Pcr

27
. .. ر با ادر ص رق ف مظ مرب ي ز ك ر م ل ا عامة ل ا حة ص ل را ب ت خ م ة) ئ بلاو ا وحدة ي سل ل س ت ل ا رة م ل ب ل ما ي? ر ب@ لا ع ا ف تPOLYMERASE CHAIN REACTION ( PCR )

TAGS:

Transcript of Pcr

Page 1: Pcr

. . صابر. قادر مظفر ب ر مالمركزي العامة الصحة مختبر

االوبئة وحدة

البلمرة إنزيم تفاعلالتسلسلي

POLYMERASE CHAIN REACTION(PCR)

Page 2: Pcr

؟؟؟؟ التقنية هذه لماذا

انقسام • وقت النووي الحمض كمية بمضاعفة الخلية تقومتصحيح نظام وجود مع سريع بشكل و تلقائي بشكل الخلية . إلى والمضاعفة النسخ سرعة تبلغ و النسخ خالل لألخطاء

و ) ( 1000 الحيوي النظام داخل بالثانية نيتروجينية قاعدةالتكاثر وقت في الخلية في تحدث ذكرنا كما هي

فقط .واالنقساميقوم • والذي الحيوية التكنولوجيا مجال في التطور ومع

النووي ) الحمض مع التعامل ، ( DNAعلى أساسي بشكلتقنية أو طريقة عن يبحثوا أن على العلماء ذلك استدعى

( النووي الحمض كمية مضاعفة على ( DNAتقوم بشكل .) الخلية ) الحيوي النظام خارج كبير،

Page 3: Pcr

التقنية مكتشف

النووي ة فكرالكانت الحمض فصل نسخ DNAتتضمن وصنعمنه كثيره

. مولس كاري د بواسطة المبدعة الفكرة هذه تحققت U وفعالKary Mullis

النووي الذي الحمض يفصل أن فكرة بباله DNAخطرتنسخ منه ويصنع

عام كثيرة .. في .1993ليقلد الكيمياء في نوبل جائزة م

http://www.hgate.net/home/wp-content/uploads/2010/09/kary-mullis.jpg
Page 4: Pcr

ه الـ ما تقنية ؟ PCR ي

مخ ي ه• نسخ بريه تتقنية تصنيع أساس على تقومالنووي الحمض قطع من )DNAعديدة المختبر inفي

vitro) الحراري يقوم بحيث المبادل ThermalجهازCycler إلى الحرارة درجة مؤية 95برفع فينفصل درجة

جزئين إلى النووي ....الحمضإنزيمات • إنتاج معينة وبإضافة على تساعد جزء لكل

األصلية النسخة من النسخ مئات• : األبحاث و االختبارات إجراء تسهيل الهدف

إ الو ضافية.الفحوصاتالجهاز :• عمل خطوات توضح صور وهذه

Page 5: Pcr
http://www.servimg.com/image_preview.php
Page 6: Pcr

مبسطة توضيحية صورة

http://faculty.ksu.edu.sa/30159/Documents/pcr.exe
Page 7: Pcr

البلمرة انزيم تفاعل تطبيقاتالتسلسلي

المختلفة • المجهرية االحياء تشخيص في واسع وبمدى االن التقنية تستخدملألمراض) , , ... ( المسببة وغيرها الطفيليات الفطريات الفايروسات البكتريا

الوبائية .

بر : • وضع طريق عن وذلك الوراثية الطفرات عن للطفرة االكشف خاص يمرالجين لتكثير

أو ص الخا• الكروموسومات زوجين على كان إذا المرض بمعرفة نقوم ومنه بهااح دهما .على

الوراثية . البصمة تعيين

أكثر • خاليا وإنتاج اإلستنساخ في .ويستخدم

النووي • الحمض في النيتروجينية القواعد تتابع تحديد األساسفي العملية هو•DNA Sequenceing.

http://faculty.ksu.edu.sa/30159/Documents/pcr.exe
Page 8: Pcr

البلمرة انزيم تفاعل تطبيقاتالتسلسلي

النووي • الحمض طول . ( DNA )معرفةالجينات .• من خليط من المطلوب الجين تحديدالمهم • الدور للتتقنية البشرية كانت الجينية الخارطة مشروع في

Human Genome Project في • واسع بمدى التقنية اختبار ) أستخدمت الشرعي الطب مجال

الهوية ... تحديد ، االغتصاب حاالت ، األمومةالجينية • األنماط الكبدي Genotypingتحديد C & Bللفيروسالسرطانية • األمراض المختلفة .تشخيصالنسيجية • األنماط زراعة HLA- tissuc typingتعيين مجال في

األعضاء

http://faculty.ksu.edu.sa/30159/Documents/pcr.exe
Page 9: Pcr

عمل التقنيةمبدأ

تقنية • اعتبار لعملية PCR يمكن مبسطة ترجمةالنووي استنساخ الخلوي DNAالحمض االنقسام أثناء

تقنية • من PCR تهدف قليلة جزيئات تضخيم إلىالنووي أو DNAالحمض خاليا من استخالصه بعد ،

كبيرة كميات على الحصول وبالتالي الجسم سوائل . عليه التحليل إجراء يمكن منه

تقنية • اعتبار لعملية PCRيمكن مبسطة ترجمةالنووي أستنساخ االنقسام DNAالحمض أثناء

اال. هذا يتم ولكي مواد ستنساخ الخلوي توفر من بد ال ،: ذلك على تساعد معينة

http://faculty.ksu.edu.sa/30159/Documents/pcr.exe
Page 10: Pcr

تقنية PCRمتطلباتالحمض- 1• قالب يسمى او التفاعل عينة

(.DNA Sampleالنووي)

http://faculty.ksu.edu.sa/30159/Documents/pcr.exe
Page 11: Pcr

تقنية PCRمتطلبات

(:-Primersالبادئات- )2•نوعان :•(. Forwardأمامي )•(.Reverseخلفي ) •في • النيتروجينيه القواعد من تسلسل وهي

( قصير واحد لبداية( bp 25-20شريط مكملالنووي الحمض في تضخيمه المراد .الجزء

http://faculty.ksu.edu.sa/30159/Documents/pcr.exe
Page 12: Pcr

تقنية PCRمتطلبات

التفاعل- 3• Hot Star Taq ) )انزيمpolymerase(:( Taq polymeraseأو

تسمى • بكتيريه ساللة من Thermus aquaticusمستخرج. حارة الينابيع في U طبيعيا تتواجد التي

•. المرتفعه الحرارة بدرجات اليتأثر

له • المثلى الحراة .72ºدرجه م

http://faculty.ksu.edu.sa/30159/Documents/pcr.exe
Page 13: Pcr

تقنية PCRمتطلباتالنيتروجينية- ) 4• Nitrogen Baseالقواعد

dNTPs-:) أدنينAdenine ثايمينThymine جوانينGuanine سايتوسينCytosine

dNTPs :Deoxynuleoside triphosphates

http://faculty.ksu.edu.sa/30159/Documents/pcr.exe
Page 14: Pcr

تقنية PCRمتطلباتمنظم- ) 5• (.PCR Buffer10xمحلولالمغنيزيوم - 6• شاردة أهمها مناسبة، رد Mg+2شوا

متمم عامل تعتبر البوليمر Cofactorالتي زيألنظيم

مقطر- )6• (.DDWماء

http://faculty.ksu.edu.sa/30159/Documents/pcr.exe
Page 15: Pcr

تقنية PCRمتطلبات•7( التسلسلي- البلمرة تفاعل -:جهاز

(Thermocyclerسريع بشكل الحرارة درجة بتغير الجهاز هذا يقومفي   مهم الحرارة درجة تغير ألن متتالي و دقيق و

. التضاعف عمليه

http://faculty.ksu.edu.sa/30159/Documents/pcr.exe
Page 16: Pcr

تقنية PCRخطواتالواحدة الدورة في مراحل ثالث

التفكيك- 1 :Denaturation مرحلة الحراري إلى الحرارة درجة رفع النووي )94يتم للحمض المزدوج الشكل لفك وذلك ( DNAْ م

األصل .d.s. DNA الىs.s.DNA

البادئات- :2 التصاق Primers annealingمرحلةبين ما إلى الحرارة درجة خفض U 60-55يجب فيزيائيا باأللتصاق البادئات ليقوم ْ م

النووي ) الحمض مع الهيدروجينية الروابط األصل ( .DNAبواسطة

االمتداد- 3 Extension :مرحلةإلى الحرارة درجة برفع الحمض 75 - 72يقوم بناء في بعمله البلمرة انزيم ليقوم °م

وجود ( . DNAالنووي ) في dNTPsالجديد

النووي ) الحمض يصبح وفيها كاملة دورة تمثل الثالث المراحل قد ( DNAوهذه األصلالنووي ) الحمض ناتج كمية وتعتمد ، أسي ( .DNAتضاعف بشكل الدورات عدد على

http://faculty.ksu.edu.sa/30159/Documents/pcr.exe
Page 17: Pcr

Figure 1: The different steps in PCR.

http://www.hgate.net/home/wp-content/uploads/2010/09/PCR2-.jpg?i=2&u=12813399
Page 18: Pcr

Quantity of Reaction Master Mix

http://www.hgate.net/home/wp-content/uploads/2010/09/PCR2-.jpg?i=2&u=12813399
Page 19: Pcr

Quantity of Reaction Master Mix

المزيج 23نضيف من مايكروليترأنبوبمن Master Mixالرئيسي كل على

نضيف PCRأنابيب من 2ثم مايكروليترالدنا ) ( .DNAعينه

الطرد جهاز األنابيبفي جميع نضعلمدة 3000المركزي الدقيقه في دورة

وإزاله العينات جميع لخلط واحدة دقيقه. الفقاعات جميع

http://www.hgate.net/home/wp-content/uploads/2010/09/PCR2-.jpg?i=2&u=12813399
Page 20: Pcr

التفاعل نظام

Page 21: Pcr

Figure3 : Verification of the PCR product on gel

http://www.servimg.com/image_preview.php?i=4&u=12813399
Page 22: Pcr

الـ تقنية PCRأنواع

PCR يسمى العادي ما شرحه: Convential PCRأو تم ما وهو. السابقة الخطوات في اليه والتطرق

:Real Time PCR ولكن المبدأ نفس على يقوم النوع وهذامر يكون الوحيد الوقت تبالخالف لتحديد بكمبيوتر الجهاز ط

لبد نسخ ءالحقيقي لعدد الحقيقية الكمية ثم ومن التفاعل( النووي ( DNAالحمض قواعد وجود على ذلك ويعتمد

الباحثين على يسهل مما ذلك لتحديد مشعة حرة نيتروجينيةالجين وكمية ، ال أو المطلوب الجين وجود لتحدد الوقت

الحراري الدورات نهاية إلى الوصول . ةبدون المحددة

http://www.servimg.com/image_preview.php?i=4&u=12813399
Page 23: Pcr

المختبر الـ أقسام بتقنية PCRالخاص

أقسام • ثالثة إلى العمل مكان تقسيم يمكنتام بشكل بعضها عن : منفصلة

االستخالص 1. Extraction sectorقسمالكواشف 2. تحضير Reagent preparationقسم

sectorبــــ ) يعرفان القسمان (Pre – PCR sectorوهذان

والمعايرة 3. التضخيم + AmplificationقسمDetection sector

( بــــ القسم هذا (Post- PCR Sectorويعرف

http://www.servimg.com/image_preview.php?i=4&u=12813399
Page 24: Pcr

A thermal cycler for PCR

http://www.hgate.net/home/wp-content/uploads/2010/09/pcr3-.jpg
Page 25: Pcr
Page 26: Pcr
Page 27: Pcr

THANKSfor

LISTINING


Diagnostic strategy in genetically determined diseases ... Karyotype analysis FISH CGH MLPA QF-PCR Methods: PCR MLPA Sequencing PCR-RLFP PCR-Multiplex PCR-ASO Methods: ... The user

Diagnostic strategy in genetically determined diseases ... Karyotype analysis FISH CGH MLPA QF-PCR Methods: PCR MLPA Sequencing PCR-RLFP PCR-Multiplex PCR-ASO Methods: ... The user

Product Category Rules (PCR) (Approved PCR ID: PA …pcr-library.edf.org.tw/data/japan/Wood, Wood Materials.pdf · Product Category Rules (PCR) (Approved PCR ID: PA-CC-01) Wood, Wood

Product Category Rules (PCR) (Approved PCR ID: PA …pcr-library.edf.org.tw/data/japan/Wood, Wood Materials.pdf · Product Category Rules (PCR) (Approved PCR ID: PA-CC-01) Wood, Wood

Pcr & Real time pcr

Pcr & Real time pcr

INTRODUCTION TO REVERSE TRANSCRIPTION PCR (RT-PCR)hpc.ilri.cgiar.org/beca/bioinfo/docs/RT-PCR Principle-ABCF 2016... · RT-PCR refers to PCR that uses product of an Reverse Transcription

INTRODUCTION TO REVERSE TRANSCRIPTION PCR (RT-PCR)hpc.ilri.cgiar.org/beca/bioinfo/docs/RT-PCR Principle-ABCF 2016... · RT-PCR refers to PCR that uses product of an Reverse Transcription

PCR LA EA - KIKUSUIPCR 500LA PCR 1000LA PCR 2000LA PCR 4000LA PCR 6000LA Part No. Z1-002-732, IB00394B Jun. 2009 OPERATION MANUAL AC POWER SUPPLY PCR-LA Series PCR-LA I Supplied Input

PCR LA EA - KIKUSUIPCR 500LA PCR 1000LA PCR 2000LA PCR 4000LA PCR 6000LA Part No. Z1-002-732, IB00394B Jun. 2009 OPERATION MANUAL AC POWER SUPPLY PCR-LA Series PCR-LA I Supplied Input

1. 2 VARIANTS OF PCR APPLICATIONS OF PCR MECHANICS OF PCR WHAT IS PCR? PRIMER DESIGN.

1. 2 VARIANTS OF PCR APPLICATIONS OF PCR MECHANICS OF PCR WHAT IS PCR? PRIMER DESIGN.

Review of PCR / PCR Writing

Review of PCR / PCR Writing

Eco Real-Time PCR System User Guide - illumina.com Real-Time PCR System User Guide 3 Real-Time PCR Real-Time PCR Polymerase Chain Reaction (PCR) denotes the amplification of DNA templates

Eco Real-Time PCR System User Guide - illumina.com Real-Time PCR System User Guide 3 Real-Time PCR Real-Time PCR Polymerase Chain Reaction (PCR) denotes the amplification of DNA templates

The polymerase chain reaction (PCR). Experiment Goals Understand how PCR technique works. Perform PCR experiment. Analyze PCR products.

The polymerase chain reaction (PCR). Experiment Goals Understand how PCR technique works. Perform PCR experiment. Analyze PCR products.

Pcr pcr applications

Pcr pcr applications

PCR, real-time PCR, reverse transcription, and cloning

PCR, real-time PCR, reverse transcription, and cloning

PolymeraseChainReaction(PCR)Polymerase Chain Reaction (PCR) · 2010-10-17 · PolymeraseChainReaction(PCR)Polymerase Chain Reaction (PCR) • A technique for the in vitroamplification

PolymeraseChainReaction(PCR)Polymerase Chain Reaction (PCR) · 2010-10-17 · PolymeraseChainReaction(PCR)Polymerase Chain Reaction (PCR) • A technique for the in vitroamplification

PCR,polymerase chain reaction.Basic concept of PCR.

PCR,polymerase chain reaction.Basic concept of PCR.

Product Category Rules (PCR) (Approved PCR ID: PA-BF …pcr-library.edf.org.tw/data/japan/Vegetables and Fruits.… ·  · 2011-09-20Product Category Rules (PCR) (Approved PCR ID:

Product Category Rules (PCR) (Approved PCR ID: PA-BF …pcr-library.edf.org.tw/data/japan/Vegetables and Fruits.… ·  · 2011-09-20Product Category Rules (PCR) (Approved PCR ID:

Advanced PCR Dave Palmer, Byotix, Inc.. Advanced PCR PCR of Plant Material Multiplex PCR Modifications to Standard PCR PCR Troubleshooting.

Advanced PCR Dave Palmer, Byotix, Inc.. Advanced PCR PCR of Plant Material Multiplex PCR Modifications to Standard PCR PCR Troubleshooting.

Real-time PCR theory and applicationssuez.edu.eg/ar/wp-content/uploads/2015/11/Real-time-PCR-theory-and-applications...PCR History 1985 PCR first published Late1980’s PCR used for

Real-time PCR theory and applicationssuez.edu.eg/ar/wp-content/uploads/2015/11/Real-time-PCR-theory-and-applications...PCR History 1985 PCR first published Late1980’s PCR used for

Nested PCR,Fusion primers, Integrated PCR

Nested PCR,Fusion primers, Integrated PCR

AMPLIFICATION PCR and RT-PCR Reagents - HPSThpst.cz/sites/default/files/attachments/pcr-and-rt-pcr-reagents.pdf · 0>0 PCR AND RT-PCR REAGENTS We have the best PCR and RT-PCR reagents

AMPLIFICATION PCR and RT-PCR Reagents - HPSThpst.cz/sites/default/files/attachments/pcr-and-rt-pcr-reagents.pdf · 0>0 PCR AND RT-PCR REAGENTS We have the best PCR and RT-PCR reagents

PV92 PCR Informatics Chromosome 16 Day #1: What is PCR? Day #2: Alu Insertion & PCR.

PV92 PCR Informatics Chromosome 16 Day #1: What is PCR? Day #2: Alu Insertion & PCR.

PCR, RT-PCR and qPCR

PCR, RT-PCR and qPCR