RECOMMENDED TOOLS - erepo.unud.ac.id

INDEXING JOURNAL :

RECOMMENDED TOOLS :

Home > Archives > Vol 14, No 2 (2014) Vol 14, No 2 (2014)

September, Jurnal Hama dan Penyakit Tumbuhan Tropika

http://jhpttropika.fp.unila.ac.id/index.php/jhpttropika/index

http://jhpttropika.fp.unila.ac.id/index.php/jhpttropika/issue/archive

http://jhpttropika.fp.unila.ac.id/index.php/jhpttropika/issue/view/5

http://id.portalgaruda.org/?ref=browse&mod=viewjournal&journal=9873

http://sinta1.ristekdikti.go.id/?ref=journal&mod=profile&journal=655

https://scholar.google.co.id/citations?user=zCyDRywAAAAJ&hl=id

https://www.zotero.org/

https://www.grammarly.com/

https://www.mendeley.com/download-mendeley-desktop/

http://www.endnote.com/

Table of Contents Articles

IDENTIFIKASI MARKA GEN KETAHANAN HAWAR DAUN BAKTERI PADA

GALUR PADI INTRODUKSI DAN GALUR DIHAPLOID

Ovi Prasetya Winandari, Aris Tjahjoleksono ., Dwinita Wikan Utami

PDF

101-

109

KELIMPAHAN BAKTERI RIZOSFER PADA SISTEM PHT-BIOINTENSIF SERTA

KEMAMPUAN ANTAGONISMENYA TERHADAP Sclerotium rolfsii PADA

KEDELAI

Abdjad Asih Nawangsih, Tita Widjayanti ., Yana Anisa .

PDF

110-

120

POTENSI BAKTERI ENDOFIT DALAM MENEKAN PENYAKIT LAYU STEWART

(PANTOEA STEWARTII SUBSP. STEWARTII) PADA TANAMAN JAGUNG

Haliatur Rahma, Aprizal Zainal, Memen Suharman, Meity S Sinaga, Giyanto .

PDF

121-

127

Pengimbasan Ketahanan Tanaman Pisang Terhadap Penyakit Darah (Ralstonia

solanacearum Phylotipe IV) MengGunakan Bakteri Endofit

Husda Marwan .

PDF

128-

135

POPULASI DAN SERANGAN KUTU PUTIH PEPAYA, PARACOCCUS

MARGINATUS (HEMIPTERA: PSEUDOCOCCIDAE) PADA TANAMAN PEPAYA

DI DAERAH DATARAN RENDAH SUMATERA SELATAN

Rosdah Thalib ., Rossi Fachrullah Rozi, Triani Adam ., Khodijah . ., Siti Herlinda .

PDF

136-

141

ISOLASI DAN IDENTIFIKASI PATOGEN GETAH KUNING MANGGIS MELALUI

PENDEKATAN POSTULAT KOCH DAN ANALISIS SECARA MOLEKULER

I Ketut Suada, Ni Wayan Suniti

PDF

142-

151

SELEKSI GALUR DARI POPULASI F4 KEDELAI YANG TAHAN TERHADAP

PENYAKIT MOSAIK (Soybean mosaic virus) DAN BERDAYA HASIL TINGGI

Wuye Ria Andayanie, Praptiningsih Gamawati Adinurani

PDF

152-

159

ASOSIASI CENDAWAN ANTAGONIS TRICHODERMA HARZIANUM RIFAI DAN

CENDAWAN MIKORIZA ARBUSKULAR UNTUK MENGENDALIKAN PENYAKIT

BUSUK PANGKAL BATANG PADA KEDELAI

Latifah . ., Hendrival . ., Mihram . .

PDF

160-

169

KEMAMPUAN BAKTERI ENDOFIT TANAMAN SEMANGKA DALAM MENEKAN

PERKEMBANGAN PENYAKIT BERCAK DAUN YANG DISEBABKAN OLEH

JAMUR COLLETOTRICHUM SP.

Eryna Elfasari Rangkuti, Dwi Suryanto ., Kiki Nurtjahja ., Erman Munir .

PDF

170-

177

ASAI KEMAMPUAN BAKTERI ENDOFIT DARI KACANG TANAH DALAM

MENGHAMBAT PERTUMBUHAN Sclerotium sp. PADA KECAMBAH KACANG

TANAH

Lisa Novita Arios, Dwi Suryanto ., Kiki Nurtjahja ., Erman Munir .

PDF

178-

186

EFIKASI CENDAWAN ENTOMOPATOGEN LECANICILLIUM LECANII

TERHADAP BEMISIA TABACI (HEMIPTERA: ALEYRODIDAE) PADA KEDELAI

Yusmani Prayogo .

PDF

187-

200

http://jhpttropika.fp.unila.ac.id/index.php/jhpttropika/article/view/63


http://jhpttropika.fp.unila.ac.id/index.php/jhpttropika/article/view/63/61




































142 J. HPT Tropika Vol. 14, No. 2, 2014: 142 -151J. HPT Tropika. ISSN 1411-7525Vol. 14, No. 2: 142 – 151, September 2014

ISOLASI DAN IDENTIFIKASI PATOGEN GETAH KUNING MANGGISMELALUI PENDEKATAN POSTULAT KOCH

DAN ANALISIS SECARA MOLEKULER

I Ketut Suada & Ni Wayan Suniti

Program Studi Agroekoteknologi Fakultas Pertanian Universitas UdayanaJl. PB. Sudirman Denpasar 80232E-mail: [email protected]

ABSTRACT

Isolation and identification of mangosteen yellow latex pathogen through Koch’s Postulate application and molecularanalysis. The yellow latex disease decreases fruit quality of mangosteen because exogenic latex causes dirty fruit and theendogenic latex makes the bitter fruit taste and does not deserve to be consumed. The causal agent of the disease causedphusilogical disorder so that cells break due to unstability of cell turgor, the drift irrigation treatment was able to decrease thedisease of 35.22%, therefore the causal agent could be microbe that promote the yellow latex. This research was aimed to findthe yellow latex pathogens with its characteristics. The Koch Postulate was apllied to isolate and proved the microbesassociated to the yellow latex and molecular analysis was constructed subsequently to find the microbe species. The resultof the research proved that there were three fungus species as the biotic agent responsible to the disease. The fungus wereVerticillium albo-atrum with the highest pathogenecity ( 74.87%), followed by Fusarium oxysporum ( 70.15%), and Pestalotiamacrotricha (20.32%).

Key words: biotic factor, Postulate Koch, yellow latex

ABSTRAK

Isolasi dan identifikasi patogen getah kuning manggis melalui pendekatan Postulat Koch dan analisis secara molekuler.Getah kuning pada manggis sangat menurunkan kualitas buah karena getah eksogenik menyebabkan buah terlihat kotor dangetah endogenik mengakibatkan rasa buah pahit sehingga tidak layak dikonsumsi. Dugaan penyebab getah kuning adalahabiotik-fisiologis yaitu sel pecah akibat ketidakstabilan air sel, namun perlakuan irigasi tetes hanya menurunkan getah kuningsebesar 35,22% sehingga patut diduga adanya faktor biotik yang memacu munculnya getah tersebut. Tujuan penelitianadalah menemukan patogen penyebab getah kuning dengan karakteristiknya. Cara penentuannya adalah dengan pendekatanPostulat Koch yaitu isolasi, inokulasi, dan reisolasi yang dilanjutkan dengan analisis molekuler untuk menentukan spesiesjamur. Hasil penelitian menunjukkan penyebab getah kuning adalah tiga jenis jamur yaitu Verticillium albo-atrum denganpatogenesitas tertinggi yaitu 74,87%, diikuti oleh Fusarium oxysporum sebesar 70,15%, dan Pestalotia macrotricha sebesar20,32%.

Kata kunci: faktor biotik, getah kuning, Postulat Koch

PENDAHULUAN

Gangguan penyakit getah kuning (gummosis)merupakan salah satu penyebab utama rendahnyakualitas buah manggis dan hal ini merupakan masalahyang sangat serius yang dihadapi oleh para pelakuagribisnis manggis (Rai et al., 2009). Getah kuningadalah cairan atau eksudat yang keluar dari pembuluhgetah kulit buah manggis, seringkali mengotori buah danmenurunkan kualitas buah (Verheij, 1992). Penyakitgetah kuning dapat menyebabkan daging buah terlumurigetah kuning, penampilan buah tidak menarik, dan kulit

buah menjadi keras sehingga sukar dibelah. Buah yangbergetah kuning rasanya tidak enak dan pahit bahkantidak layak dimakan, sehingga sangat tidak layakdiekspor. Menurut Poerwanto (2000) hanya sekitar 20%dari total produksi buah manggis layak ekspor karenarendahnya kualitas. Para pelaku agribisnis manggis mulaidari pekebun, pedagang, dan eksportir sangat berharapagar masalah penyakit getah kuning dapat diatasi.

Dugaan sementara, getah kuning diakibatkanoleh penyakit fisiologis yaitu turgor sel jaringan buahberubah secara ekstrim akibat kandungan air sel berubahsehingga sel pecah dan mengeluarkan getah kuning.

Suada & Suniti Isolasi dan Identifikasi Patogen 143

Oleh karena itu untuk menanggulanginya dilakukan upayairigasi tetes. Penelitian Syah et al. (2007) melaluipengairan yang terus-menerus (metode tetes) yangdilakukan di Kabupaten Lima Puluh Kota dan PesisirSelatan Sumatera Barat hanya mampu menurunkankejadian getah kuning sebesar 23%. Sementara itu,penelitian Rai et al. (2009) menggunakan irigasi tetesdengan penambahan pupuk kalsium dan antitranspiranhanya mampu menurunkan getah kuning sebesar47,43%. Berdasarkan kedua data tersebut berarti upayapengendalian belum dapat menuntaskan kejadianpenyakit getah kuning manggis. Hal itu sekaligusmenunjukkan penyebab getah kuning bukanlah bersifatfisiologis, namun bersifat biologis yaitu adanya gangguanmikroba patogen. Pengamatan yang dilakukan Rai etal. (2009) telah dijumpai mikroba yang berasosiasi dalamgetah kuning yaitu Penicillium sp. , Fusariumoxysporum, dan Xanthomonas namun belum dibuktikansebagai patogen penyebab getah kuning. Oleh karenaitu perlu dilakukan penelitian yang dapat membuktikanpatogen getah kuning dengan menerapkan isolasi,inokulasi, reisolasi, dan identifikasi mikroba yangberasosiasi dan teknik pembuktian ini dikenal denganmetode Postulat Koch. Setelah diketahui mikrobasebagai penyebab maka kemudian mikroba tersebutdiidentifikasi secara molekuler. Tujuan penelitian iniadalah untuk menentukan patogen penyebab gejala getahkuning pada buah manggis. Manfaat penelitian ini adalahdengan diketahui patogen penyebab penyakit getahkuning ini maka penyakit ini dapat dikendalikan secaratepat sehingga kualitas buah dapat ditingkatkan.

METODE PENELITIAN

Tempat dan Waktu. Analisis sampel dilakukan diLaboratorium Bioteknologi Fakultas PertanianUniversitas Udayana, dan analisis molekuler diLaboratory of Forest Research Station, Field ScienceCenter for Nothern Biosphere Hokkaido University.Penelitian ini dilakukan mulai Januari sampai Juli 2013.Bahan yang digunakan adalah buah manggis yangdiambil dari pohonnya di sentra produksi manggis BanjarDuren Taluh, Desa Belimbing Kecamatan Pupuan,Tabanan, Bali. Untuk isolasi jamur diperlukan mediaPDA (Potato Dextrose Agar) yang mengandung 0,1%kloramfenikol dan media CPGA (Casamino PotatoGlucose Agar) mengandung 0,1% PCNB(Pentachloro Nitro Benzena) untuk mengisolasibakteri. Alat yang digunakan berupa mesin PCR(Thermal cycler), alat DNA elektroforesis, cawanPetri, kulkas -4oC, enkast untuk ruang isolasi, pewarnajaringan xillol, dan kapas steril.

Pengamatan Intensitas Penyakit. Buah yangbergetah kuning, diamati/diambil sebanyak 3 (tiga) kaliyaitu pada umur 5 Minggu Setelah Bunga Mekar(MSBM), 10 MSBM, dan 15 MSBM. Masa pengamatanini merupakan masa perkembangan dan kematanganbuah menurut kriteria Rai (2007). Pengamatan buahyang terserang getah kuning dibedakan menjadipersentase buah yang bergetah kuning di kulit buahbagian luar dan persentase buah yang bergetah kuningdi kulit buah bagian dalam. Setiap pengamatan, 10 buahmanggis per pohon dipetik secara acak untuk diamati dilaboratorium. Intensitas getah kuning di kulit buah bagianluar dihitung menggunakan rumus:

Skor tingkat kerusakan yang digunakan mengikutikriteria Rai et al. (2009) yaitu :

Persentase buah yang daging buah/arilnya terkenagetah kuning dihitung dengan rumus:

Pengambilan Sampel Buah Manggis BergetahKuning dan Isolasi Patogen. Buah contoh diambildari pohon yang menunjukkan gejala getah kuningsebanyak 10 buah manggis dan diamati di laboratorium.

%100BAP

%100ZN

)v(nI

P = persentase serangan A = jumlah contoh buah yang daging buah/arilnya

ditemukan adanya noda getah kuning B = jumlah contoh buah yang diamati

1 = baik sekali, kulit mulus tanpa tetesan getah kuning

2 = kulit mulus, dengan 1-5 tetes getah kunuing tanpa mempengaruhi warna buah

3 = cukup baik, kulit mulus dengan 6-10 tetes getah uning tanpa mempengaruhi warna buah

4 = buruk, kulit kotor karena getah kuning dan ada bekas aliran membentuk jalur-jalur berwarna kuning di permukaan buah

5 = buruk sekali, kulit kotor karena tetesan getah kuning dan terdapat bekas aliran membentuk jalur-jalur berwarna kuning di permukaan buah, buah menjadi kusam dan keras

I = intensitas serangan n = jumlah buah yang terserang dengan nilai skor

tertentu v = harga numerik tiap tingkat kerusakan (skor) N = jumlah semua sampel yang diamati Z = nilai tingkat kerusakan (skor) tertinggi

144 J. HPT Tropika Vol. 14, No. 2, 2014: 142 -151

Setelah diseka dengan alkohol 70% sebanyak tiga kali,bagian jaringan di sekitar getah (± 2 mm2) dan getahnyasendiri diambil secara aseptik kemudian direndam dalamnatrium hipoklorit 2% selama 5 menit, lalu dibilas denganakuades sebanyak tiga kali dan dikeringkan dengankertas tissue steril. Bagian jaringan tersebut kemudiandiinkubasi selama lima hari pada media PDA-kloramfenikol untuk mendapatkan isolat jamur dan mediaCPGA-PCNB untuk isolat bakteri. Jamur dan ataubakteri yang tumbuh disubkultur pada media barumasing-masing sampai didapatkan biakan murni.

Inokulasi Isolat Patogen. Setelah didapatkan biakanmurni, tiap isolat diinokulasikan satu persatu pada buahmanggis sehat baik di laboratorium maupun di pohonmenggunakan kapas steril yang sebelumnya telahdisentuhkan/dicolekkan pada biakan mikroba. Tiap isolatdiinokulasikan dengan ulangan 10 sampai 19 kali (buahmanggis) dan diletakkan dalam kotak plastik ukuran20x30x10 cm2 (percobaan di laboratorium). Inokulasiini dilakukan pada buah umur 5 MSBM, 10 MSBM, dan15 MSBM baik di laboratorium maupun di pohon.Sebelum inokulasi, permukaan buah diseka tiga kalidengan alkohol 70%. Gejala getah kuning yang munculpada buah manggis di laboratorium dan di pohon diamatikemudian ditentukan skornya.

Reisolasi Isolat Patogen. Buah yang diperlakukan dipohon dipetik kemudian dibawa ke laboratorium untukdiisolasi langsung mikrobanya. Buah yang bergejala (dilaboratorium dan dari pohon) diseka dengan alkohol 70%kemudian dibelah dan bagian jaringan di sekitar batasgejala (± 2 mm2) diambil dan direndam dalam natriumhipoklorit 2% selama 5 menit, dibilas akuades tiga kalilalu dikeringkan dengan tissu steril. Sebagian potonganjaringan tersebut dikultur pada media PDA-kloramfenikol untuk menumbuhkan jamur dan sebagianlagi pada media CPGA-PCNB untuk menumbuhkanbakteri. Mikroba yang tumbuh dalam masing-masingmedia tersebut disubkultur beberapa kali sampai didapatbiakan murni yang siap diidentifikasi. Selanjutnya, bagianjaringan yang bergejala getah kuning maupun tidak,diamati di bawah mikroskop untuk mengetahuiperbedaan struktur antara kedua jaringan tersebut.

Identifikasi Isolat Patogen. Isolat patogen hasilreisolasi yang menimbulkan gejala getah kuningdiidentifikasi secara visual di bawah mikroskop denganmencocokkan ciri-ciri jamur yang teramati terhadappustaka yang ada (Barnett & Hunter, 1998; CMI, 1981),sedangkan analisis secara molekulernya dilakukandengan cara sebagai berikut. DNA miselium jamur isolat

tersebut diekstrak menggunakan NucleoSpin Plant IIMACHEREY-NAGEL GmbH & Co. KG (Germany).Amplifikasi DNA daerah ITS (Internal TranscribedSpacer region in the nuclear ribosomal repeat unit)yang mencakup 5,8S-rDNA dilakukan menggunakanThermal Cycler (Infinigen Biotech Inc., USA)menggunakan 2x PCR Master Mix Solution (i-Taq)iNtRON Biotechnology (Germany) dengan primerspesifik (SIGMA) yaitu ITS1: (5’TCCGTAGGTGAACCTTGCGG3’) (Gardes & Bruns, 1993) dan satuprimer universal ITS4: (5’TCCTCCGCTTATTGATATGC3’) (White et al., 1990). Kondisi PCR terdiridari: persiapan (initialization) 94oC 10 menit, diikutidenaturasi (denaturation) pada 94oC selama 1 menit,penempelan primer (annealing) pada suhu 55oC selama1,5 menit sebanyak 30 siklus, dan pemanjangan(elongation) 72oC selama 2 menit, serta proses finaldipertahankan pada suhu 72oC selama 5 menit. Kualitasdan kuantitas produk PCR ditentukan denganelektroforesis gel agarose-LE Classic type NACALAITESQUE Inc., Kyoto Japan menggunakan CBSScientific Co. Inc. Masing-masing produk PCRdimurnikan menggunakan NucleoSpin Gel and PCRClean-up purification kit (MACHEREY-NAGELGermany) dan kemudian disekuens dengan primer ITS1dan ITS4 yang dilakukan di Forest Research Station,Field Science Center for Nothern Biosphere,Hokkaido University, Japan. Reaksi sekuensmengikuti prosedur Solgent Co., Ltd. (Daejeon, Korea).Sekuens DNA yang diperoleh dibandingkan dengan database GenBank di National Center for BiotechnologyInformation (NCBI) menggunakan Nucleotide basicalignment search tool algorithm (BLAST program).Sekuens tersebut dicocokkan dengan sekuens yangpaling dekat kemudian dilakukan analisis neighbor-joining (NJ) di NCBI untuk menginterpretasikan tingkatspesies, genus, dan famili. Sekuens dianggapteridentifikasi tingkat spesies jika lebih dari 97% sesuaidengan sekuens referensi yang diperoleh dari sporokarpspesies yang sama dan sekaligus membentuk pohontunggal dengan spesimen pohon NJ. Jika kecocokantersebut kurang dari 97% maka identitas jamur tersebutadalah pada tingkat genus atau famili sesuai dengandiagram filogenetik yang diperoleh.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Persentase Getah Kuning. Getah kuning yangmengotori/keluar ke permukaan luar buah disebut GetahKuning Eksogenik dan yang ke dalam mengotori arilbuah disebut Getah Kuning Endogenik. Persentaseserangan getah kuning eksogenik pada buah cukup tinggi


seperti ditunjukkan pada Tabel 1. Persentase getahkuning rata-rata dari 10 pohon tanaman manggis (35buah per pohon) adalah 36,93±17%. Getah kuningterbanyak terjadi pada masa 10 MSBM yaitu sebesar41,20±9%. Tingginya persentase getah kuning pada 10MSBM ini kemungkinan disebabkan karena aktivitasbiologis buah mengalami puncaknya sehingga getahkuning sebagai metabolit sekunder normal pada manggisterbentuk maksimum. Getah kuning yang terbentukdalam buah manggis adalah akibat terbentuknyametabolit sekunder sebagai proses metabolisme normaltumbuhan seperti pada Famili Rubiaceae. Getah tersebutakan mengalir dan tertampung pada saluran latisifer(saluran getah buah, Gambar 1) sebagai proses yangnormal dan dapat juga dipacu akibat adanya gangguanjamur. Latisifer adalah sel sekresi yang memanjang yangditemukan dalam daun/batang/buah tanaman yang

memproduksi lateks/karet sebagai metabolit sekunder.Ada 2 jenis latisifer yaitu: 1) latisifer artikulasi yaitu serialsel lateks yang bergabung, contoh xilem; 2) nonartikulasiyaitu satu sel memanjang (syncytial cell) yang pertamakali dijelaskan oleh de Barry pada tahun 1887. Fungsigetah latisifer adalah penyembuhan luka, pertahananterhadap herbivora, dan untuk keperluan taksonomi(Famili Euphorbiaceae). Contoh tanaman famili iniadalah karet, kamboja, alamanda, jarak, dan Plumeriaobtusa (Mahlberg, 1993).

Keluarnya getah kuning baik yang bersifateksogenik maupun endogenik pada manggis adalahkarena adanya penumpukan getah pada latisifer tersebutyang jika kondisinya penuh maka tekanannya meningkatdan akhirnya mencari jalan ke luar lewat latisifer yangbermuara pada lapisan luar maupun dalam buah.

Gambar 1. Saluran latisifer tempat penampungan getah kuning dalam jaringan buah (200X). (A-C) gambarmemanjang, (D-F) gambar melintang, (F) latisifer mengandung getah; (A,B,D,E) Saluran latisiferhasil penelitian; (C,F) saluran latisifer sebagai pembanding. (Sumber: http://images.search.yahoo.com/images/view;ylt=A0PDoX.vgv1RflkA0j2jzbkF, diakses pada 10 Agustus 2013).

A B C

F E D

Tabel 1. Persentase getah kuning eksogenik (permukaan luar buah) dan getah kuning endogenik (pada aril buah)berdasarkan umur buah

Keterangan: MSBM=minggu setelah bunga mekar, SE=Standard Error pengukuran.

Getah kuning eksogenik (X±SE%) Getah kuning endogenik (X±SE%) 5 MSBM 10 MSBM 15 MSBM 15 MSBM

35,00 ± 10 41,20 ± 9 34,60 ± 14 72,00 ± 25

Rata-rata getah kuning eksogenik pada manggis selama penelitian

36,93 ± 17


Disamping sel latisifer memang terbentuk normalpada perkembangan buah, saluran getah juga akanterbentuk sembarang pada sel-sel buah yang lemah danmenjadi terusan dari saluran latisifer yang mengantarkangetah ke permukaan buah (Dorly et al., 2008). Perananmikroba terutama miselium jamur selanjutnya adalahmembantu mengalirkan getah dari sel-sel sekitar saluranke latisifer. Jamur yang tumbuh akan melubangi seldan langsung mengalirkan getah kuning ke saluranlatisifer sehingga tekanan getah pada saluran tersebutmeningkat dan akhirnya keluar baik sebagai getah kuningeksogenik maupun endogenik. Jika saluran latisifer alamimaupun terusannya bermuara dekat dengan permukaandan menembusnya ke luar disebut sebagai getah KuningEksogenik dan jika tembus ke dalam dan mengenai arildisebut Getah Kuning Endogenik.

Mikroba Penyebab/Pemacu Getah Kuning.Mikroba penyebab getah kuning adalah jamur yaitumikroba yang berbentuk benang dan memiliki tubuh buahyang berbeda-beda antar jenis sebagai ciri khas genusmaupun spesies. Jamur tumbuh dalam jaringan tanamandan mendapatkan makanan dari sel tanaman manggissebagai inangnya. Jamur yang ditemukan pada getahkuning sebagai hasil isolasi dari getah dan jaringan disekitar keluarnya getah baik eksogenik maupunendogenik adalah sebanyak 14 jenis jamur dan dua jenisbakteri. Setelah jamur dan bakteri tersebutdiinokulasikan mengikuti Postulat Koch, baik pada buahdi laboratorium maupun pada buah di pohon, hanya 3jenis jamur yang mampu menghasilkan gejala getahkuning sedangkan yang lain termasuk bakteri tidak dapatmenimbulkan gejala getah kuning (Gambar 2).

Gambar 2. (A,B,C,D,E) Gejala getah kuning yang muncul setelah diinokulasi dengan isolat jamur pemacu getahkuning pada buah di laboratorium dan (F) buah di pohon, (A-C) gejala getah kuning pada buah umur 5MSBM, D=10 MSBM, dan E=15 MSBM

CBA

F

ED


Tiga jenis jamur yang diuji melalui Postulat Koch(Gambar 3) tersebut mampu menimbulkan gejala getahkuning yang bersifat eksogenik dengan tingkatpatogenisitas yang berbeda. Setelah dilakukanidentifikasi secara visual di bawah mikroskop dandilanjutkan dengan analisis molekuler maka didapatnama spesies jamur tersebut. Jamur tersebut adalahVerticillium albo-atrum, Fusarium oxysporum, danPestalotia macrotricha (Tabel 2). Jamur V. albo-atrum mampu menimbulkan gejala getah kuning padahari ke-5 setelah inokulasi dengan jumlah titik getah 1-5buah gejala dengan skor 1-2 dan intensitas seranganpada buah tertinggi yaitu 74,87%, diikuti oleh

F. oxysporum sebesar 70,15% dan P. macrotrichadengan intensitas serangan 20,32%.

Masing-masing DNA isolat jamur seperti padaGambar 3 diisolasi, kemudian di PCR, dan hasilnyadisekuens menggunakan sistem BLAST untukmengidentifikasi jenis jamur. Identifikasi jamur patogengetah kuning dilakukan dengan cara analisis DNAmenggunakan Phytoplan Kit II kemudian DNAspesifiknya diperbanyak dengan rPrimer dan fPrimerpada thermal cycler machine PCR kemudian disekuensdan dicocokkan dengan sistem BLAST sehingga diperolehnama spesies jamur dengan kecocokan tertinggi sepertipada Tabel 3.

Gambar 3. Morfologi jamur pemacu getah kuning pada media PDA. (A) koloni, (B) miselium dengan tubuh buah,(C) spora Fusarium oxysporum; (D) koloni, (E) tubuh buah, (F) spora Verticillium albo-atrum; (G)koloni, (H) spora Pestalotia macrotricha.

A B C

D E F

G H

148 J. H

PT

Tro

pik

aV

ol. 1

4, N

o. 2

, 20

14

: 14

2 -1

51

Tabel 2. Jenis isolat yang ditemukan pada jaringan bergetah kuning eksogenik hasil inokulasi

Nomor isolat

Jenis mikroba

Hasil inokulasi pada buah di lab.

Kemunculan getah kuning hasil inokulasi pada buah

Kemunculan getah kuning hasil inokulasi pada buah di pohon (pada 10 hari setelah inokulasi)

Rataan kemunculan getah kuning pada buah (di lab dan pohon)

Karakteristik pertumbuhan koloni di media PDA di lab.

1

(J1.1)

Jamur: Pestalotia macrotricha de NOT

Menimbulkan gejala pada 11 hsi

Jumlah getah kuning 0-3 titik (skor 1-2) Kemunculan gejala 23,5% (sampel 17 buah)

Jumlah getah kuning 1-5 titik (skor 1-3)

Kemunculan gejala 17,14% (sampel 35 buah)

20,32% Koloni tumbuh cepat: pada biakan umur 3 hari mencapai diameter rata-rata 3,2 cm

2 (J1.2)

Jamur: Verticillium albo-atrum

Menimbulkan Gejala pada 5 hsi



74,87% Koloni tumbuh sangat cepat: pada biakan umur 3 hari telah mencapai diameter rata-rata 4,7 cm

3 (J30)

Jamur: Fusarium oxysporum

Menimbulkan gejala pada 7 hsi



70,15% Koloni tumbuh cepat: pada biakan umur 3 hari telah mencapai diameter 2,6 cm

4 Jamur Tidak menimbulkan gejala sampai 11 hsi

- Tidak menimbulkan gejala 0 Koloni tumbuh cepat: pada biakan umur 3 hari telah mencapai diameter 3,5 cm





7 Jamur Tidak menimbulkan gejala sampai 11

- Tidak menimbulkan gejala 0 Koloni tumbuh cepat: pada biakan umur 3 hari telah mencapai

Su

ada &

Su

niti

a

si d

an

Ide

ntifik

as

i Pa

tog

en 149

Tabel 2. lanjutan

Keterangan: Kecepatan perkembangan diameter koloni: <1,0 cm/hari = lambat; 1,0-1,5 cm/hari = cepat; >1,5 cm/hari = sangat cepat.

Nomor isolat

Jenis mikroba

Hasil inokulasi pada buah di lab.

Kemunculan getah kuning hasil inokulasi pada buah

Kemunculan getah kuning hasil inokulasi pada buah di pohon (pada 10 hari setelah inokulasi)

Rataan kemunculan getah kuning pada buah (di lab dan pohon)

Karakteristik pertumbuhan koloni di media PDA di lab.





10 Jamur Tidak menimbulkan gejala sampai pengamatan 11 hsi





- Tidak menimbulkan gejala 0 Koloni tumbuh lambat: pada biakan umur 3 hari baru mencapai diameter 4 mm




- Tidak menimbulkan gejala 0 Koloni tumbuh cepat: pada biakan umur 3 hari telah mencapai


Tabel 3. Identitas molekuler jamur pemacu getah kuning

No Identitas berdasarkan BLAST dan analisis filogenetik

Kecocokan BLAST dengan kemiripan tertinggi Penjelasan (Definition)

No Asesi (Acession number)

Kesamaan sekuens (Overlapped sequence)

1 Pestalotia macrotricha Pestalotia macrotricha KYO for 18S rRNA genes

AB540581 611/620 (98%)

2 Verticillium albo-atrum Verticillium albo-atrum strain HDFE1 18S rRNA gene

HM486421 500/502 (99%)

3 Fusarium oxysporum Fusarium oxysporum strain YS-01

HQ671180 521/523 (99%)

SIMPULAN

Telah diisolasi sebanyak 14 jenis jamur dan 2 jenisbakteri dari getah kuning manggis. Hanya tiga jenisjamur diantaranya mampu memacu munculnya getahkuning dengan tingkat kemampuan yang berbeda.Berdasarkan morfologi dan analisis molekuler, spesiesjamur yang paling kuat patogenisitasnya adalahVerticillium albo-atrum yaitu sebesar 74,87% diikutioleh Fusarium oxysporum 70,15%, dan Pestalotiamacrotricha sebesar 20,32%. Getah kuning yangmengalir menuju ke luar buah dan muncul dipermukaankulit luar buah disebut sebagai Getah Kuning Eksogenikdan yang mengalir ke dalam dan membasahi aril buahdisebut Getah Kuning Endogenik. Munculnya getahkuning eksogenik tidak selalu diikuti oleh getah kuningendogenik sebab getah kuning akan mengalir ke luaratau ke dalam buah mengikuti saluran latisifer yangkeberadaannya/terbentuknya bersifat acak dalamjaringan buah manggis.

SANWACANA

Penulis menyampaikan terima kasih sebesar-besarnya kepada Bapak Eka asal Banjar Duren Taluh,Desa Belimbing, Kecamatan Pupuan, KabupatenTabanan, Bali atas izin penggunaan tanaman manggisdi lahannya sebagai tempat penelitian serta telah secaratulus ikhlas membantu pengamatan lapangan selamapenelitian berlangsung. Kepada Rektor melalui KetuaLP2M Universitas Udayana kami sangat berterimakasihatas dana yang diberikan sehingga penelitian ini dapatberjalan dengan baik.

DAFTAR PUSTAKA

Barnett HL & BB Hunter. 1998. Illustrated Generaof Imperfect Fungi. 4th Ed. APS Press,Minnesota.

CMI. 1981. Description of Pathogenic Fungi andBacteria. Commonwealth Mycology Institute,England.

Dorly S, Tjitrosemito, Poerwanto R & Juliarini. 2008.Secretory duct structure and phytochemistrycompounds of yellow latex in mangosteen fruit.Hayati Journal of Bioscience 15(3): 99–104.

Gardes M & Bruns TD. 1993. ITS primers withenhanced specificity for basidiomycetes:application to the identification of mycorrhizae andrusts. Molecular Ecology 2: 113–118.

Mahlberg PG. 1993. Laticifers-an historical perspective.Botanical Review 59(1): 1–23.

Poerwanto R. 2000. Teknologi Budidaya Manggis.Makalah Disampaikan pada Diskusi NasionalBisnis dan Teknologi Manggis, Kerjasama PusatKajian Buah-buahan Tropika dengan DirektoratJenderal Hortikultura dan Aneka Tanaman,Departemen Pertanian, Bogor.

Rai IN. 2007. Bunga dan buah gugur pada tanamanmanggis (Garcinia mangostana L.) asal biji dansambungan. Agritrop. 26(2): 66–73.


Rai IN, Wiratmaja W, Semarajaya CGA & Arsana D.2009. Pengendalian getah kuning pada buahmanggis dengan irigasi tetes, pemberianantitranspiran, dan pemupukan kalsium.Kerjasama Kemitraan antara Badan Penelitiandan Pengembangan Pertanian Kantor PusatJakarta dengan Universitas Udayana. UniversitasUdayana, Denpasar.

Syah MJA, Mansyah E, Titin, Dewi, & Usman F. 2007.Teknologi pengendalian getah kuning pada buahmanggis. http://w.w.w.pustaka.deptan.go.id/navasi/ kl1070102.pdf. Diakses pada 5 Agustus2013.

Verheij EWM. 1992. Garcinia mangostana L. In:Verheij EWM & Coronel RE. (Eds.). Buah-Buahan yang Dapat Dimakan, pp. 77–181.Sumberdaya Nabati Asia Tenggara (PROSEA).

White TJ, Bruns TD, Lee S, & Taylor J. 1990. Analysisof phylogenetic relationships by amplification anddirect sequencing of ribosomal RNA genes. In:Innis MA, Gelfand DN, Sninsky JJ, & White TJ(Eds.), PCR protocols: a guide to methods andapplications. pp: 315–322. Academic, New York.

RECOMMENDED TOOLS - erepo.unud.ac.id

Documents

Transcript of RECOMMENDED TOOLS - erepo.unud.ac.id