Conclusion

The SureTect Salmonella species Assay was shown to be an

accurate and user-friendly method, due to the use of pre-

dispensed lysis reagent, tableted PCR reagents and automatic

interpretation of results. Results from a wide range of foods,

including challenging matrices, demonstrated the assay was

able to reliably detect the presence of Salmonella.

References

1. AOAC International, Method Committee Guidelines for

Validation of Microbiological Methods for Food and

Environmental Surfaces 2012.

2. ISO, Microbiology of Food and Animal Feeding stuffs-

Horizontal Method for the Detection of Salmonella spp. ISO

6579:2002.

Overview

Purpose: To validate the Thermo Scientific™ SureTect™

Salmonella species Assay according to AOAC Research

Institute (RI) Performance Tested MethodsSM validation

criteria.

Methods: The SureTect method was compared to the

reference method detailed in ISO 6579:2002.

Results: The SureTect Salmonella species assay reliably

detected the presence of Salmonella in a wide variety of

matrices.

Introduction

The Thermo Scientific SureTect Salmonella species

Assay (PT0100A) is a new Real-Time PCR test for the

detection of Salmonella from food, animal feeds and

environmental samples, which combines pre-dispensed

lysis reagent and lyophilised, tableted PCR reagents to

simplify and improve assay handling, along with dedicated

software to run the assays as well as interpret and display

PCR results. This study was conducted using the AOAC

RI Performance Tested MethodsSM program1 to validate

the SureTect Salmonella species assay in comparison to

the reference method detailed in ISO 6579:20022 with a

variety of food matrices.

Methods

Sample Preparation

Bulk samples of foods were screened for natural

contamination with Salmonella before splitting into three

samples; unspiked (control), low spiked (0.2-2 CFU/25g

and high spiked (2-5 CFU/25g) samples. Once spiked, all

samples were allowed to equilibrate as per AOAC

instructions.

Surface samples of stainless steel were spiked with a

suspension of Salmonella. Where samples were not

paired as in the case of surface samples and raw ground

beef analysis with the 8h enrichment protocol, additional

separate samples were prepared.

SureTect Assay Method

25g samples of foods and surface sponges were added to

225ml of room temperature Buffered Peptone Water

(BPW) (ISO), with the exception of raw ground beef with

the short 8h protocol, where pre-warmed BPW (ISO) was

used. Samples of raw ground beef analysed with the

short protocol were incubated at 41.5°C for 8h, non-fat

dried milk, environmental surfaces, raw beef and liquid

egg were incubated at 37°C for 18h and cooked shrimps,

Frankfurters, lettuce and raw chicken for 20h at 37°C.

Following enrichment 10µl of each sample was added to

the prefilled SureTect Lysis Tubes (prepared by

additionally adding Proteinase K Reagent) and the sample

lysed according to the SureTect lysis protocol (37°C for 10

minutes followed by 95°C for 5 minutes).

© 2013 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. API is a trademark of bioMérieux SA. Performance Tested

Methods is a service mark of AOAC-RI. All other trademarks are the property of Thermo Fisher Scientific Inc and its

subsidiaries. This information is not intended to encourage use of these products in any manner that might infringe the

intellectual property rights of others.

Folio number LT2085A, 05/13

.

FIGURE 3. Inclusivity of the SureTect Salmonella

species Assay.

Validation of the Thermo Scientific SureTect Real-Time PCR Method for Detection of Salmonella in

Food and Environmental Samples

Jonathan Cloke1, Dorn Clark2, Roy Radcliff2, Carlos Leon-Velarde3, Nathan Larson3, Keron Dave3

1Thermo Fisher Scientific, Basingstoke, Hampshire, RG24 8PW, UK, 2Marshfield Food Safety, 1000 North Oak Avenue,

Marshfield, Wisconsin, 54449, USA, and 3Agriculture and Food Laboratory, University of Guelph, Guelph, Ontario, N1H

8J7, Canada

Results

Inclusivity and exclusivity

All 117 Salmonella isolates were detected as positive by the

SureTect Software. None of the 36 exclusivity isolates were

detected by the SureTect Software.

Serotype Number % Positive

Salmonella bongori 4 100%

Salmonella enterica subsp. salamae 5 100%

Salmonella enterica subsp. arizoniae 3 100%

Salmonella enterica subsp.

diarizoniae4 100%

Salmonella enterica subsp. enterica 101 100%

Matrix/Inoculating

OrganismLevel

MPN/

25g

No. Test

portionsISO

SureTect

Presum* Con*

Raw chicken breast

Salmonella Indiana

Low 1.2 20 13 12 12

High 2.3 5 5 5 5

Raw ground pork

Salmonella Livingstone

Low 0.68 20 11 11 11

High 2.5 5 4 4 4

Non-fat dried milk/

Salmonella Infantis

Low 1.2 20 15 15 15

High 4.5 5 5 5 5

Pork Frankfurters

Salmonella Poona

Low 0.38 20 8 8 8

High 0.55 5 3 3 3

Cooked shrimp

Salmonella SaintPaul

Low 1.3 20 13 13 13

High 4.5 5 5 5 5

Stainless steel surface

Salmonella Newport & E.

coli

Low N/A 20 16 16 16

High N/A 5 5 5 5

Ready to eat meal

Salmonella Enteritidis

Low 1.3 20 15 15 15

High 4.5 5 5 5 5

Lettuce

Salmonella Anatum

Low 1.0 20 14 13 14

High 1.5 5 4 4 4

Raw ground beef (short

8h protocol)

Salmonella Typhimurium

Low 0.63 20 10 8 11

High 2.3 5 5 4 5

Raw ground beef

(standard protocol)

Salmonella Typhimurium

Low 0.63 20 10 9 11

High 2.3 5 5 5 5

Pasteurised liquid egg

Salmonella Virchow

Low 0.58 20 8 8 8

High 1.35 5 3 3 3

FIGURE 3. Method Developer Results for the ISO and

SureTect Salmonella species Methods.

Matrix/Inoculating

OrganismLevel

MPN/

25g

No. Test

portionsISO

SureTect

Presum* Con*

Lettuce

Salmonella Thompson

Low 0.73 20 10 10 9

High 2.97 5 5 5 5

Pork Frankfurters

Salmonella Vellore

Low 0.48 20 7 7 7

High 2.97 5 5 5 5

Stainless steel surface

Salmonella Berta & E.

coli

Low N/A 20 14 14 14

High N/A 5 5 5 5

* Presumptive (Presum) and Confirmed (Con) SureTect results

* Presumptive (Presum) and Confirmed (Con) SureTect results

FIGURE 4. Independent Laboratory Results for the ISO

and SureTect Salmonella species Methods.

Once lysed, 20µl of the lysate was added to the SureTect

PCR Tubes, which contain lyophilised PCR reagents before

running on the Thermo Scientific™ PikoReal™ Real-Time

PCR instrument.

Assay results were automatically interpreted as “positive” or

“negative” by the SureTect Software.

All SureTect results were confirmed culturally using the

SureTect confirmation method of direct plating onto Oxoid™

Brilliance™ Salmonella Agar and confirming presumptive

positive purple colonies with the Oxoid™ Salmonella Latex

Kit (DR1108A) and additionally using the reference method

confirmation protocol.

ISO Reference Method

The reference method detailed in ISO 6579:2002 was

followed, using Brilliance Salmonella Agar as the second

plating medium. Confirmations were performed using the

Remel™ microID™ kit or bioMérieux API™ 20E kit, Triple

Sugar Iron (TSI) slants and poly-O and poly-H antisera.

Inclusivity

One-hundred and seventeen Salmonella isolates covering a

wide variety of O- serogroups and subspecies were cultured

in BPW (ISO) and analysed at a level of approximately 104

CFU/ml using the SureTect assay protocol according to

AOAC-RI PTM requirements.

Exclusivity

Thirty-six exclusivity isolates were cultured in TSB for 18-24

hours and analysed at a level of approximately 108CFU/ml

using the SureTect assay protocol according to AOAC-RI

PTM requirements.

Food Matrix Analysis

No statistically significant difference, by probability of detection

analysis (POD), was seen for any of the ten food matrices and

the environmental surface evaluated in this PTM study during

either the method developer or independent laboratory studies

between the ISO reference method or the SureTect Salmonella

species assay.

Add 10µl of Proteinase K to the SureTect

Lysis Tube (pre-filled with Lysis Reagent 1)

Add 10µl of BPW (ISO) enriched sample

Lyse sample (37°C 10 min followed by 95°C

for 5 min)

Add 20µl of lysate to SureTect PCR Tube

(pre-filled with lyophilised reagent)

Run samples in PikoReal Instrument and

read off results

FIGURE 2. SureTect Assay Workflow.

FIGURE 1. The Thermo Scientific SureTect System.

daniele.sohier@adria.tm.fr

Significance The Thermo ScientificTM SureTectTM Salmonella spp Real-Time PCR Assay is a reliable method for Salmonella spp detection in food

and pet food samples, and offers important economic savings by reducing time to result and handling time.

Introduction The Thermo ScientificTM SureTectTM Salmonella spp species Real-Time PCR Assay is a new detection method based on real-time

PCR. The oligonucleotides target unique DNA sequences found only in the analyte and use PCR technology to amplify and detect them. If present, the

target DNA is amplified and the increasing fluorescent signal is detected by the Thermo Scientific PikoReal Real-Time PCR instrument and interpreted

by the Thermo Scientific SureTect. Only 8 h incubation time is required for raw beef meat analyses.

Method comparison studyRelative accuracy, relative specificity and

relative sensitivity study

442 samples were analyzed. The paired data

below show 10 negative deviations and 8 positive

deviations. The performances of the compared

methods are equivalent:

10 laboratories from various European countries

were involved. Ground beef was inoculated with

S. Typhimurium. 8 h incubation time was run in

each involved laboratory.

The paired data, the relative accuracy,

sensitivity, specificity, as well as the

accordance, concordance and odds ratio clearly

show that the alternative method precision is

equivalent to the ISO method:

Performance Assessment of the Thermo ScientificTM SureTectTM Salmonella spp

Real-Time PCR Assay according to the ISO 16140 Standard

for Salmonella spp Detection in Food and Pet Food Samples

J. Baguet, M. Bernard, C. Bernez, C. Le Doeuff, S. Peron, M. Rannou, D. SohierADRIA, expert laboratory at AFNOR certification, AOAC-RI and MicroVal

Purpose An independent study was conducted at ADRIA, to validate this new method in comparison to the ISO 6579 standard, as part of the

NF Validation approval process and according to the ISO 16140 standard.

Inter-laboratory study

Alternative

method

ISO 6579

Reference method TOTAL

+ -

+ PA = 159 PD = 1 160

- ND = 0 NA = 80 80

TOTAL 159 81 240

PA :Positive Agreement NA: Negative Agreement

PD: Positive Deviation ND: Negative Deviation

Alternative

method

ISO 6579

Reference method TOTAL

+ -

+ PA = 188 PD = 8 196

- ND = 10 NA = 236 246

TOTAL 198 244 442

PA :Positive Agreement NA: Negative Agreement

PD: Positive Deviation ND: Negative Deviation

Relative detection levels

Various (matrix/strain) pairs were tested, with

4 inoculation levels. The relative detection limits

of the alternative method vary from 0.2 to

1.2 CFU/25 g, those of the ISO standard vary

from 0.2 to 1.1 CFU/25 g:

Matrices

Relative detection levels

Reference

method

Alternative

method

Poultry meat 0.6 [0.3 ; 1.1] 0.8 [0.4 ; 1.5]

Whole egg 0.5 [0.2 ; 0.8] 0.5 [0.3 ; 0.8]

Produces 0.4 [0.2 ; 0.7] 0.4 [0.2 ; 0.7]

Raw milk 0.7 [0.4 ; 1.1] 0.7 [0.4 ; 1.2]

Pet Food 0.4 [0.3; 0.7] 0.4 [0.2 ; 0.7]

Ground beef 0.6 [0.3; 1.0] 0.43[0.2 ; 0.5]

Inclusivity / exclusivity

30 non target strains and 51 target strains were tested. No cross reaction was observed with the non

target strains, all the Salmonella spp strains were detected.

N° attestation UNI 03/07-11/13

ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS

FOR THE FOOD INDUSTRY

www.afnor-validation.com

Belén Moreno1, Ruth Rodríguez1, Patricia Uribarren1, Carmen Oria2, Nagore Errazti3 y Juncal Artieda4

1 Laboratorio de Salud Pública de Gipuzkoa, Gobierno Vasco, labora3-san@ej-gv.es 2Unidad de Sanidad Alimentaria, Subdirección de Salud de

Gipuzkoa, Gobierno Vasco. 3 Comarca de Salud Pública Tolosa-Goierri, Gobierno Vasco. 4Unidad de Epidemiología, Subdirección de Salud de Gipuzkoa,

Gobierno Vasco

MUESTREO sistemático de todo el producto clasificado y envasado por el centro de embalaje. El número de muestras

correspondientes a cada una de las manadas y procedencias se estimó en base al número de medias docenas clasificadas y envasadas

el día del muestreo. Cada muestra seleccionada estaba compuesta por seis huevos.

MÉTODO: detección de Salmonella spp. tanto en la cáscara como en el interior de los huevos, mediante el kit de detección de

Salmonella spp. SureTectTM y el equipo PikoReal Real Time PCR.

Comparación del método inmunoenzimático empleado habitualmente en el laboratorio y acreditado por ENAC, VIDAS Salmonella

(VIDAS SLM), con el método Thermo Scientific SureTectTM Salmonella spp. PCR Assay. Ambos métodos están validados por AFNOR.

Tras varios brotes de gastroenteritis aguda por Salmonella Enteritidis se inició el estudio

epidemiológico y ambiental. Los huevos frescos de una explotación fueron el alimento implicado.

Se empleó en el estudio del brote un nuevo método de detección de Salmonella spp., Thermo

ScientificTM SureTectTM, basado en tecnología de PCR, para amplificar y detectar secuencias

únicas de DNA.

El objeto del estudio es evaluar el sistema SureTectTM para la detección de Salmonella spp. por

PCR en tiempo real para su implantación en un laboratorio acreditado.

Los resultados fueron concordantes y se detectó, por ambos métodos, Salmonella Enteritidis,

cepa no vacunal, en 3 de las 60 muestras de cáscara de huevo (5 %).

Al evaluar los dos métodos de análisis, el laboratorio se decantó por utilizar el método de

detección mediante PCR al presentar las siguientes ventajas:

- Método más rápido, resultados negativos a las 24 h

- Flujo de trabajo más fácil, menor tiempo de manipulación y probabilidad de errores

- Incremento de la productividad del laboratorio

Añadir 10µl de Proteinasa K al tubo de lisis SureTectTM,

que contiene el Reactivo de lisis 1

Pesar la muestra y añadir APT en proporción 1:10

Incubar a 37ºC durante 22 ± 2 h

Añadir 10µl del preenriquecimiento de la muestra en

APT

Lisado de la muestra (37°C 10 min y 95°C 5 min)

Añadir 20µl del lisado al tubo de PCR SureTectTM, que

contiene los reactivos liofilizados

Inicio de Confirmación de resultados positivos en

SureTect PCR según ISO 6579

Llevar a cabo la reacción de PCR en el instrumento

PikoReal y leer los resultados (1h, 20 min)

Día 1

Día 2

Día 1

Día 2

Día 3

Pesar la muestra y añadir APT en proporción 1:10

Incubar a 37ºC durante 16-20 h

Añadir 1 ml de cada caldo M en un tubo y calentar a 100ºC

durante 15± 1min

Inicio de Confirmación de resultados positivos en VIDAS

SLM según ISO 6579

Añadir 1 ml a un tubo con

10 ml de MKTTn

Incubar 6-8h a 37 ± 1ºC

Añadir 0,1 ml a un tubo

con 10 ml de RVS

Incubar 6-8h a 41,5 ± 1ºC

Añadir 0,5 ml en la tira de VIDAS SLM y llevar a cabo la

reacción (45 min). Leer los resultados

Añadir 1 ml a un tubo con

10 ml de Caldo M

Incubar 16-20h a 41,5 ± 1ºC

Añadir 0,1 ml a un tubo

con 10 ml de Caldo M

Incubar 16-20h a 37 ± 1ºC

Detección de Salmonella spp. en huevos frescos mediante el método de PCR a tiempo real SureTectTM

INTRODUCCIÓN

MATERIAL Y MÉTODOS

OBJETIVO

RESULTADOS Y CONCLUSIONES

XIX CONGRESO NACIONAL DE MICROBIOLOGÍA DE LOS ALIMENTOS, Zaragoza Septiembre de 2014

PROTOCOLO VIDAS SLM PROTOCOLO SureTectTM

Conclusión

El ensayo SureTect Listeria monocytogenes  es un método preciso  y  

fácil 

de 

usar, 

al 

presentar 

los 

reactivos 

de 

lisis 

predispensados,

los 

reactivos 

de 

PCR 

liofilizados 

y 

permitir 

informar 

los 

resultados

de 

forma 

automática.    Los 

resultados 

en 

una 

gran 

variedad 

de 

alimentos, 

incluyendo 

matrices 

dificiles 

cómo 

el 

salami 

y 

el 

salmón 

ahumado, 

demostraron 

que 

este 

ensayo 

detecta 

de 

forma 

fiable 

la 

presencia de  L. monocytogenes  en alimentos y superficies.

Referencias 

1.

AOAC 

International, 

Method 

Committee 

Guidelines 

for 

Validation 

of 

Microbiological 

Methods 

for 

Food 

and 

Environmental Surfaces 2012.

2.

ISO, 

Microbiology 

of 

Food 

and 

Animal 

Feeding 

stuffs‐Horizontal 

Method for the Detection of Listeria monocytogenes. ISO 11290‐

1:1996.

Resumen

Objetivo: 

Validar 

el 

ensayo 

Thermo 

Scientific™

SureTect™

Listeria 

monocytogenes 

según 

los 

criterios 

de 

validación 

Performance 

Tested 

MethodsSM

del 

AOAC 

Research 

Institute 

(RI).

Métodos: 

El 

método 

SureTect 

se 

comparó

con 

el 

método 

de 

referencia detallado 

en 

la 

ISO 

11290‐1:1996 

y 

su   Modificación 

1:2004.

Resultados:

El

ensayo SureTect Listeria monocytogenes detecta 

de manera fiable la presencia de L. monocytogenes en una gran 

variedad de matrices.

Introducción

El 

ensayo 

Thermo 

Scientific 

SureTect 

Listeria 

monocytogenes  

(PT0300A) 

es 

un 

nuevo 

ensayo 

de 

PCR 

en 

Tiempo 

Real 

para 

la 

detección 

de 

Listeria 

monocytogenes 

en 

alimentos 

y 

muestras 

ambientales, que combina los reactivos de lisis  predispensados 

y 

los 

reactivos 

de 

PCR 

liofilizados 

para 

simplificar 

y 

mejorar 

la 

manipulación 

en 

el 

ensayo, 

además 

de 

un 

software 

dedicado 

para analizar e  interpretar los resultados por PCR. El estudio de 

validación del ensayo SureTect se realizó

según especificaciones 

del 

programa1

AOAC 

RI 

Performance 

Tested 

MethodsSM

en 

comparación con el  método de referencia  ISO 11290‐1.

Métodos

Preparación de la Muestra

Con 

el 

objetivo 

de 

detectar 

contaminación 

natural 

por 

Listeria 

spp, 

se 

analizaron 

muestras 

de 

alimentos 

dividiendo 

seguidamente cada una en tres porciones:  muestra sin inocular 

(control),    con 

bajo 

nivel 

de 

contaminación 

(0.2‐2 

CFU/25g) 

y  

con 

alto 

nivel 

de 

contaminación    (2‐5 

CFU/25g).    Una 

vez 

dopadas, 

las 

muestras 

se 

dejaron 

equilibrar 

según 

las 

especificaciones técnicas indicadas por AOAC .  Las muestras de 

superficie 

de 

acero 

inoxidable 

y plástico 

se 

inocularon 

con 

una 

suspensión de L. monocytogenes.  

Método del Ensayo SureTect

Tras  diluir 25g  de las muestras y cada una de las  esponjas de

superficie 

en 

225 

ml 

del 

caldo 

Oxoid™

24 

LEB   con 

Tampón 

24 

LEB   y 

suplementos 

selectivos, 

y 

atemperado 

previamente,   se 

incubaron 

todas 

las 

muestras 

a    37°C 

durante 

22 

horas.  

Transcurrido 

este 

tiempo, 

se 

añadió

10 

µl 

de 

cada 

uno 

de 

los 

enriquecimientos a los tubos con solución de lisis,  Proteinasa K  

y 

Reactivo 

de 

Lisis 

2. 

El 

protocolo 

de 

lisado 

se 

llevó

a 

cabo 

mediante 

calentamiento 

en 

termobloque 

a 

37°C 

durante    10 

minutos seguido de  95°C durante 5 minutos.  A continuación se 

añadieron    20 

µl 

del 

lisado 

en 

tubos    de 

PCR 

SureTect 

que 

contienen 

predispensados 

y    liofilizados 

los 

reactivos 

de 

PCR 

y 

se 

procesaron    en 

el 

equipo 

de 

PCR 

Real‐Time 

PikoReal™

de 

Thermo 

Scientific™. 

El 

Software 

SureTect 

interpretó

los 

resultados    automáticamente 

como 

“positivo”

o 

“negativo”. 

Todos 

estos 

resultados 

se 

confirmaron    mediante 

siembra 

directa 

en   placa   Oxoid™

Brilliance™

Listeria 

Agar 

y 

galería 

de 

identificación bioquímica  de Oxoid™

Microbact™

12L así

como 

por las descritas por el método 

ISO de referencia.

FIGURA 1. El Sistema Thermo Scientific SureTect 

© 2013 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. Performance Tested Methods is a service mark of AOAC‐RI.  All other 

trademarks are the property of Thermo Fisher Scientific Inc and its subsidiaries. This information is not intended to encourage 

use of these products in any manner that might infringe the intellectual property rights of others.

Folio number LT2086A, 05/13

.

Validación del Método Thermo Scientific SureTect Real-Time PCR para la detección de Listeria monocytogenes en Alimentos y Muestras medioambientales

Jonathan Cloke1, Carlos Leon-Velarde2, Nathan Larson2, Keron Dave2, Helen Simpson1, Craig Hopper1, Katharine Evans1, David Crabtree1, Annette Hughes1, Milena Oleksiuk1, Sophie Withey1

1Thermo Fisher Scientific, Basingstoke, Hampshire, RG24 8PW, UK and 2Agriculture and Food Laboratory, University of Guelph, Guelph, Ontario, N1H 8J7, Canada

Matriz/microorganismo 

inoculadot y serotypoNivel

MPN/

25g

No. 

Porciones 

del testISO

SureTect

Presun* Con*

Melon CantaloupeL. monocytogenes 3c

Bajo 0.70 20 11 13 13

Alto 3.00 5 5 5 5

Salami L. monocytogenes 1/2a

Bajo 0.29 20 4 10 11

Alto 0.40 5 3 4 4

Salmón ahumadoL. monocytogenes 

Bajo 0.60 20 8 7 8

Alto 1.25 5 2 4 4

Espinacas frescasL. monocytogenes 3b

Bajo 0.38 20 6 8 8

Alto 0.39 5 5 5 5

Pavo cocidoL. monocytogenes 4b

Bajo 1.06 20 12 19 19

Alto 4.37 5 5 4 4

Salchichas de cerdoL. monocytogenes 4e

Bajo 0.72 20 9 14 14

Alto 1.00 5 5 5 5

HeladoL. monocytogenes 1/2b

Bajo 0.24 20 1 12 12

Alto 0.64 5 0 4 4

Gambas cocidasL. monocytogenes 4b

Bajo 1.00 20 14 15 15

Alto 1.88 5 4 4 4

Queso procesadoL. monocytogenes 1/2a

Bajo 0.53 20 9 6 6

Alto 1.48 5 4 4 4

Carne cruda  picada  de 

terneraL. monocytogenes 1/2c

Bajo 1.13 20 14 13 13

Alto 1.88 5 4 4 4

Superficie acero inoxidableL. monocytogenes 3a

Bajo N/A 20 12 11 11

Alto N/A 5 4 5 5

Superficie de plásticoL. monocytogenes 3a

Bajo N/A 20 15 16 16

Alto N/A 5 5 4 4

FIGURA 3. Resultados por ISO y SureTect  durante el desarrollo 

del  método

Matrix/Inoculating Organism

Level MPN/ 25g

No. Test portions

ISO SureTect

Presum* Con*

Salchichas de cerdo L. monocytogenes 4b

Bajo 0.59 20 8 12 12

Alto 2.97 5 5 5 5

Lechuga frescaL. monocytogenes 4b

Bajo 0.37 20 5 10 10

Alto 2.19 5 5 5 5

Superficie acero inoxidableL. monocytogenes 1/2a

Bajo N/A 20 8 8 8

Alto N/A 5 4 5 5

Resultados

Inclusividad

Los  53 cultivos de L. monocytogenes  de distintos serotipos

fueron detectados  con  el ensayo y software

SureTect.

Exclusividad

Las    38 

cepas, 

fueron    detectados    como 

no‐

Listeria  

monocytogenes

con el ensayo y software SureTect.

Análisis  des las Matrices Alimentarias

Durante 

el 

desarrollo 

del 

método, 

se 

constató

una 

diferencia 

estadísticamente 

significativa, 

mediante    análisis 

de 

la 

probabilidad 

de 

detección    (POD),   para    las 

matrices 

de 

salami, 

salmón 

ahumado, 

espinacas, 

pavo 

cocido 

loncheado, 

salchichas 

de 

cerdo, 

helado, 

gambas 

cocidas 

y 

acero 

inoxidable 

a 

favor 

del 

método   SureTect 

y 

en 

salchichas 

de 

cerdo 

y 

lechuga 

durante 

el 

estudio 

del 

laboratorio 

independiente, 

demostrando 

que 

el 

ensayo    SureTect 

Listeria 

monocytogenes    es 

más 

fiable 

que 

le 

método de referencia ISO para la detección de contaminación por  

L. 

monocytogenes 

en 

muestras 

de 

alimentos 

y 

superficies.     Los 

resultados 

para 

el 

resto 

de 

las 

matrices 

no 

mostraron 

una 

diferencia 

estadísticamente 

significativa 

por 

análisis 

POD 

entre 

los métodos  ISO y SureTect. 

* Presumptive (Presum) and Confirmed (Con) SureTect results

*Resultados  presuntivos (Presun) y  confirmados (Con) por SureTect 

FIGURA 4. Resultados del Laboratorio Independente por 

métodos  ISO y  SureTect para  Listeria monocytogenes. 

Método de referencia ISO

Todos 

los 

experimentos 

fueron 

llevados 

a 

cabo 

según 

las 

especificaciones 

técnicas    indicadas 

en 

el 

método 

de 

referencia

ISO 

11290‐1:1996, 

incluída 

la 

Modificación 

1:2004 

y 

empleando 

el Agar Oxford como medio secundario 

de siembra 

y 

las 

pruebas 

confirmatorias 

de 

tinción 

de 

Gram, 

catalasa, 

hemólisis, 

prueba  

CAMP , ramnosa y xilosa.

Inclusividad

Se 

emplearon 

53 

cultivos 

puros 

de 

L. 

monocytogenes 

de   todos 

los serotipos conocidos  excepto el 4ab,  incubados en el caldo 24 

LEB, 

suplementado de 

forma 

selectiva, 

y a una concentración 

de 

104 CFU/ml con el método SureTect.

Exclusividad

Se 

inocularon 

38    cultivos 

puros    en 

Caldo 

Triptona 

Soja 

y 

se 

analizaron 

a 

una 

concentración 

aproximada   de   108CFU/ml 

con  

el ensayo SureTect y siguiendo las especificaciones del Programa 

Performance Tested  de AOAC‐RI.

FIGURA 2. Flujo de trabajo del ensayo SureTect . 

Añadir  10µl  de Proteinasa K y 10µl del Reactivo 

de Lisis 2 al tubo de lisis de SureTect que contiene 

predispensado el Reactivo Lisis 1

Añadir  10µl de la muestra enriquecida en  24 LEB 

Lisar la muestra 37°C 10 min seguido de 95°C  5 min

Añadir 20µl de lisado al tubo  de PCR SureTect  

(incluye el reactivo liofillizado)

Analizar las muestras en el equipo PikoReal

daniele.sohier@adria.tm.fr

Significance The Thermo ScientificTM SureTectTM Listeria monocytogenes species Real-Time PCR Assay is a reliable method for Listeria

monocytogenes detection in food and environmental samples, and offers important economic savings by reducing time to result and handling time.

Introduction The Thermo ScientificTM SureTectTM Listeria monocytogenes species Real-Time PCR Assay is a new detection method based on

real-time PCR. The oligonucleotides target unique DNA sequences found only in the analyte and use PCR technology to amplify and detect them. If

present, the target DNA is amplified and the increasing fluorescent signal is detected by the Thermo Scientific PikoReal Real-Time PCR instrument and

interpreted by the Thermo Scientific SureTect.

Method comparison studyRelative accuracy, relative specificity and

relative sensitivity study

339 samples were analyzed. The paired data

below show 26 negative deviations and

34 positive deviations. The performances of the

compared methods are equivalent:

10 laboratories from various European countries

were involved. Cheese was inoculated with

L. monocytogenes.

The paired data, the relative accuracy,

sensitivity, specificity, as well as the

accordance, concordance and odds ratio clearly

show that the alternative method precision is

equivalent to the ISO method:

Performance Assessment of the Thermo ScientificTM SureTectTM

Listeriamonocytogenes Real-Time PCR Assay according to

the ISO 16140 Standard for Listeria monocytogenes Detection

in Food and Environmental SamplesJ. Baguet, M. Bernard, C. Bernez, C. Le Doeuff, S. Peron, M. Rannou, D. Sohier

ADRIA, expert laboratory at AFNOR certification, AOAC-RI and MicroVal

Purpose An independent study was conducted at ADRIA, to validate this new method in comparison to the ISO 11290-1 standard, as part of the NF

Validation approval process and according to the ISO 16140 standard.

Inter-laboratory study

Alternative

method

ISO 11290-1

Reference method TOTAL

+ -

+ PA = 152 PD = 2 154

- ND = 6 NA = 80 86

TOTAL 158 82 240

PA :Positive Agreement NA: Negative Agreement

PD: Positive Deviation ND: Negative Deviation

Alternative

method

ISO 11290-1

Reference method TOTAL

+ -

+ PA = 97 PD = 34 131

- ND = 26 NA = 182 208

TOTAL 123 216 339

PA :Positive Agreement NA: Negative Agreement

PD: Positive Deviation ND: Negative Deviation

Relative detection levels

Various (matrix/strain) pairs were tested, with

4 inoculation levels. The relative detection limits

of the alternative method vary from 0.2 to

1.2 CFU/25 g, those of the ISO standard vary

from 0.2 to 1.1 CFU/25 g:

Matrices

Relative detection levels

Reference

method

Alternative

method

Rillettes 0.3 [0.2 ; 0.5] 0.5 [0.3 ; 0.9]

Smoked salmon 0.4 [0.2 ; 0.7] 0.3 [0.2 ; 0.5]

Raw milk 0.4 [0.2 ; 0.8] 0.6 [0.3 ; 1.2]

Produces 0.6 [0.3 ; 1.1] 0.6 [0.4 ; 1.0]

Process water 0.5 [0.4; 0.8] 0.6 [0.5 ; 0.8]

Inclusivity / exclusivity

30 non target strains and 50 target strains were tested. No cross reaction was observed with the non

target strains, all the Listeria monocytogenes strains were detected.

N° attestation UNI 03/08-11/13

ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS

FOR THE FOOD INDUSTRY

www.afnor-validation.com