INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA PARA EL DIAGNOSTICO DEL

GUIA DE CONTROL DE CALIDAD PARA EL DIAGNOSTICO DE PARASITOS INTESTINALISITT-CNSP123

1 EDICION

08 04 2008

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PROGRAMA DE EVALUACION EXTERNA DE LA CALIDAD (PEEC / PEED)LABORATORIO DE REFERENCIA NACIONAL DE ENTEROPARASITOS

2013PROGRAMA DE EVALUACION EXTERNA DE LA CALIDAD EN EL DIAGNOSTICO DE PARASITOS INTESTINALES, Fasciola y Paragonimus ANTECEDENTES

El Instituto Nacional de Salud (INS) a travs del Centro Nacional de Salud Pblica (CNSP) encabeza el Sistema de la Red Nacional de Laboratorios de Salud Pblica (SRNL), por tanto tiene como uno de sus objetivos, evaluar y normar las metodologas apropiadas para el diagnstico laboratorial de enfermedades transmisibles entre ellas las infecciones causadas por los parsitos intestinales y extraintestinales, Fasciola y Paragonimus (fase crnica), asegurando con ello la calidad de los diagnsticos. Por tal motivo el INS evala peridicamente a los Laboratorios miembros del SRNL en Salud Pblica y otros laboratorios que deseen participar voluntariamente en el Programa de Evaluacin Externa de la Calidad (PEEC) sobre las pruebas de diagnstico parasitolgico, por aplicacin de los mtodos: directo, sedimentacin espontnea en tubo, tcnica o mtodo de sedimentacin rpida (TSR / MSR), la tcnica del fijador; frotis, coloracin, mtodo de Graham, coloracin, de Kato katz y gusanos o fragmento.

La participacin de los laboratorios de la Red Nacional en el PEEC permitir tomar acciones correctivas ante errores parciales o sistemticos; as como la utilizacin adecuada de los datos de la competencia diagnstica.

Es importante sealar que es la sexta vez en el pas que se realiza este programa para el diagnostico parasitolgico a partir de set o paneles. Esto a su vez nos permitir seleccionar aquellos laboratorios con informacin de calidad para la consolidacin de la frecuencia y distribucin de los parsitos intestinales, Fasciola y Paragonimus en el pas.

En el presente documento, se establece el procedimiento para la organizacin y ejecucin del PEEC / PEED, basado en el Procedimiento Ensayos Interlaboratorios e Intralaboratorios PRT-CNSP-012 Ed N 01, 2006

OBJETIVO

Asegurar la calidad de los resultados en el diagnstico de los parsitos intestinales, Fasciola y Paragonimus; as como brindar la informacin necesaria para implementar acciones correctivas y preventivas, desarrollar proyectos de mejora cuando sean requeridos.ALCANCE

Laboratorios de la Red Nacional de Laboratorios de Salud Publica, la cual incluye a los Laboratorios de Referencia de las DIRESAS y DISAS, laboratorios hospitalarios y otros laboratorios de establecimientos de salud de mayor demanda de atencin.DEFINICIONES Y SIGLAS Programa de evaluacin externa de la calidad (PEEC), control directo: Programa que contempla la organizacin, realizacin y evaluacin de ensayos sobre el mismo tem de ensayo o sobre tem de ensayos similares, por dos o ms laboratorios, de acuerdo a condiciones predeterminadas.

Item de ensayo: Material o dispositivo presentado al laboratorio participante a los fines de ensayo de aptitud. Laboratorio evaluador externo: Organismo con responsabilidad para coordinar todas las actividades relacionadas con la operacin de un programa de ensayo de aptitud.BIOSEGURIDAD

El personal encargado de la manipulacin, seleccin y conservacin de materiales y muestras debe estar especialmente capacitado e instrudo de los peligros potenciales provenientes de los productos a manipular y de las operaciones relacionadas a su trabajo y con conocimiento de las medidas de bioseguridad correspondientes y pertinentes (Bioseguridad en laboratorios de ensayo, biomdicos y clnicos - Manual de Procedimientos -. Serie de Normas Tcnicas N 18). Las muestras relacionadas al presente programa: lminas, frascos o viales con muestras con suspensiones coprolgicas gusanos o fragmentos se deben manipular con un nivel de bioseguridad nivel 2 (NBS 2)

Se recomienda tratar estas muestras como material potencialmente infeccioso.

En caso de accidentes de rotura las lminas, frascos o tubos aplicar los procedimientos de bioseguridad descritos para accidentes.DESARROLLO DEL PROCESO

1. Criterio de seleccin de los laboratorios evaluados Realizar los tems de ensayo (pruebas de laboratorio) de manera peridica. Pertenecer a un establecimiento de salud con elevado numero de atenciones, hospitalizaciones o ser cabeza de una red de laboratorios. Participacin activa y constante en programas de evaluacin externa de la calidad.2. Envo del tem de ensayo del INS al Laboratorio evaluado El Comit de Ensayos Interlaboratorios programara anualmente la realizacin del Programa de Evaluacin Externa de la Calidad. Los tem de ensayo o material biolgico para el control de calidad sern enviados siguiendo las pautas dadas por el PRT 001 del CNSP del INS denominado Envo de muestras biolgicas en la Red Nacional de Laboratorios de Referencia en Salud Publica. En dicha normatividad se especifica el uso de 3 tipos de recipientes (Recipiente primario, secundario y contenedor externo de envo). El material de control de calidad ser preparado como un set o panel, que podr estar compuesto por frascos o viales con muestra, mas fijador/conservador, frotis o extendido en lmina coloreada o sin colorear, frotis perianal, espcimen gusano, esto para el anlisis cualitativo (determinar el agente etiolgico) y efectuar tambin la repetibilidad y reproducibilidad de los resultados. En el presente programa se enviar a cada laboratorio participante viales o frascos, con muestras de heces que previamente hubiera realizado el mtodo de concentracin por sedimentacin y fijadas lminas previamente coloreadas o preparadas para su lectura correspondiente.

El contenedor con el material biolgico ira acompaada por un oficio de envo y el protocolo e instructivo del programa. Se deber conservar las muestras parasitolgicas refrigeradas (a 4C ) cuando corresponda a muestras frescas y las muestras preservadas o fijadas a temperatura ambiente como en este caso. Sistema de codificacin: A cada Institucin participante se le asignara un cdigo, con el objetivo de la confidencialidad de los resultados, los cuales son slo de conocimiento del centro coordinador y no puede utilizarse con fines diferentes a los de la evaluacin para los que fue previsto la intervencin.

3. Procesamiento del tem de ensayo Las muestras con parsitos intestinales, Fasciola hepatica, Paragonimus entregados en el panel se procesarn de acuerdo a las tcnicas descritas en el manual Norma 37 2003, gua de control de calidad del INS, o las que se utilizan de rutina para su diagnstico, utilizando los reactivos que disponen para la identificacin del parsito. Los tem de ensayo enviados por el INS sern procesados considerando las instrucciones dadas por el Laboratorio de referencia de Enteroparsitos. Las muestras coprolgicas enviadas sern muestras positivas (P) y negativa (N):P = Nombre del agente y sealar el estadio evolutivo (huevo, quiste,

ooquiste, trofozotos, larva, adulto macho o hembra)

N = No se observ quistes trofozotos ni huevos de parsitos

X.x = Iniciales del agente (gnero o especie) e iniciales de las formas evolutivas observadas por ejemplo G.l (q,t) = Giardia lamba (quistes,

trofozotos).Recomendable: utilizar el sistema de cruces, se indica la intensidad parasitaria en forma semicuantitativa, ejm. Giardia lamblia (t) +++, significa mayor de 10 elementos parasitarios por campo microscpico; Ascaris lumbricoides (hf) ++, significa de 6-10 elementos parasitarios por campo microscpico.4. Reporte de resultados Los resultados sern reportados, verificados y enviados por el laboratorio evaluado (Hospital o DISA, regin) en los formularios definidos por el Comit de Ensayos Inter- laboratorios para el Diagnstico de Enteroparsitos (impresos, medio magntico, Internet, etc.). Los resultados deben ser enviados en un plazo de 30 a 45 das despus de haberse recibido el panel en el Laboratorio. Los Laboratorios participantes enviarn los resultados mediante correo electrnico a: mbeltran@ins.gob.pe, mariabeltranfa@gmail.com y de manera oficial a: Cpac Yupanqui 1400 - Jess Mara. Lima 11. Una vez remitido los resultados, llamar al INS o1748-1111 anexos 2137 - 2154, para verificar que los resultados han llegado al INS. Para el reporte del resultado se usar el formulario 001 usando la clasificacin internacional de las enfermedades (anexo B).

Para evitar errores de trascripcin en los resultados, se sugiere revisarlos cuidadosamente antes de enviarlos.

5. Revisin del informe de resultados Los resultados obtenidos por los Laboratorios participantes, sern comparados con los resultados obtenidos por el Laboratorio de Referencia Nacional, CNSP/INS, para determinar la concordancia, aceptacin o proficiencia utilizndose las tcnicas estadsticas en los aspectos comunes a todos los ensayos de aptitud. Informe de resultados: El Laboratorio de Referencia Nacional del CNSP/INS emitir el informe, en un mximo de 30 - 45 das despues de haber recepcionado los resultados de los laboratorios participantes*.

El CNSP/INS har llegar a los Establecimientos participantes una copia del informe final de la evaluacin externa de la proficiencia o desempeo.

Nota: *Tomar mayor tiempo en caso que no haya respuesta de los laboratorios

participantes mayor al 80%.PERIDIOCIDAD DE LA EVALUACION EXTERNA

Los laboratorios participan al menos una vez por ao en el PEEC (incluyendo ensayos interlaboratorios) y todas las veces que el laboratorio evaluador considere convenienteLos laboratorios participantes son:

Hosp... San BartolomHosp. Arzobispo Loayza

Hosp. Sergio BernalesInstituto Nacional de Ciencias Neurolgicas

Hosp Nacional Cayetano HerediaHosp. Santa Rosa

Hosp..Nacional Hipolito UnanueHosp. de Emergencias Casimiro Ulloa

Hosp. Nacional Dos de MayoHosp. Chancay

Hosp. Guillermo Almenara IrigoyenHosp. San Juan Bautista de Huaral

Hosp. Emergencias PeditricasHosp. San Jos (Callao)

Hosp. de la Fuerza Area del PerHosp. Regional de Huacho

Hosp. Edgardo Rebagliati MartinsHosp. Daniel A. Carrion (Callao)

Instituto de Enfermedades NeoplsicasHosp. de Barranca

Hosp.Nacional Maria AuxiliadoraHosp. Rezola (Caete)

Hosp.de VitarteHosp. Jos Agurto Tello (Chosica)

Hosp. de Puente PiedraISA Lima Ciudad

Hosp . Materno Infantil de Canto GrandeDISA Lima Este

Hosp.MilitarDISA Lima Sur

Hosp.Sabogal (EsSalud)DISA Lima Norte

Hosp.III Emergencias Grau (EsSalud)DISA Callao

Hosp. Naval

Instituto Nacional Materno PerinatalHosp. de Ventanilla

Instituto Nacional de Salud del NioHosp. Vctor Larco Herrera

Clnica San Borja y lab. de las regiones

CONSTANCIAS DE PARTICIPACION EN EL PEECLa Direccin General del CNSP/INS entregar una Constancia de participacin y evaluacin del desempeo (proficiencia) en el ensayo de aptitud, a cada uno de los participantes (instituciones) que hayan cumplido con: Haber participado en el PEEC teniendo un registro aceptable o concordancia mayor al 75%. Haber entregado al INS los resultados de evaluacin en los plazos sealados.

La constancia de Evaluacin de las muestras coprolgicas, frotis, especimen o gusano las lminas para identificacin de las etiologas, no es una calificacin del laboratorio en su totalidad, ni tampoco una evaluacin especfica del profesional que realiz el procedimiento; es una evaluacin del desempeo o proficiencia de los mtodos aplicados por parte del Laboratorio (competencia en el diagnstico).DE LAS CONSULTAS

Los Laboratorios participantes podrn hacer cualquier consulta sobre el PEEC 2013 a los miembros del Comit Ensayos Interlaboratorios 2013 del INS/CNSP/LRN Enteroparsitos: 01-7481111 anexos 2137 - 2154: Blga. Mara Beltrn Fabin.OPERATIVIDAD DE LAS 10 MUESTRAS

Frasco del 1 al 7 en formalina al 10%, preparar para la microscopa por el mtodo directo, concentracin o ambos.Frotis en lminas, del 7 al 10, las lminas que tienen laminilla estn preparadas y montadas hacer la microscopa a 10x y 40x, las que no tienen laminilla agregar una gota de agua destilada, colocar una laminilla, realizar la microscopa; opcional agregar lugol. Las lminas montadas le sirven como material de control o muestras patrn de coloracin o conservacin permanente.ANEXO A: FORMATO DE REPORTE DE RESULTADOS DE LA EVALUACION EXTERNA DE LA CALIDAD

Programa de Evaluacin Externa de la Calidad 2013LABORATORIO DE ENTEROPARASITOSLABORATORIO N ...........

Institucin:

Fecha de recepcin del set o panel:. Fecha procesamiento:.

Cdigo muestraMtodoNombre del agenteEstadio evolutivo

001

002

003

004

005

006

007

008

009

010

ANALISTA P (Prof)T(Tec).

Para ser completado por el INS

Fecha de recepcin de resultados:Recibido por:.

Nota: Se recomienda indicar si es profesional o tcnico, quien haga la microscopia. ANEXO B: CLASIFICACION INTERNACIONAL DE ENFERMEDADES

CIENFERMEDADAGENTE ETIOLGICOABREVIACIN

0 06. 0

007.0

007.1

007.2

007.3

007.8

07.9

121.1

121.2

121.3

123.0

123.2

123.4

123.6

123.8

126.0

126.1

127.0

127.2

127.3

127.4

127.5

127.6

134.8Amebiosis

Blastocistosis

Balantidiosis

Giardiasis o lambliasis

Coccidiosis (isosporiaiss)

Tricomoniasis intestinal

Criptosporidiosis

Ciclosporiosis

Sarcocistosis

Chilomastiosis

Clonorquiosis

Paragonimiosis o (distomatosis pulmonar)

Fasciolosis o dist. heptica

Teniosis (intestinal)

Teniosis x T.saginata

Difilobotriosis

Himenolepiosis

Dipilidiosis

Ancilostomiosis

Necatoriosis

Anquilostomideos

Ascariasis

Estronfiloidiosis

Trichuriosis

Enterobiosis u oxiuriosis

Capilariosis

Trichostrongiliosis

Macracantorrinchosis

Entameba histolytica

Entamoeba coli

Blastocystis hominis

Balantidium coli

Giardia lamblia

Isospora belli

Trichomonas hominis

Cryptosporidium spp

Cyclospora cayetanensis

Sarcocystis hominis

Chilomastix mesnili

Retortamonas intestinaleis

Clonorchis sp

Paragonimus peruvianus =

P.mexicanus

Fasciola hepatica

Taenia spT.saginata

Diphyllobothrium pacificum

Hymenolepis nana

Hymenolepis diminuta

Dipylidium caninum

Ancylostoma duodenale

Necator americanus

Ancylostoma / Necator

Ascaris lumbricoides

Strongyloides stercoralis

Trichuris trichiura

Enterobius vermicularis

Capillaria sp

Trichostrongylus sp

Meloidogyne sp

Rhabditis

Macracanthorhynchus hirudinaceusE.h

E.c

B.h

B.c

G.l

I.b

T.h

Cryp.sp

C.c

S.h

Ch.m

R.i

Clon

P.p

F.h

T.sol /T.sagT.sag

D.p

H.n

H.d

D.c

A.d

N.a

A/N

A.l

S.s

T.t

E.v

Cap.

Trichost.

Meloi

Rhab

M.h

ANEXO C: Muestras / Mtodo para control de calidad del diagnstico de los Parsitos Intestinales, Fasciola y ParagonimusMETODO A EVALUARMUESTRAS PARA CONTROL DE CALIDAD

Mtodo de concentracinEn frasco o vial y en fijador conservador alcohol para nemtodes, formol para cstodes y tremtodes

Mtodo de GrahamLmina de frotis peri anal

Coloracin Ziehl Neelsen modificado o KinnyounLmina coloreada.

Coloracin Tricrmica / Hematoxilina Frrica de Heidenhainlmina coloreada en frotis

Mtodo de Kato Katzlmina frotis con celofn transparente, agregar colorante glicerinado

Identificacin o de espcimen determinacin

Espcimen o fragmento contenido en frasco o tubo y con el lquido fijador conservador alcohol 70% (N) o formol 10%). (C y T).

PEEC 2013

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