Presentación de PowerPoint - AAG · Taxonomy of SDS Causal Agent Kingdom Eumycota Phyllum...
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Caracterización y Control de Ophiosphaerella sp.
Causante de Spring Dead Spot de Pasto Bermuda en
South Carolina, USA & Buenos Aires, Argentina
Alejandro Canegallo
Clemson University
Overview
• Introducción y antecedentes de SDS en Carolina del Sur y Argentina
• Objetivos de la investigación
• Aislación del agente causal
• Identificación y determinación de la variabilidad genética
• Estudio a campo
• Materiales y métodos
• Resultados
• Conclusiones
1997 Primer Putting Green de Bermuda Ultradwarf en
Sudamérica
Cortesia G. Busso
1999 Una enfermedad desconocida fue
reportada
Cortesía L. De Tomasi
Spring Dead Spot en Argentina
• 1997 Primer putting green de bermuda ultradwarf en Sudamérica.
• 1999 Una enfermedad desconocida fue reportada
• 2000 Varias canchas de golf plantaron sus greens con TifEagle
• 2002 Severa epidemia de la enfermedad se produjo. Se aplicaban fungicidas sin ningún control
• 2003 Dr. Martin visita Argentina
Courtesy S. B. Martin
Spring Dead Spot
Ophiosphaerella korrae O. herpotricha O. narmari
Bermudagrass Zoysiagrass
Infección : Otoño Temperaturas diurnas 12-14 °C / Temperaturas de suelo debajo de 21 °C Síntomas: Primavera Cuando el pasto bermuda comienza el rebrote
Preguntas para Argentina
? Patogenos especificos
? Distribucion de patogenos
? Correlacion con la edad y fuente
del cesped
? Mejores fungicidas para su control
y cuando es el mejor momento para
aplicarlo
? Funcionan las practicas clturales igual
que en EEUU ?
Canegallo se los va a decir en 2014!!
Cortesia S. B. Martin
Objetivos 1. Aislación e identificación de Ophiosphaerella
sp.
2. Determinación de similitudes y variación entre las aislaciones de SC y las de ARG
3. Estudio a campo para determinar practicas de manejo
Caracterización y Control de Ophiosphaerella sp.
Causante de Spring Dead Spot de Pasto Bermuda en
South Carolina, USA & Buenos Aires, Argentina
Objetivo 1 – Aislación e Identificación
• Recolección de muestras • 10 muestras por localidad
• 60 mm de diámetro, 63 mm de profundidad
• Borde de la mancha
• Lavado para remover la tierra
• Raíces sintomáticas fueron seleccionadas
• Esterilización de la superficie con solución de 20 % de Cloro
• Cultivadas en un medio especifico con antibióticos
South Carolina
Argentina
Aislación
Aislación
• South Carolina
• 36 Canchas de golf
• 22 Canchas de golf con SDS
• 272 muestras recolectadas
• 214 aislaciones
• Argentina
• 41 Canchas de golf y polo
• 17 Canchas de golf y polo con SDS
• 228 muestras recolectadas
• 145 aislaciones
Ascosporas
Courtesy S. B. Martin
Courtesy S. B. Martin
Pseudothecia
Objetivo 1 – Identificación de Especies
Identificación de Especies
Objetivo 1 Identificación de Especies de Ophiosphaerella
• Amplificación de la región ITS de ADN ribosomal
500 100
500 100
Objetivo 1 Identificación de Especies de Ophiosphaerella
500 100
500 100
Objetivo 1 Identificación de Especies de Ophiosphaerella
• South Carolina • 214 aislaciones
• 207 Ophiosphaerella korrae
• 0 Ophiosphaerella herpotricha
• Argentina • 145 aislaciones
• 145 Ophiosphaerella herpotricha
• 0 Ophiosphaerella korrae
Objetivo 1 Identificación de Especies de Ophiosphaerella
Objetivos 1. Aislación e identificación de Ophiosphaerella
sp.
2. Determinación de similitudes y variación entre las aislaciones de SC y de ARG
Caracterización y Control de Ophiosphaerella sp.
Causante de Spring Dead Spot de Pasto Bermuda en
South Carolina, USA & Buenos Aires, Argentina
Secuenciación de Región ITS
Unidades Familiares Ordenadas en Árbol Filogenético
Unidades Familiares Ordenadas en Árbol Filogenético
Objetivos
1. Aislación e identificación de Ophiosphaerella sp.
2. Determinación de similitudes y variación entre las aislaciones de SC y las de ARG
3. Estudio a campo para determinar prácticas de manejo
Caracterización y Control de Ophiosphaerella sp.
Causante de Spring Dead Spot de Pasto Bermuda en
South Carolina, USA & Buenos Aires, Argentina
Objetivo 3 Ensayo a Campo
• 3 años consecutivos, 2012, 2013 y 2014
• Pilará Golf Club, Pilar BA, Argentina
• Tee de practica de ‘Tifway 419’
• Infectado naturalmente
• Suelo de arena (sand capped)
Objetivo 3 Ensayo a Campo
• Tres factores
• Fuente de Nitrógeno (SN) 3 tratamientos (plots)
• Aireacion (A) 2 tratamientos (subplots)
• Fungicidas (F) 4 tratamientos (sub-subplots)
• Cuatro bloques (Repeticiones)
Objetivo 3 Ensayo a Campo
Objetivo 3 Ensayo a Campo Fuentes de Nitrógeno
Sulfato de Amonio Nitrato de Calcio Urea
Objetivo 3 Ensayo a Campo Aireación
Sulfato de Amonio Nitrato de Calcio Urea
No Aireación Aireación 2×
Objetivo 3 Ensayo a Campo Fungicidas
No Fungicida
Folicur Baja Dosis
Folicur Alta Dosis
Rubigan
Evaluaciones visuales • Calidad de césped
• 1 a 10
• 1= pobre, inaceptable
• 10= césped denso y saludable
• Severidad de la enfermedad • 1 a 10
• 1=no enfermedad
• 5=50 % de césped vivo dentro de las manchas
• 10=ausencia de césped vivo dentro de la mancha
Objetivo 3 Ensayo a Campo
Análisis de Imágenes Digitales
1. Incidencia de la enfermedad
• Porcentaje of césped sintomático dentro del plot
2. Intensidad de la enfermedad
• Solo 2013 y 2014
• Porcentaje de pixeles no verdes en la fotografía
Objetivo 3 Ensayo a Campo
Análisis de Imágenes Digitales
1. Incidencia de la enfermedad
• Porcentaje of césped sintomático dentro del plot
2. Intensidad de la enfermedad
• Solo 2013 y 2014
• Porcentaje de pixeles no verdes en la fotografía
Objetivo 3 Ensayo a Campo
Dec. 15, 2013 Nov. 12, 2013 Nov. 21, 2013 Oct. 15, 2013 Oct. 30, 2013
Incidencia de la Enfermedad
Intensidad de la Enfermedad
January February March April May June July August September October November December
2014 Mean 25,6 22,6 20,6 17,8 14,7 11,7 12 14,5 15,9 19,8 21,8 23,1
2013 Mean 24,8 23,7 19,6 18,7 14,6 12,2 11,3 11,9 13,7 18,2 20,7 26,3
2012 Mean 25,2 24,4 21,2 17,4 16,2 11,6 9,2 13 15,5 17,9 22,2 24,4
2014 Minimum 11,9 12,6 9 8,6 5,8 1,9 1,8 4,5 6,5 6,7 10,2 12,1
2013 Minimum 12,1 12,1 7,9 7,6 3,8 1,3 1,5 0,6 4,7 7,1 10,6 12,1
2012 Minimum 14,1 13,6 8,2 4,5 6,4 0,6 0,6 3,1 3,8 8,6 11,1 15,2
0
5
10
15
20
25
30
Tem
pe
ratu
re C
Minimum Temp.
Mean Temp.
Efecto de la Fuente de Nitrógeno Sobre el pH del Suelo
Objetivo 3 Efecto de la Fuente de Nitrógeno Sobre la Intensidad de la Enfermedad
Efecto de la Aireación
Efecto de Fungicidas Sobre Incidencia de la Enfermedad
Control No Tratado
Incidencia de SDS = 12.56 %
Fenarimol 0.144 gr (m2)-1
Incidencia de SDS = 1.89 %
Tebuconazole 0.175 gr (m2)-1
Incidencia de SDS = 3.51 %
Tebuconazole 0.0875 gr (m2)-1
Incidencia de SDS = 3.89 %
Efecto de Fungicidas Sobre Intensidad de la Enfermedad
Efecto de Fungicidas Sobre Intensidad de la Enfermedad a Través del Tiempo
Interacciones Fungicidas × Fuente de Nitrógeno en Severidad de la Enfermedad
Conclusiones • O. korrae es la especie de Ophiosphaerella causante de SDS en
Carolina del Sur
• O. herpotricha es la especie de Ophiosphaerella causante de SDS en Argentina
• No hay evidencia de inmigración of patógenas (O. korrae en SE USA, O. herpotricha in ARG)
• Variabilidad esta relacionada con las zonas geográficas
• No hay variabilidad debido a cultivares de bermuda
• Fungicidas son necesarios para un control efectivo de SDS
• Mayor reducción en el pH del suelo deberían ser necesarios para mejorar el control de SDS cuando O. herpotricha es el agente causal
• Aireación con púas huecas no mostro mucha diferencia, pero debería ser considerada
Agradecimientos
• Ivana y Justa Canegallo
• Oscar y Maria Elena Canegallo
• Dr. Bruce Martin
• Dr. Earl Eisner
• Dr. Wonkeun Park
• Dr. Paula Agudelo, Dr. Lane Tredway, Dr. Bert McCarty, and Dr. Julia Kerrigan
• Federico Zemborain, Pilara GC
• Diego Maidana, Nordelta GC
• Ruben Santa Maria, Pilara GC
• Julio Alizon Garcia, Guillermo Busso, Santiago Zapiola, Vicky Zemborain
• Alfredo Gaetan, Ciro Ramos, Hugo Cueva, Fabian Gallardo, Fernando Marenco, Juan Cruz Marreins, Darwin Teran, Matias Romoli, Carlos Migale, Carlos Torres, Andres Figari, Carlos Martinello, Sebastian Olivar, Marcelo Bouvier, Ricardo Melognio, Alejandro Romano, Marcelo Burgos, Miri Carranza, Coqui Montenegro, Matias Olguin, Ulises Alanis, Hernan Sack, Hugo Roman, Guillermo Martin, Ismael Lopez, Nene Rodriguez, Adan Ramirez, Leandro Ybanez, Melli Luna, Gladys Slavka, Agustin Magalhaes
• AAG, CUBA, Campo Chico CC, Carilo G, Carmelo G., Costa Esmeralda, Cordoba GC, El Canton, Haras S. Maria, Hurlingham C., Jockey Club Rosario, La Cumbre GC, La Orquidea, G., Martindale, Nordelta, Pilar Golf, Pilara, Ranelagh GC, Rio Cuarto GC, Rosario GC, San Diego CC, San Sebastian, Sheraton Colonia, Tortugas CC, Villa Maria CC., Everlinks, Jockey Club Cordoba, La Herradura, Velay, El Relincho, San Francisco, San Eugenio
Agradecimientos
Objetivo 3 - Interacciones Fungicidas × Fuente de Nitrógeno en Calidad de Césped
Gel O. korrae CG Gel O. herpotricha CG
Taxonomy of SDS Causal Agent
Kingdom Eumycota
Phyllum Ascomycota
Class Dothidiomycetes
Subclass Pleosporomycete
Order Pleosporales
oFamily Phaenosphaeriaceae
oGenus Ophiosphaerella
pilAR
esmAR
canAR
herAR
cafAR
norAR
mafAR
velAR
magAR
hurAR
chiAR
sheUY
fraAR
relAR
dieAR
eveAR
jcrAR
jccAR
ediAR
colAR
321MO
337MO
309OK
313OK
342MO
318MO
316OK
327MO
narGB
300OK
304OK
rmbSC
mbnSC
rcSC
fuSC
rlkSC
pdrSC
lt1NC
cccSC
wogSC
greSC
flSC
bkmSC
cheNC
wcSC
wilCA
wpSC
slmSC
disSC
fjSC
307OK
cspSC
wofSC
houSC
lexSC
scSC
thoSC
O. herpotricha
O. narmari
O. korrae
Objective 2 Ophiosphaerella spp. Genetic Variability 1 – ITS Region Sequences
Objective 3 Field Experiment
Objective 3 Field Experiment - DIt
Objective 3 Field Experiment - DIt
Pat O’Brian
Objective 2 Estructura O. korrae
Objective 2 Estructura O. herpotricha
Objetivo 1 - Aislación
• Recolección de muestras
• Dentro de una localidad
• 1 muestra por mancha dentro del circulo
• 10 muestras extra fuera del circulo
• 2 localidades en SC
• 2 localidades en ARG
Objetivo 1 - Aislación
• Recolección de muestras • Dentro de una localidad
• 1 muestra por mancha dentro del circulo
• 10 muestras extra fuera del circulo
• 2 localidades en SC
• 2 localidades en ARG
• Variabilidad entre localidades
• 10 muestras por localidad tomadas al azar
1. Aislación del patógeno causante de Spring Dead Spot de Pasto Bermuda en canchas de golf y de polo en la Provincia de Buenos Aires, Argentina y en canchas de golf en Carolina del Sur, USA
2. Identificación de Ophiosphaerella sp. usando técnicas moleculares y determinación de la variabilidad genética en las regiones bajo estudio
3. Evaluar en un experimento a campo el efecto combinado de distintos fertilizantes nitrogenados, aplicaciones de fungicidas y practicas culturales para desarrollar practicas de manejo mejoradas para SDS en Argentina
Caracterización y Control de Ophiosphaerella sp.
Causante de Spring Dead Spot de Pasto Bermuda en
South Carolina, USA & Buenos Aires, Argentina
1. Aislación del patógeno causante de Spring Dead Spot de Pasto Bermuda en canchas de golf y de polo en la Provincia de Buenos Aires, Argentina y en canchas de golf en Carolina del Sur, USA
2. Identificación de Ophiosphaerella sp. usando técnicas moleculares y determinación de la variabilidad genética en las regiones bajo estudio
3. Evaluar en un experimento a campo el efecto combinado de distintos fertilizantes nitrogenados, aplicaciones de fungicidas y practicas culturales para desarrollar practicas de manejo mejoradas para SDS en Argentina
Caracterización y Control de Ophiosphaerella sp.
Causante de Spring Dead Spot de Pasto Bermuda en
South Carolina, USA & Buenos Aires, Argentina
O. korrae
• 131 isolates were sequenced
• 454 bp
• 10 polymorphic sites were identified (2.2 %)
O. herpotricha
• 85 isolates were sequenced
• 454 bp
• 23 polymorphic sites were identified (5.18 %)
Objetivo 2 Determinación de Variabilidad Genética
• AMOVA (Analysis of molecular variance)
• Geographical locations
• Bermudagrass host cultivar
• Pairwise ΦST comparisons
• Phylogenetic tree (Bayesian inference)
Objetivo 2 Determinación de Variabilidad Genética
• AMOVA
A. Regiones Geograficas
1. Coastal SC
2. Inland SC
3. Upstate SC
4. North Carolina
5. California
6. Oklahoma
Objetivo 2 Determinación de Variabilidad Genética O. korrae
• AMOVA
A. Geographical locations
B. Cultivar de Pasto Bermuda
1. ‘Tifway’
2. ‘Tifway 2’
3. ‘Miniverde’
4. ‘TifEagle’
5. ‘Champion’
Objetivo 2 Determinación de Variabilidad Genética O. korrae
Objetivo 2 Variabilidad Genética O. korrae
PAIRWISE FST
Objetivo 2 Variabilidad Genética O. korrae
• AMOVA
A. Regiones geograficas
1. Buenos Aires, ARG
2. Interior ARG
3. North Carolina
4. Missouri
5. Oklahoma
Objetivo 2 Variabilidad Genética O. herpotricha
• AMOVA
A. Geographical locations
B. Bermudagrass host cultivar
1. ‘Tifway UGA’
2. ‘Tifway EDIN’
3. ‘Old Tifway’
4. ‘TifSport’
5. ‘Tifdwarf’
6. ‘TifEagle’
7. ‘Comun’
8. Desconocido NC
9. Desconocido OK
10. Patriot MO
Objetivo 2 Variabilidad Genética O. herpotricha
AMOVA of ITS Sequences
Objetivo 2 Variabilidad Genética O. herpotricha
Objetivo 2 Variabilidad Genética O. herpotricha
O. herpotricha
Tifway Cynodon Tifway EDIN Tifway Antiguo Bermuda Común Tifway USA
Objetivo 2 Determinación de similitudes y variación entre las aislaciones de SC y de ARG
1. Secuenciación de la región ITS
2. Amplified Fragment Length Polymorphism (AFLP)
FST Pairwise Comparisons
COASTAL SC INLAND SC UPSTATE SC CALIFORNIA NORTH CAROLINA OKLAHOMA
COASTAL SC *
INLAND SC 0.00000+-0.0000 *
UPSTATE SC 0.00000+-0.0000 0.00000+-0.0000 *
CALIFORNIA 0.01832+-0.0014 0.00396+-0.0006 0.01455+-0.0013 *
N. CAROLINA 0.01653+-0.0013 0.00158+-0.0004 0.01980+-0.0016 0.33700+-0.0052 *
OKLAHOMA 0.00030+-0.0002 0.00000+-0.0000 0.00000+-0.0000 0.03356+-0.0019 0.03277+-0.0015 *
Objetivo 2 Variabilidad Genética de O. korrae 2 – AFLP
FST Pairwise Comparisons
BA-AR INLAND – AR MISSOURI OKLAHOMA NORTH CAROLINA
BA – AR *
INLAND – AR 0.00000+-0.0000 *
MISSOURI 0.00000+-0.0000 0.00000+-0.0000 *
OKLAHOMA 0.00000+-0.0000 0.00079+-0.0003 0.00000+-0.0000 *
NORTH CAROLINA 0.00238+-0.0005 0.03336+-0.0018 0.01277+-0.0011 0.02921+-0.0017 *
Objetivo 2 Variabilidad Genética de O. herpotricha 2 – AFLP
• Evaluación Visual
• Calidad de césped
• Severidad de la enfermedad
• Análisis de imágenes digitales
• Incidencia de la enfermedad
• Intensidad de la enfermedad
Objetivo 3 Ensayo a Campo
Objetivo 3 Efecto de la Fuente de Nitrógeno Sobre la Incidencia de Enfermedad
• Variabilidad
• Regiones geográficas
• Independiente del cultivar de bermuda
• Población USA de O. herpotricha es significativamente diferente que la población de ARG
• No hay evidencia de inmigración de genotipos de Ophisophaerella sp.
Objetivo 2 Variabilidad Genética