8/12/2019 RR Rife 1931 CaliforniaWesternmagazine Article

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LIFORNIANDWESTERNMEDI INEVOLUME XXXV DECEMBER, 1 9 3 1 No.6OBSERVATIONS ON BACILLUS TYPHOSUS IN

I T S FILTERABLE STATE*A PRELIMINARY COMMUNICATION

B y ARTHUR I S A A C K E N D A L L , P H . D .C h i c a g o , I l l i n o i s

ANDR O Y A L RAYMOND R I F E , P H . D .

S a n D i e g o , C a l i f o r n i aT T seems i m p r o b a b l e t h a t v i a b l e b a c t e r i a i n t h ef i l t e r a b l e s t a t e h a v e ever b e e n u n e q u i v o c a l l y

seen. N e v e r t h e l e s s , t h e t h e o r e t i c a l a n d p r a c t i c a li m p o r t a n c e o f f i l t e r a b l e f o r m s o f b a c t e r i a i nt h e o r e t i c a l a n d a p p l i e d b i o l o g y c a n n o t b e d e n i e d .R e c e n t l y , t h r o u g h t h e s i m u l t a n e o u s a v a i l a b i l i t yo f t h e R i f e m i c r o s c o p e , an i n s t r u m e n t c o m b i n i n gvery h i g h m a g n i f i c a t i o n w i t h c o 6 r d i n a t e d r e s o l v i n gpower, a n d a s i m p l e p r o c e d u r e f o r i n d u c i n g t h ef i l t e r a b l e s t a t e i n b a c t e r i a a t w i l l , 1 t h e p o s s i b i l i t y o fa c t u a l l y d e m o n s t r a t i n g o r g a n i s m s i n t h i s h i t h e r t oi l l u s i v e c o n d i t i o n very o b v i o u s l y p r e s e n t e d i t s e l f .Two f e a t u r e s o f t h e R i f e m i c r o s c o p e , f u l l d e -t a i l s o f w h i c h w i l l b e p r e s e n t e d e l s e w h e r e , mustb e s p e c i f i c a l l y m e n t i o n e d h e r e . F i r s t , t h e e n t i r eo p t i c a l s y s t e m , i n c l u d i n g n o t only t h e l e n s e s b u ta l s o t h e i l l u m i n a t i n g u n i t , i s m a d e o f q u a r t z . I na d d i t i o n , a d o u b l e w e d g e q u a r t z p r i s m i s m o u n t e db e t w e e n t h e i l l u m i n a t i n g u n i t a n d t h e q u a r t z A b b ec o n d e n s e r . T h e l a t t e r ca n b e r o t a t e d , w i t h v e r n i e rc o n t r o l , t h r o u g h 3 6 0 d e g r e e s , t h e r e b y a f f o r d i n gr e a d i l y c o n t r o l l a b l e p o l a r i z e d l i g h t a t any r e q u i r e da n g l e . T h e i m p o r t o f t h i s p o l a r i z a t i o n u n i t w i l l b ed i s c u s s e d l a t e r . I n a s m u c h as t h i s m i c r o s c o p e magn i f i e s f r o m 5 t o 1 7 , 0 0 0 d i a m e t e r s , i t i s o b v i -o u s l y very necessary t o h a v e i t m o u n t e d upon ani m m o v a b l e f o u n d a t i o n .

t f f

T h e o r g a n i s m s e l e c t e d f o r t h e s e e x p e r i m e n t swas t h e w e l l known R a w l i n g s s t r a i n o f B . t y -p h o s u s . The i m m e d i a t e h i s t o r y o f t h e c u l t u r eu s e d i s as f o l l o w s :

O c t o b e r 2 9 , 1 9 3 1 . An agar s l a n t was m a d e o fa t h r i c e - p l a t e d c u l t u r e o f B . t y p h o s u s , Raw-l i n g s s t r a i n . E d i t o r s N o t e : T h i s agar s l a n t wasm a d e i n t h e L a b o r a t o r y o f R e s e a r c h B a c t e r i o l o g y , From:

T h e Rife Research Laboratory, San D i e g o , C a l i f o r n i a ;T h e Laboratory o f Research B a c t e r i o l o g y , Northwest-ern U n i v e r s i t y Medical S c h o o l , C h i c a g o , I l l i n o i s ; an dTh e P a t h o l o g i c a l Laboratory o f t h e Pasadena H o s p i t a l ,Pasadena, C a l i f o r n i a . Presented at a meeting o f t h e B a c t e r i o l o g i c a l Sectiono f t h e Los Angeles C l i n i c a l an d P a t h o l o g i c a l S o c i e t y ,N ovember 2 0 , 1 9 3 1 .

N o r t h w e s t e r n U n i v e r s i t y M e d i c a l S c h o o l , C h i -c a g o , I l l i n o i s . )N o v e m b e r 2 , 4 p . m . I n o c u l a t e d s i x c u b i cc e n t i m e t e r s o f K p r o t e i n ) Medium 2 f r o m t h ea g a r s l a n t c u l t u r e .N o v e m b e r 3 , 1 0 a . m . F i l t e r e d t h i s c u l t u r e i nK Medium o f N o v e m b e r 2 , t h r o u g h a B e r k e f e l dN f i l t e r T h e c u l t u r e w a s d i l u t e d w i t h f o u rv o l u m e s o f s t e r i l e p h y s i o l o g i c a l s a l i n e s o l u t i o n ;t h e v a c u u m u s e d w a s l e s s t h a n f o u r i n c h e s o f

w a t e r ; t h e t o t a l t i m e o f f i l t r a t i o n w a s l e s s t h a nt e n m i n u t e s . )N o v e m b e r 3 . One d r o p o f f i l t r a t e r e p r e s e n t -i n g o n e - f i f t h d r o p o f t h e o r i g i n a l c u l t u r e , w a si n t r o d u c e d i n t o s i x c u b i c c e n t i m e t e r s o f K M e -d i u m . I n c u b a t e d a t 3 7 d e g r e e s c e n t i g r a d e . T h ef i l t r a t e w a s a l s o t e s t e d f o r p u r i t y a s f o l l o w s : 1 )c u l t u r a l r e a c t i o n s ; 2 ) s u g a r f e r m e n t a t i o n r e -a c t i o n s ; 3 ) a g g l u t i n a t i o n w i t h s p e c i f i c t y p h o i ds e r u m . A l l w e r e t y p i c a l .N o v e m b e r 5 The f o r t y - e i g h t - h o u r c u l t u r e o fN o v e m b e r 3 i n K Medium w a s f i l t e r e d , a s a b o v e ,t h r o u g h a B e r k e f e l d N f i l t e r One d r o p o f t h e

f i l t r a t e w a s a d d e d t o s i x c u b i c c e n t i m e t e r s o fK Medium a n d i n c u b a t e d a t 3 7 d e g r e e s c e n t i -g r a d e .N o v e m b e r 6 . T h e t w e n t y - f o u r - h o u r c u l t u r e o fN o v e m b e r 5 w h i c h g r e w w e l l , w a s a g a i n f i l t e r e d .T h i s t i m e t h e f i n e s t B e r k e f e l d f i l t e r W , w a su s e d . As b e f o r e , a d r o p o f t h i s f i l t r a t e w a s a d d e dt o s i x c u b i c c e n t i m e t e r s o f K Medium a n d i n c u -b a t e d a t 3 7 d e g r e e s c e n t i g r a d e . G r o w t h w a s a b u n -d a n t N o v e m b e r 7 .N o v e m b e r 9 . T h e c u l t u r e w a s a g a i n t r a n s -f e r r e d t o K M e d i u m .N o v e m b e r 1 2 . S t i l l a n o t h e r c u l t u r e w a s m a d e ,

i n e v e r y i n s t a n c e u s i n g t h r e e l o o p s o f c u l t u r e f o rt h e i n o c u l u m .I t i s w o r t h y o f n o t e t h a t t h i s t h r i c e f i l t e r e dc u l t u r e o f B . t y p h o s u s g r e w q u i t e r e a d i l y i nK Medium a s a b o v e o u t l i n e d : a f t e r t h e s e c o n df i l t r a t i o n i t f a i l e d t o g r o w i n p e p t o n e b r o t h . I no t h e r w o r d s , t h e o r g a n i s m h a v i n g b e c o m e f i l t e r -a b l e a n d a c c u s t o m e d t o p r o t e i n m e d i a p r o t e o -p h i l i c ) l o s t i t s a b i l i t y t o g r o w i n o r di n a r y p e p t o n ec o n t a i n i n g n u t r i e n t b r o t h .T h e c u l t u r e s o f N o v e m b e r 9 a n d N o v e m b e r 1 2w e r e e x a m i n e d u n d e r t h e m i c r o s c o p e a n d t h e r ew e r e n o d i s c e r n i b l e b a c i l l i a l t h o u g h t h e c u l -t u r e s w e r e m a r k e d l y t u r b i d . D a r k f i e l d i l l u m i n a -t i o n r e v e a l e d v e r y s m a l l , a c t i v e l y m o t i l e g r a n u l e s ,a n d d i r e c t o b s e r v a t i o n o f t h e s e w i t h t h e o i l e m e r -s i o n l e n s c o n f i r m e d t h e p r e s e n c e o f t h e s e m o t i l eg r a n u l e s , w i t h o u t , h o w e v e r , a f f o r d i n g a n y i n d i c a -

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CALIFORNIA AND WESTERN MEDICINE

F i g . 1.-Photograph o f t h e m i c r o s c o p e an d i t s i n v e n t o r , Royal Raymond R i f e , Ph. D . I n th e i l l u s t r a t i o n t h esource o f i l l u m i n a t i o n i s t o t h e extreme l e f t , t h e l i g h t p a s s i n g through t h e s u b s t a t i o n condenser an d then throught h e o p t i c a l system. The v e r t i c a l tube i s t h e o b s e r v a t i o n t u b e . Th e t h r e e l e n s e s a r e d i r e c t e d toward t h e camera.The camera i s a s p e c i a l s t o p motion camera f o r standard f i l m s . Beyond t h e camera i s t h e motor t o d r i v e i t . Thes t a g e o n which t h e instrument i s p l a c e d i s s o arranged that t h e microscope can be t i l t e d through an y a x i s fromh o r i z o n t a l t o v e r t i c a l .

t i o n o f t h e i r s t r u c t u r e . T h e r e f o r e , t h e s e g r a n u l e sf o r o b v i o u s r e a s o n s c o u l d n o t b e u n e q u i v o c a l l yd i a g n o s e d a s t h e f i l t e r a b l e f o r m o f t h e b a c i l l u s .f f 1

I n t h i s v i a b l e , f i l t e r e d s t a t e t h e c u l t u r e w a st a k e n t o P a s a d e n a , C a l i f o r n i a , a n d , t h r o u g h t h ei n s t r u m e n t a l i t y o f D r . M i l b a n k J o h n s o n , t h e c o -o p e r a t i o n o f D r . A l v i n G . F o o r d , a n d t h e c o u r t e s yo f t h e P a s a d e n a H o s p i t a l , t h e n e c e s s a r y s p a c e a n de q u i p m e n t f o r m o u n t i n g t h e m i c r o s c o p e a n d c o n -t i n u i n g t h e c u l t u r e s w e r e m a d e a v a i l a b l e . T h es u b s e q u e n t d e v e l o p m e n t s , w h i c h a r e t h e i m m e d i -a t e s u b j e c t o f t h i s d i s c u s s i o n , a r e a s f o l l o w s :

N o v e m b e r 1 6 . T h e c u l t u r e s o f N o v e m b e r 1 2 ,m a d e i n C h i c a g o , w e r e t r a n s f e r r e d t o f r e s h KM e d i u m a n d i n c u b a t e d a t 3 7 d e g r e e s c e n t i g r a d eo v e r n i g h t .N o v e m b e r 1 7 . T h e R i f e m i c r o s c o p e w a s i n -s t a l l e d a n d t h e f i r s t c u l t u r e s , t h o s e i n o c u l a t e dN o v e m b e r 1 6 , w e r e e x a m i n e d . T h e p r e l i m i n a r yo b s e r v a t i o n s o f t h e s e c u l t u r e s w e r e m a d e w i t h ap o l a r i z i n g m i c r o s c o p e w i t h a s p e c t r o s c o p i c a t t a c h -m e n t . I t s h o u l d b e b o r n e i n m i n d t h a t t h e e n t i r eo p t i c a l s y s t e m o f t h i s m i c r o p o l a r i m e t e r w a s o fq u a r t z . A o n e - e i g h t e e n t h - i n c h a p o c h r o m a t i c o i li m m e r s i o n l e n s w a s u s e d , w i t h a 2 0 x q u a r t zo c u l a r .When a c u l t u r e o f B . t y p h o s u s i n t h e f i l t e r a b l es t a t e , g r o w n a s a b o v e i n d i c a t e d i n K M e d i u m ,

w a s e x a m i n e d w i t h t h i s m i c r o p o l a r i m e t e r , i t w a so b s e r v e d t h a t t h e p l a n e o f p o l a r i z a t i o n o f t h el i g h t p a s s i n g t h r o u g h t h e c u l t u r e w a s d e v i a t e dp l u s 4 . 8 d e g r e e s , w i t h t h e s i m u l t a n e o u s a p p e a r -a n c e o f a d e f i n i t e b l u e s p e c t r u m . W i t h t h i s o b -s e r v a t i o n i n m i n d , t h e c u l t u r e w a s n e x t s t u d i e dw i t h t h e R i f e m i c r o s c o p e a t 5 0 0 0 d i a m e t e r s .T h e d o u b l e w e d g e q u a r t z p r i s m r e f e r r e d t oa b o v e w a s s e t b y m e a n s o f t h e v e r n i e r t o m i n u s4 . 8 d e g r e e s . * E x a m i n e d i n t h i s p o l a r i z e d l i g h t ,t h i s t h r i c e f i l t e r e d c u l t u r e o f B . t y p h o s u s c u l t i -

v a t e d i n K p r o t e i n ) Medium s h o w e d s m a l l , o v a lg r a n u l e s , many o f t h e m q u i t e a c t i v e l y m o t i l e .T h e s e m o t i l e g r a n u l e s w h e n i n t r u e f o c u s a p -p e a r e d a s b r i g h t t u r q u o i s e - b l u e b o d i e s , w h i c h c o n -t r a s t s t r i k i n g l y , b o t h i n c o l o r a n d i n t h e i r a c t i v em o t i o n , w i t h t h e n o n c o l o r e d , n o n m o t i l e d e b r i s o ft h e m e d i u m .I f f

T h e s e o b s e r v a t i o n s w e r e r e p e a t e d e i g h t t i m e s ,u s i n g i n e a c h i n s t a n c e g r o w t h o f t h e f i l t e r a b l eo r g a n i s m s i n K M e d i u m . T h e c u l t u r e s e x a m i n e dw e r e b o t h t w e n t y - f o u r a n d f o r t y - e i g h t h o u r s o l d .T h e q u a l i t a t i v e r e s u l t s w e r e a l w a y s t h e s a m e ,n a m e l y , t h e o c c u r r e n c e o f s m a l l , o v a l , a c t i v e l ym o t i l e , t u r q u o i s e - b l u e b o d i e s i n t h e c u l t u r e s a n dt h e a b s e n c e o f t h e s e s m a l l , o v a l , a c t i v e l y m o t i l e ,

* Th e reason f o r s e t t i n g t h e quartz wedge I n t h e r e -verse d i r e c t i o n w i l l be discussed i n another p l a c e .

4 1 0 V o l . xxxv, N o . 6

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D e c e m b e r , 1 9 3 1 TESTICULAR SUBSTANCE IMPLANTATION STANLEY 4 1 1F i g _ 2 2 r P r

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F i g . 2.-Arthur I s a a c K e n d a l l , P h . D . , D i r e c t o r o f Med-i c a l R e s e a r c h , Northwestern U n i v e r s i t y Medical S c h o o l ,co-author with Royal Raymond R i f e , P h . D . , o f t h e papero n O b s e r v a t i o n s o n B a c i l l u s Typhosus i n I t s F i l t e r a b l eS t a t e .t u r q u o i s e - b l u e b o d i e s i n t h e u n i n o c u l a t e d c o n t r o lK M e d i a .

From t h e t w o f a c t s t h u s f a r a r r i v e d a t , n a m e l y ,t h a t t h e s m a l l , o v a l , t u r q u o i s e - b l u e b o d i e s w e r ea c t i v e l y m o t i l e a n d a l s o t h a t t h e y w e r e c u l t i v a b l ef r o m K Medium t o K M e d i u m , i t i s s u r m i s e dt h a t t h e s e s m a l l , o v a l , m o t i l e , t u r q u o i s e - b l u e b o d i e sa r e i n d e e d t h e f i l t e r a b l e f o r m s o f t h e B . t y p h o s u s .f I

T h e r e i s a n o t h e r e v e n m o r e d i r e c t p r o c e d u r ef o r e s t a b l i s h i n g t h e i d e n t i t y o f t h e s e s m a l l , o v a l ,m o t i l e , t u r q u o i s e - b l u e b o d i e s . I t h a s b e e n s h o w ni n p r e v i o u s c o m m u n i c a t i o n s 3 t h a t a g a r c u l t u r e s ,o r b e t t e r , b r o t h c u l t u r e s o f B . t y p h o s u s i n o c u -l a t e d i n t o K M e d i u m , b e c o m e f i l t e r a b l e w i t h i ne i g h t e e n h o u r s g r o w t h a t 3 7 d e g r e e s c e n t i g r a d e .I t s h o u l d f o l l o w , i n a s m u c h a s n o t a l l o f t h e b a c i l l ia p p e a r t o b e c o m e f i l t e r a b l e u n d e r t h e s e c o n d i -t i o n s , t h a t a t l e a s t s o m e o f t h e b a c i l l i s h o u l d h a v es i m i l a r t u r q u o i s e - b l u e g r a n u l e s w i t h i n t h e i r s u b -s t a n c e i f t h e y a r e i n d e e d p a s s i n g t o t h e f i l t e r a b l es t a t e . A l s o t h e f r e e s w i m m i n g f i l t e r a b l e f o r m s ,t h e s m a l l , o v a l , m o t i l e , t u r q u o i s e - b l u e b o d i e s d e -s c r i b e d a b o v e , s h o u l d b e s i m u l t a n e o u s l y p r e s e n t .D a r k f i e l d e x a m i n a t i o n o f s u c h a c u l t u r e e i g h t e e nh o u r s o l d r e v e a l e d u n c h a n g e d , a c t i v e l y m o t i l eb a c i l l i b a c i l l i w i t h g r a n u l e s w i t h i n t h e i r s u b s t a n c e ,a n d f r e e s w i m m i n g , a c t i v e l y m o t i l e g r a n u l e s .T h i s c u l t u r e e x a m i n e d i n t h e R i f e m i c r o s c o p ew i t h t h e q u a r t z p r i s m s e t a t m i n u s 4 . 8 d e g r e e sa n d w i t h 5 0 0 0 d i a m e t e r s m a g n i f i c a t i o l , s h o w e dv e r y c l e a r l y t h e t h r e e t y p e s o f o r g a n i s m s j u s td e s c r i b e d , n a m e l y :

F i r s t , u n c h a n g e d b a c i l l i : T h e s e w e r e r e l a t i v e l yl o n g , a c t i v e l y m o t i l e , a n d a l m o s t d e v o i d o f c o l o r .S e c o n d , l o n g , a c t i v e l y m o t i l e b a c i l l i e a c h w i t ha r a t h e r p r o m i n e n t g r a n u l e a t o n e e n d . Theg r a n u l e i n s u c h a n o r g a n i s m w a s t u r q u o i s e b l u e ,r e m i n i s c e n t i n s i z e , s h a p e , a n d c o l o r o f t h e s m a l l ,o v a l , a c t i v e l y m o t i l e , t u r q u o i s e - b l u e g r a n u l e s f o u n di n t h e p r o t e i n m e d i u m K M e d i u m ) w h e r e , i t w i l l

b e r e c a l l e d , n o f o r m e d r o d s h a p e d ) b a c t e r i ac o u l d b e d e m o n s t r a t e d . T h e s e b a c i l l i h a v i n g t h et u r q u o i s e - b l u e g r a n u l e s w e r e c o l o r e d o n l y a t t h eg r a n u l e e n d , t h e r e m a i n d e r o f t h e r o d b e i n gn e a r l y c o l o r l e s s , i n t h i s r e s p e c t c o r r e s p o n d i n g t ot h e u n c h a n g e d n o n f i l t e r a b l e ) b a c i l l i j u s t m e n -t i o n e d .T h i r d , f r e e s w i m m i n g , s m a l l , o v a l , a c t i v e l ym o t i l e , t u r q u o i s e - b l u e g r a n u l e s , p r e c i s e l y s i m i l a r ,a p p a r e n t l y , i n s i z e , s h a p e , a n d c o l o r t o t h o s e s e e ni n t h e g r a n u l a t e d b a c i l l i j u s t d e s c r i b e d .f f f

From t h e f a c t t h a t t h e s e s m a l l , o v a l , t u r q u o i s e -b l u e b o d i e s . c o u l d b e s e e n b o t h i n t h e p a r e n t r o da n d f r e e s w i m m i n g i n t h e m e d i u m , i t i s a s s u m e dt h a t t h e s e s m a l l , o v a l , a c t i v e l y m o t i l e , t u r q u o i s e -b l u e b o d i e s a r e i n d e e d t h e f i l t e r a b l e f o r m o fB . t y p h o s u s .Laboratory o f Medical Research, Northwestern Uni-v e r s i t y Medical S c h o o l , 3 0 3 Chicago Avenue, C h i c a g o ,I l l i n o i s .R i f e Research Laboratory, 7 1 2 E l e c t r i c B u i l d i n g , SanD i e g o .

REFERENCES1 J a m e s A . P a t t e n L e c t u r e , N o r t h w e s t e r n U n i -v e r s i t y B u l l e t i n , V o l . 3 2 , N o . 5 S e p t e m b e r 2 8 ) , 1 9 3 1 .2 . N o r t h w e s t e r n U n i v e r s i t y M e d i c a l S c h o o l B u l -l e t i n , V o l . 3 2 , N o . 8 , O c t o b e r 1 9 ) , 1 9 3 1 , f o r f u l l

d e t a i l s .3 . O p . c i t

TESTICULAR SUBSTANCE IMPLANTATION*COMMENTS ON SOME SIX THOUSAND

IMPLA N T A T I O N SB y L E O L . S T A N L E Y , M. D .

S a n Q u e n t i nD I S C U S S I O N b y J a u Do n B a l l , M. D . , S a n F r a n c i s c o ;R a l p h A . R e y n o l d s , M. D . , S a n F r a n c i s c o ; H . L i s s e r ,M. D . , S a n F r a n c i s c o .ESEARCH r e l a t i v e t o t h e t r a n s p l a n t a t i o n o ft e s t e s a n d i m p l a n t a t i o n o f t e s t i c u l a r s u b s t a n c ew a s b e g u n a t t h e C a l i f o r n i a S t a t e P r i s o n a t S a nQ u e n t i n i n 1 9 1 8 . I t i s now t w e l v e y e a r s s i n c et h i s w o r k w a s s t a r t e d . A p p r o x i m a t e l y f o u r t h o u -s a n d p e r s o n s h a v e b e e n o b s e r v e d a n d h a v e h a da d m i n i s t e r e d t o t h e m s o m e f o r m o f a g o n a d a lp r o d u c t . I t i s now t i m e t o c h e c k u p a n d e v a l u a t e ,i f p o s s i b l e , t h e r e s u l t s .

BROWN-SEQUARD S OBSERVATIONSB r o w n - S e q u a r d , t h e f a t h e r o f e n d o c r i n o l o g y ,i n 1 8 9 0 p u b l i s h e d t h e r e s u l t s o b t a i n e d b y i n j e c t -

i n g i n t o h i m s e l f a n e x t r a c t m a d e b y g r i n d i n g i na m o r t a r w i t h w a t e r , a n d f i l t e r i n g t h e t e s t e s o f Read b e f o r e t h e G e n e r a l M e d i c i n e S e c t i o n o f t h e C a l i -f o r n i a Medical A s s c c i a t i o n a t t h e s i x t i e t h annual s e s s i o na t Sa n F r a n c i s c o , A p r i l 2 7 - 3 0 , 1 9 3 1 .