VII.PLATICA VALIDACION doc angel FINAL-1CON EJERCICIOS.pdf
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NORMATIVIDAD
1.- Norma ISO 17025(Acreditación de laboratorios de ensayo ycalibración).
2.- BPM (Industria Farmacéutica )
3.- Norma ISO 15189
(Acreditación de laboratorios clínicos).
4.- Organismos Internacionales como FAO, USP
y otras farmacopeas, OMS, OIE, ICH.(Conferencia Internacional tripartita sobre
armonización).
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GUÍAS DE REFERENCIA
EURACHEM . The fitness for porpose ofanalytical methods:
- A Laboratory guide to method validation andrelated topics, 1998.
- Guide to Quality in analytical Chemistry: An aid
to accreditation (2002).- Quantifying Uncertainty in Analyticalmeasurements 2ª ed. (2000)
www.eurachem.org
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IUPAC
(International Union of Pure and AppliedChemistry):
- Harmonized guidelines for single laboratoryvalidation of methods of analysis(2002).
- Nomenclature in evaluation of analyticalmethods including detection and quantificationcapabilities (IUPAC Recomendations)www.iupac.org
ICH :
Validation of analytical procedures:
Text and Methodology Q2(R1) 2005. www.ich.org
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¿QUE ES LA VALIDACION?
ISO-9000-2000: Es la confirmación medianteel aporte de pruebas objetivas de que se han
cumplido los requisitos para el usopretendido o una aplicación especifica de unmétodo o prueba microbiológica.
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TIPOS DE METODOS CUALITATIVOS
CUANTITATIVOS
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PARA QUÉ SE VALIDA UN METODO
- Para saber si el laboratorio tiene laresponsabilidad de garantizar que los resultadosson exactos, validos y confiables.
- Para saber si ese ensayo sirve para lo que sequiere utilizar.
- Para conocer el comportamiento del método
- Para tomar decisiones técnicas y administrativas
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¿POR QUE VALIDAR UN METODO?
- Porque cuando el usuario solicita un análisis lohace para resolver un problema.
- Porque si el resultado de un ensayo no presenta
ninguna utilidad mejor no utilizarlo.
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¿QUE METODOS SE VALIDAN?
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1) METODOS NO NORMALIZADOS
- Validar antes de usarlos- Buscar información sobre validación previa
- Especificar los requisitos del cliente yobjetivos del ensayo.
2) METODOS QUE DISEÑA ODESARROLLA EL LABORATORIO.
- Procedimiento
- Asignarlo a personal calificado
- Proveer los recursos necesarios
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3) METODOS NORMALIZADOS
UTILIZADOS FUERA DELALCANCE PREVISTO.
- Son métodos aplicados a matrices que no se
especifican en el procedimiento normalizado.- Ampliaciones y modificaciones de los
métodos normalizados.
- Para demostrar que una versión modificadade un método cumple las mismasespecificaciones que el método original.
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4) SISTEMAS DE ENSAYO
COMERCIALES (KITS)- Los laboratorios deben conservar los datos
sobre la validación de los sistemas de ensayo
comercial que se utilicen- Los datos se pueden obtener de ejercicios de
inter comparación o de datos sobre validaciónremitidos por el fabricante y sujetos a laevaluación de una tercera parte (p. ej. aoac)
- Si no se disponen de datos sobre validación osi no son plenamente aplicados, el laboratorio
completara la validación del método
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PUNTOS A CONSIDERAR
CUANDO SE SELECCIONA UNMETODO DE ENSAYO
– Propiedades analíticas, precisión, exactitud,
especificidad, sensibilidad, limite decuantificación y/o de detección, los efectosmatriciales.
–
Factibilidad de uso o automatización. – Rapidez de análisis o respuesta.
– Costo.
–
Tipo de método.
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PRINCIPIOS DE LA PRACTICA
ANALITICA QUE SE DEBENCONSIDERAR PARA TENERBUENOS RESULTADOS DEL
ENSAYO− Hacer las mediciones de forma tal que
satisfagan el requerimiento acordado.
− Utilizar métodos y equipos probados queaseguren que son aptos para un determinadopropósito.
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− El personal que realiza el ensayo debe ser
competente y estar calificado.− Debe haber una verificación externa y
periódica de la competencia técnica dellaboratorio.
− Los ensayos que se realizan deben serconsistentes con lo que se realiza en cualquierotro lugar.
−
Debe haber procedimientos bien definidos decontrol de calidad y de aseguramiento de lacalidad.
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CENTRO NACIONAL DE SERVICIOS DE DIAGNOSTICO
EN SALUD ANIMAL
SISTEMA INTEGRAL DE GESTION
PLAN O PROTOCOLO DE VALIDACION DE PRUEBAS DE LABORATORIO
No
1) ALCANCE DE LA VALIDACIÓN
Método
Procedimiento de validación
Analito
Matrices
2) REQUERIMIENTOS DEL MÉTODO
TipoValidación retrospectiva Validación prospectiva Verificación
3) DISEÑO EXPERIMENTALMatriz de la muestra(s): Testigo(s) reactivo: Tipo de Prueba a realizar:
Parámetros a evaluar: Número de análisis requeridos: Criterios de aceptación para cadaparámetro:
Material de referencia y/omaterial de referenciacertificado:
Analista (s) responsable: Fecha:
1 de 2
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CENTRO NACIONAL DE SERVICIOS DE DIAGNOSTICO
EN SALUD ANIMAL
SISTEMA INTEGRAL DE GESTION
PLAN O PROTOCOLO DE VALIDACION DE PRUEBAS DE LABORATORIO
No 4) MATERIALES, INSUMOS Y EQUIPOS NECESARIOS PARA DESARROLLAR LAVALIDACION
Plan de validación elaborado por: Firma Fecha deelaboración
Nombre:
Cargo:
Comentarios, observaciones o modificaciones al plan: Fecha Firma
2 de 2
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Definición del método a validar: Cuali o Cuantitativo-Analíto-Matriz- Concentración-principio.
Tipo de método
Normalizado Normalizado
modificado
No normalizado: nuevo o
desarrollado por el
laboratorio
No normalizado
Tradicional: utilizado por
el laboratorio hace años
Se trata de un método normalizado NoSi
Verificación
Desarrollar pruebas experimentales
Validación
Retrospectiva
NoTiene una modificación significativa?
Si
Establecer parámetros a evaluar
Establecer pruebas elementales
Establecer criterios de aceptabilidad
Validación prospectiva
Evaluar resultados
INFORME DE VALIDACION
REVISION DE INFORME
Comparar resultados
versus criterios
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PROCESO DE VALIDACION
METODO A VALIDAR
DISEÑO Y
EJECUCION
DE
ENSAYOS
DATOS
ANALISIS
ESTADISTICO
METODO
VALIDADO
COMPARACION CON
REQUISITOS DE USO
PREVISTO
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1 Introducción al método
2 Parámetros de validación
3 Etapa 1 selección y factibilidad
4 Etapa 2 Desarrollo yestandarización
5 Etapa 3 Ejecución del método
6 Etapa 4 Validación
7 Etapa 5 Mantenimiento y mejora8 Verificación del método
9 Puntos a considerar
Etapas del proceso de validación de métodos
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PARAMETROS A INCLUIR EN LAVALIDACION
PARAMETROS DELMETODO
METODOMICROBIOLOGICO
CUALITATIVO
METODOMICROBIOLOGICO
CUANTITATIVO
METODO ANALITICOFISICOQUIMICO
LIMITE DE DETECCION + - +
LIMITE DECUANTIFICACION
- + +
DESVIACION NEGATIVA + + +
DESVIACION POSITIVA + + +
FALSOS POSITIVOS + + +
FALSOS NEGATIVOS + + +
SENSIBILIDAD + +
ESPECIFICIDAD + + +
EXACTITUD RELATIVA + + +
REPETIBILIDAD + + +
REPRODUCIBILIDAD + + +
EXACTITUD + - +
PRECISIÓN - - +
LINEALIDAD - - +
RANGO - - +
ROBUSTEZ - - +
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Grupo de ensayo Pruebas realizadas Parámetros de validación queaplican
FISICOQUIMICOS
Análisis de concentración de inactivantes. LinealidadPreservantes
Adyuvante
Proteínas
BIOLOGICOS
Titulación Repetibilidad, reproducibilidad,sesgo, sensibilidad,especificidad
Inocuidad o seguridad N/A
Potencia en animales de laboratorio ométodos alternos reconocidosinternacionalmente.
Exactitud, repetibilidad,reproducibilidad, sesgo,sensibilidad, especificidad
MICROBIOLOGICOSPureza Límite de detección
Esterilidad Límite de detección
Identidad Repetibilidad, reproducibilidad,limite de detección
INMUNOLOGICOSTitulación in vitro. Repetibilidad, reproducibilidad,
sesgo, sensibilidad,especificidad
Identidad serológica Repetibilidad, reproducibilidad,sesgo, sensibilidad,especificidad
CONTROL DE CALIDAD A PRODUCTOS BIOLOGICOS
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LIMITE DE DETECCIONEs la cantidad mínima de analito que puede ser
detectado por el método pero en cantidadesque no pueden estimarse con precisión. losresultados se expresan como detectadono detectado en una cantidad o volumendefinido.
LIMITE
DE CUANTIFICACIONEs la concentración de analito en una muestraque puede ser determinada con precisión yexactitud aceptables, bajo las condicionesexperimentales establecidas.
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DESVIACION NEGATIVA (DN)
Es cuando el método a validar da unresultado negativo sin confirmación y elmétodo de referencia da un resultadopositivo.
DESVIACION POSITIVA (DP)Es cuando el método a validar da un
resultado positivo sin confirmación y elmétodo de referencia da un resultadonegativo.
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FALSOS POSITIVOS F(+)•
Es la probabilidad que el ensayo arroje unresultado positivo cuando la muestra esnegativa.
• F( + ) = DP c / DP + NV = 1 - especificidad.DNc= numero de negativos del total de positivos.
FALSOS NEGATIVOS F(-)• Es la probabilidad de que el ensayo arroje un
resultado negativo cuando la muestra espositiva.
• F( - ) = DN c /DN + PV = 1 - sensibilidad.DPc = numero de positivos que salieron de los negativos.
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SENSIBILIDADEs la capacidad del método de dar positivocuando las muestras son verdaderas positivas(PV)
sensibilidad % = PV / (DNc + PV) 100
ESPECIFICIDADEs la capacidad del método de dar negativocuando las muestras son negativas (NV)especificidad % = NV / (DPc + NV) 100
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EXACTITUD RELATIVAGrado de concordancia entre los resultadosdel método evaluado y los obtenidos utilizandoun método de referencia reconocido
Exactitud relativa % =PV + NV / (PV + NV + DN + DP)100
REPETIBILIDADGrado de concordancia entre los resultados demediciones sucesivas, realizadas en lasmismas condiciones de medición.
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Dichas condiciones son: el mismoprocedimiento, mismo analista/observador,
ubicación, instrumentos y condiciones demedicion y puede ser expresadacuantitativamente en terminos de los parametrosde dispersion de los resultadosp. ej.
se preparan las muestras a analizar encualquier orden y cada operador analiza
las muestras 5 veces y se anotan losresultados ( las muestras son conocidas)se pueden expresar en porcentaje losresultados de repetibilidad.
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REPRODUCIBILIDAD
Grado de concordancia entre los resultados demediciones de la misma muestra realizadas en
diferentes condiciones de medición (pruebasinter-laboratorios)
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EXACTITUDEs la proximidad de la concordancia entre elresultado de una medición y un valorverdadero del mensurando, este parámetrose puede determinar haciendo la
comparación con un método reconocidocomo exacto (método de referencia).Reportar el valor teórico, y el valor delensayo. Se calcula el promedio, la
desviación estándar, desviación estándarrelativa (coeficiente de variación).
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PRECISION
Es el grado de concordancia entre losresultados independientes de una medición,obtenidos en condiciones estipuladas ya sea
de repetibilidad o de reproducibilidad ydepende de la distribución de los resultadossin estar relacionada con el valor verdadero.
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En el ejemplo veremos que se trabajan 10
muestras y se realizan 5 lecturas de cadauna.
Registrar los resultados y calcular la
media, desviación estándar y DER o CV.Criterio de aceptación: para muestrasbiológicas debe ser un CV o DER < 10%
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LINEALIDAD
Es la capacidad de un método analítico paragenerar resultados directamente proporcionala la concentración del analito o valor delparámetro de la muestra dentro de un rango.
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Hay 2 formas para determinar la linealidad.
a) Preparar soluciones patrón de por lo menos5 diferentes concentraciones del estándar queestén distribuidas regularmente y que cubran
del 80%-120% ó 50% - 150% del intervalo detrabajo esperado, con diluciones a partir deuna misma solución madre y analizando enduplicado para cada dilución o realizando por
duplicado la solución madre y analizando 1 vezcada dilución.
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b) Usar 6 réplicas por concentración. Analizar
las soluciones conforme al método encuestión.
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Criterio de aceptación.La curva de calibración se grafica colocando las
concentraciones de las soluciones en el ejehorizontal de la x y las respuestas delinstrumento en el eje vertical de la y, la relacióndebe ser lineal con un coeficiente de
determinación (r ² ) de por lo menos 0.98 – 0.99,los valores deben caer dentro de una zonahorizontal angosta, los que queden fuera no sonaceptables para ser incluidos en el intervalonormal de trabajo.
CV ≤ a 2% r ≥ a 0,99
r² ≥ 0,98
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RANGO O INTERVALO
Intervalo entre la concentración máxima ymínima del analito en la cual se puededeterminar al analito con un nivel adecuado deprecisión, exactitud y linealidad utilizando elmétodo en cuestión.
Procedimiento.
Verificar que el método analítico proporcionalinealidad, precisión y exactitud aceptablescuando se aplica a muestras que contienen elanalito en los extremos y dentro del intervalo
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Criterio de aceptación:
Determinar que los niveles de precisión,exactitud y linealidad de las mediciones en elrango de las concentraciones del analito
cumple con su respectivo criterio deaceptación.
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EJEMPLOS
DEVALIDACION ENMETODOS MICROBIOLOGICOS
PARAPRODUCTOS BIOLOGICOS
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Tres analistas realizaron por quintuplicado unamisma muestra. Dicha muestra es un material de
referencia de ensayo de aptitud.Valor asignado (log ufc/ml): 4,26 log¹º
1 Analista Medición
1 Medición
2
Medición
3
Medición
4
Medición
5 Promedio Desviación estándar
2
3 1 4,60 4,61 4,59 4,54 4,62 4,59 0,03
4 2 4,58 4,57 4,56 4,51 4,54 4,55 0,03
5 3 4,65 4,68 4,70 4,71 4,67 4,68 0,02
6 Sr 0,03
7 SR 0,07
Sr= V sr1² + sr2² + sr3² SR= Desviación estándar de los3 promedios de cada analista
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Repetibilidad =
2,8* x Sr = 2.8 x 0,03=0,084 x 100 = 8,4%
Por lo tanto 8,4 < 10 la prueba es satisfactoria
Este método tiene un 91,6% de repetibilidad
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Reproducibilidad =2.8 x 0,07= 0,196 x 100 = 19,6
Este método tiene un 80,4 % de reproducibilidad.
En este caso de reproducibilidad se espera quela variabilidad en esta determinación sea mayorque la repetibilidad, por lo tanto si se cumple.
* El 2.8 sale del promedio de las desviaciones estándar de cadaanalista y se multiplica por 100.
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CV o DER= 0,028/ 4,61 (100)
= 0,60 por lo tanto el CV < a 10
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Método a validar
ufc/g
Método de referencia
ufc/g
Método a validar
Log ufc/g
Método de
referencia
Log ufc/g
2000 2100 3,30 3,32
1800 2200 3,26 3,34
1900 2300 3,28 3,36
1800 2100 3,26 3,32
2100 2200 3,32 3,34
Promedio
Desviación estándar
Error absolutoError relativo
Coeficiente de variación
(DER)
3,28
0,03
0,061.7
0,91% < 2
3,34
0,02
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EJEMPLO:
En un ensayocualitativo se
requiere saber
la especificidad,
sensibilidad yexactitud para
validar dicho
método.
NÚMERO DELECTURAS
METODO AVALIDAR
METODO DEREFERENCIA*
MUESTRA POSITIVA
1 - +
2 + +
3 + +
4 + +
5 - +
MUESTRA NEGATIVA
1 + -
2 - -
3 - -
4 - -
5 - -
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*-Método investigado a fondo que describecon claridad y exactitud las condiciones y
procedimientos necesarios para medir losvalores de una o mas propiedades.
-Método que ha demostrado tener unaexactitud y una precisión apropiadas parael uso que pretende hacerse del mismo.
-Método normalizado nacional ointernacionalmente
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RESULTADO DEL ENSAYOA VALIDAR RESULTADO ASIGANADO
( + )* RESULTADO ASIGANADO( - )* TOTAL
POSITIVO +/+ (PV) +/- (DP) PV + DP
NEGATIVO -/+ (DN) -/- (NV) DN + NV
TOTAL PV + DN DP + NV N
* Obtenidos por el método de referencia
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Siguiendo el ejemplo tenemos
RESULTADO DEL ENSAYO
A VALIDAR
RESULTADO ASIGNADO
(+)
RESULTADO ASIGNADO
(-)
TOTAL
POSITIVO 3/5 1/5 3 + 1 = 4
NEGATIVO 2/5 4/5 2 + 4 = 6
TOTAL 3 + 2 1 + 4 10
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FALSOS POSITIVOS F (+) =
DPc /DP + NV 1 / 1 + 4 = 1 – ESPECIFICIDAD
1/5= 0.2 = 1 – 80 = 20%
FALSOS NEGATIVOS F(-)=
DNc / DN + PV 2 / 2 + 3 = 1 - SENSIBILIDAD
2/5 = 0.4 = 1 – 60 = 40%NÚMERO DE LECTURAS METODO A VALIDAR METODO DE REFERENCIA*
MUESTRA POSITIVA
1 - +
2 + +
3 + +
4 + +
5 - +
MUESTRA NEGATIVA
1 + -
2 - -
3 - -
4 - -
5 - -
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SENSIBILIDAD% =
PV/ (DNc + PV)100 = 3/ (2 + 3) 100
3/5 = 0.6 X 100= 60%
ESPECIFICIDAD =NV/(DPc + NV)100 = 4/(1 + 4)100 = 4 / (1 + 4)100 =
4/5 X 100 = 0.8 X100 =80%
EXACTITUD RELATIVA %
PV + NV / (PV + NV + DN + DP )100
3 + 4 /(3 + 4 + 2 +1)100 = 7/10 X 100 = 70%
NÚMERO DELECTURAS
METODO AVALIDAR
METODO DEREFERENCIA*
MUESTRA POSITIVA
1 - +
2 + +
3 + +
4 + +
5 - +
MUESTRA NEGATIVA
1 + -
2 - -
3 - -
4 - -
5 - -
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No. DE
MUESTRA
RESULTADO
ASIGNADO
1 2 3 4 5 ACERTACION CONVERSION
A
DECIMAL
PORCENTAJE
DE
ACERTACION
1 + + + - - + 3/5 0.6 60%
2
+
+
+
-
-
-
2/5
0.4
40
3
-
-
+
+
-
+
2/5
0.4
40
4 + - - + + - 2/5 0.4 40
5
-
+
+
-
+
+
1/5
0.2
20
6 + - + + + - 3/5 0.6 60
7 - - - - - - 5/5 1.0 100
8
+
-
-
-
+
+
2/5
0.4
40
9 + + + + - + 4/5 0.8 80
10 + + + + + + 5/5 1.0 100
PROMEDIO
0.58
58
DS 0.274
REPETIBILIDAD ( ejemplo )
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Lo anterior se repite en total 3 veces poranalista y se hace una tabla como la anterior,
por ejemplo en las otras lecturas se obtuvo losiguiente:
LECTURA No. 2
PROMEDIO 0.62 = 62%DS= 0.274
LECTURA No. 3
PROMEDIO 0.62 62%DS= 0.358
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PROMEDIO DE LAS MEDIAS=
0.58+ 0.62 + 0.62 / 3 = 0.60
DS = 2.3
CV= 2.3/0.60 X 100 = 3.79
Se admite que el CV no sea mayor al 10%.
En el caso de la reproducibilidad se hace entre
laboratorios y no existe ningún criterio universalpara juzgar la reproducibilidad.
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Analista DICT50 Lote 1 de antígeno Parámetros a evaluar
_
X DS CV
1
Ensayo
1 2 3
100 9 9 8 8,6 0,577 6,7
200 8 9 8 8,3 0,577 6,9
300 8 9 9 8,6 0,577 6,7
2Lote 2 de antígeno _
X DS CV
Ensayo
100 9 9 9 9,0 0 0
200 9 8 9 8,6 0,577 6,7
300 9 9 9 9,0 0 0
3
Lote 3 de antígeno _
X DS CV
Ensayp100 9 8 9 8,6 0,577 6,7
200 9 7 9 8,3 1,15 13,8
300 9 8 9 8,6 0,577 6,7
Los resultados son expresados en Log 2
Criterio de aceptación: CV ≤ 15%, por lo tanto si se cumple
Validación de la precisión inter-ensayos (Reproducibilidad) en una prueba de virus-suero-neutralización en cultivo celular para determinar la concentración de anticuerpos hacia elvirus Diarrea Viral Bovina con diferentes analistas, diferente lote de antí geno, diferentes
DICT50 y un suero de referencia con un tí tulo de anticuerpos de 1:512 ( 9 Log2 )
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aLog Dilución ______________________________________________________________________________________________________________________________________
Replicas 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
1 + + + + + + - - - - - -
2 + + + + + - + - - - - -
3 + + + + + - - - - - - -
4 + + + + + + - - - - - -
5 + + + + + - - - - - - -
6 + + + + - + + - - - - -
7 + + + + + + + - - - - -
8 + + + + + - - - - - - -
Total (X1) 8 8 8 8 7 4 3 0 0 0 0 0
8/8 8/8 8/8 8/8 7/8 4/8 3/8 0/8 0/8 0/8 0/8 0/8P1 1 1 1 1 0.875 0.5 0.375 0 0 0 0 0
Ejemplo de una lectura de un ensayo de dilución seriada para determinar el título de la TCID50 +Presencia de virus,- Sin presencia de virus. El ensayo se realizó con 12 diluciones y 8 réplicas por dilución. Total X1 es el número depositivos por dilución, P1 es la fracción de los pozos positivos/total.El método Spearman-Karber estima el título utilizando la siguiente fórmula:
m = Xk – d/2 + d ∑ (X1 / n) ó m= Xk – d/2 + d ∑ P1
m = Logaritmo negativo del título, considerando el volumen de inóculo por pozo.Xk = El logaritmo del valor recíproco de la dilución más baja donde todas las réplicas son positivos.d = El 10Log del factor de dilución(d = 1.00 cuando el factor de dilución es 1:10, d = 0.30 cuando el factor de dilución es 1:2, d = 0.48 cuando el factorde dilución es 1:3, etc.)n= Número de réplicas por dilución
X1 = El número de pozos positivos por dilución a partir de Xk P1 = Proporción de la reacción (X1 / n)
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Siguiendo con el ejemplo:
En el ejemplo se considera que las diluciones fueron de 1:10 (d = 1)
Xk = 4d = 1n= 8X1 = 8/8, 7/8, 4/8, 3/8 ó 1, 0.875, 0.5, 0.375m = 4 – ½ + 1 (8/8 + 7/8 + 4/8 + 3/8)= 4 – 0.5 + 2.75= 6.25
Como el volumen de inoculo fué de 100 µl/pozo, el logaritmo de la dilución es 10m y ellogaritmo del título es por eso 6.25 /100 µl ó 7.25 / ml (107.25 TCID50 / ml.)
Cálculo de la desviación estándar:
√ [ d2 ∑{ P1 (1 – P1)/ (n – 1) } ]= √ [ 12 ∑{ P1 (1 – P1)/ (8 – 1) } ]
= P1 hasta P4 1.00 = > 1 ( 1 – P1 ) / 7 = 0P5 = 0.875 => 0.875 ( 1 – 0.875) / 7 = 0.016P6 = 0.500 => 0.500(1 – 0.500) / 7 = 0.036P7 = 0.375 = > 0.375 (1 – 0.375) /7 = 0.033P8 hasta P12 0.000 => 0 ( 1 – 0) / 7 = 0
DS = √ { 12 (0.016 + 0.036 + 0.033) }
DS = √ 0.085 = 0.292
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Muestra Corrida 1Título DS
Corrida 2Título DS
1(Bajo)
3.74 0.193.39 0.213.74 0.18
3.56 0.193.82 0.183.48 0.22
2(Medio)
5.65 0.195.91 0.215.74 0.18
5.39 0.195.91 0.235.65 0.24
3(Alto)
7.48 0.207.82 0.21
7.56 0.20
7.39 0.227.74 0.24
7.39 0.20Pool de DS 0.205
Ejemplo: Prueba de repetibilidad de un ensayo de TCID50. 3 muestras son tituladas en trplicado en 2 corridasindependientes realizadas por un operador en el mismo día, resultando en logaritmos de títulos y desviaciónestándar de 18 ensayos ,el pool de las desviaciónes estándar es la repetibilidad del ensayo de TCID50 y escalculado en base a las desviaciones estándar individuales de los 18 ensayos.
Pool de DS = √ { [ (n1 – 1)DS12 + ……..(n1 – 1 )DSI2 ] / [ n1 + …. nI – 1 ] }
DS = desviación estándar de cada ensayon = número de réplicas dentro de cada ensayoI = Número de ensayos
REPETIBILIDAD
EJEMPLO DE LINEALIDAD
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NIVEL Concentraciónmg/L( X ) ( X2 )
Promedio( Y ) ( Y2 )
( X.Y )DS
CV % Varianza
1 2 3
1 13,4 179,5 43,8 44,2 44,1 44,0 1936 589,6 0,2 0,4 0,0
2 26,6 707,5 86,2 86,1 87,6 86,7 7516,8 2306,22 0,8 1,0 0,7
3 40,8 166,6 131,2 132,7 133,6 132,5 17556,25 5406 1,2 0,9 1,4
4 54,7 2992 181,7 180,7 178,6 180,3 32508 9862,4 1.6 0,9 2,55 68,6 4705,9 221,6 224,2 221,8 222,5 49506,2 15263,5 1,4 0,6 2,0
Promedio 40,82 133,2
Desviaciónestándar
21,9 71,26
Sumatoria 204,1 10249,5 666 109023,2 33427,72
_X 2 1666,2
_ Y2 17742,24
Sxy=i=1∑n (X1.Y1)+(X2.Y2)….. – (Promedio de X . Promedio de Y) = 33427,72/5 – 5437,2 = 1248,3
nSx = √ ( (∑ X2 /n) – (Promedio de X)2 ) =√ 10249,5/5 – 1666,2 = √383,7 = 19,58
Sy= √ ( (∑ Y2 /n) – (Promedio de Y)2 ) = =√ 109023,2/5 – 17742,24 = √4062,4 = 63,7
r = Sxy / Sx . Sy = 1248,3/ 19,58 X 63,7 = 1248,3/1247,2 = 1,0008
r 2 = 1,001
Si el coeficiente es positivo, la correlación es directa y hay una dependencia funcional -1 ≤ r ≤ 1
Significancia: tr =│ r │ √ ( n – 2 )/ √ ( 1 – r 2 ) = │ 1.0008 │ √ 3 /√ 1 – 1,001 = 1,0008 x 1,73 / √ - 0,001 =0,729/0.031 = 23,5tr = 23,5 tt = 3,182 Por lo tanto tr > tt ( 23,5 >3,182 HAY UNA CORRELACION LINEALSIGNIFICATIVA
J O
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EN SALUD ANIMAL
SISTEMA INTEGRAL DE GESTION
INFORME DE VALIDACION DE MÉTODOS DE ENSAYONo de validación:
IDENTIFICACION DEL METODO DE ENSAYO VALIDADO
Nombre completo del método:
Tipo de método:Cualitativo Cuantitativo
Normalizado Normalizado modificado No Normalizado Nuevo
Analito:
Unidades:Matriz ( o matrices)
Responsable Validación:
Firma:
Fecha:
IDENTIFICACIÓN DE MATERIALES INSUMOS O EQUIPOS EMPLEADOS
Equipos involucrados: (Nombre, marca, modelo, número de identificación, tipo de columna, tipo de detectores, etc.)
Soluciones estándares y/o patrones involucrados: (Nombre, marca, modelo, número de identificación, concentraciones, etc.)
Material de referencia: (Nombre, marca, código de identificación códigos asignados, unidades, etc.)
Material de referencia certificado: (Nombre, marca, código de identificación, No. Certificado, valores asignados, unidades,
trazabilidad, etc.)
1 de 6
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EN SALUD ANIMAL
SISTEMA INTEGRAL DE GESTION
PARAMETROS DE VALIDACION
Pruebas realizadas
Selectividad: Sensibilidad:Linealidad: Precisión:Exactitud: Veracidad Limites:Robustez:Otros:
RESULTADO DE LAS PRUEBAS EXPERIMENTALES REALIZADAS
Linealidad
Descripción: (Breve descripción de la experiencia analítica)
Tipo de calibración:Calibración externa: Calibración de matriz:
Calibración externa estándar interno (SI): Calibración en matriz estándar interno
(SI):
Ecuación recta: Intervalos de confianza:ICm max.: min.:ICLo max.: min.:
Valor obtenido Criterio de Aceptabilidad
Rango lineal:
Coeficiente de correlación ( ):
Comentarios:
2 de 6
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CENTRO NACIONAL DE SERVICIOS DE DIAGNOSTICOEN SALUD ANIMAL
SISTEMA INTEGRAL DE GESTION
Sensibilidad
Descripci n: (Breve descripción de la experiencia analítica)
Valor obtenido Criterio de Aceptabilidad
Comentarios:
Limites
Descripción: (Breve descripción de la experiencia analítica)
Valor obtenido (unidades) Criterio de Aceptabilidad
Limite critico, LC:
Limite detección, LOD:
Limite de cuantificación, LOQ:
Comentarios:
3 de 6
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CENTRO NACIONAL DE SERVICIOS DE DIAGNOSTICOEN SALUD ANIMAL
SISTEMA INTEGRAL DE GESTION
SELECTIVIDAD (ESPECIFICIDAD)
Descripción: (Breve descripción de la experiencia analítica)
Valor obtenido (unidades) Criterio de aceptabilidad
Correlación(es) a Interferencias:
Comentarios
EXACTITUD
Precisión
Descripción: (Breve descripción de la experiencia analítica)
Precisión en condiciones de repetibilidadNivel/ concentración(unidades)
SDr %CVr Criterio deaceptabilidad
Comentarios:
4 de 6
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CENTRO NACIONAL DE SERVICIOS DE DIAGNOSTICO
EN SALUD ANIMAL
SISTEMA INTEGRAL DE GESTION
Precisión en condiciones de reproducibilidadNivel/ concentración(unidades)
SDRi %CVRi Criterio deaceptabilidad
Comentarios:
Valor obtenido (unidades) Criterio de aceptabilidadPecisión del método %RSDHorrat
Comentarios:
Veracidad
Descripción: (Breve descripción de la experiencia analítica)
Valor obtenido (unidades) Criterio de aceptabilidad
Lectura obtenida, X
Sesgo, s:
t-Student,t:
Comentarios:
ReproducibilidadNivel/ concentración(unidades)
R %R T obs Criterio deaceptabilidad
Comentarios:
5 de 6
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CENTRO NACIONAL DE SERVICIOS DE DIAGNOSTICO
EN SALUD ANIMAL
SISTEMA INTEGRAL DE GESTION
Robustez
Descripción: (Breve descripción de la experiencia analítica)
(X-x) Valor obtenido (unidades) Criterio de aceptabilidad
APLICABILIDAD(Declaración del campo de aplicación del método: Analito, rango de trabajo, unidades, matrices y advertencias acerca d la
interferencia conocida en las cuales se ha demostrado la validación.)
ANEXOS(Anexar al presente informe los documentos necesarios para respaldar la información los registros o reportes entregados
por el equipo y copia de la plantilla de cálculos generados en el proceso analítico):
Revisado por Validación Firma Fecha
Nombre :
Cargo:
Aceptada
Rechazada
OBSERVACIONES
6 de 6