STAPHILO

7
45 Isolasi , Identifikasi dan Karakterisasi Fenotip Bakteri Staphylococcus aureus dari Limbah Penyembelihan dan Karkas Ayam Potong ISOLATION AND PHENOTYPICAL CHARACTERIZATION OF STAPHYLOCOCCUS AUREUS ISOLATED FROM SLAUGHTERED HOUSE WASTE AND CARCASS OF CHICKENS Khusnan 1) , Siti Isrina Oktavia Salasia 2) dan Soegiyono 2) 1 Bagian Penyakit Ternak, Akademi Peternakan Brahmaputra, Jl. Ki Ageng Pemanahan, Nitikan,Yogyakarta,Tlp. 0274-384370 2 Bagian Patologi Klinik, Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Gadjah Mada, Jl. Olahraga, Karangmalang, Yogyakarta 55281 Email: [email protected] ABSTRAK Staphylococcus aureus merupakan salah satu bakteri yang berpotensi untuk menyebabkan keracunan pangan pada manusia. Sumber penularan utamanya adalah daging ayam yang tercemar bakteri tersebut dan pencemaran dapat terjadi mulai dari saat penyembelihan sampai pada proses pengolahan maupun adanya infeksi Staph. aureus pada ayam potong. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan mengkarakterisasi Staph. aureus dari karkas ayam dan limbah proses penyembelihan ayam. Karakterisasi Staph. aureus meliputi kemampuanya untuk memfermentasi Manittol Salt Agar (MSA), aktivitasnya pada uji katalase dan koagulase, sifat hidrofobisitas permukaan bakteri, produksi hemolisin dan reaksi aglutinasi terhadap eritrosit kelinci. Sebanyak 18 isolat Staph. aureus yang terdiri atas 4 isolat dari spesimen limbah proses pemotongan dan 14 dari karkas ayam potong dipakai dalam penelitian ini. Semua isolat Staph. aureus dapat menfermentasi MSA, memproduksi gas pada uji katalase dan menggumpalkan plasma darah kelinci serta semua bersifat hidrofilik. Di antara 18 isolat Staph. aureus sebanyak 55% isolat mengaglutinasi eritrosit kelinci, 12% memproduksi ß-hemolisin dan (88%) memproduksi γ-hemolisin. Hasil ini menunjukkan bahwa sebagian besar isolat Staph. aureus yang diisolasi bersifat virulen Kata kunci : Staph. aureus, limbah, rumah, potong ayam, karkas ayam potong ABSTRACT Staphylococcus aureus is widely known to cause food poisoning in human and chicken meat has been suggested to be one of the main source of Staph. aureus infection in human. A study was therefore conducted to isolate and characterize of Staph. aureus derived from chicken carcasses and the waste of chicken slaughtered house. The characterization of Staph. aureus was carried out based on the ability to ferment mannitol salt agar (MSA), their activities in catalase and coagulation test, the production of hemolysins, the hydrophobicity of the surface, and their hemaglutination activities. As many as 18 isolates of Staph. aureus consiting of 4 isolates from the waste of chicken slaughter house and 14 isolates from chicken carcasses were used in this study. All 18 isolates fermented mannitol, reacted positive for catalase and coagulase, and contained hydrophilic activities on their surfaces. Ten (55%) Staph. aureus isolates agglutinated rabbit erythrocytes and 2 (12%) isolates produced β-hemolysin and 18 isolates (88%) produced γ-hemolysin. It appeared that most of the Staph. aureus isolated were virulence. Key words: Staph. aureus, waste slaughter house, chicken carcass Jurnal Veteriner Maret 2008 Vol. 9 No. 1 : 45-51 ISSN : 1411 - 8327

Transcript of STAPHILO

��

�������� �� ���� ����������������������������������������������� �������������

��������������������������������

������������������ ������������������������������������� ��������������

���������������������������������������������

���������������� ���������������������������������

����������������������������������������������������������� �!�������������������"��������#������������ �$%&'()*')&$

�������������#�#���!�������+������,�!��#���������-������.��,���,�/��0���1������ �����������!��������������#���������22%*3

����4������������ !��""#$"%

������

������������ ������������������ ����� ������������� ���� ������������������������������������������������������ ����������������������������� ����������� ���� ����� ���������������� � �������������������� ������������������������������������������������� ������������� � ��� ����� ����� �� ���� ����� ��� ��� ��� ����� � ������������ ���������� �������������� ��������������������������������������������������������� ������������� ��������� �� ������������ ����������� ������������ ����� ��� � ������� �� � � �������������� ��������������������� ����������� �������������� ��������������������������������� ���� ����������� ��� �������������������!"����� ��������� ������� �������� ��#����� ������������ ������������ ���� ������� !#� ����� ������ ������� ��� �������� ����������� ��� ��������� ���� �������� � ��� ���� �������� ������������������� ��� ����� ���� �� ����� ����������������������������������� ������������� �������������$��� ����!"����� ��������� ��������� %%&� ���� �������� ���� ��� ��� � �������� !'&������������ � ()�������� ��� � �""&������������γ)���������*�������������������+������������������ ��������� �������������������� � �����

�� �������,��������� ��������������������� ���������������������� ��

�������

������������ �����+��������+� ��������������������������������������� ����������� ��� ����������� ������������������������ ������� ������������� ����+�� �������������� �� �� ���� �� ��� ������ ���-�� ����������� ��� ���� ��� ����� ������� ������� ��� ���+� �� ��� ����������� �����������.��������� ���-� �������������� ���+������������ �������� �������� �� ������� ��� ����� ������������� ������� � � ������� ��������������� ��� � �� ��������� �������������� ��������������� ����� �������������� ������������ �� ����� � � ������������!"����� ������������ ��� � ��� ������#� ���� �� ����� ���+� ����������������� �����������!#� ���� �� ������������������+���������� ��� ���������!"����� ������� ������ �������� ������ � �������� ����������������� ��� �� ����� ������������ �� � � ��� �� ����� �������� .�� �%%&��������� � ��� ���� ������ �� ��� ����� � ��� ����� �� ��� '� �!'&�� ���� �� � ���������β)�������� ��� � !"� ���� �� �""&����������γ)���������/ ���������� �� ��� ���������������� ������� ���+���� ��������

������ ������������ ����+� ������� ���������������������

����������������� ��� ������������������������������������� �

��

����� !"!��

��%����������#5#55�,� �����,� �&�'�(%&�)��'� *&���+'��,� �������!����-�%��*�!�*&�(&���-'���*&�!��'+�'�.&��'���*����+&����,��-�����+��)&�'��+&�����!��(��&�'�(�+&�'�.&��'��%���'�'����-����!�%#������!�%��� ������,��*�+�%&�!&/�/����6��6���7##���'�.&��'�*�����-'+����������(�*�����&��'#������ ������,��)�(���*�+�%&�!&/�/����*&�!��'+�*����%����'�,+&��+�%���*&�!��'+�!��(�/&���'+����&�(����#8�5,5�#5��,����#����&/�(�'���'/�+����'��&��$����*��(��#����'.&�+��'��-'�'��'�.&��'������ ������,*����%����'������-���'%*&+'(",�,5������,���,����#��,�*�&�%"�'�,�"�+&"%'&-'+'�,�*'"��+�"��'�,� &��"����'+'�,�����,��,�,� ,������#5#55��,�&��$�����%������,� �#8�5� ,5�#5�� ,����#��0���1,�%&�'�('+'�������&*�'��02"�-'������� ��34456�%%&��"�,�34476���������� ��34471#

��-�����+����%/&���"�+�%'���'�/��+&�'�� �����,�����-���/�����*��(������-�+&�����!��(+&�$&%��'�"-&��/��+&�'�+&��&/�+#��('�(��!�%%&��*����� ��-��� ��+�� � *�"���� +&����� !��(/&�*"+&��'� � ��+���%&�!&/������� � �����, �('�(��!�%���*�+�+&�$&%��'�"-&��� ������,���&��� �!�%� +&-��� +&�'�.&��'� �� � �����,�&/&-�%��!�%�'+���'*"+"�(��+���+&��"�+�%'���'*��������+���+����&+&-���*&�!&%/&-'���,����/������*�������+�*&�("-�������('�(#���%��&%"+"�(����!�%��&/�(�'�+&%*�+�*&�!&%/-'�������*&�("-�������������!�%����(�+�/&�*"+&��'�&/�(�'���%/&��*&�$&%������ �����,#���%��,�&)���� '�'� /&-�%� �'�&+���'� �&/&��*�� /&���+'�(��+� '�.&��'� ����8'��-&��'�� � �����,� !��(�''�"-��'����'�-'%/�����%���*"+"�(������������!�%� �'� ��%��� *"+"�(� �&���� ��+'%&9� "(!����+�#

� ������,� ���*�+��'/&������/&���������8'��-&��'�!�� %&�)��'� /&/&��*�� +'*&� ���8'��-&��'�!���'+&�+�����"-&�� ��/�+���'� !��(�'*�"����'� "-&�� /��+&�'� +&��&/�+� �&*&�+'�&%"-'�'�,��"�(�-��&�*-��%������&�+&�"+"��'�0��//�,� 5:::1#� �&%�%*����!�� ��+��%&�('�.&��'��&-�'���(��'+&�+�����"-&����8'��-&��'/��+&�'�����.��+"��*&�&�+��8'��-&��'�!��+&��&/�+!��(� +&���*�+� *���� *&�%������ �&-� /��+&�',�&*&�+'� �'.�+� �'��"."/'�'+��,� ��/�+���'�&%�(-�+'�'�,��&/&���������*��-������.'%/�'�0�.&�� ���� ����"�,� 34;;6����-� ��� �� � 34;41#�&%�(-�+'�'������.'%/�'���/&�.��(�'��&/�(�'��&�'����+���*&-&��+���/��+&�'�*�����&-�&*'+&-�"�*&��0����+&�������#,�344<1#��'.�+��'��"."/'�'+��*����*&�%������/��+&�'� /&�+��((��(� )�9�/

+&�����*� .��&� *&-&��+��� �9�-� ���'� '�.&��' &�&-'+'���'�'��'-����������+���%&�('�"-��'�� �����,�����'��-'%/�����%���*"+"�(��!�%������������!�%�*"+"�(���&�+�������+&�'���'�.&�"+'*� � �����,� !��(�%&�&�+����� 8'��-&��'�!�,�&*&�+'�.&�%&��+��'�1�����#������������0���1,�)'� ��+�-��&,� �)'� �"�(�-��&� *-��%�,� �)'�&%�(-�+'���',��)'�*�"����'��&%"-'�'�������)'�'.�+��'��"."/'�'+��#

�#����������"�����

$��%���������������������������=��+&�'�� � �����,� �''�"-��'� ���'� ��%*&-

-'%/���$�'�����'���%���*&%"+"�(����!�%�����'��$�$'�����������!�%�*"+"�(�!��(��')��-��'*�����+���'�'"��-��'�9'-�!����&������+'%&9� "(!����+�� 0� 1#� � �*&�'%&�� !��(� �'*���'/&��*���'��$�$'������'���������!�%�*"+"�(����-'%/���$�'��!��(�/&����-����'���%���*"+"�(#�*&�'%&��%�-��%�-�� �'+���%� *����%&�'������#�����-���6�#���0��=1,��''��/��'����*��������<>?�,��&-�%��57�)�%#

�"-"�'�/��+&�'�!��(�+�%/���*����%&�'���=��'+���%��-��(��&�-�+��(������������''��/��'����*���������<>?���&-�%��57�)�%#�"-"�'�/��+&�'�!��(�/&��'.�+�%��"'���&-��)�+�!��'+���%��-��(�*����������������#��,��������0���1�*���������<>?�,��&-�%��57�)�%#�����!��"-"�'�� ������,� �'+����'��&�(���*&��/����9�����%&�'���������'�%&����%&�)��'����'�(#

!&�����������+��"�&����'��"-"�'�/&�9��������'�(����'

%&�'�������'$�%*����&�(���&�@'%���+�-��&*������$�� "/)&�#�����!��� � �����,� �'+����'+&�/&�+���!��(&-&%/��(�(��#

!&���������������%���+���%'-'-'+&��*-��%���������&-'�$'���-�%

+�/��(��&���'���'$�%*����&�(���3��"�&��"-"�'/��+&�',��''���/��'����*�����<>°���&-�%��57)�%#������ � � �����,� �����%&�(�(�%*�-���*-��%���������&-'�$'�0=�A$�-&�������#�34471#

������������������� �%��������� � � �����,� � �'+���%�*����*-�+� �(��

������ 0�(��� /��&,� �B"'�,� 2&�%��1,� ����&-��)�+�!���''���/��'��&-�%��3;�57�)�%�*��������<>C�#�����!����+'8'+����&%"-'�'����'+����'�&�(�������!��@"����&%"-'�'���*����*-�+��(��������0���-��������#�34>41#������ ������,�!��(%&�(���'-������-.���&%"-'�'�������%&%/&�+��@"��� +&���(� �'� �&�'+��� �"-"�',� !��(

������������� �������������

��

%&�(���'-���� /&+���&%"-'�'�� �����%&%�/&�+����@"����(���(&-�*��'��&�'+����"-"�',����!��(�%&�(���'-���� (�%���&%"-'�'�� +'���%&%/&�+���@"����&%"-'�'���'��&�'+����"-"�'#�&%&�+���� '+�,� ��%��� !��(�%&%*�"����'�"%/'���'��-.�������/&+���&%"-'�'�������+�%*��@"���(&-�*�����+&���(��'��&�'+����"-"�'#

!&� �%������������� �&-'�$'� !��(� �'�%/'-� �&�(��

��+'�"�(�-��� :,5��� �"�'�%� �'+��+� *�� D,5,�'�&�+�'.��������'$�$'�������-'��&�(���:,3D�����-#� ���*&��'� �&-� ������%&���� 5E��'/��+��-�%��-���+���:,3D������-#��&/��!����5:�µ-���*&��'�/��+&�'�!��(�%&�(�����(��&�'+���3:�

/��+&�'F%-���-�%�:,3D����-��'$�%*����&�(��5:�µ-����*&��'��&-�������%&�����&-'�$'�5E���'�+���(&-���"/!&�#��&-���"/)&���'("!��(��&-�%�<:� �&+'�� ���� �&���'� �&%�(-�+'���'� �'�%�+'#�'�(��+� �&%�(-�+'���'� �'�!�+����� � �&/�(�'/&�'��+G�++��&���'����+,�+��&���'��&���(�����−+'���������&���'�0�'/�9�������� ��344<1#

!&� � �'�(����=��+&�'��'+���%���-�%�D�%-����-��������

��������7�,�9��0=��1�������''���/��'����*���<>C���&-�%��57�)�%#���-+���/��+&�'��&%��'���'8"�+&B,��'*'���������&���-�%�+�/��(��&�+�'.�������'�&�+�'.���D�%&�'+�*�����&$&*�+���D#:::�*%#���*&���+����'/���(,�������������'$�$'��<��-'��&�(���=�#�&--&+�/��+&�'��'���*&��'����&�(��� -���+���=���7���"��&�+���'� 3:�� �&-/��+&�'�*&��%- ��&/��!���D:�H-�����*&��'�/��+&�'�'$�%*����&�(���D:�H-��%"�'�%���-.�+��&�(���"��&�+���'�3,5�,�3,I,�5�,�5,7������<,5��*���"/)&��(-��,������'������&�(���+�����('('��+&�'-#�)'��'��"."/'�'+����'�!�+�����*"�'+'.�/'-��+&�)��'�(�&(��'�/��+&�'�!��(�+�%*����&*&�+'�*��'��*�+'��&+&-���$�%*������'�����0�'/�9�������� ��344<1#

��"�������#�� ���

�������������������-�%�*&�&-+'���'�'��'(�������3;�'�"-�+��

�����,�!��(�+&��'�'��+���7�'�"-�+�/&����-����'�*&�'%&��-'%/���$�'����%���*&%"+"�(����!�%

����37�'�"-�+�/&����-����'��*&�'%&��$�$'�����('�(�!�%�*"+"�(�0��/&-�31#���"-�+��'�!�+�����*"�'+'./��+&�'��� ������,��/'-���+&�)��'�*&��/�����9����*����%&�'���������'�%&����%&�)��'����'�(,�"�(�-��&�*-��%���&-'�$'�J�,���+�-��&�J�����*���*&9����������%�+&�%��������%�J�0=�A$�-&�,�� ��� �34471#

��'� 3;� '�"-�+�� � �����,� !��(� �'+&-'+',�&%���!��%&%*�"����'� �&%"�-'�'�,� 5� '�"-�+033E1�0�<7������<I1�%&%*�"����'�K��&%"-'�'�����3I� '�"-�+� 0;4E1� -�'��!��%&%*�"����'� γ��&%"-'�'��0��/&-�56���%/���7�����D1#���-��'������� �05::D1�%&�&%������/��9��D4E�'�"-�+������ �����,� ���-� ����� ��*'� *&����%&%*�"����'�&%"-'�'�,�!��(�+&��'�'��+����D4E�K��&%"-'�'�D,<E�α��&%"-'�'�� ���� <D,>E�αFK��&%"-'�'�#���"%"������ �05::I1�%&���*�+�����3::E�'�"-�+����� ������,����-��������%/'�(�*&�������&++�9��� 0�1� �%&�(���'-���� K��&%"-'�'�#�&����+��2"�-'������� �:34451�����=�A$�-&������� 034471������ � �����,�%&�(���'-���� 7� )&�'�+"��'���&%"-'�'�,� !�'+��α� 0�-*��1�β� 0/&+�1,� γ0(�%�1�����δ�0�&-+�1��&%"-'�'�#�����%&�'���(�������,� � )'�������� ������,� �%&%/&�+���@"��+&���(��'��&�'+����"-"�',��%����/��+&�'�+&��&/�+%&%/&�+���α��&%"-'�'�,� �&���(���� )'��%&%/&�+��� @"��� �(��� (&-�*,�%���� /��+&�'+&��/�+�+&�%�����β��&%"-'�'�#������� ������,!��(�+'����%&%*&��-'��+����@"����&%"-'�'���'�&�'+����"-"�'�+&�%�����γ��&%"-'�'�#��"%/'���'��+����α��&%"-'�'������β��&%"-'�'�������+�%*��@"���(&-�*�����+&���(��'��&�'+����"-"�'�0���-�������#�34>41#��&%"-'�'��%&��*�����&��"*�"+&'�!��(�%&%*��!�'���+'8'+���&�@'%�+'������)�(�+"B'��0�'--'�%�������#�5:::1#��"��'���'+"-'+'��!��(�'���'-����"-&������� ������,����-���α,�β,�δ,����γ��&%"-'�'��02"�-'������� �34456�=�A$�-&������ �34471#����"*�"+&'��!��(�/&��'.�+�&�@'%�+'���*�+� /&�*&������-�%�%&�!&�'����� ���+�'�'��+��� *&�+�%/����� /��+&�',� �&���(���&��"+"B'�� /&�*&���� ��-�%�%&�'%/�-���/&�/�(�'�*&�!��'+��*����'���(�0�'--'�%������� 5:::1

����������������� ��� ��������������������

��

������������� �������������

��/&-�3# ���'-�'�"-��'������ ������,����'��*&�'%&��-'%/���$�'����%���*&%"+"�(����!�%�����$�$'����������!�%�*"+"�(#

Karakterisasi No Isolat

Jenis Hemolisin Hemaglutinasi Hidrofobosistas 1 L6 γ + Hidrofil 2 L23 γ + Hidrofil 3 L24 γ - Hidrofil 4 L37 ß + Hidrofil 5 K1 γ + Hidrofil 6 K2 γ + Hidrofil 7 K3 γ + Hidrofil 8 K4 γ + Hidrofil 9 K5 γ - Hidrofil 10 K6 γ - Hidrofil 11 K10 γ + Hidrofil 12 K11 γ - Hidrofil 13 K13 γ + Hidrofil 14 K15 γ - Hidrofil 15 K17 γ - Hidrofil 16 K22 γ - Hidrofil 17 K26 γ + Hidrofil 18 K36 ß - Hidrofil

��/&-�5# �����+&�'���'������ ������,����-�-'%/���$�'����%���*&%"+"�(����!�%�����$�$'��������� �!�%�*"+"�(� +&�����*�*�"����'� �&%"-'�'�,� �&%�(-�+'���'� ���� �'.�+�'��"."/'�'+��

No Isolat Asal spesimen MSA Katalase Gram Koagulase 1 L6 Limbah RPA + + + + 2 L23 Limbah RPA + + + + 3 L24 Limbah RPA + + + + 4 L37 Limbah RPA + + + + 5 K1 Karkas ayam + + + + 6 K2 Karkas ayam + + + + 7 K3 Karkas ayam + + + + 8 K4 Karkas ayam + + + + 9 K5 Karkas ayam + + + +

10 K6 Karkas ayam + + + + 11 K10 Karkas ayam + + + + 12 K11 Karkas ayam + + + + 13 K13 Karkas ayam + + + + 14 K15 Karkas ayam + + + + 15 K17 Karkas ayam + + + + 16 K22 Karkas ayam + + + + 17 K26 Karkas ayam + + + + 18 K36 Karkas ayam + + + +

MSA : manitol salt agar RPA : rumah potong ayam

��

����������������� ��� ��������������������

0������!� ��� ������� � ��������� � ��� ��������+��������������������������� �������������������������������→�

0������#�γ)���������→������������ ���������� �����������������

0������'� *���� ���� �� ����� �������� ���� �� ���� ��� �� *���� ��� ��� �� ����� �����������������������→�

0������%� ()�������� �12��������� � � ���������� �����������������

0������3� ���� ���� ������������������������� ���� ����4��������� �����)�

0������5� *���� ���� ���������� �� ��� ��� ����� ������������ �� ����� ������ ������ �→���������������� ���������

��%/���>#��&%�(-�+'���'���&�(����&-�������%&����&-'�$'�"-&��� �����,��0→1

��

�� ������� ��

�� ������� ��

��

�-.���&%"-'�'�� /&�*&���� � *&�+'�(���-�%%&�&�+������*�+"(&�'�'+�������� ������,#��-.��+"��'�� ��*�+�%&������ )��'�(��F�&-� � �&*&�+'%���".�(������&*'�(������#���%��,��&)����'�'/&-�%� �'�&+���'� %&���'�%&� �&�������)��'�(�����'/�+�&��"+"��'�#�������(����/��9�&��"+"��'�� ��*�+�%&������ )��'�(���%&-�-�'*&�('��+���%"�"%&�� � *���� *&�%������ �&-'���(,�%&-�-�'�*&%/&�+������&B�%&����+��%&%/&�+�������,���6����5������,���&/"$"���'"��'"���&$'-�%&-�-�'�5������,�����%&-�-�'��"-"'�"�%"+'��!��(���*�+�%&-'�'������&-�02�9&+@����� ��34;51#�=&+���&%"-'�'��%&%*��!�'���+'8'+��/'"-"('����+���%&%*�"����'���#�5#���-'�'�,�!�'+��"��&�+���'�!�������%&�'�(��+� � *���� �����'�('�,����������%&�������*���������<>?�#=&+�+"��'�� ���-��� &�@'%� !��(�%&%*��!�'��/�+��+� !��(� ����� !�'+�� �.'�("%'&-'�� � ���-'�"."�.�+'��#���'+�"�'+� ���'� /&�/�(�'� �*&�'&��&9���%&%*��!�'� +'�(��+� �&*&����� !��(/&�/&���+&�����*�+"��'��'�',�!��(�/&�(��+��(*�����"��&�+���'��.'�("%'&-'��!��(�+&�������(��-�%�&�'+�"�'+�+&��&/�+�02"�-'������� �34451#

�� ���� ��������������������'-� �)'� �&%�(-�+'���'�%&���)�����

/��9�� DDE� '�"-�+������ � �����,� %�%*�%&�(�(-�+'���'��&-�������%&�����&-'�$'�0��/&-5�������%/���>1#������ ������,�!��(�/&����-���'� ����� ��*'� *&���� �&/�('��� /&���� +'���%&�(�(-�+'���'��&-�������%&�������*',��"%/�%��*�����&-�������%&������%/'�(�0����������� ��-��'�,� 5::D1#� �+�&*+"�"���� ����+�*�!-"�"����%&%/&�+���/&/&��*����/�+���''�+�������&��+����&-,�!��(��'��(��/&�*&������-�%%&�&�+����� � *�+"(&�'�'+�����%��� +&�����*'���(�!��(��''�.&��'#���/�+���'�+&��&/�+���+���-�'�� ���-��� *�"+&'�� ����� /��+&�'� �&*&�+'�&%�(-�+'�'�� %��*��� .'%/�'�� !��(� ����'*&�%������/��+&�'�0�.&����������"�,�34;;6���-� ��� �� � 34;41#��&%�(-�+'�'������ .'%/�'�%&��*����� ��&�'�� !��(� /&�*&���� ��-�%*&-&��+��� /��+&�',� /�'�� !��(����%��&(�+'.%��*���*"�'+'.�*�����&-�&*'+&-�'���(�0����+&������#,�344<1#

��/��(�����+�������!���&%�(-�+'���'�����&%�%*����/��+&�'���+���%&-&��+�*�����&-��&-� '���(�+&-����'+&-'+'�*����/&�/�(�'��*&�'&�/��+&�'�0���-������#,�34;46��'/�9�������� ��344<,�L%%-&�� ��� �� �� 34476���-��'�������L%%-&�,34476���-��'�������L%%-&�,�344D1#��"++�$��-���� �� �� 0344:1� %&-�*"����� /��9�� �+��'��+�&*+"�"���� !��(� ��*�+�%&�(�(-�+'���'&�'+�"�'+�*��+'�%&%'-'�'�.'%/�'��*����*&�%������&-�!�#��'%/�'��*����*&�%�������&-�/��+&�'

�&�'�(� �'�&/�+� �&/�(�'� �'��"."/'�� !��(/&�+��((��(�)�9�/�+&�����*�'�+&����'�/��+&�'�&�(���&�'+�"�'+#

=��+&�'�!��(��%&�(�(-�+'���'�&�'+�"�'+��-&/'�%�%*��%&-&��+� *���� &*'+&-� /���-'�� � )'���'/���'�(���� �&�(��� /��+&�'� !��(� +'���%&�(�(-�+'���'� &�'+�"�'+� 0��-��'�,� 344I6��������������-��'�,�5::I1#

���'-���)'��'��"."/'�'+����+&�����*�3;�'�"-�+����� � �����,�%&���)������ /��9��� �&%��'�"-�+�/&��'.�+��'��".'-'�#�=��+&�'�!��(�/&��'.�+�'��".'-� �%�%�!��%&%*��!�'� � ��*��-� *���*&�%������ �&-�!�� 0�'@���,� 34;51#� ����%�%�!�,� �&%��� /��+&�'� !��(� /&���*��-/&��'.�+� 8'��-&�,� �&���(���� !��(� +'���%&%*��!�'� ��*��-� �%�%�!�� +'���� /&��'.�+8'��-&��0&-$@�����������,�34;;1#���*��-�/��+&�'+&�������"-&��*"-'�����'����+���*�"+&'��!��(/&�+��((��(�)�9�/�+&�����*��*&-&��+���/��+&�'*�����&-�'���(�0�'/�9��������L%%-&�,�344:1

�'��"."/'�'+��� *���� *&�%������ /��+&�'%&�&�+����� �&%�%*���� /��+&�'� ��+��%&-&��+� *���� �&-� '���(#� =��+&�'� !��(*&�%������!��/&��'.�+��'��"."/�%&%*��!�'�'.�+���&�'�!��(����+� 0��-��'�������L%%-&�,34476� ��-��'�� ���� �L%%-&�,� 344D1#� ��-+��/��+&�'� !��(� /&��'.�+� �'��"."/� -&/'�� /��!��%&-&��+�*�����&-��&-�&*'+&-����� -&/'��/��!���'.�("�'+�"-&���&-��&-�*"-'%"�."���-&���0�&+�".'-1)'����'/���'�(������&�(�����-+���!��(�/&��'.�+�'��".'-�0��-��'�������#�5::71#

�#�!"��

������ � � �����,� � ��*�+� �'+&%�����*���-'%/���$�'��*&%"+"�(����!�%�*"+"�(�����$�$'����������!�%�*"+"�(#� ��&%�������� � ������,!��(��'+&%�������*�+�%&�.&�%��+��'�1����#����������,�%&%*�"����'�(���*�����)'���+�-��&,%&�((�%*�-���� *-��%�� ������ �&-'�$'� ����&%���/&��'.�+��'��".'-,��&/�('���/&����0;;E1%&%*�"����'���&%"-'�'�������&/�('����&$'-033E1� K��&%"-'�'�� �&�+�� DDE� %�%*�%&�((�%*�-���� &�'+�"�'+� �&-'�$'� �&�+�� 3::E/&��'.�+��'��".'-#����'-�'�'�%&���)������/��9��&/�('���/&����'�"-�+������ ������,�!��(��''�"-��'/&��'.�+�8'��-&�#

!����������#�����

�$�*���+&�'%�����'���'��%*�'�����&*���'�)&��'�+'�&*�'�����!��(�+&-���%&�����'*&�&-'+'���'�'�%&-�-�'�&�&-'+'��������%&�+�-+�������((�����5::>

������������� �������������

��

��)�����!����

=�A$�-&�� 2,��$�9��@��,���+&�%�����,� 3447#�+�*�!-"�"��&����.&�+'"�&�� ���� M��+&�"+"B'�&,�=���#���F3,����=-"/&-,��#�����$�-'&β&�� 0�&����&/&�1,�����/�$�� �&�/��+&�'&--&�� ��.&�+'"�&�� /&'� �'&�&�,� 5#��.-�(&#� ���+�8� �'�$�&�� N&�-�(� 2&��,�+�++(��+#

����+&���,�2"�&���,��-&B���&���2�,�344<#�&�'�('+'��'��*'(��$���&��/!�������#5#55�,,��,�����**���+'8&��&8'&9#���;��1���#6�#�<IG�<4�DD

�%%&��"���#,�3447#��"�"$"%'�-��+�*�!-"$"$$�-"�+/�&���#��$�� ���<�7�5��=�,�4<G��7>�D7#

����2,�="&-�&�+�2�,�="!�&���,�8��������'+���,�"���+� ��#� �&�9�-�+� �� �,� 3447#�*'�&%'"-"(!� ".� �+�*�!-"$"$$��� ���&��'�.&$+'"��� '�� *�+'&�+�� "�� �&%"�'�-!�'�#��.&$+#��"�+#��"�*#��� ������#��3DG�>;�;3#

�"++�$��-����#��'(('����,#�=&���"'�#�344:#�&%�((-�+'��+'"�� *�"*&�+'&�� ".������#5#55�,� ,��,#��� ���� 1�5�#6�#�� 5;G53DI�53D;#

2�9&+@��,��&-�'$�� 2�,� ��&-/&�(���,� 34;5#1�5�#6�#�#���7#������5��� �37���&�#����(&�&�'$�-��/-'$�+'"��#��"���-+"�#���-'."��'�#5D;#

2"�-'����,��'--&++��,��%"��=,#�'-.&�+���,3445#� >��,,��� ��5�#6�#�#��#� 5: ��� &�#�**-&+"���������(&#���-'."��'�#�7:3�73<#

�������,���-��'������#5::I#��&�*"���&+�".'-,��&�'�*�����&-�&*'+&-,��(-�+'���'�&�'+�"�'++&�����*�� ������,G���)'����'��"."/'�'+��'��8'+�"#��������;���57G�#3

���-� �,� ���+�)�� �,� �'��&� 2#� 34;4#�&%�((-�+'��+'"���$+'8'+'&��".�(�"�*�=,��,��������+�&*+"$"$$'G�&%"��+��+'"��".��"8&-��(����*&$'.'$� $&--�/'��'�(� �$+'8'+'&�� '�������#5#55�,�,��,#�<�7�5��<�����D>G�<;7�<;4#

�L%%-&�� �,� ��%"�"� ��,��'/�9��� ���,��-��'�� ���,� ��+"&*��(&�+'&� �G� 3447#�&-�+'"��/&+9&&���&%�(-�+'��+'"�,����.�$&�!��"*�"/'$'+!��������&�&�$&�*�"*&�+'&��".������#5#55�,� ,��,#� ��G��"+"-'��,��� 0&�#1,�+�"(&�'$� �+�&*+"$"$$'G� �&�&�+� �����+��&#� ���$&�� �/-'$�+'"��,� �+#&+&��/��(#�*#�355�35<#

�.&�� �,� ����"�� �#� 34;;#� �'�'�&8'&9G�&$+'�"*��("$!+"�'�G� �� %"-&$�-��%&$���'�%� ".� �&$"(�'+'"�� /&+9&&�� $&--���.�$&� ��(���� ���� -&$+'��� '�� +�&*��("$!+"�'��".�/�$+&�'�#�<�7�5��<������DIGD<4�D7>#

&-$@�����2,���������,� 34;;#�=�,��(��,��1���#6�#�#��� %,� 02���-� ��-'� G� ������,� #71�5�#6�#�#��1,��&+������,����'"&+"%",��#�#,

�%��,��#,��)'+�"�"%",��#��#�������(��,��#�#� 0&�&�)&%��1,� ���"�&�'����'8&��'+!�&��,�2����+�#

���"%"��,��������,����+�+'�,���-��'�����,�'/"9"���#�5::I���"-��'����������+&�'���'�������#5#55�,������,�����-��������%/'�(*&�������� &++�9�#� �1����� !��#��������-����55�G�375�37>

��-��'������344I#������+&�'���'�������#5#55�,?##�������5�,�*����/�/'������&����'�=�-'#��*"�����"!&��&�&-'+'�������#

��-��'�����,��L%%-&���#�3447#��$���&�$&�".��&%�((-�+'��+'�(����&�'���%"�(�8'��-&�+�����8'��-&�+�'�"-�+&��".�������#5#55�,�,��, 1����5����,�55G�>I<�>I7#

��-��'�����,��L%%-&���#�344D#�'�+�'/�+'"��".�&�"+!*&,�8'��-&�$&��%���&�������.��+�&�$����$+&�'�+'$��".�������#5#55�,�,��,�'�"-�+&�.�"%�*'(�#���;� �1���0=751G�>;�;<#

��-��'�� ���,� �������� �,� �L%%-&�� �,��#��$�O$���,�5::7#��"%*���+'8&��+��'&��"�*�&�"�� ���� (&�"+!*'$� *�"*&�+'&�� ".�������#5#55�,������,��'�"-�+&��.�"%�/"8'�&��/$-'�'$�-� %��+'+'�� '�� �&�+��-� 2�8�,���"�&�'�������&��&,��&�%��!#���;����5 DG�3:<�3:4#

��-��'�� ���,#��'/"9"���,��������#� 5::D�����+&�'���'� .&�"+'*&��������#5#55�,�����,�'�"-�+&����'���%*-&��������*'�*&���%��+'+'����/�-'�'� ��������;���5<G�>5�>;

���-���=,��%"-��2,�'--'$��2,�34>4#����'%*-&%&+�"�� ".� �&+&$+'�(� �+�*�!-"$"$$�-�&%"-!�'�#�>6��������#������<��6��������57DG�5;<�5;I#

��//�� ��#� 5:::#� &�!��'+� �!�%� ���&���((�-��(���!�#� "(!����+�,����'�'��

�'@�����,�34;5#�����������<���#�#���;��������,02���-���-'�G����<���#��5��#���#�;���������<����#�#��1,� ����)"�9"�",� �#0&�&�)&%��1,� ��'�'� �&�5,� �'�-��((���'8&��'+!��&��,�����/�!�#

��++�� 2�,��9&������,��'$�&��"����#� 34;I#��&�+'.'$�+'"��".��+�*�!-"$"$$'�.�"%�/"8'�&���&��G�&8�-��+'"��".�+�&����5:���!�+&%#�����1�5�#6�#��<5G�<D4�<I3#

�'/�9��� ���,� �L%%-&�� �,� �&-&'%� ��,����'/����#�344<#�����&%�((-�+'��+'�(���&�'��".�(�"�*�=��+�&*+"$"$$'�'�"-�+&��.�"%$��&��".�/"8'�&�%��+'+'��%&�'�+&�����&�&�$&+"��&���$&--�#���/���1�5�#6�#��3<4G�53><�53>;#

�'--'�%���2,������2�,��&��&��"��=,�""-&��,�P����� =,��'-�"���,���'�� �,� 5:::#��&�+'.'$�+'"�� ".� �� �"8&-� (&�&� $-��+&�&�$"�'�(� �+�*�!-"$"$$�-� &B"+"B'��-'�&*�"+&'��G������$+&�'@�+'"��".�+�&�*�"+"+!*'$(&�&�����'+��*�"��$+,����3#�<�7�5��<����I;G�77:>�773D#

����������������� ��� ��������������������