SHIMADZU APPLICATION NEWS...4. R102 (New Coccine), 5. Y5 (Sunset Yellow FCF), 6. R40 (Allura Red...
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No.L421LAAN-A-LC127
高速高分離分析の応用(その38)“Nexera”による合成着色料の分析
High Speed with High Resolution Analysis (Part 38)Analysis of Artificial Colorings by “Nexera”
■合成着色料12成分の分析Analysis of 12 Artificial Colorings
合成着色料の高速分析については,アプリケーション
ニュースNo. L349でご紹介しましたが,今回はいっそうの
高速化を目指し,超高速LCシステム“Nexera”および高速
高分離分析用カラム“Phenomenex Kinetex C18”を用いた
超高速分析例をご紹介します。
K. Yamabe
12種類のタール系合成着色料について一斉分析を行いま
した。カラムには,粒子径2.6 µmの“Phenomenex Kinetex
C18”(1.9 µmのソリッドコアに極微粒子の多孔質シリカゲ
ルを多層で結合(層厚0.35 µm)させたCore-Shellカラム)
を用い,フォトダイオードアレイ検出器“SPD-M20A”によ
り波長400 nm~700 nmの最大吸光度(MAXプロット)でモ
ニタを行いました。
Fig. 1に合成着色料12成分標準混合液(各50 mg/L水溶
液)のクロマトグラムと等高線プロットを,Table 1にその分
析条件を示します。
本分析条件により,12成分を1分以内に分離することがで
きました。また,6回の繰り返し注入における各ピークの保
持時間およびピーク面積再現性(1 µL注入)は,Table 2に
示すように良好でした。
0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 min
0.0
250
500
750mAU
Table 1 分析条件Analytical Conditions
Column : Phenomenex Kinetex 2.6 µm C18 100 Å(50 mm L. × 3.0 mm I.D., 2.6 µm)
Mobile Phase : A; 10 mmol/L Ammonium acetateB; 10 mmol/L Ammonium acetate / Acetonitrile = 1/1 (v/v)
Flow Rate : 2.5 mL/minTime Program : B Conc. 5 % (0.0 min) → 100 % (1.1-1.6 min)
→ 5 % (1.61-2.4 min)• Mixer : 20 µL
Column Temp. : 40 °CInjection Volume : 1 µLDetection : SPD-M20A Max Plot 400-700 nmFlow Cell : Semi-micro Cell
Table 2 合成着色料12成分の再現性(n=6)Repeatability of 12 Artificial Colorings (n=6)
Peak No.
Retention Time %RSD
Peak Area %RSD
1 0.103 0.1172 0.069 0.1613 0.047 0.2894 0.068 0.2195 0.091 0.1166 0.057 0.2037 0.066 0.1708 0.056 0.2069 0.021 0.07310 0.034 0.11711 0.032 0.14012 0.037 0.148
Fig. 1 合成着色料12成分のクロマトグラムおよび等高線プロット(各50 mg/L)Chromatogram and Contour Plot of a Standard Mixture of 12 Artificial Colorings (50 mg/L each)
■Peaks1. Y4 (Tartrazine), 2. R2 (Amaranth), 3. B2 (Indigo Carmine), 4. R102 (New Coccine), 5. Y5 (Sunset Yellow FCF),6. R40 (Allura Red AC), 7. G3 (Fast Green FCF),8. B1 (Brilliant Blue FCF), 9. R3 (Erythrosine), 10. R106 (Acid Red),11. R104 (Phloxine), 12. R105 (Rose Bengale)
min
1 23 45 6
78
9
1011
12
0.00 0.25 0.50 0.75 1.00
0.0
100
200
300
mAU
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0 min
300
400
500
600
700
nm
島津コールセンター 0120-131691TEL:075-813-1691
No.L421
Table 1の分析条件により,漬汁と飴の抽出液を測定しま
した。標準品と保持時間が一致する検出ピークは,それぞ
れスペクトルパターンも一致しました。
■合成着色料21成分の分析Analysis of 21 Artificial Colorings
■食品中合成着色料の分析Analysis of Artificial Colorings in Food
Fig. 2 食品中合成着色料のクロマトグラムおよびスペクトル(左 : 漬汁,右 : 飴)Chromatograms and Spectra of Artificial Colorings in Food (Left : Pickle, Right : Candy)
500300 nm 500300 nm 500300 nm
0.0
0.5
1.0mAU
0
10
20
30 mAU
4
10
■Peak3. B2
Peak10
0
10
20
30 mAU
3
Peak3Peak4 ■Peaks 4. R10210. R106
0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 min0
10
20
30
40mAU
0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 min
0
10
20
30
40mAU
前ページの合成着色料12成分に,さらに9成分を加えた
合計21成分について,グラジエント溶離条件を検討するこ
とにより(Table 3),2分以内に一斉分析することができま
した。
Fig. 3に,MAXプロットおよび3波長のクロマトグラムを
示します。黄色 系着 色料を450 nm,赤 色 系着 色料は
520 nm,青緑系着色料は620 nmのクロマトグラムでピーク
を同定しました。このように,フォトダイオードアレイ検出器
では,各成分に適した検出波長を選択して定量を行なうこ
とができます。MAXプロットでは,ピーク20(OrangeⅡ)と
ピーク21(Patent Blue V)が重なりますが,Fig. 4に示すよ
うに450 nmと620 nmではそれぞれ他方の成分がほとんど検
出されず,別々に定量することが可能です。
Time Program : B Conc. 5 % (0.0 min) → 100 % (2.5-2.7 min) → 5 % (2.71-3.5 min)
Detection : SPD-M20AMax Plot 400-700 nm, 450 nm, 520 nm, 620 nm
Table 3 分析条件*Analytical Conditions
Fig. 4 ピーク20およびピーク21のスペクトルSpectra of Peak 20 and Peak 21
Fig. 3 合成着色料21成分のマルチクロマトグラム(各25 mg/L)Multi-Chromatogram of a Standard Mixture of 21 Artificial Colorings (25 mg/L each)300 400 500 600 nm
0100200300400500
mAU
ピーク20 ピーク21
0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 1.25 1.50 1.75 min0
50100150
mAU
1 315
5
13 789
1011
2 4 6 1214 1617
1819
20+21
Max.Plot
0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 1.25 1.50 1.75 min0
102030
mAU51
2019
13 450 nm
0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 1.25 1.50 1.75 min0
25
50mAU
121110
9642
1716
1514
520 nm
0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 1.25 1.50 1.75 min0
50
100mAU
87
3
2118
620 nm
■Peaks1. Y4 (Tartrazine), 2. R2 (Amaranth), 3. B2 (Indigo Carmine), 4. R102 (New Coccine), 5. Y5 (Sunset Yellow FCF),6. R40 (Allura Red AC), 7. G3 (Fast Green FCF),8. B1 (Brilliant Blue FCF), 9. R3 (Erythrosine), 10. R106 (Acid Red),11. R104 (Phloxine), 12. R105 (Rose Bengale)13. Orange G, 14. Black PN, 15. Red 2G, 16. Fast Red E,17. Azo Rubine, 18. Green S, 19. Quinoline Yellow S,20. OrangeⅡ, 21. Patent Blue V
*その他条件はTable 1と同じ
3100-04101-570-IK2011.4
2011年4月