Nuclear survivin expression is associated with HPV-independent

carcinogenesis and is an indicator of poor prognosis in

oropharyngeal cancer

British Journal of Cancer (2008) 98, 627 – 632

SF Preuss, A Weinell, M Molitor, M Stenner, R Semrau, U Drebber, SJ Weissenborn, EJM Speel, C Wittekindt, O Guntinas-Lichius, TK Hoffmann, GD Eslick and JP Klussmann.

University Hospital of Cologne, Cologne, Germany. University of Maastricht, The Netherlands. University Hospital of Jena, Jena, Germany. University Hospital of Duesseldorf, Duesseldorf, Germany. University of Sydney, Sydney, New South Wales, Australia.

Algunos OSCC se asocian con infección por VPH, particularmente VPH- 16

OSCC: VPH(+) y VPH(-):

diferencias biológicas

diferencias clínicas

Alteraciones moleculares

Pronostico.

Entidades tumorales diferentes.

INTRODUCCIÓN

Familia INK4: p14, p15, p16, p18 y p19

inhibidor de la quinasa dependiente de ciclina D/CDK4 implicados en el control de la fase tardía G1

P16: pérdida funcional en tumores humanos.

reguladores negativos del ciclo celular

Importante en la regulación de Rb. (Evita su fosforilación y la liberación de E2F)

pRb actúa como un regulador negativo de la expresión de p16

P16 (INK4A) Y OSCC

Expresión de p16INK4a en OSCC: correlacionada con la presencia del DNA de VPH.

Sobre expresión p16 relacionada con transformación maligna por VPH-AR.

Indica inactivación del control del ciclo celular mediada VPH-AR.

pRB se une E2F y bloquea la progresión del ciclo celular, la proliferación y la transcripción de p16INK4a.

P16 (INK4A) Y VPH-AR

Infección crónica con VPH-AR

E7 bloquea a pRB

inactiva el complejo pRB-E2F

promueve proliferación celularsobre expresa a p16INK4a.

La sobreexpresión de p16INK4a es un marcador directo de la actividad oncogénica en todos los tipos de VPH de alto riesgo.

OSCC VPH (+) y sobre expresión de p16: factor pronóstico favorable (Ritchie et al, 2003 y Reimers et al, 2007)OSCC VPH (+): mas sensibles a la radioterapia (Lindel et al, 2001)

SURVIVINA

Efector mitóticoInhibidor de la apoptosis (IAPs)

Se expresa durante el desarrollo y en células en proliferaciónEs indetectable en tejidos diferenciados.Se sobre expresa en tumores sólidos y líquidosExpresión correlacionada con la resistencia a la apoptosis inducida por eltratamiento antitumoral y disminución de la supervivencia de los pacientes

Expresión:Citoplasmática y Nuclear

Controla la división celular

Efecto citoprotector

Sobre expresión: Mal pronóstico, progresión y resistencia a quimioterapiaPotencial utilización para el diagnóstico y tratamiento del cáncer.Expresión nuclear correlacionada con baja probabilidad de supervivencia en OSCC y cáncer de pulmón de célula pequeña. Resultados contradictorios: Incremento en tasas de supervivencia total en casos con sobre expresión (expresión nuclear o citoplasmática). La carcinogenesis asociada con VPH puede tener un efecto en la regulación de los niveles de expresión de survivina. P53 regula negativamente la expresión de survivina, por lo que su sobre expresión podría ser mediada por acción de la proteína E6 de VPH-AR.

Sobre expresión en lesiones malignas.

OBJETIVODeterminar la expresión citoplasmática y nuclear de la survivina y su impacto

en la supervivencia en pacientes con carcinoma escamoso oro faríngeo y mostrar las potenciales interferencias de la carcinogénesis mediada por VPH con los patrones de reactividad citoplasmáticos o nucleares

METODOLOGÍA

Población de estudio:

106 casos OSCC.

Tejidos embebidos en parafinaentre julio de 1998-nov 2005

Edad media 57 años (34-82)

U Cologne: n=92 0U Duesseldorf: n=14

77 hombres (73%) 29 mujeres (27%)

Tratamientos: Radioterapia Quimio-RadioterapiaRecolección de datos por visitas periodicas c/4-6 mesesTiempo de seguimiento: diagnóstico- ultima visita o muerte.Tiempo medio de seguimiento: 20.3 meses (0.33-79.8)

METODOLOGÍA

PCR y tipificación de VPH:

Confirmación de la integridad del DNA: -globinaGrupo A = VPH genital/mucoso: A10/A5 - A6/A8Grupo B1= VPH cutáneo: CP62/70 - CP 65/69a

Inmunohistoquímica: 101 casos elegibles

Proteína Anticuerpo Evaluación

P16: Ab-4, clon 16PO4, + : Coloración nuclear y/o citoplasmática fuerteSobreexpresión si más del 60 % de las células tumorales eran positivas para p16.

Survivina Antisurvivin policlonal rabbit antibody

Porcentaje de células positivas para la coloración citoplasmática. 0: <5% ; 1: 5-25%; 2: 26-50% ; 3: 51-75% 4: >75%. Positivas para coloración nuclear cuando mas del 5% de los núcleos en la lámina se ven positivos, independientemente de la coloración del citoplasma.

ANÁLISIS ESTADÍSTICO

• Test X2 con el programa SPSS para analizar el estatus de survivina, p16 y VPH.

• Kaplan Meier para realizar el análisis de supervivencia global y supervivencia libre de enfermedad.

• Test log-rank para los análisis univariados.

• Análisis de Cox para determinar el Riesgo relativo según predictores independientes de supervivencia total

Supervivencia total definida como el tiempo entre el diagnóstico y la fecha de la última visita o fecha de muerte.

Supervivencia libre de enfermedad definida como el tiempo entre la fecha del diagnóstico y la fecha del último examen en el que la paciente se encontraba libre de recurrencia independientemente de que esta fuera local o a distancia.

Características De La Población De Estudio

RESULTADOS

Expresión de survivina

Expresión citoplasmática:0: <5% ; 1: 5-25%; 2: 26-

50% ; 3: 51-75% 4: >75%.

Expresión nuclear:+: mas del 5% de los núcleos

se ven positivos

Análisis de supervivencia

Correlación entre VPH, p16 y expresión de survivina (Citoplasmática y nuclear)

p16 y : VPH-AR (+): P< 0.001 Survivina Citoplasmática y tumores p16(-): P=0.0022;

Survivina Nuclear y VPH(-): P=0.023Survivina Citoplasmática y VPH(-): P=0.022

P=0.013 P<0.001

93.3%

58.4%

78%

35%

Análisis de supervivencia (5 años)

Análisis multivariado

Valor predictivo de los marcadores en supervivencia global y libre de enfermedad:

Survivina nuclear (+): P= 0.004

P16 (+): P=0.041

Estado TNM: expresión de p16 y M afecta la probabilidad de supervivencia global P=0.023

Supervivencia libre de enfermedad: VPH (+): 72%. VPH (-): 48%. P=0.0576

Supervivencia libre de enfermedad: p16 (+): 93%. p16(-): 44%. P=0.013

Supervivencia global: p16 (+): 78%. p16(-): 43%. P=0.0244

Survivina Citoplasmática: mal pronóstico de supervivencia libre de enfermedad: P=0.0387

Expresión de Survivina Nuclear asociado con mal pronóstico de supervivencia libre de enfermedad.

independientes

DISCUSIÓN Un tercio de los OSCC son VPH (+), predominante VPH-16: 29%

v/s 36%, los OSCC VPH (+) tienen mejor pronóstico.

Respuesta celular hacia epítopes T específicos de la proteína E7 de VPH 16 en sujetos con OSCC E7 y p16 +.

La sobre expresión de p16 en Ca. de cervix VPH + se debe a la interacción entre VPH 16 E7 y pRb y está correlacionada con el estatus de VPH.

58% de los tumores: survivina citoplasmática (+). Correlación inversa entre la expresión citoplasmática de survivina y los carcinomas asociados a VPH.

Tumores VPH (+): sobre expresión de p16 y baja expresión citoplasmática de survivina: Expresión de VPH16-E6=degradación de p53=sobreexpresión survivina, La mayoría de los OSCC (+) como (-) tienen inactivación de p53. (ambiente)

Sobreexpresión de survivina asociada con mal pronóstico en OSCC. (marcador pronóstico de respuesta a radioterapia), correlacion con baja supervivencia libre de enfermedad.

La survivina se expresa en el núcleo: (proliferación) o citoplásma (viabilidad) El 19% de los casos mostraron expresión nuclear de survivina.

La expresión nuclear de survivina se correlacionó con los tumores VPH (-) en este estudio lo que sugiere que la carcinogénesis dependiente de VPH interfiere con la importación de survivina al núcleo.

Se sugiere que la expresión nuclear de survivina predice pocas probabilidades de supervivencia en cáncer humano.

En este estudio la expresión nuclear de survivina se correlacionó con una mala probabilidad de supervivencia libre de enfermedad en análisis univariados y multivariados . (Poco tiempo se seguimiento).

Conclusión:

• La expresión de survivina se encontró en la mayoría de los OSCC, la expresión citoplasmática y particularmente la nuclear, predice un mal pronóstico en estos pacientes. El patrón de expresión de survivina parece ser influenciado por las diferentes vías moleculares de la carcinogénesis y el patrón de expresión nuclear de la survivina parece incrementarse en tumores negativos para VPH.

DISCUSIÓN