Prošla nedelja
description
Transcript of Prošla nedelja
Prošla nedelja
Imunoaglutinacija (princip, podela, primena)
Imunoprecipitacija (princip, podela, primena)
ANTIGEN-ANTITELOREAKCIJE SA OBELEŽENIM
ANTITELIMA
ANTIGEN-ANTITELO REAKCIJE SA OBELEŽENIM ANTITELIMA
M
Fc
Fab
ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY (ELISA,EIA) - marker ENZIM
IMUNOFLUORESCENCIJA (IF) - marker FLUORESCENTNA BOJA
RADIOIMMUNO ASSAY (RIA) - marker RADIOAKTIVNI IZOTOP
AtM - marker
Fab
Enzimski imuno-test(EIA, ELISA)
Marker je enzim, a obeleženo je primarno At (specifično za antigen) ili sekundarno At (anti-Ig antitelo)
Obavlja se u pločama za mikrotitraciju (pločama sa 96 rupica)
Signal se detektuje kolorimetrijski (pomoću spektrofotometra)
Koristi se za detekciju antigena u tečnim uzorcima (npr. serumu) ili antitela (najčešće u serumu)
Bazira se na principu promene boje supstrata pod dejstvom enzima
Može da bude kvalitativna ili kvantitativna
ELISA detekcija antitela
antigen kojim je obložena ploča
ispitivani serum
InkubacijaIspiranje
6
12
ELISA detekcija antitela
obeleženasekundarna At
EE
E
E
E
E
ELISA detekcija antitela
Inkubacija
EE
E
E
E
E
12
6
ELISA detekcija antitela
Ispiranje
EE
E E
EE
E
E
ELISA detekcija antitela
E
E E
E
12
6
Kolorimetrijska detekcija
ELISA detekcija antitela
ELISA (detekcija Ag u tečnom uzorku - SANDWICH ELISA)
neobeleženaAg-specifičnaAt
uzorak(serum)Ag
Inkubacija
12
6
Ispiranje
ELISA (detekcija Ag u tečnom uzorku - SANDWICH ELISA)
Inkubacija
12
6
Ispiranje
E
EE
E
E
obeleženaAg-specifičnaAt
ELISA (detekcija Ag u tečnom uzorku - SANDWICH ELISA)
Kolorimetrijska detekcija
12
6 E E
dodavanje supstrata
ELISA (detekcija Ag u tečnom uzorku - SANDWICH ELISA)
Imunofluorescencija(IF)
Marker je fluorescentna boja (fluorohrom), a obeleženo je primarno At (specifično za antigen) ili sekundarno At (anti-Ig antitelo)
Signal se detektuje pomoću fluorescentnog mikroskopa ili protočnog citoflourimetra
Koristi se za detekciju antigena (na ili u ćeliji/tkivu) ili antitela (najčešće u serumu)
Bazira se na principu da fluorohromi kada se ozrače svetlom jedne talasne dužine bivaju pobuđeni da emituju svetlo druge talasne dužine (fluorescein – zeleno, rodamin – crveno ...)
IMUNOFLUORESCENCIJA
INDIREKTNA (IIF)(obeleženo sekundarno At)
DIREKTNA (DIF)(obeleženo primarno At)
Detekcija Ag
DIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA
F
FF
F
fiksiraniuzorak
obeleženaprimarna At
F
FF
F
InkubacijaIspiranje
12
6
DIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA
F F
Ekscitacija
Fluorescencija
DIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA
DIF Chlamydia trachomatis
IMUNOFLUORESCENCIJA
INDIREKTNA (IIF)(obeleženo sekundarno At)
DIREKTNA (DIF)(obeleženo primarno At)
Detekcija Ag
Detekcija Ag
Detekcija At
fiksiraniantigen
ispitivani serum
INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA (detekcija i kvantitiranje At u serumu pacijenta)
InkubacijaIspiranje
6
INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA (detekcija At u serumu pacijenta)
Inkubacija
obeleženosekundarno AtF
F
F
F
F
FF
F
INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA (detekcija At u serumu pacijenta)
Inkubacija
FF
F
F
F
FF
F
12
6
INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA (detekcija At u serumu pacijenta)
Ispiranje
FF
F F
FF
F
F
INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA (detekcija At u serumu pacijenta)
INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA (detekcija At u serumu pacijenta)
F
F F
F
Ekscitacija
Fluorescencija
Indirektna Imunofluorescencija
Neutrofili (cANCA)Citoplazmatsko vezivanje
ANCA (anti neutrofilna At protiv citoplazmatskih Ag)
Neutrofili (pANCA)Perinuklearno vezivanje
Indirektna Imunofluorescencija
Glomerulonefritis Goodpasture’s sindrom
(At protiv Ag glomerularne bazalne membrane)
IMUNOFLUORESCENCIJA
INDIREKTNA (IIF)(obeleženo sekundarno At)
DIREKTNA (DIF)(obeleženo primarno At)
Detekcija Ag
Detekcija Ag
Detekcija At
specifičnost
osetljivost
Radio-imunotest (RIA)
Marker je radioaktivni izotop (npr. 125I)
Nedostatak: rad sa radioaktivnošću i odlaganje radioaktivnog otpada
Koristi se za određivanje niskih koncentracija antigena u rastvoru(npr. hormona u krvi)
Vrlo osetljiv kvantitativan test
Meri se vezana radioaktivnost pomoću odgovarajućeg brojača
"for the development of radioimmunoassays of peptide hormones"
Rosalyn Sussman YalowJuly 19, 1921 – May 30, 2011
Nobelova nagrada za fiziologiju ili medicinu 1977
Brzi test za otkrivanje trudnoće
BRZI TEST ZA OTKRIVANJE TRUDNOĆE (princip)
Detekcija HCG u urinu trudne žene
Koriste se tri vrste antitela:
1. anti-HCG antitelo - obeleženo koloidnim zlatom (slobodno)
2. anti-HCG antitelo – neobeleženo (fiksirano za membranu)
3. anti-imunoglobulinsko antitelo – neobeleženo (fiksirano za membranu)
pozitivan
uzorak (urin)
negativan
uzorak (urin)
+
–
BRZI TEST ZA OTKRIVANJE TRUDNOĆE (rezultati)
pozitivan
uzorak (urin)
Z Z Z
Z
difuzija Z Z
difuzija
Z
HCG
obeleženoanti-HCG
At
neobeleženoanti-HCG
At
anti-IgAt
+
uzorak(urin)
Z
Z
BRZI TEST ZA OTKRIVANJE TRUDNOĆE (pozitivan rezultat)
Z Z
negativan
Z Z ZZ
difuzija Z Z
difuzija
ZZ Z–
BRZI TEST ZA OTKRIVANJE TRUDNOĆE (negativan rezultat)
uzorak (urin)
uzorak(urin) neobeleženo
anti-HCGAt
anti-IgAt
obeleženoanti-HCG
At
anti-imunoglobulinsko antiteloj.Za određivanje količine hormona u krvi koristi se
10.
direktna imunofluorescencijai.U RIA testu se kao obeleživač koristi9.
RIA i ELISAh.Za dokazivanje auto-antitela u serumu koristi se
8.
u ploči za mikrotitracijug.Za dokazivanje bakterije iz roda Chlamydia u cervikalnom brisu koristi se
7.
radioaktivni izotopf.U testu indirektne imunofluorescencije fluorescentnom bojom je obeleženo
6.
jačine boje razgrađenog supstratae.U ELISA testu količina antigena ili antitela određuje se na osnovu
5.
indirektna imunofluorescenca ili ELISA
d.Razgrađeni supstrat od strane enzima u ELISA testu detektuje se
4.
antigena ili antitela u tečnim uzorcimac.ELISA se radi3.
kolorimetromb.Antitelo u ELISA testu obeleženo je2.
enzimoma.ELISA se koristi za detekciju1.
1.____ 2.____ 3.____ 4.____ 5.____ 6.____ 7.____ 8.____ 9.____ 10.____c a g b e j i d f h
Sledeća nedelja
Predavanje:Imunološka tolerancija: značaj i mehanizmi
Autoimunost: principi i patogeneza
Seminar:Reakcije preosetljivosti