメータ比やゲイン/オフセット調整など
の計算結果パラメータを新規に作成し、元のパラメータと同じようにグラフ表示やゲーティング・統計解析に
用いることが可能です。
13.1 一般的な新規パラメータの作成
１． ワークスペースのサンプルセクションで、対象となるデータファイルを選択します。
２． Tools タブ＞Derive Parameters を選択します。
３． Transform of …ウィンドウが開きます。
４． Name:に新規パラメータの名前を入力します。
５． Insert Reference：で元となるパラメータを選択します。
６． ＋－×÷ボタンや Insert Function を用いて、計算式を作成します。※パラメータと式の間にはス
ペースを入れてください。
７． Scale ボックスを開き、Scale で Liner や Log、Biex 等を選択します。
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８． Liner と Log の場合は、右の Min と Max へ各々最小値と最大値を設定します。
９． Biex 等の場合は、下の Transforms ボックスを開き、Extra Neg. Decades と Width Basis
を調整します。
１０． OK を押します。ウィンドウが消えます。
１１． グラフウィンドウの軸パラメータで、リストの一番下にある新規パラメータ（３．で入力した名
前）を選択します。
13.2 比（FL1/FL3）パラメータの作成
１． ワークスペースのサンプルセクションで、対象となるデータファイルを選択します。
Width Basis:
リニア表示の範囲の基底値
Extra Neg. Decades:
０近傍の表示幅を調節
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２． Tools タブ＞Derive Parameters を選択します。
３． Transform of …ウィンドウが開きます。
４． Name:に新規パラメータの名前を入力します。
５． Insert Reference：で FL1 を選択します。
６． ÷ボタンを押します。
７． Insert Reference：で FL３を選択します。上のボックスに FL1/FL3 の式が入力されます。
８． Scale ボックスを開いて Scale で Linear を選択し、右の Min と Max へ各々最小値と最大値を
設定します。
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９． OK を押します。ウィンドウが消えます。
１０． グラフウィンドウの軸パラメータで、リストの一番下にある新規パラメータ（４．で入力した名
前）を選択します。
13.3 ゲイン（オフセット）調整パラメータの作成
１． ワークスペースのサンプルセクションで、対象となるデータファイルを選択します。
２． Tools タブ＞Derive Parameters を選択します。
３． Transform of …ウィンドウが開きます。
４． Name:に新規パラメータの名前を入力します。
５． Insert Reference：で元となるパラメータを選択します。
６． ×（乗算）ボタンを押し、スペースの後ゲイン値を入力します。（オフセットの場合は、－ボタンを押
し、スペースの後オフセット値を入力します。）
７． Scale ボックスを開き、Scale で Liner や Log、Biex 等を選択します。
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８． Liner と Log の場合は、右の Min と Max へ各々最小値と最大値を設定します。
９． Biex 等の場合は、下の Transforms ボックスを開き、Extra Neg. Decades と Width Basis
を調整します。
１０． OK を押します。ウィンドウが消えます。
１１． グラフウィンドウの軸パラメータで、リストの一番下にある新規パラメータ（４．で入力した名
前）を選択します。
13.4 作成したパラメータのバッチ処理適用
１． Derived parameter で新規パラメータを作成すると、ワークスペースに％名前の階層として表示
されます。
Width Basis:
０近傍の軸のリニア表示の範囲
指定
Extra Neg. Decades:
０近傍の表示幅を調節
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２． １．の階層をバッチ処理（対象のグループまたは All samples にドラッグ＆ドロップ）すると、グル
ープ内の全てのサンプルに作成したパラメータを適用することができます。
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14. プレートエディター
マイクロプレート対応機能を持つフローサイトメトリー機器から出力された fcs ファイルに、プレートマップイン
ターフェイスで情報（キーワードと値のセット）を付加することができます。
※fcs ファイルに WELL ID 情報が記載されている必要があります。
14.1 プレートエディターの起動
１． フローサイトメトリー機器から、各ウェルの fcs ファイルを出力します。
２． Fcs ファイルをプレートごとのグループにします。
３． 対象のグループを選択します。
４． ワークスペースの FlowJo タブ＞Plate Editor を選択します。
５． プレートエディターが起動します。
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14.2 プレートエディターでの情報付加
１． Read Samples from Group ボタンを押します。FlowJo が選択したグループ内の各 fcs
ファイルの WELL ID をもとに、プレートマップに配置していきます（ウェルに○がつきます）。
２． Read Attributes from Group ボタンを押します。各ウェルの fcs ファイルにいくつのキーワ
ードがあるかを数字で表示します。選択しているウェルのキーワードと値は右側下の keyword
/Values-selected well にリスト表示されます。不要なキーワードと値がある場合、左の☓を
クリックして除くことが可能です。
３． 新規のキーワードを追加するには、１）のボックスにキーワードとその値を入力し、２）の Add
ボタンを押します。
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４． 入力したキーワードと値が、その上の Keyword/Values –Drag to wells リストに追加さ
れます。
５． 付加したいキーワードと値の組を、対象のウェルや行・列にドラッグ＆ドロップします。全てのウェ
ルに付加する場合は左上 A と１の間へドラッグ＆ドロップします。付加が完了したウェルが緑
色で縁取られます。
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６． 複数のキーワードと値の組を付加したい場合は、Staging well にドラッグ＆ドロップしてまと
め、Staging well を対象のウェルや行・列にドラッグ＆ドロップします。全てのウェルに付加す
る場合は左上 A と１の間へドラッグ＆ドロップします。付加が完了したウェルが緑色で縁取ら
れます。
７． Apply Plate Keywords to Group ボタンを押します。プレートエディターで付加した情報
がワークスペースなど FlowJo 内の他の機能でも利用可能になります。
14.3 希釈系列の情報を自動付加する
プレートエディターでは希釈系列を等比数列とした場合の初項と公比を設定することで、希釈率や濃度
などの情報を自動でプレートマップ上に付加することができます。例えば添加物質の濃度が 1ug/ml,
0.5mg/ml, 0.25ug/ml…(2 倍希釈)と並んでいる場合や、希釈倍率が 1, 2, 4, 8 倍と並んでい
る場合などに便利です。
１． プレートエディターで、初項となるウェルや行・列を選択します。
２． Tools タブ＞Configure＞Dilution series を選択します。
３． Fold Dilution Keyword Generator ウィンドウが起動します。
４． Keyword にキーワードを入力します。
５． Starting value に初項となる値を入力します。
６． Number of Replicates にｎ数（その値を何回使用するか）を入力します。
７． Dilution Multiplier に公比を入力します。
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８． Sequence Incrementer に実行回数を入力します（動作していないので設定しない）。
９． 下へ系列を展開する場合は Fill Down を、右へ系列を展開する場合は Fill Right を押します。
１０． Plate Editor タブ＞Apply Plate Keywords to Group ボタンを押して、FlowJo 内の全
ての機能に反映します。
14.4 プレートヒートマップ・Chernoff Face表示
Well ID の情報を元にレイアウトエディター上で、統計計算の結果をプレートヒートマップ表示することがで
きます。
※ワークスペースで統計計算を済ませておきます。
１． レイアウトエディターの ボタンを押します。
２． プレートヒートマップを表示するスペースを四角く指定します。
３． ワークスペースでグループを指定します。
４． ∑のアイコンの統計計算階層をレイアウトエディターの２．のスペースにドロップ＆ドロップします。
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５． 青~黄色のヒートマップで表示がされます。
６． 別の統計計算の階層を５．のヒートマップの上にドラッグ＆ドロップし、ヒートマップをダブルクリックして
Properties を開き、Plate タブのリストで Heatmap（右下）と Heatmap Upper Half（左
上）に設定することが可能です。
７． 最大 10 の統計計算階層をヒートマップにドラッグ＆ドロップし、ヒートマップをダブルクリックして
Properties を開き、Plate タブで Chernoff Face を選択すると、各統計計算を顔パーツに割り
当てて表示することもできます。
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14.5 Csv ファイルからのメタデータのインポート
エクセルで作成した Well ID とメタデータキーワードの情報を csv ファイルで保存し、これをプレートエディ
ターで FlowJo へインポートすることができます。
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１． エクセル上で１行目に Well ID と追加したいキーワードを入力し、列に割り当てるウェル ID と
値を設定します。
２． Csv 形式で保存します。
３． FlowJo を起動し、fcs ファイルをインポートします。
４． プレートエディターを起動します。
５． Read Samples from Group ボタンをクリックします。
６． Read Attributes from Group ボタンをクリックします。
７． プレートエディターの File タブ＞Import ボタンを押し、２．の csv ファイルを選択します。
８． プレートエディターの Plate Editor タブ＞Apply Plate keywords to Group ボタンを押しま
す。
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９． ＋ボタンを押すとプレートを追加することができ、複数のインポートした情報を追加することができ
ます。
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15. 集団比較
ファイル間における統計的な差異を評価するツールです。２集団（例えばコントロールサンプルとテストサ
ンプル）の統計的な有意差や刺激応答試験の％ポジティブといった統計的処理ができます。
15.1 集団を比較する
１． ワークスペースでサンプルとなるファイルまたは集団を選択します。
２． FlowJo タブ＞Biology＞Compare Population を選択します。
３． Comparison to …ウィンドウが起動します。Remove:右の各ボタンでリストから項目を削除する
ことができます（Unselect は５.の後に使用します）。
４． 比較するパラメータにチェックを入れます。
５． 下部に５．のパラメータのヒストグラムが表示されます。
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６． 比較対象となるファイルまたは集団を、Comparator にドラッグ＆ドロップします（複数可能で
す）。
７． リストに結果が表示されます。リストの不要なパラメータは右クリック＞Remove で削除することがで
きます。
８． 下部に比較ヒストグラムが表示されます。
Plot Deference にチェックを入れるとテストサンプルとコントロールとの差を緑色のラインで表示
します。
Show CDF にチェックを入れると CDF グラフを表示します。
Smoothing のチェックを外すと、スムージングを外すことができます。
Tint sample にチェックを入れるとテストサンプルのヒストグラムに色をつけることができます。
Tint control にチェックを入れるとコントロールのヒストグラムに色をつけることができます。
複数コントロール（Comparison）の場合、Marge control histograms にチェックをいれ
ると、マージしてひとつのコントロールとして表示します。
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15.2 統計計算の項目について
統計計算結果には以下の項目があります。
K-S および Chi Squared（T(X)）は２集団間の”数学的“な差異を示すものであり、”生物学的”な
差異であるかは個別に考慮・判断ください。
Overton % Positive：
Roy Overton による一般的かつ実用的なアルゴリズム（１）。チャネル毎に減算を実行し、コントー
ルに対して陽性な細胞の割合を導きます。各データを Mode＝100％に設定して規格化します。
SE Dymax % Positive:
Bruce Bagwell による Overton の規格化とポピュレーション算出を向上させたアルゴリズム。各デ
ータをヒストグラムの面積で規格化し、アーティファクトや外れ値の影響を抑えることができるため、生
物実験データにおいては Overton よりも優れていると言われています。完全にクリーンなデータの場
合は Overton と同じ結果となります。
Chi Squared (T(x))(3-5)：
FlowJo では Cox Chi Square の方法(6)をもとにビニングをフローサイトメトリー用に改変してカイ
二乗検定を行っています。このアルゴリズムでは２集団間の微小差異を定量的に同定します。Chi
Square が小さい程、２集団間の差異が少なく（同一に近い）、大きい程差異が大きくなります。
Chi Square のスコアは、テストサンプルとコントロールが同一でない確率を推定する T(X)に変換さ
れます。
K-S max deference：
K-S 検定を用いたテストサンプルとコントロールとの累積分布関数（cumulative distribution
function(CDF)）の極大差
K-S max at intensity：
K-S max deference の時の intensity
KS Probability：
K-S 検定に基づいて、２集団が異なる分布を有している確率
※Kolmogorov-Smirnov (K-S)：有限個の標本に基づいて、２つの集団の確率分布が異なるもの
であるかどうか、あるいは母集団の確率分布が帰無仮説で提示された分布と異なっているかどうかを調べ
る方法。この方法は n＝100 程度の小集団を想定した比較で、フローサイトメトリーデータを扱う際信頼
できない場合もあるが FlowJo に残されています。
References:
1) Overton WR. Modified histogram subtraction technique for analysis of flow cytometry data. Cytometry.
1988 Nov;9(6):619-26.
3) Roederer M, Treister A, Moore W, Herzenberg LA. Probability binning comparison: A metric for
quantitating univariate distribution differences. Cytometry. 2001 Sep 1;45(1):37-46.
4) Roederer M, Moore W, Treister A, Hardy RR, Herzenberg LA. Probability binning comparison: a metric for
quantitating multivariate distribution differences. Cytometry. 2001 Sep 1;45(1):47-55.
33
5) Roederer M, Hardy RR. Frequency difference gating: A multivariate method for identifying subsets that
differ between samples. Cytometry. 2001 Sep 1;45(1):56-64.
6) Cox C, Reeder JE, Robinson RD, Suppes SB, Wheeless LL. Comparison of frequency distributions in flow
cytometry. Cytometry. 1988 Jul;9(4):291-8.
15.3 複数パラメータのカイ二乗検定
結果リストのパラメータをクリックして黄色に選択すると、複数のパラメータでのカイ二乗検定を行い、リス
ト下部に表示します。
T(X)：T(X)は確率変数 X に対する統計量で、この場合は２集団が異なる確率と複数の分布が
ランク付けされるかを示します。T(X)値が高いとテストサンプルとコントロールは異なることを示します。
15.4 バッチ処理
集団比較は設定したコントロール（Comparator）との比較として、バッチ処理が可能です。
１． 結果がワークスペースのサンプルセクションに階層として表示されます。
２． これをドラッグ＆ドロップで他のサンプルへ適用することができます。
３． ゲーティング階層と同様、バッチ処理することもできます。
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15.5 結果の出力
テーブルエディターを介して csv 形式等で出力することができます。また、Comparison ウィンドウのリスト
を画像として出力することもできます。
１． （バッチ処理後）テーブルエディターを起動します。
２． ワークスペースの Comparison 階層をテーブルエディターへドラッグ＆ドロップします。
３． Create table ボタンを押します。
４． 結果の Table ウィンドウの File＞Save as＞ファイル形式を選択し、保存先とファイル名を指定し
ます。
５． 保存ボタンを押します。
６． Comparison ウィンドウのリストを画像として出力するには、File＞Save as で保存先とファイル名
を指定します。
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16. 細胞周期解析
DNA 染色試薬（Propidium iodide や Hoechst、７-AAD など）を用いた一般的な細胞周期
（G1 期、S 期、G2・M 期の分布）を統計的に効率よく解析することができます。FlowJo では細胞周
期の３つの期についてモデルフィッティングを行って解析します。
※本機能は開発途中段階のため、旧バージョン（Windows：v7.6.5・Mac：v9）の使用を推
奨します。旧バージョンに対応していない新型フローサイトメトリー機器から出力された fcs ファイルや
fcs3.1の場合ご使用ください。
16.1 細胞周期解析の方法
DNA 染色した蛍光パラメータのヒストグラムを用い、G1 期と G2 期をガウシアンフィッティングした後、S
期をフィッティングします。
１． 下準備として、一般的にデータから細胞以外の夾雑物・対象外の細胞・ダブレットをゲーティングで
除去したサブポピュレーションを作成します。
２． １．のサブポピュレーションを選択し、ワークスペースの FlowJo タブ（または Tools タブ）＞
Biology＞Cell cycle を選択します。
３． Cell cycle ウィンドウが起動します。
４． X 軸を細胞周期染色の蛍光パラメータにします。
５． Model を開き、データプロットとモデルプロットとがより近似する（一般的には RMSD（Root
Mean Square）が小さい値となる）方のモデルを選択します。
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６． CC Gates in Workspace にチェックを入れると各ゲートがワークスペースに反映されます。
※Cell cycle ウィンドウで表示される各期の％は、Cell cycle 解析画面の青、黄色、緑色のエリアの
細胞数の％を示しています。このため、色が重なっているエリアがある場合、％総和が 100 以上となるこ
とがあります。
一方、CC Gates in Workspace にチェックを入れ、ワークスペースに表示された値は、Cell cycle 機
能で定められた各期の X 軸の範囲内にある細胞数の％を表示しています。このため、フィッティングの範
囲外に細胞があると 100％にならないことがあります。
16.2 フィッティングモデルについて
FlowJo v10 では細胞周期解析のモデルに、Watson モデルと Dean-Jet-Fox (DJF)モデルが搭載
されています。
Watson モデル(1)：
1987 年に James Watson 等によって発表されたモデル。G0/G1 期と G2/M 期のピークが正規
分布していて、そのうちの１つが識別可能であることのみを前提としています。まずヒストグラムの左側
から G0/G1 ピークを推定しガウシアンとしてフィッティングします。次に G0/G1 の平均の 1.75 倍の
蛍光強度を G2/M の平均と位置づけます（理論的には２倍になるはずだが、実際には理論値よ
りも小さくなるため）。G2/M のガウシアンの幅は G0/G1 と同じ処理にて算出されます。
DJF モデル(2)：
Dean-Jett によって発表された細胞周期データのモデリングアルゴリズム(3)を改良したもの。G0/G1
と G2/M は Watson モデルと同じフィッティングがされます。S 期を二次多項式とガウシアンによるフィ
37
ッティングし、S 期の開始時と完了期を含めた複合的な分布をより正確にフィッティングすることができ
ます。
Citations:
(1) Watson, Chambers, & Smith. A pragmatic approach to the analysis of DNA histograms with a definable
G1 peak. Cytometry 8:1-8 (1987).
(2)Fox, MH. A Model for the Computer Analysis of Synchronous DNA Distribution. Cytometry 1(1):71-77
(1980).
(3)Dean PN, Jett JH. Mathematical analysis of DNA distributions from flow microfluorometry. J Cell Biol
60:523-527 (1974).
16.3 手動での調整（Constraints）
データへモデルを適用しただけではフィッティングが成立しない場合、G0/G1・G2/M の各ピークの平均の
比、範囲、変動係数（CV）やそれらの組み合わせにより手動で調整をすることができます。
１． Cell cycle ウィンドウの Constraints を開きます。
２． 各ピークの平均の比を設定して調整する場合、片方のピークの平均をもう一方の比で与えるには
Peak:で＝G１(G2)×ｎを選択し、表れたｎ：のボックスに比の値を入力します。
３． 各ピークの範囲を設定して調整する場合、Peak:で Range を選択し、表れたボックスに最小値と
最大値を入力します。また、レンジゲートツールでヒストグラムのピークの範囲をゲーティングし、どちら
かのピークの範囲として設定することもできます。
４． 各ピークの CV を設定して調整する場合、CV：で=n を選択すると値を入力することができます。ま
た、CV：で=G1(G2)n を選択すると、もう片方の n 倍として設定することができます。
16.4 バッチ処理
38
ゲーティングサブポピュレーションや統計計算などと同様に、細胞周期解析もワークスペースのサンプルセク
ションに Cell Cycle 階層として表示され、バッチ処理が可能です。
１． あるサンプルでの細胞周期解析の階層を、他のサンプルへドラッグ＆ドロップすると同じ設定での解
析をさせることができます。
２． グループや All samples へドラッグ＆ドロップすると、バッチ処理します。
※この時、元の細胞周期解析で Constraints 設定がされていない場合、用いるモデルは同じで各ピー
クの検出から各々のデータに合わせてやり直します。一方 Constraints 設定がされている場合には、そ
の設定（各ピークの範囲など）に従って解析します。このため、はっきりと２つのピークが識別できるコント
ロールとピークの識別が難しいサンプルのデータセットを解析する場合には、Constraints 設定をしなくて
も解析できるがサンプルへバッチ処理をするためにコントロールデータで Constraints を設定した細胞周
期解析を行い、これをサンプルへバッチ処理することで効率的な解析ができます。
16.5 テーブルエディターやレイアウトエディターへの出力
ワークスペースでバッチ処理された解析結果は、表や図としても出力可能です。
39
１． テーブルエディターへワークスペースの Cell Cycle 階層をドラッグ＆ドロップし、Create Batch
Report ボタンを押します。Table が表示されます。
２． レイアウトエディターへワークスペースの Cell Cycle 階層をドラッグ＆ドロップします。グラフが表示され
ます。必要な場合バッチ処理します。
40
17. カイネティクス解析
タイムパラメーターに対するサンプルの時間変化をモデル化して解析することができます。ピーク検出に
よるオートレンジ設定または手動により、モデルを任意のレンジに分けて解析することが可能です。タイ
ムパラメーターがデータに含まれていない場合、FlowJo では設定流速から暫定的なタイムパラメータ
ーを算出しこれを用います。
※本機能は開発途中のため、グラフをオーバーレイする機能が搭載されていません。オーバーレイ
をされたい場合は、旧バージョンのご使用をお奨めいたします。
17.1 カイネティクス解析の方法
１． 解析対象のファイルまたはサブポピュレーションを選択し、ワークスペースの FlowJo タブ＞
Biology＞Kinetics を選択します。
２． カイネティクスウィンドウが開きます。
３． データファイルに ratio パラメータがある場合は自動で Y 軸に設定します。Ratio パラメータがな
い場合は適当なパラメータを Y 軸に設定します。Y 軸パラメータは任意のものに変更できます。
また、ratio パラメータがデータファイルにないが、ある蛍光と別の蛍光との比を Y 軸に設定したい
41
場合は新規パラメータ（derived parameter 13.2 参照）を作成して設定することで可能
です。
４． ゲーティングツールを用いてタイムレンジゲートを作成します。
Auto create ranges ボタン：開始位置をもとに自動算出します。
Create multiple ranges ボタン：任意の数のゲートに分割します。
Prefix for range names：ゲート名を入力します。
Number of ranges to create：分割数を入力します。
Duration of each range：現在機能していません。
５． 作成したタイムレンジゲートは、黒いゲート幅をクリックしてレンジを変更させたり、Create a
single range ボタンでレンジゲートを追加したりして調整できます。
17.2 表示グラフ設定
グラフ下の Options セクションで、Y 軸に設定する値の算出方法やスムージングを設定することができま
す。
42
１． Options 横の矢印をクリックして開きます。
２． Statistic で Y 軸に設定したパラメータの値の算出方法を選択します。
Median：各時間間隔で通過した細胞の値の中央値を算出します。
Mean：各時間間隔で通過した細胞の値の平均値を算出します。
Geometric mean：各時間間隔で通過した細胞の値の積を細胞数で根号（ルート）算
出します。
Percentile：各時間間隔で通過した細胞の任意の％の時の値を算出します。50 を入力す
ると Median と等しくなります。
% of cells over Threshold T：設定した Threshold 値以上の値を持つ細胞の任意
の％の時の値を算出します。設定する Threshold は channel value ではなく scale
value です。
※（for cells > T）がないものはすべての細胞を母集団とします。
※（for cells > T）があるものは、選択したパラメータにおいて Threshold T 以上の細胞だけを
母集団とします。
Use absolute value：値を入力します。
Use percentile of events within：どのゲートの何％の値を閾値として設定するか
を選択します。
３． Smoothing：でグラフの平滑化処理を選択します。
Moving Average：移動平均。bin が移動しながら平均値を算出していきます。
Gaussian：移動平均と動きは同じだが、bin の中央に重みがつき、中央から離れるに重み
が小さくなっていきます。
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17.3 解析一覧
カイネティクス解析の情報がタイムレンジゲートごとに一覧表にまとめて表示することができます。
１． グラフ下の Statistics 横の矢印をクリックして開きます。
２． 解析情報がタイムレンジゲートごとに表示されます。
Start t：タイムレンジゲートの開始時間（秒）
End t：タイムレンジゲートの終了時間（秒）
各ゲートのダブルクリックで Start t と End t を調整することができます。この時、入力した時間
に一番近い細胞通過時間が設定されます。
Peak t：Y 軸の値が最大値になったときの時間
Peak：Y 軸の最大値
Mean Y：Y 軸の平均値
Slope：線形近似の傾き
AUC：Area under the curve. 積分によって求めたグラフ面積
dt：End t – Start t
17.4 解析の出力方法
カイネティクス解析の情報を FlowJo レイアウトエディターやテーブルエディター、bin データとしてエクスポー
トすることができます。
１． カイネティクス解析を行うとワークスペースに Kinetics 階層が作成されます。
２． レイアウトエディターまたはテーブルエディターでバッチ処理をする場合は、準備としてワークスペースで
バッチ処理をしておく必要があります。ワークスペースでのバッチ処理はゲート階層と同様に取り扱うこ
とが可能です。
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３． レイアウトエディターへ出力する場合、ワークスペースの kinetics 階層をレイアウトエディターへドラッグ
＆ドロップします。
４． テーブルエディターへ出力する場合、ワークスペースの kinetics 階層をテーブルエディターへドラッグ＆
ドロップします。
５． Bin データとして出力する場合、カイネティクスウィンドウの File＞Copy Time Series を選択しま
す。１列目時間、２列目 Y 値として bin 情報がクリップボードにコピーされます。Excel 等他のソフ
トウェアにペーストできます。
６． カイネティクスウィンドウに表示されているグラフを画像として出力する場合、カイネティクスウィンドウの
File＞Export graphic as..を選択し、保存先とファイル名を指定します。
17.5 カイネティクスプラットフォームに関する論文
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Intracellular ionized calcium, magnesium, membrane potential and pH.
Rabinovitch and June, Flow Cytometry, by M. G. Ormerod
Measurement of Calcium Mobilization Responses in Killer Cell/Target
Conjugates by FACS Analysis. Vallitutti and Dessing, Natural Killer Cell
Protocols, by Kerry S. Campbell, Marco Colonna
Intracellular Calcium, Chapter 10 of Guide to Flow Cytometry Methods, by W.
McLean Grogan, James M. Collins
Analysis of BCR Mediated Ca2+ Mobilization by Flow Cytometry. Brummer et.
al, B Cell Protocols by Hua Gu, K. Rajewsky
Influx of Ca2+ Ions Using Indo-1. Methods in Cellular Immunology, 2nd
Edition, by Rafael Fernandez-Botran, Václav Vtvika
46
18. 細胞増殖解析（Proliferation）
細胞へ CFSE 等のプローブ蛍光色素を導入し、細胞分裂パターンを解析します。０世代の細胞が細
胞分裂をしていくと、世代ごとに蛍光強度が約 0.5 となることを利用し、モデルフィッティングを行います。
※本機能は FlowJo v10.3以降に搭載されていますが開発途中のため、動作が不安定です。
旧バージョンのご使用をお奨めいたします。
18.1 細胞増殖解析の方法
１． 解析対象のファイルまたはサブポピュレーションを選択し、ワークスペースの FlowJo タブ＞
Biology＞Proliferation を選択します。
２． 横軸のパラメータを選択します。
３． レンジゲートツールを選択し、分裂前（G0）を Fix Peak 0 としてゲーティングします。
４． Proliferation を開きます。
５． Number of Peaks に分裂回数を入力します。
６． 以下のパラメータを設定することができます。
Fix Ratio：分裂したときの蛍光強度の比
Fix CV：各ピークの幅
７． Create Gate ボタンを押し、ゲーティングをワークスペースに反映させます。
18.2 解析一覧細胞増殖解析に関する論文
ヒストグラムの右側 Statistic に解析一覧が表示されます。
Proliferation Index：分裂総数を分裂した細胞数で割った値です。少なくとも一回は分裂
した細胞が対象のため、分裂応答が反映されています。刺激等に対する応答をサンプル間で
比較するような場合に有用な指標です。
Division Index：平均細胞分裂回数です。分裂をしなかった細胞も含まれます。
Peak CV：ピークの変動係数です。全てのピークに同じ CV 値が用いられます。
Peak Ratio：分裂したときの蛍光強度の比
18.3 細胞増殖解析に関する論文
Interpretation of Cellular Proliferation Data: Avoid the Panglossian. Mario
Roederer, Cytometry Part A 79A: 95 101, 2011
Assessing Antigen-Specific Proliferation and Cytokine Responses Using Flow
Cytometry. Allsopp and Langhorne, Edited by Denise Doolan, Malaria Methods
and Protocol, p. 409
Antigen/Mitogen-Stimulated Lymphocyte Proliferation. Whiteside, Measuring
Immunity, Chpt. 31 p. 364
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Use of Cell-Tracking Dyes to Determine Proliferation Precursor Frequencies of
Antigen-Specific T Cells. Givan, Fisher, Waugh, Bercovici, Wallace. Flow
Cytometry Protocols 2nd Ed. p.109
Proliferation Assays Based on BrdU Incorporation or CFSE Labeling. Maecker,
Immunotherapy of Cancer, Disis, p.62
Monitoring T cell Proliferation. Hodgkin, Hawkins, Hasbold, Gett, Deenick,
Todd, Hommel. Analyzing T Cell Responses By Dirk Nagorsen, Francesco M.
Marincola, p. 122
48
19. 対応するファイル形式
FlowJo は fcs ファイル、lmd ファイル以外にも対応しているファイル形式があります。
19.1 CSV (Comma Separated Values)ファイル
※本機能は開発の初期段階です。
１． CSV ファイルフォーマットの確認
サンプルファイルのイベントが各列に、パラメータが各行に対応します。
値がすべて正の整数
２． CSV ファイルのインポート
CSV ファイルを FlowJo v10 にドラッグ＆ドロップすると fcs に変換され、インポートされます。
ファイルをインポートすると、FlowJo によって各行に新しいパラメータが作成されます。
可視化のため、全ての値は 4096 の範囲内で規格化されます。
※読み取れない CSV ファイルの場合、インポートできないか赤いバツが付きます。
19.2 CLR (CLassification Results)ファイル
※本機能は開発の初期段階です。
CLR ファイルも CSV ファイルと同様インポートできます。
各列はイベント、各行は Class（パラメーター）、各値はその Class における確率値（０から１の間）
で記載されています。
１． CLR ファイルのインポート
CLR ファイルを FlowJo v10 にドラッグ＆ドロップすると fcs に変換され、インポートされます。
ファイルをインポートすると、FlowJo によって各行に新しいパラメータが作成されます。
可視化のため、全ての値は 4096 の範囲内で規格化されます。
※読み取れない CSV ファイルの場合、インポートできないか赤いバツが付きます。
２． CLR ファイル論文
ISAC’s Classification Results File Format (CLR). Spidlen, Bray, ISAC Data
Standards Task Force, and Brinkman. Cytometry A. 2015, 87, p.86–88.
19.3 XML(Extensible Markup Language)ファイル
FlowJo v10 では主にコンペンセーションマトリックスのマトリックスファイル（.MTX）がこのファイルに属し
ます（1.6 コンペンセーションマトリックスファイルのエクスポート・インポート参照）。
19.4 Zip ファイル
FlowJo v10 では自動で解凍してインポートします。
49
19.5 画像ファイル
※本機能は FlowJo v10.0.7 とｖ10.4 以降でのみの対応で、開発途中です。
画像ファイルを FlowJo で開き、ゲーティングや統計計算ができます。
画像ファイルは fcs と同様、構成要素を抽出して解析することができます。FCS ファイルのイベント（細
胞）を扱うのと同じように、画像ファイルのピクセルをその色や明るさをパラメータとしてゲーティングや MFI
などの統計計算し、テーブルエディターやレイアウトエディターで結果を表示することができます。
１． 対応する画像ファイルの形式は、JPEG、PNG、BMP と GIF です。TIFF および PDF ファイルは、
Image J や Adobe Photoshop などで対応形式に変換します。
２． 新規のワークスペースを開き、画像ファイルをワークスペースのサンプルセクションへドラッグ＆ドロップし
ます。FlowJo が自動的に fcs ファイルに変換し、インポートします。また、作成された fcs ファイルは
画像ファイルと同じフォルダ内に保存されます。
※PC 環境によっては数分程度時間がかかります。
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※必ずドラッグ＆ドロップでインポートしてください。
３． サンプルセクションのファイル名をダブルクリックしてグラフを表示します。画像ファイルの各ピクセルの情
報は以下の８つのパラメータで表示されます。
４． 画像の X ピクセル（幅）と Y ピクセル（高さ）が表示されます。必要な場合 T ボタンで調整しま
す。
パラメータの３－５は各ピクセルにおける RGB カラーの強度を、６－８は hexcone color
cylinder (HSV)の次元に対応しています（下図は 1800 ✕ 2000 ピクセルの場合）。
51
５． X 軸を Parameter_7:: Saturation に変更します。
６． Y 軸を Histogram に変更します。
７． 必要であれば T ボタンでスケールを調整します。
８． 真っ白と真っ黒のピクセルを除外するレンジゲートを作成し「Unsaturated」とします。
９． ゲートをダブルクリックします。
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１０． X 軸と Y 軸を各々Paramater_1 と Parameter_2 に変更します。
１１． おおまかに元となった画像と似たイメージが表示されます。（FlowJo は軸を反時計回りに
90°回転するため、元の画像は左に 90°回してください。）
１２． Unsaturated ゲートを右に移動し幅を狭めてサチュレーションしているイベントのみをゲーティン
グします。プロットの中で、色の豊富な部分がどこかを確認します（本例の場合、細胞質と核）。
１３． ゲートを左に移動し幅を調整してゼロ近傍をゲーティングします。元の画像のバックグラウンドに
あたる部分が表示されます。
１４． Unsaturated ゲートを削除します。
１５． X 軸を Parameter_3（Red）、Y 軸を Histogram に変更します。
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１６． ゼロ近傍以外をゲーティングし、「Red」とします。
１７． Red ゲートをダブルクリックします。
１８． X 軸と Y 軸を各々Paramater_1 と Parameter_2 に変更します。
１９． 元の画像の Red のみを表示した画像と大まかに同じプロットが表示されます。
２０． グラフウィンドウの複製ボタンを押し、右上の上階層へボタンを押します。
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Green、Blue について 15. – 19.と同様の作業を行います。
２１． レイアウトエディターを起動します。
55
２２． ワークスペースの Red ゲートをレイアウトエディターにドラッグ＆ドロップします。ヒストグラムが表
示されます。
２３． Green と Blue のゲートをオーバーレイします。
２４． グラフの上でダブルクリックして Graph definition を起動し、ドットプロットに変更します。
２５． X 軸を Parameter_3（Red）、Y 軸を Histogram に変更します。
２６． OK を押すと３色で表示します。必要な場合、テーマ色を変更します。
56
２７． 作成された各色のゲートについて、統計計算等を行うことも可能です。
57
20. デフォルト設定（Preferences設定）
FlowJo をより使いやすくするために、設定の変更をデフォルトにすることができます。
ワークスペースにある Preferences アイコン をクリックすると Preferences ウィンドウが開きます。
20.1 Workspace
解析の中心的な機能部分における表示や選択を変更することができます。
１． Workspace：表示するサンプル名やワークスペース全般の変更ができます。
２． Fonts：ワークスペース、グラフ、レイアウトのテキストやフォントの変更ができます。
３． Gate：ゲート表示やゲート名表示の有無、子階層のグラフタイプの設定ができます。
４． Locale：国の設定と伴う数値や時刻の設定をプレビューできます。
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５． License：（シリアルナンバーライセンスまたはトライアルの方は）登録されているナンバーと
Hardware address、プロキシサーバー等を確認できます。
20.2 Output
グラフ表示のデフォルト設定、テーブルエディターやレイアウトエディターの出力形式などの変更ができます。
１． Graphs：グラフウィンドウ起動時に表示するグラフタイプやオプション等の設定ができます。
２． Tables：テーブルエディター実行時の設定や印刷時のヘッダー・フッターの設定ができます。
３． Layout：バッチ処理の設定やドラッグ＆ドロップ時のグラフタイプの設定ができます。
４． Annotation：レイアウトエディターでの Annotation の設定やオーバーレイの色設定ができます。
５． File Formats：出力フォーマットの設定ができます。
20.3 Platforms
コンペンセーションやその他の特定の解析機能の設定を変更できます。
１． Compensation：コンペンセーションコントロールについての設定ができます。
２． Cytometry Platforms：Cell cycle や kinetics などの機能の条件を設定できます。
３． Plates：プレート情報やプレートエディターの設定ができます。
20.4 Tools
ソフトウェア的な最適化をするためのオプションを変更できます。
１． Ranges：テーブルエディターの Expected Range の最小値と最大値の設定変更ができます。
２． Performance：FlowJo engine 等の設定調整ができます。
３． Cytometers：サイトメーター毎にパラメータやスケール表示等の設定ができます。
４． Diagnostics：ソフトウェア設定を選択することができます。
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トラブルシューティング
FlowJo をご利用になられて操作等に問題が生じた場合、下記をお試し下さい。
！最初にご確認下さい！
OS のログイン名および使用するファイルパスに日本語や”-”等の記号が含まれる環境下で FlowJo
をご使用になられると、使用に不具合を発生する恐れがあります。
ログイン名を変更する方法
1. ”コントロールパネル”の”ユーザーアカウント”を開いて下さい
2. 半角英数のログイン名で新しいアカウントを作成して下さい。このとき、記号も極力使用しないで
下さい。
3. 現在のユーザーからログアウトし、２.で作ったログイン名でログインし直して下さい。
※C:ドライブ直下に半角英数名のファイルを作成し、管理されることをお奨めします。
FlowJoがデモモードになってしまう orシリアルライセンスを求められる場合
・ FlowJo ドングル抜き差ししてください。
・ パソコンを再起動してください。
・ FlowJo ドングル以外のコンピュータに挿してある USB 機器（外付け HDD、USB メモリ等）を
全てはずしてください。
・ ハブではなくパソコンに直接 FlowJo ドングルを接続してください。
・ お使いのドングルが v10 に対応しているかご確認ください。
操作がうまくいかないとき
・ FCS ファイルの保存場所を確認してください。
【方法】
WSP ファイルが開かない場合は、前回の解析時から FCS ファイルが別の場所に移動されている
可能性があります。FCS ファイルを元の保存場所（通常であれば WSP ファイルと同一のフォル
ダ）に戻してから FlowJo を再起動し、WSP ファイルを開いてみて下さい。（10．データの保存
の 10.2 注意点もご参照下さい。）
・ Preference リセットを行ってください。
※シリアルライセンスをご使用の場合はシリアル No を控えておいて下さい。
シリアル No は、Help > License Information からご確認頂けます。控えたライセンス No
は、FlowJo 再起動時に必要になります。
Preferences ウィンドウを表示し（20.デフォルト設定を参照）、Preferences ウィンドウの
Reset ボタンを押します。
FlowJo を再起動します（初回 FlowJo License information で agree します）。
上記で解決しない時
・ 弊社サポート([email protected])までお問合せ下さい。
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製品に関するお問い合わせについて
FlowJo V10 マニュアル(英語版)は下記 URL からご覧いただけます。
http://docs.flowjo.com/d2/
FlowJo をご利用になられてご不明な点がある場合、また問題が生じた場合などは弊社サポート窓口ま
でお問合せ下さい。
※サポート時間 :平日 9：00～17：00
日本ベクトン・ディッキンソン株式会社
カスタマーサポート
TEL:0120-4890-77
FAX:03-6234-5793
E-mail :[email protected]
![Mascot DistillerAgilent MassHunterをお使いのお客様 はHDDアイコンを選択してください。 インストールするフォルダを確認し、 [Next >]ボタンをクリックしてください。](https://static.fdocuments.in/doc/165x107/60e931769a8a9e6a4808edf8/mascot-agilent-masshunter-hddfe.jpg)
