Трансляционная клеточная иммунотерапия – индуктор тканевой толерантности при аллогенной

трансплантации почки(2010 – 2013 гг)

Отдел трансплантологии, нефрологии и хирургической гемокоррекции

Отделение хирургической гемокоррекции и детоксикации 19.05.2014

Проф. Кильдюшевский А.В.

Министерство здравоохранения Московской области ГБУЗ МО Московский областной научно-исследовательский

клинический институт (ГБУЗ МО МОНИКИ) им. М.Ф.Владимирского

Отдел оперативной нефрологии и пересадки почки Отделение хирургической гемокоррекции и детоксикации

ТРАНСЛЯЦИОННАЯ КЛЕТОЧНАЯ ИММУНОТЕРАПИЯ ПРИ АЛЛОТРАНСПЛАНТАЦИИ ТРУПНОЙ ПОЧКИ У УРОЛОГИЧЕСКИХ

БОЛЬНЫХ

(Проспективное рандомизированное исследование эффективности

комбинированного метода с включением экстракорпорального

фотофереза в программу индукционной иммунодепрессии в сравнении

со стандартным протоколом иммунодепрессивной лекарственной

терапии у больных после аллогенной трансплантации почки)

Протокол исследования

на 2010-2013 гг.

Результаты поисковой НИ программы

Проспективное клиническое исследование эффективности ТКИ в качестве профилактики острого отторжения у 40 реципиентов

парных почечных трансплантатов (20 доноров)

Характеристика реципиентовОсновная группа ТКИ

+ ИС (20 чел)Контрольная группа

ИС (20 чел)

Муж. 12 12

Возр. (лет) 31 - 55 (45) 21 – 55 (35)

Жен. 8 8

Возр. (лет) 27 – 50 (33) 37 – 48 (43)

Индекс совм.

8 (4;13) 9 (5;13)

Зам. Поч. Тер. (лет)

2,1 2,4

Характеристика реципиентовПричины ТХПН

Основная группа ТКИ + ИС (20 чел)

Контрольная группа ИС (20 чел)

Хр. пиелонефрит 9 9

Хр. гломерулонефрит 5 5

Поликистоз почек 4 4

Гипертоническая нефропатия

2 -

Антифосфолипидный синдром

- 2

2: выделение и сбормононуклеарных клеток

4: Реинфузия3: Мононуклеарные клетки подвергаются УФ облучению

1: Эксфузия крови в ротор сеператора клеток

4: Инкубация

Методика проведения ТКИ

Первые 2 недели 2 раза в неделю

Вторые 2 недели 1 раз в неделю

Второй месяц 1 раз в 2 недели

Третий – шестой месяц 1 раз в месяц

Результаты протокольной биопсии

Основная группа ТКИ + ИС (20 чел)

Контрольная группа ИС (19 чел)

30 сут 180 сут 30 сут 180 сут

Канальцевый некроз 8 - 3 -

IA Banff - - 1* -

IB Banff - - - 1*

IIA Banff - - - -

IIB Banff - - 1* -

III Banff - - 1** -

Фокально-сегментарный гломерулосклероз

- - - 1**

Хр. Тр. Нефропатия 1-2 ст.

1 5 - 1

Хр. Тр. Нефропатия 3 ст. - - - 2*

0 200 400 600 800 1000 1200 1400

Дни

60%

70%

80%

90%

100%

Cu

mu

lativ

e P

rop

ort

ion

Su

rviv

ing

Complete Censored

ТКИ+ИС ИС

Общая выживаемость (OS) почечного аллотрансплантата в двух группах

(Kaplan-Meier)

Gehan's Wilcoxon Test p = ,00932Cox-Mantel Test p = ,00803Peto & Peto Wilcoxon Test p = ,00837Log-Rank Test p = ,00816

Трансплантатэктомия в контрольной группеОстрое отторжение -2 (Сарайкин, Ищенко);

ФСГ - 1 (Малышев); Тромбоз -1(Саидов)

Результаты биопсии ПАТ в двух группах на 30 сутки после трансплантации

биопсия ПАТ реципиента контрольной группы

биопсия ПАТ реципиента основной группы

диффузная инфильтрация интерстиция лимфоцитами с примесью нейтрофилов, многие канальцы полностью разрушены. В участках относительно – сохранной паренхимы – тяжелое повреждение канальцевого эпителия, явления тубулита (Banff III).

очаговый склероз интерстиция и атрофия канальцев, занимающие менее 5% почечной паренхимы. Очаговая инфильтрация интерстиция лимфоцитами без явлений тубулита. Остаточные явлениям ОКН

Бессобытийная продолжительность жизни (без признаков заболевания) (DFS) после трансплантации почки в двух группах реципиентов (Kaplan-Meier)

0 100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000 1100

Время наблюдения после трансплантации (дни)

-10%

0%

10%

20%

30%

40%

50%

60%

70%

80%

90%

100%

Дол

я с

об

ыти

й (

%)

Complete Censored ТКИ+ИС ИС

Grouping variable: Лечение

Total number of valid observations: 38 uncensored: 21 ( 55,26%) censored: 17 ( 44,74%) Valid observations: Group 1 (ТКИ+ИС ): 19 Group 2

(ИС ): 19 Uncensored: 6 ( 31,58%) 15 ( 78,95%) Censored: 13 ( 68,42%) 4 ( 21,05%)

Gehan's Wilcoxon Test p = ,00603 Cox's F-Test p = ,00063Cox-Mantel Test p = ,00120Peto & Peto Wilcoxon Test p = ,00379Log-Rank Test p = ,00187

Продолжительность жизни до инфекционного события (DFS) после трансплантации почки в двух группах реципиентов (Kaplan-Meier)

0 100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000 1100

Time

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

0,7

0,8

0,9

1,0

Cu

mu

lative

Pro

po

rtio

n S

urv

ivin

g Complete Censored ТКИ+ИС ИС

Gehan's Wilcoxon Test p = ,00901Cox-Mantel Test p = ,00114Log-Rank Test p = ,00166

Основная группа: пиелонефрит трансплантата (Кузьмичев – 10 сутки после трансплантации)

Контрольная группа: пневмония (Шиендо, Сарайкин, Львова, Нистратов, Азаров, Рустамов – смерть)Пиелонефрит (Чернявская, Малышев)ЦМВ – Сумская, Степаненко, Куликов)

В

ГКГ Класс II

ТКР

CD80/86

CD28

IL-2FasL Fas

CD4

ГКГ Класс I

CD8

IL-4IL-5

ГКГ Класс I/II ГКГ Класс I/II

ПерфоринГранзим В

CTLA-4

CD80/86

CTLA-4CD28 ТКР

CD27

CD70

CD3+CD4+CD28+CD27+CD45RO-

РГЗ

Сравнительный анализ экспрессии Сравнительный анализ экспрессии CD28CD28 на наивных хелперных Т-лимфоцитах через 1 на наивных хелперных Т-лимфоцитах через 1 месяц после аллогенной трансплантации почки в двух группах: ИС и ИС+ТКИмесяц после аллогенной трансплантации почки в двух группах: ИС и ИС+ТКИ

Относительное количество наивных CD4+ лимфоцитов,

экспрессирующих CD28

Mean ±SE ±1,96*SE

4 30

Сутки после трансплантации

35

40

45

50

55

60

65

70

%

MFI CD28 на наивных CD4+ лимфоцитах

Mean ±SE ±1,96*SE

4 30

Сутки после трансплантации

14

16

18

20

22

24

26

ед

Относительное количество наивных CD4+ лимфоцитов,

экспрессирующих CD28

Mean ±SE ±1,96*SE

4 30

Сутки после трансплантации

25

30

35

40

45

50

55

60

65

70

%

MFI CD28 на наивных CD4+ лимфоцитах

Mean ±SE ±1,96*SE

4 30

Сутки после трансплантации

12

14

16

18

20

22

24

26

Контрольная группа ИС Основная группа ИС+ТКИ

Динамика экспрессии Динамика экспрессии CD28CD28 на наивных на наивных CD4 CD4 лимфоцитах у больных лимфоцитах у больных после аллогенной трансплантации почек в зависимости от леченияпосле аллогенной трансплантации почек в зависимости от лечения

Иммуносупрессия Иммуносупрессия + ТКИ

3 сутки

30 сутки

MFI – 10,38 ед

MFI - 12, 95 ед

MFI - 28, 2

MFI – 16,1

Динамика экспрессии Динамика экспрессии CD28CD28 на наивных на наивных CD4 CD4 лимфоцитах у больных лимфоцитах у больных после аллогенной трансплантации почек в зависимости от леченияпосле аллогенной трансплантации почек в зависимости от лечения

ИММУНОСУПРЕССИЯ ИММУНОСУПРЕССИЯ + ТКИИММУНОСУПРЕССИЯ + ТКИ

3 СУТКИ

30 СУТКИ

MFI – 31,7 ед

MFI - 9,45 ед

MFI - 28, 2

MFI – 12,2

Процесс альтернативного сплайсинга экзонов mРНК, кодирующих трансмембранный и цитоплазматический домены молекулы CD 28

В

ГКГ Класс II

ТКР

CD80/86

CD28

IL-2FasL Fas

CD4

ГКГ Класс I

CD8

IL-4IL-5

ГКГ Класс I/II ГКГ Класс I/II

ПерфоринГранзим В

CTLA-4CD80/86

CTLA-4CD28

ТКР

CD27

CD70

Новая иммуномодулирующая стратегия, которая использует механизмы индукции толерантности к

донорским антигенам, через костимуляторные сигналы в регуляции Т-клеточного ответа, может разрешить

проблему генетической несовместимости в трансплантологии.