Studies on the Dose-effect Relationship and P harmacokinetics of Weichang’an pill

Studies on the Dose-effect Relationship and Pharmacokineticsof

Weichang’an pill

Studies on the Dose-effect Relationship and Pharmacokineticsof

Weichang’an pill

Advisor ： Prof. Gao WenyuanMaster candidate ： Qu Zhuo Date ： 2013-06-22

1

胃肠安丸的研究进展

2

胃肠运动机制

3

中药对胃肠运动的调节作用

Review

Weichang’an Pill , a

traditional Chinese

medicine (TCM) formula,

has been used to treat

irritable bowel syndrome

and functional diarrhea for

several decades.

Review

抗腹泻作用对平滑肌的作用抗炎镇痛作用抑菌抗轮状病毒的作用抗内毒素作用，安全性评价

对泻下的蒽醌类成分，胃肠安丸甲醇提取物，巴豆霜中的脂肪油类成分和二萜类成分均进行过分析。胃肠安丸甲醇提取物中的68 个化合物，对其中的 41 个化合物进行了结构鉴定

小肠消化酶：乳酸脱氢酶（ LDH ）、苹果酸脱氢酶（ MDH ）和乳糖酶活性胃肠激素：血管活性肽（ VIP ）、 P 物质（ SP ）Na+-K-+ATPase活力近端结肠组织AQP4 表达

化学成分药效学作用机制

气相色谱 -电子捕获检测 (GC-ECD) 法测定 5个不同批次胃肠安丸中六六六(BHC) 、滴滴涕(DDT) 和五氯硝基苯 (PCNB)3种有机氯农药残留

其他

胃肠安丸的研究进展Review 1

胃肠运动机制

平滑肌收缩

腹泻作用机制

Review 2

target

AQP4Na+-K+-ATPase

Substance P （ SP）

vasoactive intestinal peptide （ VIP）

inducible nitric oxide synthase （ iNOS)

Na+/H+ exchange 3 (NHE3)

Targets of anti-diarrheaReview

Review

Sigrid Elsenbruch. 2011. Abdominal pain in Irritable Bowel Syndrome: A review of putative psychological, neural and neuro-immune mechanisms. Brain, Behavior, and Immunity 25, 386–394

Ref.

中枢神经系统

自主神经系统

肠神经系统

神经内分泌系统

激素释放

肠平滑肌纤维

平滑肌细胞

（离子通道： Ca2+ 、 K+ 、 Na+ ）

Ca2+ channels

Dopamine receptors

Acetylcholine receptors

5-HT receptors

Targets of smooth muscle contraction and relaxationReview

target Ca2+ channels

Acetylcholine receptors

钙离子在平滑肌细胞收缩中的作用

平滑肌收缩

钙离子通道多种机制

细胞膜外 Ca2+ 肌浆网 Ca2+

细胞浆游离 Ca2+↑

启动平滑肌收缩装置

Review

戴芸 , 刘新光 , 谢鹏雁 , 等 . 钙稳态失衡在致结肠平滑肌收缩性改变中的作用 .中华内科杂志 .2003,42(9):615-617Kenton M. Sander. Mechanisms of calcium handling in smooth muscles. Journal of Applied Physiology . 2001,91: 1438–1449,.

The relationship between calcium homeostasis and intestinal smooth muscle contraction

Review

戴芸 , 刘新光 , 谢鹏雁 , 等 . 钙稳态失衡在致结肠平滑肌收缩性改变中的作用 .中华内科杂志 .2003,42(9):615-617Kenton M. Sander. Mechanisms of calcium handling in smooth muscles. Journal of Applied Physiology . 2001,91: 1438–1449,.

Concentration of[Ca2 +]i↑

Concentration of[Ca2 +]i ↓Intracellular Ca2 + release Na+/Ca2+exchange

calcium pump

Extracellular Ca2 + influx

Intracellular stores of Ca2 + release

Extracellular Ca2 + influx

Smooth Muscle

contraction

Smooth muscle relaxation

Ching-Chung Tsai, Shih-Che Huang, Jong-Kang Liu, Hsiu-Chuan Wang, Tong-Rong Tsai, Ping-Ju Tsai, Ching-Wen Liu, Li-Ching Chang . Salvia miltiorrhiza causes tonic contraction in rat ileum through Ca2+-calmodulin pathway. Journal of Ethnopharmacology, Volume 142, Issue 3, 1 August 2012, Pages 694-699

Review Ca 2+ channels

Review

Najeeb-ur-Rehman, SamraBashir, AdnanJ.Al-Rehaily, Anwarul-HassanGilani. Mechanisms underlying the antidiarrheal, antispasmodic and bronchodilator activities of Fumaria parviflora and involvementoftissueand species specificity. Journal of Ethnopharmacology 144 (2012) 128–137.

This study showing the presence of antidiarrheal, antispasmodic and bronchodilator activities in Fumaria parviflora possibly mediated through dual blockade of muscarinic receptors and Ca2+ channels

Ca 2+ channels

P. Mandl, J.P. Kiss. Role of presynaptic nicotinic acetylcholine receptors in the regulation of gastrointestinal motility. Brain Research Bulletin 72 (2007) 194–200

（ A ） Active state ： the ACh release is increased, therefore the smooth muscle contraction and the gastrointestinal motility is enhanced.

（ B ） Inactive state ： the ACh release is decreased and the smooth muscle contraction is reduced. This might lead to the development of constipation.

Acetylcholine receptorsReview

中药对胃肠运动的影响

复方对胃肠运动的影响

单味药材对胃肠运动的影响

单体对胃肠运动的影响

Review 3

中药对胃肠运动的作用促进作用抑制作用双向调节作用

单体药根碱、 β- 桉叶油醇、厚朴酚、氢溴酸槟榔碱、槲皮素、木香烃内酯、

橙皮内酯、姜黄素

吴茱萸碱甘草香豆素

大黄素去氢木香烃内酯

药材黄芪、甘草、生姜、大黄、枳实、木香、莱菔子、芒硝、蒲公英、泻叶、栀子、莪术、白术、白芍、白萝卜、一枝蒿、藿香

黄连、党参、黄瓜香、防风

白术、黄芩、巴豆霜、厚朴、陈皮、石斛、苦荞、檀香

复方

润滑肠道丸、大建中汤、复方樟脑汀、大承气汤、旋覆代赭汤、保和丸、胃动灵胶囊、消痞舒胃口服液、胃肠舒泰颗粒、胃消合剂、黄芪建中汤、藿香正气液、复方陈香胃片、气滞胃痛颗粒、四磨汤口服液、胃复力、胃痛

消痞方、消食和胃冲剂

痛泻要方、芍药甘草汤、白术黄芪新方、参苓白术散、参香养胃

胶囊

四君子汤、半夏泻心汤、四逆散、枳实消痞丸、补中益气汤、安胃丸、白术芍药散、藿香正气口服液、桂枝汤、和胃汤、黄厚排气颗粒、香

砂六君颗粒

Review

胃肠安丸胃肠运动机制

中药对胃肠运动的作用

胃肠安丸体内的抗腹泻作用主要针对正常小鼠和新斯的明引起的胃肠功能亢进小鼠来评价；体外的解痉作用主要是从药物对不同的受体和 Ca2+ 通道的作用进行，把量效与靶点结合，进行简单的机制研究，这也是我们体外研究所包含的内容。

研究内容

Conclusion

Experiment

胃肠安丸量效学胃肠安丸量效学的研究的研究

体外研究

入血成分分析

体内研究

离体肠平滑肌收缩实验

采用血清药物化学手段，对典型量效的入血成分进行分析。

酚红实验

炭末推进实验

.

.

实验进展实验进展

Ach 5-HT

红色 -已完成，蓝色 -正在进行

Ca2+ 通道

酚红实验

实验方法实验方法

胃排空率 (%)

小肠推进率 (%)

小肠推进相对百分率 (%)

=(1-A 胃内酚红 /A 基准酚红 )×100%

= 酚红前进的距离 /小肠的全长×100%

= A 小肠某段酚红 /A 小肠各段酚红之和 ×100%

观察指标

95

%O

2+5

%C

O2

换能器

标本槽

台式液（ 37℃ ）

实验方法实验方法

离体肠平滑肌收缩实验

WCA pill

对正常小鼠肠推进的影响：给药剂量的增大，促进肠推进。对正常小鼠胃排空的影响：在整个给药剂量范围内，胃排空均受到抑制；当给药剂量为 0.8 、 1.6 、 3.2 g/kg时，与正常组比较，抑制作用显著。

实验实验胃肠安丸对正常小鼠肠推进和胃排空的影响

Fig. 1. Effects of different doses of ME on gastrointestinal transit and gastric emptying in normal mice. Compared with normal mice: * P<0.05 or ** P<0.01

对新斯的明小鼠肠推进的影响：小剂量 0.05-0.8 g/kg的给药剂量时，促进肠推进；继续增大给药剂量，抑制肠推进。对新斯的明小鼠胃排空的影响：在整个给药剂量范围内，胃排空均受到抑制；当给药剂量为 1.6 、 3.2 g/kg时，与模型组比较，抑制作用显著。

实验实验

Fig. 2. Effects of different doses of ME on gastrointestinal transit and gastric emptying in neostigmine mice. Compared with neostigmine mice: * P<0.05 or ** P<0.01

胃肠安丸对新斯的明小鼠肠推进和胃排空的影响

分组剂量(g/kg)

胃排空率(%)

肠推进率(%)

相对百分率 (%)

第一段第二段第三段第四段第五段

空白对照 CMC-Na 73.12±7.34 63.05±5.91 15.96±6.10 15.09±6.29 40.93±5.26 24.26±4.50 3.74±1.79

给药组

0.05 71.84±6.73 65.58±6.93 14.42±4.45 19.87±5.04 33.44±6.56 22.25±5.32 10.01±2.75**

0.1 68.71±6.90 69.20±5.11 12.87±6.55 16.34±6.77 28.10±5.18 26.22±4.14 16.47±5.34**

0.2 66.88±5.00 68.83±6.56 14.72±7.86 14.96±3.00 24.88±5.31 30.18±3.26* 15.23±2.67**

0.4 70.03±3.91 68.54±5.28 13.21±5.17* 13.43±5.08 25.85±4.05 29.44±7.34* 18.08±9.83**

0.8 45.82±6.65** 77.25±7.50** 17.77±7.15 10.09±4.64 25.87±6.55 32.15±6.59* 14.14±2.53**

1.6 9.70±5.20** 76.63±4.04** 22.12±10.13 10.65±9.17 36.69±9.91 22.08±4.78 8.48±4.55

3.2 36.13±10.87** 79.63±12.09** 17.62±8.90 18.97±7.68 24.34±4.89 26.18±7.89 12.88±9.10*

Table 1. Effects of different doses of WCA on gastrointestinal transit in normal mice.

Compared with normal mice: * P<0.05 or ** P<0.01

实验实验胃肠安丸对正常小鼠肠推进的影响

对正常小鼠：空白对照组中酚红主要集中在第 3段；给予不同剂量WCA后，酚红在小肠内的推进情况有所不同，小剂量时，酚红主要集中在第 4 、 5段；大剂量时，与空白对照组无显著性差异。

分组剂量(g/

kg)

胃排空率(%)

肠推进率(%)

相对百分率 (%)

第一段第二段第三段第四段第五段

空白对照 CMC-Na 73.11±9.58* 63.06±5.91** 15.96±0.95 15.10±4.55** 40.94±3.25** 24.28±2.85* 3.73±2.07*

新斯的明 1*10-4 81.67±6.77 85.43±6.70 17.89±3.55 25.02±7.27 27.59±9.77 18.39±5.41 11.11±2.58

给药组

0.05 81.36±5.24 84.21±13.77 12.65±6.76* 21.44±3.78 32.96±4.42* 21.15±5.71 11.92±4.64

0.1 76.13±6.05 86.18±8.98 12.12±2.41* 26.97±5.11 25.15±5.62 21.04±6.21 14.70±2.45

0.2 79.73±6.43 88.80±8.06 10.96±3.67* 24.13±6.58 20.50±7.82 20.79±6.34 23.62±6.47**

0.4 79.04±8.93 92.86±7.14 11.75±6.24* 23.16±4.30 31.87±8.18 19.80±9.75 13.42±13.42

0.8 80.73±6.22 96.74±6.04* 10.87±3.87* 19.66±6.02 31.22±3.11 28.06±3.53** 10.1±8.05

1.6 55.15±6.95** 69.91±7.56* 19.65±8.26 25.43±7.30 36.53±2.03* 9.62±5.87* 8.75±8.38

3.2 60.91±5.98** 76.45±9.96* 16.36±3.07 21.35±3.63 23.29±2.97 23.30±4.44 15.69±3.89

Table 2. Effects of different doses of WCA on gastrointestinal transit in neostigmine mice.

Compared with neostigmine mice: * P<0.05 or ** P<0.01

实验实验胃肠安丸对新斯的明小鼠肠推进的影响

对新斯的明小鼠：模型组中的酚红在第 1 、 2 、 3 、 4 和 5段都有分布；给予小剂量WCA后，与模型组比较，第 1段的酚红量增加；当给药剂量增大到 1.6 g/kg 时，第 3段的酚红量增加，第 4段酚红量减少说明此剂量对肠推进有抑制作用。

Fig. 3. Effects of different polar parts extracted from WCA pill on Ach-induced contraction of rat-isolated jejunum (A) average tension (B) inhibition.

对 Ach引起的离体空肠平滑肌异常收缩的影响：不同极性部位的胃肠安丸对空肠的异常收缩均有抑制作用；随着极性的增大，抑制作用减弱。

A B

实验实验不同极性部位胃肠安丸对空肠平滑肌的影响

图 1 胃肠安丸 HPLC-MS分析色谱图 .

图 2胃肠安丸对照品 HPLC-MS

分析色谱图 .

(A) 正离子模式下总离子流色谱图(B) 负离子模式下总离子流色谱图(C)正离子模式下多级质谱色谱图(D) 负离子模式下多级质谱色谱图(E) 230nm波长条件下液相色谱图 .

(F) 254nm波长条件下液相色谱图 .

(G) 280nm波长条件下液相色谱图 .

1

2

Time （ min） A:acetonitrile-methanol

（ %）

B:0.5% acetic acid （ %）

0 5 95

15 22.5 77.5

35 22.5 77.5

41 25.6 74.4

56 58 42

71 58 42

100 80 20

120 100 0

色谱条件色谱柱： Kromasil （ 250 mm×4.6mm I.D.，粒径 5 μm）；微量进样器（ 25 μL ， Hamilton）；流动相： A：乙腈 -甲醇（ 50 ： 8）， B ： 0.5%醋酸水溶液，梯度洗脱条件见表 2-1；柱温： 35 ℃；流速： 1mL/min；检测波长：230 nm ， 254 nm ， 280 nm。

质谱条件m/z扫描范围： 100 ～ 1000 u；干燥气温度： 325 ℃；干燥气流速： 10.0 L/min；雾化气压力： 27.6 Pa；离子化方式： ESI （ +）和 ESI （ -）；电喷雾电压： 3500 V。

流动相梯度洗脱程序

张静泽，高文远，刘振，等 . 胃肠安丸化学成分分析 [J]. 药物评价研究 . 2010,33(2):116-120.

典型量效的入血成分和代谢物的分析

为了避免血浆中的内源性杂质的干扰，实验中考察了不同血浆样品处理方法处理。血浆蛋白沉淀以甲醇、乙腈沉淀除蛋白；液液萃取；固相萃取小柱处理四种方法进行处理，比较萃取回收率及基质干扰。

固相萃取小柱处理

001-0101.D: TIC +All MS

001-0101.D: TIC -All MS0

1

2

3

7x10Intens.

0.00

0.25

0.50

0.75

1.00

7x10Intens.

0 20 40 60 80 100 120 Time [min]

002-0201.D: TIC +All MS

002-0201.D: TIC -All MS0.0

0.5

1.0

1.5

2.0

8x10Intens.

0.0

0.5

1.0

1.5

7x10Intens.

0 20 40 60 80 100 120 Time [min]

003-0301.D: TIC +All MS

003-0301.D: TIC -All MS0.0

0.2

0.4

0.6

0.8

1.0

8x10Intens.

0.0

0.5

1.0

1.5

7x10Intens.

0 20 40 60 80 100 120 Time [min]

典型量效的入血成分和代谢物的分析

(A) 胃肠安丸甲醇提取物 HPLC-MS 色谱图； (B) 空白血样HPLC-MS 色谱图； (C) 胃肠安丸甲醇提取物给药后血样HPLC-MS 色谱图 .

A

B

C

实验实验不同浓度胃肠安丸对空肠平滑肌自主性收缩的影响

Fig. 4. Effects of different concentration s of ME on contraction of jejunum

对离体空肠平滑肌自主性收缩的影响：在 0.01-2.0 mg/mL浓度范围内呈剂量依赖性； 2.0 mg/mL 、 4.0 mg/mL 和 6.0 mg/mL这三个浓度下的抑制率和张力值无显著性差异，出现平台期。

实验实验不同浓度胃肠安丸对空肠平滑肌的影响（ 5-HT-induced ）

Fig. 5. Effects of different concentration s of ME on 5-HT-induced contraction of jejunum (A) inhibition.(B)average tension.

A B

对 5-HT引起的离体空肠平滑肌异常收缩的影响：在 0.01-6.0 mg/mL浓度范围内呈剂量依赖性 :随着加药浓度的增大，张力值减小，抑制率增大。

对 Ach引起的离体空肠平滑肌异常收缩的影响：在 0.01-2.0 mg/mL浓度范围内呈剂量依赖性；当加药浓度为 2.0 mg/mL时，对平滑肌的收缩作用抑制最强； 2.0 mg/mL 、 4.0 mg/mL 和 6.0 mg/mL这三个浓度下的抑制率和张力值无显著性差异，出现平台期。

实验实验不同浓度胃肠安丸对空肠平滑肌的影响（ Ach-induced ）

Fig. 6. Effects of different concentration s of ME on Ach-induced contraction of jejunum (A) inhibition.(B)average tension.

A B

实验实验不同浓度胃肠安丸对空肠平滑肌的影响(KCl-induced ）

Fig. 7. Effects of different concentration s of ME on KCl-induced contraction of jejunum (A) inhibition.(B)average tension.

A

对 KCl引起的离体空肠平滑肌异常收缩的影响：在 0.01-2.0 mg/mL浓度范围内呈剂量依赖性；当加药浓度为 2.0 mg/mL时，对平滑肌的收缩作用抑制最强；继续增大加药剂量，抑制率降低。

实验实验不同浓度胃肠安丸对空肠平滑肌的影响（ CaCl2-induced ）

Fig. 8. Dose–effect curves of CaCl2 on rat-isolated jejunum in the absence ( ) and in the presence of ◆the methanol extract of WCA pill ( 0.01 mg/ml▲; 0.02 mg/ml●; 1 mg/ml 〤 ; 2 mg/ml ) and ∣verapamil (■).

四个浓度的WCA使得CaCl2量效曲线右移，和阻滞剂的行为一致，推测WCA对肠道平滑肌的作用和 Ca2+通道有关。

配伍后成分药代动力学胃肠安丸组方中药味配伍药动学

胃肠安丸

Pharmacokinetics

O

O

Dehydrodehydrocostus lactone

Costunolide

木香


Study on Pharmacokinetics

HPLC-MS analysis

Marker

i.g.

木香

Sesquiterpenes


IS: [M+H]+ m/z: 285Dehydrodehydrocostus lactone

Costunolide

C15H20O2+H+ C15H21O2+ C15H19O+ C14H19

+ Costunolide m/z 233 m/z 215 m/z 187

-H2O -CO

C15H18O2+H+ C15H19O2+ C15H17O+ C14H17

+ Dehydrodehyrocostuslacton m/z 231 m/z 213 m/z 185

-H2O -CO


Figure 1. MS spectrum of

costunolide, dehydrocostuslactone

and IS, the quantifier ions m/z

transitions for costunolide,

dehydrocostuslactone and IS were

233187, 231185, 285193,

respectively.


为了避免血浆中的内源性杂质对所检测血样中木香烃内酯和去氢木香内酯的干扰，实验中考察了不同血浆样品处理方法处理。血浆蛋白沉淀以甲醇、乙腈沉淀除蛋白；液液萃取；固相萃取小柱处理四种方法进行处理，比较萃取回收率及基质干扰。



Figure 2. Representative of A and B stand for the blank plasma and blank plasma spiked with the standards. a: MRM spectrums of costunolide; b: MRM spectrums of dehydrocostuslactone; c: MRM spectrums of IS.


No. ComponentsRegression

equationR2

Linear

range

（ ng/m

L）

LOD

（ μg/m

L）

LOQ

（ μg/m

L）

1 Costunolide y = 6.754x – 4.568 0.9978 0.70-769.70 0.0106 0.702

2Dehydrocostu

slactoney = 0.792x - 0.109 0.9979 0.90-956.00 0.0236 2.51

Table 1 Statistics results of linear regression equation analysis in the determination of the markers.


Table 2 Precision and accuracy of the assay for costunolide and dehydrocostuslactone in rat plasma.

Components

Spiked

concentration

（ ng/mL）

Inter-day Intra-day

Measured

Concentration

(µg/mL,

mean±S.D.)

RE

%

RSD

/%

Measured

Concentration

(µg/mL, mean

±S.D.)

RE

%

RSD

/%

Costunolide

6.01 5.96 7.15 -0.92 5.80 8.86 3.44

48.11 47.41 5.50 -1.45 47.15 6.82 2.00

384.85 375.72 3.52 -2.37 365.55 7.28 5.01

Dehydrocostu

slactone

7.47 7.93 5.28 6.14 7.87 4.46 -5.3559.75 59.98 8.76 0.38 60.37 9.70 -1.04

478.00 470.78 6.93 -1.51 467.68 8.92 2.16


Table 3 Stability of costunolide and dehydrocostuslactone in rat plasma.

Components

Concentration

added

(µg/mL)

Accuracy (%, mean±S.D.)

24 h at room

temperature

Freeze-thaw cycles

3 times

30 days storage

at -20 ℃

Costunolide

6.01 97.84±6.48 99.89±5.00 92.01±8.78

48.11 97.93±3.49 98.45±4.62 104.36±9.46

384.85 99.89±5.42 100.76±7.13 98.18±6.99

Dehydrocostuslactone

7.47 101.03±5.41 100.09±5.78 99.06±4.74

59.75 99.85±3.64 98.80±7.32 99.85±3.64

478.00 100.52±4.42 98.00±5.67 100.52±4.42


Table 4 Recovery of costunolide, dehydrocostuslactone and IS in rat plasma.

Components

Spiked

concentration

（ ng/mL）

Recovery

(%)

RSD

(%)

Costunolide

6.01 76.23±3.07 92.22±3.78

48.11 77.74±6.79 93.20±2.42

384.85 77.39±3.98 92.67±4.59

Dehydrocostuslactone

7.47 82.85±2.79 93.14±2.15

59.75 82.57±2.95 91.34±3.60

478.00 80.04±3.13 91.23±3.60


Fig. HPLC-MS chromatogram after oral administration of Radix Aucklandiae at 1 h.(A) Costunolide; (B) Dehydrocostuslactone.

A

B


Figure 4. Time-concentration curve for costunolide (A) and dehydrocostuslactone (B) after a single dose of

oral administration of RA.


Parameter Co De

Ke(1/h) 0.071 0.328

Ka(1/h) 0.13 0.522

t1/2(ka) (h) 5.54 1.326

t1/2 (ke) (h) 9.74 2.108

Tmax(peak) (h) 10.46 2.391

Cmax(ng/ml) 10.44 15.339

AUC( (ng/ml)*h) 308.83 44.512

CL/F(s) (mg/h/(ng/ml)) 0.0032 0.0317

V/F(c) ((mg)/(ug/ml)) 0.046 0.0186

Table 5. Pharmacokinetic parameters of costunolide (Co) and dehydrocostuslactone (De) after i.g. administration of RA.

Fig. Mean plasma concentration-time profiles of Costunolide (A) ; Dehydrocostuslactone (B) after oral administration of WCA pill.

Time Time

A B

Pla

sma

con

cen

trat

ion

(ng/

mL

)

Pla

sma

con

cen

trat

ion

(ng/

mL

)



胃肠安丸

Pharmacokinetics

OH

厚朴

Honokiol （ Ho）

Magnolol （ Ma）


Figure 1. Parent and product ion mass spectra (ESI-) and ion structure of magnolol, honokiol and IS.


为了避免血浆中的内源性杂质对所检测血样中和厚朴酚及厚朴酚的干扰，实验中考察了不同血浆样品处理方法处理。血浆蛋白沉淀以甲醇、乙腈沉淀除蛋白；液液萃取；固相萃取小柱处理四种方法进行处理，比较萃取回收率及基质干扰。



Figure 2. Chromatography of magnolol, honokiol and IS in rat plasma with LC-MS/MS. A: the blank plasma; B: the blank plasma spiked with the standards; C: the plasma sample after 1 h oral administration of WCA. a: TIC chromatogram in negative ESI mode; b: MRM spectrums of honokiol; c: MRM spectrums of magnolol; d: MRM spectrums of IS.


No

.Components Regression equation R2

Linear

range

（ ng/m

L）

LOD

（ μg/m

L）

LOQ

（ μg/m

L）

1 Honokiol y = 8.551x – 0.0437 0.9975.25-

1344.00

2 Magnolol y = 13.738x -

0.070530.998

18.064-

5429.69

Table 1 Statistics results of linear regression equation analysis in the determination of the markers.


Table 2 Precision and accuracy of the assay for honokiol and magnolol in rat plasma.

Components

Spiked

concentration

（ ng/mL）

Inter-day Intra-day

测定值RE

%

RSD

/%测定值

RE

%

RSD

/%

Honokiol

10.50 9.80 6.14 -6.68 10.31 7.92 1.79

84.00 85.74 2.90 2.08 83.77 3.14 0.27

672.00 675.72 1.96 0.55 669.94 3.70 0.31

Magnolol

32.47 31.76 5.48 -2.18 32.74 5.15 -0.84

342.63 351.64 4.26 2.63 358.00 2.62 -4.48

2785.00 2604.11 7.07 -6.50 2711.27 6.94 2.65


Table 3 Stability of honokiol and magnolol in rat plasma.

Components

Concentration

added

(µg/mL)

Accuracy (%, mean±S.D.)

24 h at room

temperature

Freeze-thaw

cycles 3 times

30 days storage at

-20 ℃

Honokiol

10.50 97.84±6.48 99.89±2.73 92.01±8.78

84.00 97.93±3.49 98.45±4.03 104.36±9.46

672.00 99.89±5.42 100.76±4.68 98.18±6.99

Magnolol

32.47 101.03±5.41 100.09±3.12 99.06±4.74

342.63 99.85±3.64 98.80±1.20 99.85±3.64

2785.00 100.52±4.42 98.00±1.08 100.52±4.42


Table 4 Recovery of honokiol and magnolol in rat plasma.

Components

Spiked

concentration

（ ng/mL）

Recovery

(%)

RSD

(%)

Honokiol

10.50 86.23±2.71 92.22±3.78

84.00 86.07±2.07 93.20±2.42

672.00 84.72±5.76 94.01±4.59

Magnolol

32.47 80.19±3.01 91.81±2.15

342.63 81.91±2.08 93.67±3.60

2785.00 84.71±3.33 91.23±3.60

IS


Figure 3. Time-concentration curve for magnolol (A) and honokiol (B) after three doses (0.4, 0.8, 1.6) of oral

administration of the extract of WCA.


Parameter

Honokiol Magnolol

Dose 0.4

(g/kg)

Dose 0.8

(g/kg)

Dose 1.6

(g/kg)

Dose 0.4

(g/kg)

Dose 0.8

(g/kg)

Dose 1.6

(g/kg)

Ke(1/h) 0.169 0.0733 0.181 0.000626 2.153 16.267

Ka(1/h) 0.672 1.911 1.218 1.397 0.166 0.631

t1/2(ka) (h) 1.031 0.363 0.569 0.472 4.181 1.097

t1/2(ke) (h) 4.094 9.453 3.818 2.361 0.322 0.0426

T(peak) (h) 1.424 1.391 0.943 0.779 1.705 0.546

C(max) (ng/ml) 996.356 1170.9 2330.92 189.873 381.422 1469.43

AUC( (ng/ml)*h) 17100 25025 30998 758232 3055.56 11211.8

CL/F(s) (mg/h/(ng/ml)) 0.0187 0.00128 0.00103 0.0000422 0.0104 0.0028

V/F(c) ((mg)/(ng/ml)) 0.137 0.0472 0.0670 1.824 0.00737 0.0889

MRT 59.607 34.652 54.695 43200.7 0.698 24.011

Table 5. Pharmacokinetic parameters of honokiol and magnolol after i.g. administration of different doses of WCA.


Figure 3. Time-concentration curve for magnolol (A) and honokiol (B) after oral administration of the extract of HP and WCA.

A B

厚朴药材及胃肠安丸给药后厚朴酚及和厚朴酚体内药代动力学比较

Time

Pla

sma

con

cen

trat

ion

Time

Pla

sma

con

cen

trat

ion


Figure 4. Time-concentration curve for magnolol after oral administration of pure monomer, the extract of HP and WCA.

厚朴酚单体、厚朴药材及胃肠安丸给药后厚朴酚体内药代动力学比较

Time

Pla

sma

con

cen

trat

ion

总结总结

体外肠平滑肌收缩实验

在 Ach 和 KCl诱导的离体空肠异常收缩的的实验中， 2 mg/mL加药浓度下的抑制率最大 ;

在 5-HT诱导的离体空肠异常收缩的的实验中，WCA0.01-6.0 mg/mL浓度范围内对抑制率的影响呈剂量依赖性 ;

WCA对肠道平滑肌的作用可能和 Ca2+通道有关 ;

WCA极性小的部位较大极性部位抑制作用强。

总结总结

体内肠推进和胃排空实验

对正常小鼠胃肠运动的影响：不同剂量均促进肠推进，抑制胃排空。

对新斯的明模型小鼠的胃肠运动的影响：不同剂量对胃排空均有抑制作用；小剂量促进肠推进，高剂量抑制肠推进。

胃肠安丸对小鼠胃肠运动具有双向调节作用

Spasmolytic activity of Wei-Chang-An pill extract involves calcium channels in rat jejunum . Journal of Ethnopharmacology. (Under Review)

文章情况

采用肠外翻模型，研究厚朴药材和胃肠安丸中厚朴酚及和厚朴酚的肠吸收特征；

处理胃肠安丸给药后的生物样品（血样，粪样和尿样），进行 QTOF-MS分析；

查阅养血清脑颗粒文献。

计划计划

Studies on the Dose-effect Relationship and P harmacokinetics of Weichang’an pill

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Transcript of Studies on the Dose-effect Relationship and P harmacokinetics of Weichang’an pill