Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer

35
Published OnlineFirst October 21, 2014. Cancer Res Yann Simon Gallot, Anne-Cécile Durieux, Josiane Castells, et al. cancer Myostatin gene inactivation prevents skeletal muscle wasting Updated version 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057 doi: Access the most recent version of this article at: Material Supplementary http://cancerres.aacrjournals.org/content/suppl/2014/10/21/0008-5472.CAN-14-0057.DC1.html Access the most recent supplemental material at: Manuscript Author edited. Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been E-mail alerts related to this article or journal. Sign up to receive free email-alerts Subscriptions Reprints and . [email protected] Department at To order reprints of this article or to subscribe to the journal, contact the AACR Publications Permissions . [email protected] Department at To request permission to re-use all or part of this article, contact the AACR Publications Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancer cancerres.aacrjournals.org Downloaded from Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057 Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancer cancerres.aacrjournals.org Downloaded from Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057

Transcript of Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer

Page 1: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer

Published OnlineFirst October 21, 2014.Cancer Res   Yann Simon Gallot, Anne-Cécile Durieux, Josiane Castells, et al.   cancerMyostatin gene inactivation prevents skeletal muscle wasting

  Updated version

  10.1158/0008-5472.CAN-14-0057doi:

Access the most recent version of this article at:

  Material

Supplementary

  http://cancerres.aacrjournals.org/content/suppl/2014/10/21/0008-5472.CAN-14-0057.DC1.html

Access the most recent supplemental material at:

  Manuscript

Authoredited. Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been

   

   

   

  E-mail alerts related to this article or journal.Sign up to receive free email-alerts

  Subscriptions

Reprints and

  [email protected] at

To order reprints of this article or to subscribe to the journal, contact the AACR Publications

  Permissions

  [email protected] at

To request permission to re-use all or part of this article, contact the AACR Publications

Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from

Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057

Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from

Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057

Page 2: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer

� �

Myostatin gene inactivation prevents skeletal muscle wasting

cancer

����� ���� ���� ��� ������������ �������

���������� ��� ����

��� ������� ����� ���������

���

�������� �����!�� "��� #��� �����

��� ������� $���

%�� ������� &������ '� ��'�(�

��� & ������

"�)��*�� ����+��� �����,�

%�� ������� -�.

*�� "����� � ��'��))��

/�� ����� ������

!� ����

�������������0��1����� ��

�"���� �������#'1�����������2&���������3��,���� �����"1���0�*!4!%����� �& �������0������

!5-$��3�$�677��1���+��������������� ��� ��������0�%*474��� 8��������0������

%5-$��3�$��4�9��3�� �����-� �� ���:�������0�7%444������ �0��������0������

*5-�&$�� 3�474�� 5-$�� 3���!%/�� �����-� "���� �1�� 3��,���� �� ��� "1��� 0�79744�

;��������0������

/�-$�� 3�$� /!%9�� "���� ���� ��� ������� ����������� ��� ��� ��������� &���� -�����

��8�����������"1���0�7944<�"1���0������

�����8�������� '�=� ������0��1����� �

� � � � "���� �������#'1�����������>&��������

� � � � 0���� ����������������/������������#����

� � � � *!4!%����� �& ������������!��0������

� � � � ?��=�4%%�*�<<�*!��*�<<�

� � � � 0��=�4%%�*�<<�*!��*�<6�

� � � � &����=������@)��1����� A���,�� �� �����@)��

Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from

Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057

Page 3: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer

� !

������������ ��������������������������

-�8 �� ������)��� ��)��� ���� �B������������@�

Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from

Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057

Page 4: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer

� %

��������

���'����� ��� �� ������ B�� ���� �1����� '� � �� ���� ��� �����)���� �1� � ����� 1� ����

� ��� 1�)���1�8� ��� ��B� '���,�������������@�:B�,���� �� ��� ��������� ����� �'B�

'����,��������)��(��� ����������'���� ���.���� '������� ��������@�5�� '�������� �� ��1��B��

�� ��� '�� '18 '����� '� � '�� ������ 8� ���� 1� � ��� ��� ��,�,��� ��� ���� ���� '��

8� '�������� )� ���'������������� ������ B�� ���� ��� ����������� ���@�Myostatin� �����

���� �,� ���8��,�� ��� '����,��������)��(��� ���������������������������������) ���B� '�

"�B��� ����� �������� C""�D� ������ �� ���ApcMin/+� ����� ��� �� �����'������� )� ����� ���

��������������'����@����'���� �����1��1� � �������� ���� ��� '���� �,� ���)�������)�����

8� ��1 ��� 8� 'B�1�� �1� ��'��� ���� '�� ��8������� )� � �8'1����� ��� ������� ��$0�� ����

��0��E� �������������B� '��� 8'��1����� ��������@�- ���1��1� � ������������8�����

'����B '�)�""�� ����� '������������ '����.��)��� �� �����8�18�����ApcMin/+������ '���

� ����1� ����������� ���,�,��� ��� � '� ����@� ����� ��8������� ����1���� ��� '�� ""�� ����

�'B��� '���8'�� 18�� ���������� ���B� '�����������8�������)���������,�,������ ���

� ��������� �,�������������������88 ���@�?�(��� �� '������� ����� �� ��,������������ ����

���� )��1� � ��� ��� '�� 8� '�������� )� ������� ���'����� ���� ���(� '��� ���� ��� � ���

��B '��B� '��8���� ����)��)�� '������������ �������)��������������1� �����������@�

Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from

Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057

Page 5: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer

� *

������������

������� ���'����� ��� �� B�� ���� �1����� �'���� ���.��� �1� '�� ���� ������ ���� )� ��1�

B���' � '� ������ ��)����8�� ���)����8��� �����������(��� ����������B'���� '�����������

8� ���� �8�� �� � ��� ���� �,��1� 8�����,��� C�D@� ?���� ���� '� �����,��� )�� ��� �������

���'���������8� �64F�)�8� ��� ��B� '���,���������������8�� �������1����8������ ���������� ����

��������C!D@�����������'���������� ��)��!4F�)������������ ������ '��C%D���������� �����1�

�� ���� ��� ����������+���� 1�)���)�������������� ���� 1�)���'� '���81����������������

���,�,���)��������8� ��� ��C*D@�

��))���� � � �� ������'�,���������,��8��� � ��� � ������� ���'������ �� ���'� �� ���� � '���

����� ��, ��� � '�� '���8�� ��� 8 �� ���� )� ��'��� ���� 18��55� �� �,��� ����8 �� C�� $55D�

���� ��� ���������� ��������� �1� �� �,���� ���� 1� � ��� C�� �D� C��,��B��� ��� /D@� �� �� ��� ��

'��'�1������,��������)� '�� ����)�������B '� )�� ��G� ��8��)���1������1������ ���

)�� �(��� ��� ������ )������ C7D@��� �� �� �� ��� ��� �� �����E8��������� ������ �1� �������� �

�� $55�������� $55���B'��'� '��������� ������� �,� �� 18��5��� �,�������8 ��������(�B�����

�� �,�������8 ����(��(������C��(D�*�����/@�?'������� ������������8'�8'�1�� ���)����!�����

���%�� '�� ������ ���B� '� ���*� �� � �� ���!E%E*� �8�����B'��'� '��� �� ���� �� � '��

�������� � ������������ �������8 ��@�

�� ��������� ��������� ��)��(��� ������������@�Mstn���������� �,� ������������(��� ���

������ '18�� �8'1� C7�� <D��B'������ )�����,����8������� )��� �� �������� �(��� ���������

� �8'1� C6��4D@� ��� ��������� ��� �� �� ��8������� ��� '�� �������� ����� ���� )� �� �8���

���� ���� �������� � �(��� ��� ������ B�� ���� C/D�� ���������� ������� ���'����� C����7D@� 5��

���� ����� )� ������� ���'������ ������ �� ��� )� �� ������� )�� )� �� $55�� 8�����,���

�(��� �������������C�*���/D����� ����������� ���� '�C�/���7D��������������� ��)��8���C�/D@�

:B�,���� �� �'� ����� )� ���� ���� �� $55�� �������� '��� ����� '�� ��))���� 1� ���

Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from

Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057

Page 6: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer

� /

��������� ���� '�����8�� �,���))�� ��)��� �������� �,����C�/D��B'�����8���������������8�

������ ��������1��� ��������������� � ����������(��1��� ���� ��� � '��B�� �����1�����C/D@�

5�� '��� � ��1��B�� �� �� � �D� ��� ������ '������������'�������1�B'��'�Mstn� �����

���� �,� ��� �1� �� ��� '�� ������ )� ������� ���'������ ���� ��D� � ������� '�� 8�������

'���8�� ��� �8�� �)�Mstn� ����� ���� �,� ��@������B� '������� ���)� '�� '��������)� '��

Mstn� ����� B���� ����� ��� !� ��))���� � ������ ����� )� ������� ���'������ '�� "�B��� �����

��������C""�D� ������������������� '��ApcMin/+������������)������ ��� �������

�������'�����C�<���6D@�

Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from

Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057

Page 7: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer

� 7

�������������������

��������

������8����� ��B��������� ����������������B� '� '��&��8�������� 1������������

)�� '���������������)������ �1��������)������� �)���8��8���@���� � � �,���/<�"E7�Mstn�

(��(�� � CMstn-/-D� ���� B���� 8��,����1� ���������� ����� �

HEH� ���� C<D@� ?'�� )�����Mstn�

������� CB'���� '�� '��������)� '��Mstn������ ��� )���(���B� '���8����)� ��#��� ��D�'��������

���� ����1� ������� �1���8���������������������� � '��.1� ��� ���@��/<�"E7�ApcMin/+�����

����B���� 8���'����� )�� ���(���"���� �1@� ?� ������ ��ApcMin/+EMstn-/-

����� ApcMin/+�

�����B����)��� �� ��� �Mstn-/-�)�����@�ApcMin/+Mstn+/-

����������)�� '��8����1�B����

'���� ��� �Mstn-/-�)�����@�ApcMin/+Mstn+/+

��ApcMin/+Mstn+/-�����ApcMin/+Mstn-/-

�����B����

���� �)�����1���� 18������1���@�

������������� ������!�"��"������"�������#����"��������

"�B��� ������������� C""�D������� C��������?18����� ��������� ��D�B������� ����� ���

��&����88���� ���B� '��4F�)� ����,��������������F�8����������� ��8 1����� �%<I��

����/F��;!�������@�Mstn-/-�C�*@/*�J�4@64�� '�K��L��D�����B���� 18��C�*@74�J�4@9/�� '�K�

�L�!D���������B��������� ������1������� ���B� '�/����47�""������������/4�M��)�� ������

�#��@��� ���Mstn-/-�C�*@7<�J��@�%�� '�K��L6D�����B���� 18��C�*@77�J�4@9/�� '�K��L9D�

���� ���� �����,��� � ������ �#��@� ����� B���� ���B��� )�� ���� B� ��� ad� libitum@� ��1�

B���' ��)���� �(������ �����.��B����������������1@�

���$�$��������

Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from

Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057

Page 8: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer

� <

���,�,����� ��B����� ����������B���� 18��C�/@47�J�4@7!�� '�K��L!4D�����Mstn-/-�C�/@�/�

J�4@�7�� '�K��L�<D����������� ���B� '�""�������@���1�B���' ��)���� �(������ ���

��.��B����������������1��� ������ '@�

���,�,��� �� � B��� ���� �� ������� ���ApcMin/+Mstn+/+C�L%4D��ApcMin/+Mstn+/-

� C�L�/D� ����

ApcMin/+Mstn-/-� C�L�!D����� ���@�ApcMin/+Mstn+/+

� B���� ����� �� ��� ��� '@� ���,�,��� �� ��� )�

ApcMin/+Mstn+/-�����ApcMin/+Mstn-/-

�����B������ ��������� ��� '������)�*/�B��(�@�

���$��������������

�����B�������� '� �.���C�@8@���N�� ���)�94��@(����(� ����������4��@(�

����1��.���D�%/�

��1���) ��� '�������� ���)�""�������@�Extensor digitorum longus��gastrocnemius��soleus�����

tibialis anterior������������B������� �������,�����������8��� �������B������8���1���������

����B���'��@������B���� '���(�������1����,����������� ��@�

�������������"�#���$���

#�����C!/4�M�D�B���'����.������/4�O��)����)�����1������������ ���C�������� '����

B� '� '���1��� ��4@/��D� '� �'���8��,����1��8�� ��1��,�8�� ��@�-���������B���������

�������� ������� ������@���8����B���������� ���������)���/����������� ��)������ ��4�444���

� �*I��)���/���@�?'����8���� �� �C!44�O�D�B��� '����������B� '��44�O��)�4@������ '���

��� � �� ��))��� C8:� L� !@!D@� ���� ����� ����� �� ���� B���� �� ������� �1� ������'�����

�'�� ���8'1�C���?�(�5�� ���� ���@$@"@D�������8� ����������,� ���B� '����'1����@�

���%����� ��

? ��� $-�� B��� ����� ��� )�� gastrocnemius� ������ ���� ��� ������ �1� ������ '��

$-���1�0������?�����������P� �CQ�����D@�$-��C*44���D�B�����,����� ����������������� '��

�����8 ���-���1� '�����(� �C���$��D@�?'������� ���)�B����������,�����8�������+�����������

Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from

Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057

Page 9: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer

� 6

��� ��������88���� ��1�?������@�$���� ���#�$�B���8��)���������!4�M��)�����,����������

'�� ��0�� � &,������� ��8��� ��� C���$��D@� 0����������� �� ���� 1� B��� �������� ������ ��

�0R97�$����?���#�$��� �� ��� �1� �� C���$��D@��� ��B���� ����1.��� ������ '��HH�?�

� '�� )� ����1���@� $�)������� ������ C'18��� '���� �������� 8'�8'����1�� ����)�������

������� 8� ���� ������ #4� ���� S� ������D�B���� ����� � �����.�� '�� ��8������� ��,���� )�

������)��� ���� �C6D@�

��������&���"�����

Gastrocnemius������������ ��� �������B����'����.���C�=!4����� ���B =,�D�������

�������� /4���?����:�����))��� C8:�<@*D� �� ��������44���-����� !���&�?���!���

&�?���/4���G���1���8'�8'� ���/4��������)������������������ ',����� ���

�!4����(�����������������F�?�� ��R��44������ '������ ��)������ ��!�444���)���4����� �

*I�@�#� ��������� �� ���)� '����8���� �� �B����� �������� �</4���C���$��D@��

�����������'����

0��"����������1����� )�������� ���8 ��������������8���� ��� ������������ ��������� �

5T��S��5T��S���%!E���%7

�����8<4�7P?'�*!�E���*!*

�C���$��D�B���������� ���)��!�'����B� '�/4�M��

)� 8� ���� )��� ���� C�=�4� ���� ��� ,�=,�D� ��� 97�B���� 8�� ��@� ��8���� B���� '��� B��'����

������ ��� B� '� �� ��1�� ��� �� ������� )�� %4� ���� )��B��� �1� '�� ������ ��� B� '� ��

� ��8 �,����U8'1���1 '���� ��� ��� )�� �4� ��@� ?'�� ����1���� ����� ��� )� �� ������������

)����������� �� �� ���� B'��'� ���B��� ���� ������ ���� �)��� ��� )� '�� ���� � 8� ����

'���'� '�� ���� )����������� ������� ������� )� '�� ����� ���� +��� �)��� ��� )� '�� ���� �

8� ���� '���'� '�� )����������� �� ���� 1� )� 8'1���1 '���@� 0����������� �� ���� ���� B����

���������������#���V�!44��1� ����� ���� �C���$��D@��� ��B��������1.������������

#�������������) B���@�

Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from

Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057

Page 10: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer

� 9

0��B�� ������ �����1�����/4�M��)�8� �����B��������,������!@/F�����8�1���1������

������ '����� ���� �4@*/�M��� ������������������C�&�:��� '�����"�)����������D������

������ ��� ,�����' � B� '� '�� �88�8��� �� �� ���1@� �� ������� ������ � *&��#�� C�=/44�

,�E,�D�� -0�T�� 87/� C�=744D�� -0�T�� 87/���/%7

� C�=!44D�� ������� 8� ���� C�8D� �7� C�=744D��

�8�7���!%/E!%7

� C�=644D�� ���!E%� C�=/44D� ���� ���!���*7/E*7<

E%���*!%E*!/

� C�=!44D�B���� )�������

����������?��'���1@��� ������������� �����C�=��444D���������!�C�=644D�B����)����� ��

���.��� ��'���1@��� ������������� �� �/�� ��!��8����C�=644D��0�;%����!/%

�C�=/44D��

"�%��C�=644D�����S� �������C�=!�444D�B����)�������������'@�5����� ���B� '�'��������'�

8�����������N��� ����������1��� ���1�C��(D����B��� '���'����������� ��� �� ���)�

����8������ C�&� :��� '����� "�)�� ��������D@� "������� B�� ���� �� �� B���� +��� �)����

������ 5����� �) B��������1���� C-� ����� 5�� � � ���)�:��� 'D@�S� ������� ����� ��B����

����� ��'��(�)���+����8� ����������@�

���8����%� ��.1�� �� �,� 1� B��� )���� ������1� CW���� L� %64� �� ���� W���� L� *74� �D�

�� ������� �� ��� 8� ���� �� ��� �� �1� ������ ��� 1����8����� �����8�<�����*�

� '1��������C���'�D������)�������� ����� �� ��C�9D@�

��������������������(��'(�����ApcMin/+Mstn+/+���#�ApcMin/+Mstn-/-���"��

?'�� ����� �� �� ���� B��� ����)���1� ������ ��� ��� ���1� � '�� � ��'� ���� 8������ � '��

����������B����� ��� �%��+������� ����C�88���������������B����� �� ���D@�?'������B���

���� ��,��@����� ��� ����B���� )���'���B� '�#����8����� ���� �������1����� )����� ����4F�

8���)�����'1���)��!*�'��@���� ����B���� '����������B� '�#���C%����!�'���D������ ������

���4@�F�� '1���������� )�� %�'��@�#�18��B���� ��� ��������� �������� ���������8�� ����

B������ ����.������X������!���!�%������Y%������ ��@�

��������"��

Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from

Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057

Page 11: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer

� �4

� � �� ������8�������B��������������������� �8������� ������������ B�B�1�����1����

)� ,��������� B� '� '�� � ���� �-�B���P����� post� hoc� �� � ����� � ���� �)1� �8���)���

��))���������� B���������C���8'#���#����/@4%D@�� ���� >�� � �� �B��������)���8�������

�� B���� B����� ���@���))�������������,�,����� ���B����� ��������1� '���'���+����� �� @�

?� ����� � )�� ��))�������� ��� ���B���' � � � ��� '� �� B����B���� 18�� ����Mstn-/-� ���

������������� ��� ����1����)� �,��������B���8��)���� C��8���-; �K������������8 �D@�

?'��S���,���)������)�������B����� �� �4@4/�)�������8������@��� ������8����� �����������J�

�&@�

� �

Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from

Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057

Page 12: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer

� ��

������

Mstn�!�������"��$������(��$��������������)����������"��������������������%*�����!���"��

��1������)� ������gastrocnemius���������������8� ������ �� �B���������������������

B���� 18�� ���������������C0��@�����D@��1��� ��� ���� ������� ���� ��� '��������������

��1����� C0��@� ��D�� )� ����� C0��@� ��D�� ���� �8�� ��1�8��,�� ��� ���� )� �(��� ���������

���� C0��@� ��D� ���� 8� ���� �� �� � C0��@� ��D@� #� �� ��� ������ �������B�� ���� ���Mstn-/-�

����������� ���� B��� ���� ����� �� ��� �1� '�� 8�����,� ��� )� 8����� ���� �����

����� �� ��� C0��@� �&� ������88���� ��1�0��@� �D@�#��,�� ���)� �(��� ������������� ����

B�����������,����� extensor�digitorum�longus��tibialis�anterior�����soleus��������)�Mstn-/-�

����������� ���� C��88���� ��1� 0��@� !D@� 58� �� �1�� ������� �� �(�� B��� � � ��))���� �

�� B���� ���8�� C��88���� ��1� 0��@� %D@��� �� ���� '��� 8� �� �� '���� ���� �(��� ���������

������ �� �8'1������������������'����@�

Mstn�!�������"��$������#�"�����������������!�� �+�

?�����B '�B�������,�������44F�)�������� � ���B���' �B��������)���� �1��B������

Mstn-/-������8����� �B���� 18������C0��@�!�D@�58� �� �1���� ��per se������ ��� ��� '��

in vitro�8���)��� �,���'���� ���� ����)�""�������� C��88���� ��1�0��@�*���D@�&�8�������)�

������������ ���� ����������� ��(���� B��� '���)��� �� ������� ��� ��� �����@� $-��

��,����)�,����������� '��������B '�)�� ��C &�0D�������N�����,���)� ���������������

���� ��B '� C!4D�� ������� ����8� ��� �� C�"3?�D�� '�� 8������� � ������� ����8� ��� ���

��1� 18��� )� ������� ������ C!�D�� ���� '18�������������� )�� �� C:50D��S�� �� �������8 �����

�� �,� �� )� &�0� ���� �"3?�� ����� ��8������� C!!D�� B���� �����)���� �1� �B����� ��� '��

���� )�Mstn-/-� ���� C0��@� !�D@� ?���� ���� �� �,��� ���������� '��� ����� �1� ����� �'B�� �

��'��� ����������������� �����������C!%D@��� �,��������'����'� ���������8� �����)�

Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from

Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057

Page 13: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer

� �!

,������G������� ���)�����)������ ������ �,�����,G��G�D���� �,������CG�EG�D������� �,���

�� CG�EG�D� C!*D@� 5�� '�� 8����� � � ��1�� $-�� ��,���� )� � '� G�� ���� G�� ������ �� B����

�����)���� �1� �B��� ��� '�� ���� )� Mstn-/-� ���� C0��@� !�D@� &�8������� )� � '� 18�� 55�

C�� $55�D����� 18��5�C��(*D�����8 ����B'��'� ����������� �,����������C!*D�B���������B�����

��� '�� ����)�Mstn-/-�����C0��@�!�D@�

?'��8������� 1� '� ��� �������������� �����B '��1�������������88 ����)� ���������

B������� ��,�� ��� ��@������ �� �B� '� '���'18 '������$-����,���)�?Z&�P�������������

)� �88 ���� C!/D�� ���� 8� ���� �� �� �� ���� �����!� 8� ���� �� �� ���� ���8����%� ��.1��

�� �,� 1�B����'��'��� ��� '�� ����)�Mstn-/-����� C0��@�!����������88���� ��1�0��@�*�D@�

�� �� '���� '��������� �������� �� '� ��� ��������8������� '����8�������)���������,�,������

���������������� ���������������������������88 ���@�

Mstn� !���� ���"��$������ ����������� �+�� �"��$������ ��� (������'��"� (��+ �'�� ��� �)�������

���"���������������%*�����!���"��

�� ����������8��,�� �������B�� �����1������� ���� '������������ B����8� �����1� '�����

���E�� ������� ��@� Z�� )��� � ��8����� '�� ������ ��� )� '�� �( E������� ���� � )�

��8�1���� C?;$D�8� 'B�1������������ ������ ��)� �(��� ���������8� �����1� '�����B'���

�� �,� ��� 8��,�� �� ������ � �8'1� in vivo� C!7�� !<D@� :B�,���� 8'�8'�1�� ��� ��,���� )�

�B�� �����))�� ���)� '��8� 'B�1�� ����������8<4�7P�� �8�7����� '�� ������ ��� ��8������

*&���������#� ����C*&��#D����B�������������)���� �1�����������������8���� � �����B '�

��� '��gastrocnemius�������)�� '�B���� 18������Mstn-/-�����C0��@�%D@

Z�� ��� � ��,�� ��� ��� B'� '����� �� ���� ��� ����������� ���� B��� ������ ��� B� '� ���

��'��� ���)� '�����+�� ���8� �����8� 'B�1@�5����������� '����8�������)��������8���)���

&%� ���+�� ��� �������� C��0��E� ������� ���� ��$0�D� �������� �1� ��� ��B '� ��� '��

gastrocnemius� ������ )� B���� 18�� ���� B��� �8�� ��1� ���� ��� ���Mstn-/-� �����������

Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from

Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057

Page 14: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer

� �%

���� C0��@� *���D@� ?�������8 � ��,��� )� )�('���� ��� ;� C0�;D� %�� �� �������8 ��� )�� ��

��,�,��� ��� '�� ��8������� )���0��E� ������� ������$0�� C!6�� !9D�� B��� ���� ��(���1�

�������� ���Mstn-/-� ����������� ���� C0��@� *�D@� :B�,���� 0�;%� 8'�8'�1�� ��� ��,���

�����������'������C0��@�*�D@��� �,��8'�8'�1�� ���)��)�87/������� � ��� �)�-0��

�������8 ���)�� ����,�,������ '����8�������)���$0��C%4D��B�������%�)����B������Mstn-

/-� ����������� ���� �8����� B� '� B���� 18�� ����������� ���� C0��@� *&D@�

#'�8'�1�� ��� )� 5T�S� �� ���%!� ���� ���%7�� ���B�� '�� �������� )�-0�T�� �1� 5T�S@� 5T�S�

8'�8'�1�� ���� B'��'� B��� ��(���1� ���������� ��� '�� gastrocnemius� ������ )� B���� 18��

���� ��� ���8���� � �����B '�� �����������'������ ���Mstn-/-� ��������������� C0��@�

*0D@����������1�� �������8 ���,����)�?Z&�P�����(��� ���������B�� �����1 (����C%�D������

?$�07�����&%����+�� �����������������8 � ��8� ������+������)�� '���� �,� ���)�-0�����

���8���� �?Z&�P�C%!D��B�����B�������� ������Mstn-/-� ���������������C0��@�*��:D@�

Z�������� ���� '����8�������)��� 8'��1����� ��������� C%%��%*D@��1 8����������

������������ )��� )� ��� ������������ ��� 8� ���� ���' � �'���� %� C"�%D� ��� ��

8� 18�������(���)��� 8'��1�C%/D��B���������)���� �1��������������gastrocnemius�������

)�B���� 18�� ��������������@�-�,���� ���B��� ����,��� ���Mstn-/-� ���������������

C0��@�/�D@�3�(��$-����,�������� �/�� ��!�8� �����8����B�������� �B����� ���Mstn-/-�

����������8���� � �����B '��8����� �B���� 18������C0��@�/���D@������ �,��1������

'���� )�������� ������ �� '� � �� �� ���� � ���� ��� '�� �� �,� ��� )� 8� ��1 ��� 8� 'B�1�� ���

�(��� ��������������������������'����@�

����-�"��$�����!�����!�����)����������"���������������%*�����!���"��

&��,� ��� ��8������� )� �� �,���� 8� ���������B�� ���� ���� ���'����� �1� �8������� ����

'����8�������)���0��E� �������C%7D�������� �,� ���)��� �,����������������������� ��������

���������� ���'����� C/�� %<D@� Z�� '���)��� �� ������� B'� '��� �� �� ���� 8�����1� �� �����

Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from

Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057

Page 15: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer

� �*

�� �,������������@����8�������1���� �� �������8 ���,��������������'���������B���� 18�� ���

�������� ���� C0��@� 7�D@� ?�������8 � ��,���� )� �� �,��� G�� ���� �� $55�� B���� ���������� ���

���8���� � �����B '�� '����B���� 18������Mstn-/-�����C0��@�7���D���� � �������8 ���,����

)� ��(*� ���� ��(/� B���� �������� ��� Mstn-/-� ���� �1� ��� ��B '� C0��@� 7��&D@� 0�����1��

���!E%�8'�8'�1�� ����������!E%�8� ������ �� �B��������������B���� 18������Mstn-/-�

��������������������'������������8���� � �����B '�C0��@�70D@�?'���)������ ������

���� � � ���� � ��(���1� �� ��� �� �E�� �,��� ���������� ��� �(��� ��� ������ %/� ��1�� �) ���

������ ���)�""�������@�

Mstn�!�������"��$������#������"���'�(�����!�����$�$���������������%*�����!���"����#�

ApcMin/+���"��

""�� ����������� ���� ���)�� ��� �� �� '��� B�� ���� �1����� �'���� ���.��� �1�

8�������,��B���' �����C0��@���D�������� '�C0��@�<�D@�- ���1���� ������B��������� ���B� '�

�������)���� �8����� ���)����������,�,���C0��@�<�D@�Z�� '���)����������� '���))����1�)�

Mstn���������� �,� ������ApcMin/+����������� �����'�������)������ ����������C�<��%6D�

���� ���'����� C�6D� '� � �������� �� � � ��� ��� '�� adenomatous polyposis coli� CApcD� �����

�������� � �� �8��� �� �� ����� ��8������ C���D� C�<D@� 5�� '������ � � ��� ��� Apc� ����� ���

���8������� )�� '�� ��� �� ��� ���� ��,��8�� � )� )������� ����� ��� 8�18���� C%6D�� ���

�� ���� ����� � ��'��� ��� �������� �'���� ���.��� �1� ������� )� '�� ������ �� �� ���@� ?'��

��,�� ���� )�ApcMin/+ ���� ��� '�� �������� 8��������� )� ��� ��B '� ����������B�� ����

C�6D� '� � ������ �����1� ���� ��� � '����������� ���'������ �8����� � '�� ������ ���)�

��� ������� B'��'� �������� �� ����1� )�� � ��� ��B '� ���� ������ B�� ���@� ;��

'� ��.1���� Mstn+/-� ���� '.1���� Mstn-/-

� ���� ��� ���(�������� ���,�,��� )� ApcMin/+�

����B�������(���1�8�������C0��@�<�D@�Z'����44F�)�ApcMin/+Mstn+/+�����'��������!9�

B��(���) ������ '����� �94F�)�ApcMin/+Mstn+/-�����ApcMin/+Mstn-/-

�����B����� �������,�@�;)�

Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from

Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057

Page 16: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer

� �/

� ���B���� 18������Mstn-/-�����'������������)��8������������������ ����C��88���� ��1�

0��@�/�D@�5����������� '�����,�,����� ��)�ApcMin/+Mstn-/-�����B��������� ���B� '�������� ���

��� '�� ������ ���� ��.�� )� �� �� ����� 8�18�� C0��@� <���� ���� ��88���� ��1� 0��@� /�D@�

��,��8�� � )� 8�18���� ��� ������1� ������ ��� B� '� ������ ���� ���1� )����� C�<D@�

��������� � )� '�� ��� � ��� '���)��� �� ��� ��� ����� � ������� '�� '��� '� � � ��� )� '��

������@� Z'������ '�� ��� � B��� ����8���� ��� ApcMin/+Mstn+/+� ����� � � B��� �8�� ��1�

8�����,��� ���ApcMin/+Mstn-/-����� C0��@� <&D@� 0�����1���� �� ���� �� '��ApcMin/+

� ���(������

� ���� ��� '����������������1�����C0��@�<0D�������8�� ��1�8��,�� ��� '������)��(��� ���

����������C0��@�<�D@�

Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from

Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057

Page 17: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer

� �7

�����������

������������� ������'������������ �)�� �������,�� � �����1����� '� ����������� ���� 1�

)�� �'� '���81�� ���������� ������1� ���(�� �������� 8'1������ 8��)������ ���� 8� ��� >��

+���� 1� )� ��)��� ���� �� �� ��1� ���������� ���,�,��� ��� ������� 8� ��� �� C*D@� �� '��'� ������

B�� ����� '��(�1�)�� ����)�������������� ������'������ ��� ������.��������)�� �����8�������

)�� '�� ��� '� )� ��1� ������� 8� ��� �� C%D�� � � ������� �� 8��1� ������ �� 8������ B'���

����������'������������1����������� ������@�?'��8����� �� ��1�������1������� ��� '� �

���� ���� �� �� ��� ��� �))�� �,�� � �� ��1� � 8��,�� � �(��� ��� ������ B�� ����� � ��B� ���

��B '������ �������������,�,����� �����""�� �������������������ApcMin/+ ���@�

���'���� �����1���� ������8� ���������� �������1���8��������8� �����1� '�����C9��

%9D� ���� ����������� 8� ���� ������� ��� C%9D@� ;��� )�������� �'B���� '� �Mstn� ���� ���� � �

� ���� �� '�� ��'��� ��� )� �( E?;$� 8� 'B�1� �������� �1� ��� ��B '�� �� � ���� �����1�

� ���� ��� '�� �� �,� ��� )� 8� ��1 ��� 8� 'B�1��� ������1� ������ �� '� � �� �� ���� 8�,�����

8� �� ��������� ����������������������B�� �����1���8�������� '���� �,� ���)�8� ��1 ���

8� 'B�1�@� :B�,���� B�� ���� � �������� '�� 8������� 1� '� � 8� ���� �1� '����� ����� ���

������ ��� ��))���� �1� �������� ������� '�� ��� ������ )� ������� ���'����@� ?'�� ��'������

���������� '�� ���'�� ��� � � �� '�,�� ����� �� �,�������� �� � ������� ���'����� ��� ���������� �

����� �� � � ���� � ��� 8�� �� )�� �� ���� ���� �� B���� '�� '� � ���� '�� ��� '���'� '��

8���� ���)� ���� ����'� �����,��� ���'�� ��� )�� ��� C!D@� 5�� '��8����� � � ��1�� �������8 �

��,����)�?Z&�P����8B��)����(��� ���������B�� �����1 (����C%�D������ '� �)�?$�07��� ��

�B�� �����))�� ��C%!D��B������(���1�������������(��� ���������)�Mstn-/-� �����������

���@�0�� '������B����������,��� '� �������� ������,����)��� �������1 (����������B�����

���Mstn-/-������8����� �B���� 18��������������������� ����C��88���� ��1�0��@�7D@�

?'���)������ �� ���� ������� ���� �� )�,����1� � ������ ���� '�� ��,���)����'�� ��� )�� ��@�

Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from

Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057

Page 18: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer

� �<

:B�,�������� �������,�� ��� ����B���������������1� �������1��� ������ '������)��� �����

'�������� ���)� '��8���� ���)����'�� ���)�� ��@�

�1� � ��������� �,������������1��������� ��� $55�������� $55���B'��'� '��������� ������

�� �,� ��� 18��5� �� �,��� ����8 ���� ��(� *� ���� /@� -�� '��� �������8 � ��,���� )� �� �,��� G���

�� $55�����(*�������(/��������!E%�8'�8'�1�� ����B��������� �� �1������� ������B����

18������Mstn-/-�����������8���� � �����B '�������� ���� '� �1� � ��E�� �,�������������

B��� � � �8������ %/� ��1�� �) ��� ������ ��� )� ""�� �����@� :B�,���� � � ��� 8������� '� �

1� � ��E�� �,��������������B�����))���� ����1� ������ ����� B����B���� 18������Mstn-/-�����

�������� ������� '�� ��� ������ )� ��� ��B '@� 5�� ��88� � )� '��� ����8 ���� 1� � ���

��8������� ���� �������� ���'������ ��� �(��� ��� ������ )� B���� 18�� ���� ��� ���8���� �

��� ��B '� � � ��1� %/�� ��� ����,� ���B'��'� �� ��� ��B� '� ���� '�� � ������ '� ���������

1� � ��� ��8������� ��� ���8���� � ��� ��B '�� �� � � � �������� ��� 8�� �� C����7D@�

?'���)������� ���� ���)�1� � ��E�� �,����������������B���� 18������������������������

������� '�� ���������)� �����B '@�0�����1�������������,���)�����!E%�8'�8'�1�� ���

B�������,����� B����B���� 18������Mstn-/-������ ���1�%/�������� ���� '� � '�������������

��)���������1����� ���� ���� �1��))�� ��� '���8� 'B�1����Mstn-/-����@�

#�����,� ��� )� �(��� ��� ������ ���� ���Mstn-/-� ����������� ���� ���� ApcMin/+Mstn-/-

���������������B� '�� �������'B���� '� ���+��� �� ���)��� ������������� �,���������� ���1�

������ �� ���)��� ������� )��)��� $55������ ���� ���� �������))�� �� ������������)�

����������'����� C�/�� �7D@� :B�,���� ��� � ��1� �� ����� '���� ����,� ���� �1� �'B���� '� �

�� ��per se��������� ������� ������ �)�����������'�� ����������������������'����@�;���

�1� +��� ��� B'� '��� '�� �������������� 8'�� 18�� )� Mstn-/-� ���� ��� '�� ������ )��

8� �� ��� ������ � ������ B�� ���@� #��,���� � ������ '�,�� ������1� ���� �� ��� '� � '��

���(���� )� �� $55�� ���������� � � '�� ��� )� ��� ��,��8�� � ��� ���� ���� 8�,�����

8� �� ��� ������ � ������� ���'����� C�/�� �7D@� �� '��'� '�� � �� ��1� ����� ��� '���� � ������

Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from

Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057

Page 19: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer

� �6

��'��� �� � '� �� �� ���� �� �,��� ����������� '���� �� �� � ����1� ������ � '� � �� �� ��'��� ���

��)���� ����� ����� � �(��� ��� ������ � �8'1@� ?'��� ���� ������� '�� +��� ��� )� B'� '���

���(���� �� �,����1� 8�,���� ���� ����� 8� �� ��� ������ � ������� ���'����@���� ��������� ���

�� �,��� ��,��� '��� ����� ��8� ��� ��� ��1� �� ������ � � ���� ���������� ������� ���'����� C/D@�

5����������������� ������,���)��� �,����������������8� ���������B�� ���������))�� � '� �

���� ���8����� ����� ������������C%7D@�0�� '��������'��� ���)��� $55������������������

�������'18�� �8'1�� '����B���� 18������Mstn-/-�����C*4D@������������� ��'�,�����������

� ������ �1� ������ ��� �� ���� $55� �� ���1� C*�D@� ?�� '���� '���� �� �� ��88� � ��� �8� �� �

����)��� �,������� '�������� ���)��(��� �����������������������'����@�:B�,�����������

�� $55� ���� ���� ��� �� ���� � )�� '��� ��������� ���'� ��� ���� �8'���� ��� 8� ����� C*!D��

B'��� 8�� �,�� �� ��� �� �(��� ��������� '�� ����� '��� ����� ����� �1� ���� �� ��� C*%��

**D@�?'���)���� '������)������ �))�� �)� ��'��� ����� '��� �������� �,���� '���'������ $55�

���(��������������� ������������1� '����'��� ���)������8'���� ���8� ����@��8���)���

��'��� ���)��� ������ �,���� ��� '���� �� �)�����������'������'�������B���������� ����

�� B���� '�����8�� �,���))�� ��)��� �������� �,���@

;��� � ��(���� )������� )� '�� 8����� � � ��1� B��� '�� ����� ��� ��� ��� ��B '� ���Mstn-/-�

���������))�� � '� ��������� ���� ��� ��������������� ���� ���������������������������

��� ��������� ��� �88 ���@�?��� ��B '�B��� ������(���1� ��B��� ���ApcMin/+Mstn-/-������

�� '���B� '���8�����,� ���)���1�B���' ������(��� ������������@��� '��'�������� ���

��� ��� ��B '� '��� � � ����� �1� �� �����1� ����,��� C�*�� �/D�� '�� ������ � )�������� ����

����� �� � B� '� �� 8��,���� � ��1� ���� �� ���� '� � ������ �� ��� )� �� ������� �� $55��

��B���""�� �����B '��������C�7D@�;����� ����������)�� '�����88� ����1����� ��������

8'����������� � ������ �'B���� '� � ����� ��E��'��� ��� )��� $55� ���������� ��B�� ���

��,��8�� � ��� ������ C*/�*6D@� ?�(��� �� '���� ��� ����� �� ���� �)1� �� �� ��� �� 8 �� ����

��B '�8� ����)�� ������� �� ����� ���8��������@�?'���)���� '�������� �)��������'�,��

Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from

Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057

Page 20: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer

� �9

�8���� ���� ��� '�� ������� )� ��B� ������ ���� � �� ������ )�� '�� ��� �� � )� ���� )� '��

�� �� ������������������@�

5 ����������� '� ��8� �!4F�)������������ ���� ��� �����1�����,��)�����'������� '���

'�������� � ���������� C!D@�:�����B��������1��'B� '� 8��,�� ���)�������B�� ��������

����� ��� ��� ��� ��B '� ���Mstn-/-�����B��� ������ ���B� '� ��� ��������� ��� ���,�,��� �� �@�

?'������� ������ �����B '�8�����1��� ���� ��� ������������ '�����,�,����� ��)�Mstn-/-�

����������� ���@� :B�,���� '��� �� �� ��������� �))�� � ����� ���� � � ��8����� '��

8������� ���,�,��� )� ""�� ����������� ���=� B'��� �� �,�������� ����1���� B��� ����� �

����� �)����))����������� ���B���' �����,�,����� ��B���� ���������)���� �1��������������Mstn-

/-� ��������������@���������� ����� B����8�����,� ���)��(��� ������������������� ���

��� ��� ��B '� ���� ��� ��������� ��� ���,�,��� �� �� ���� � � 8�,�� ������� 1�� �� ���'���� ���

���(���� B���� '����)�� ����������������1�8������@��(��� ������������ � � �������8� �� �

�����,���)����������@���������������� '��������� ����8��)���������������� ��������,��

�(��� ��������� 8� ���� ������� �����1� ��������� '�� �,�������� 1� )� ������� 8��������� )��

��,������������������������ �� ��1�8�,���������1�����������)��)�� ���� ������

C*9D@��� ���� �,��1�� ��� �� ���8��� �1� )������� ��� �� )��+��� � )� ��� �,�� � ��� ������� 8� ��� �� C!D@

#�����,� ��� )� ������ ���� ���� )��� ��� B���� '���)��� ��� ����)������ �1� ��� �������

���8��� �1� ������ )��� ��� ���� ����� '��� �� ���� �� � 8�������� ��)��8��@� 0�����1��

8�����,� ���)��(��� ����������������������� ����� ���� � '��������������8'1�������� �,� 1�

'� � ������ B� '� '�� 8��������� )� '�� ��������� ���� �� �� ��1� � ����1� B'��� ��1�

������ �����@�

?'��8����� �� ��1������� ��� '� �8�����,�����(��� ��������������'����������)� '�������

)� �� ��,�� ���� ����� � � 8�������� ���,�,��� ��� 8� ��� ��B� '� ��,������ �������@�:B�,����

)�� '���� ������B���������������1� �8�������1��� ������ '���� �� ���������)��� ���)��� ��

��'��� ��@� Z�� ���� ����� ��� ��)�� ��� ��� � '�� ������� ���� ��,��� )� �� �� ���� '���

Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from

Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057

Page 21: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer

� !4

�� $55���������C�� �,�������'������������8'���� ���8� ����D�����������8� ��� �@�#�������

��))����������� '����8�������)��� ������ '����� $55����������� B����������� 18����'����

��������� ������@�0�����1�����'��������� ���1������ ������������������ ���������������

����������������������8������'�����'��� �)��������������)��������8�����1�����������8�������

�����.� ������������������ �8'1@�?'���� '����,��8�� �)�(�B����������� �� ������

)�� '�� ��� �� �)�����������'������1���������88�������� � '���8� '������� �� �� ����

������ ���B� '�������B�� ���������������,���� �����������@�

� �

Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from

Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057

Page 22: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer

� !�

��.��/��0�����

?'�� �� '��� '��(� ��,��� ������� )�� '��� '��8� ��� ������ ��� 18���@� ?'��� � ��1� B���

��88� ��� �1� ���� �� )�� '�� "����� �� ��� ��� ������� ���� '�� 5�� � � � -� ����� ��� �������

C5-��D@�

� �

Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from

Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057

Page 23: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer

� !!

�����

�@� 0�����P��� �������0����(�������������� 5���������&��0����������$"�� � � ��@���)��� ��� ����

������)��� ���)�����������'����=������ ���� �������������@�"���� �;���@�!4��K�!=*69�9/@�

!@� ?���������@����'������)�����������'����@�#'1����$�,@�!449K69=%6��*�4@�

%@� ?���������@�����������'����@������;8������ ��� ���@�!4�4K!7=�*7�/�@�

*@� ?���������@����'���������������8� ��� �@�-� �$�,�������@�!44!K!=67!�<�@�

/@� :��� :Q�� ['�� R�� �� �'� Z&�� �������� �"@� �1� � ��E�� �,��� 8� 'B�1� �� �����=�

������������������� '���8�� ���8 �� ���@�5� ������'����������@�!4�%K*/=!%%%�*<@�

7@� ��#'���������"�B��������"�����@�$����� ���)� �(��� ������������� ��������1�����B�

?�0��� ����8��)���1�����@�-� ���@��99<K%6<=6%�94@�

<@� ���� �"��#�� ������0������0��#����� ����$1�"������B�������� ���@������ �����(��� ���

������ ���� �1� 8� �� ���� �������8���)��� ���� �,� ��� )� '�� 1� � ��� ����@� �������@�

!44%K%/=!!<�%6@�

6@� �����������������'��������.� ����P������-������)1�$��#������8����� ���@�&� 8���

��8�������)�1� � ������������ �8'1�)����� ��(��� ����������1�����������������������

��8������@�&��������1@�!44<K�*6=%�*4�<@�

9@� �����'��������������������.� � ���P������-������)1�$������ ���� � � ��@��B��

������ ���)��( E������� ���� �)���8�1��������������8� 'B�1�������8���� �1� � ���

,����8�����������(��� ��������@�&��������1@�!449K�/4=!67�9*@�

�4@� [����� ?��� ��,���� � �� P������� "��� :�1���� #�� &�+����� �0�� ?(����� P-�� � � ��@�

5���� ��� )� ���'����� ��� ���� �1� �1� ������1� ������ ����� 1� � ��@� �������@�

!44!K!97=�*67�6@�

��@� �� �����#��������� ��������� ����#�����0��$�))�#������������ ���@��������1� � ���

����������������'�����������8����� �������������'����@�&����������5�,�� @�!446K%6=/%��6@�

�!@� "������������[��"����Z��Z����$��?����#�������$��� ���@��1� � ����� �������$-������ ���

��������B '�����������������������'��������@������?'��@�!446K�/=�//�74@�

�%@� ��� � ��� #����� 0�� ������ ��� $�))� #�� ������� ��� ������� 0��� � � ��@� ����� 1�����

��'��� ��� ���� �� '�� 1� � ��E)���� � ��� ����� B� '� � �8�,���� ���'����� ��� ���

�����������@������������������?���� �@�!449K9=746��7@�

�*@� ����1� P���(� �&�� �1����� ?�� "��(� ���� #��� ��� P������� "��� [����� ?�@� ��� ��

��'��� ���)�1� � ���)���1�8� �����8�����,����(��� ���������������������)��������

���'����@����'����8'1��$������@�!4�4K%9�=�/*6�/*@�

�/@� ['��R��Z�����"��"������������PB�(�P�������Q��� ���@�$�,������)�����������'���������

������B�� �����1��� $55���� ������������ �8����������,�,��@�����@�!4�4K�*!=/%��*%@�

�7@� ���+�� �����?�������;�8��������������#� �������8��,����&��� ���@��1� � ������(����

������ �� $55�� �� ������ ��� ���� �������� '�� "�B��� ����� �������� ����� �� ��� '��

�8�,��� � )�������B�� ���� ���� 8'1������ 8��)�����@� �����'���������8�����������@�

!4�!K%=%<�*%@�

�<@� ������$��#� �:����,��Z0@�������� �� � ��� '� �8�����8���� ��� �8����� �� �����

��8��������� '�����@��������@��994K!*<=%!!�*@�

�6@� ��� ���,��� P��� ������� 0��� #�������� ��,��� ��������� ���� ������ ��@� 5� �����(���7� ����

���'���������8����E\����@�����#'1����$�����5� �����8�#'1���@�!446K!9*=$%9%�*4�@�

�9@� ��� '�� #�� �����.� ��� 0�,���� 0��� �����'�� ��� 0������ "�� ��� "�� � � ��@� $����� ��� )�

���+�� ���8� ����� �1� ��� ���8���� ��.1�� �� �,� ����� ���� �� ����������� 8� �������� ��� �� �

������������������8���� ���������@�#)����������'@�!44<K*/*=7!/�%%@�

!4@� $�8������������������@�$���)� '�� &�0E &�0$��������������������1����� '���81@���,�

�������$��@�!4�!K��*=!%<�7<@�

Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from

Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057

Page 24: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer

� !%

!�@� ���'�����"��$����� ������ � ��@���������� ���� ��������� ������ ��� )� ������� ����8� ���

C�"3?D�8� ��������������@��������#'1���@�!44/K!4!=7/*�7!@�

!!@� ����.���"@�:1���1�� ��� )�:50��=� �1���� �������� � � '���������� ��,��@� #'1����1@�

!44*K�9=�<7�6!@�

!%@� :��"B�������'���&��['����"��Z� ���P����������#��"�88���#��� ���@�?���� ������ �,���

����8 ����(��(����������'��� ������������������ ����������� '���'�����'�����)��� ���

�8���� ��1� ��� �� &�0� '���8���@��������$��@�!4��K<�=�%7!�<%@�

!*@� �� ��)��,�����Z������ �@� ?'�� ����' � ���� '�� ���(� ������ )� �� �,��� ��� B���� '������� ����

������@�����������@�!4�!K�!/=%9!9�%<@�

!/@� �'��'�8� ��'�����������#$��R��:��:��������� �:��:���������� ���@�?Z&�P������B�

����� ��� ������� ��� '�� ��� �������� )�� �� )���1� '� � B��(�1� �������� �88 ���@� �� ����

�'�@��99<K!<!=%!*4���4@�

!7@� $��������������������(������$�����$��-���.�"��� � �?-��� ���@������ ���)�5�0���

�������� �(��� ��� 1 ���� '18�� �8'1� �1� #5C%DPE�( E?;$� ���� #5C%DPE�( E��P%�

8� 'B�1�@�-� ���������@�!44�K%=�449��%@�

!<@� ������ ���� � � � ?-�� ��.���.���� P�����Z;�� � ,��� �"�� ���������� $�� � � ��@� �( E?;$�

8� 'B�1�������������������� ��)��(��� ���������'18�� �8'1���������8��,�� �������� �8'1�

���,�,@�-� ���������@�!44�K%=�4�*�9@�

!6@� �������������������������� �����(��(�������������&��#���������� ���@�0�� �������8 ���)�� ���

������� '��� �8'1����� ������+�� ����������� ������������������(��� ���������� �8'1@�����@�

!44*K��<=%99�*�!@�

!9@� � � � ?-�� ���N��� ��� ����(�� ���� #����� 0�� ?�)�1,�� ��� P����� Z;�� � � ��@� ?'�� 5�0�

�E#5%PE�( � 8� 'B�1� 8��,�� �� ��8������� )� ������ � �8'1��������� ���+�� ��� �������� �1�

��'��� ����0;R;� �������8 ���)�� ��@��������@�!44*K�*=%9/�*4%@�

%4@� �������0��� .�����?�B��-&����@���������.�#���;'�����"��,�:���� ���@�5PP�� �E-0�(�88���

�� �,� ������������,����������B�� ����������@�����@�!44*K��9=!6/�96@�

%�@� �� �������'� ������ ���P������� "��'�?��)����))�&��Z�� ���� ���"��:�� � � ��@� ?'��?Z&�P�

0��*��1� ���������� ����������� ��)������,� ������������(��� ���������� �8'1�������@���

��������@�!4�4K�66=6%%�*9@�

%!@� #����#P����8 ���P���'� ���������#����������P�������1������'������ ���@�?���� ������� ���

)�?$�07���'��� ���(��� ���������B�� ����������@�����������@�!4�4K�9�=�%9/�*��@�

%%@� ��������������������$������ ���������&��$���)�$������#�����#�� � � ��@� 0�;%�

�� ������ 8'��1�����(��� ������������,�,@�������� ��@�!44<K7=*/6�<�@�

%*@� ['�� ��� ����� � ���� ��'���� ��� ��� #�� ������� ��� ��'��))��� ��� � � ��@� 0�;%� ������ ��1�

�� �,� ��� 8� ���� ������� ��� �1� '�� �� 8'����E�1����� ���� 8� ������ 8� 'B�1�� ���

� �8'1���������������@�������� ��@�!44<K7=*<!�6%@�

%/@� P����(1�������������0��������,��'�:������'��$?�����,�����.�������������P��� ���@�

����������� )�� '�� ���� ���� �� ��8�� � ��� )� ����1�� )�� �� ����� �� 8'��1@� �� 8'��1@�

!4�!K6=**/�/**@�

%7@� �'����"��Z�� ��P"��Z�����(���&�����8'1�P?��?'���$&����(��N������ ���@�&��,� ���

��8�������)��� �,����8� ���������B�� �����������'����@�0��&���@�!4�*K!6=�<���!%@�

%<@� �� .�(�����0������������� '����#��P�����"��"��:��������1��@���,��8�� �)��������

���'�������(���1����������������� ���������'�������)����� ����@�#���-� �����������3���

�@��99*K9�=66�<�!�@�

%6@� ���������?'��,����������B� .�Z������������������ �"������� ����:��� ���@�5��� �)��� ���

�����'���� ���.� ���)� '��)������������ ���8�18������������@�����@��99�K77=/69�744@�

%9@� "(�����1� ������1� �� �� ������B��� ��� ����(��� #��� �'������� P������� $�� � � ��@�

�1� � ��� 8� ��� '��B�� ���� )� '����1���� � ��� ����� '���'� 8� ���� ���+�� ���

8� ����� 8� 'B�1����� ��� ���� )� ��������� 8� ����@� �� �� #'1���� ����� #'1���@�

!4��K%4�=��%�7�!*@�

Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from

Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057

Page 25: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer

� !*

*4@� "�������$����"�����,����� ���������� '���������&��?(�����P-��� ���@�$����� ���)�

��������B '��1��� �8��������������������� '���'��� �,��� 18��55�����8 ��@�#���-� �������

����3����@�!44/K�4!=�6��<�!!@�

*�@� "��'�?��)����))� &������ �� ���� �'�88���� P�� 5�����N� ��� 0����� �-�� :�� ���� ��� � � ��@� ���

�� ���1� ���(���� �� �,��� 18�� 55� ����8 ��� �������� � ���� �(��� ��������� '18�� �8'1� ����

8� �� ��)��� �8'1@������������@�!4�*K%*=747��6@�

*!@� ��.�� ?��� �'��� R�� ��� ��� ��,�� #�� ['���� ��� :���� ���� � � ��@� #� ���� ���� �)��� ��� ����

)��� ����� ,����� ��� )� �� �,���� ���� ���� �8'���� ��� 8� ���� ��� ��� ������� �� �,���

���������������� ��@����&�������@�!446K!!=!769�<4!@�

*%@� ��� ���$����'��B���&�������B������ ���.�����['�����&�.�&��� ���@���#������������� ����

���������@�-� ����� @�!4�%K*/=�%49��6@�

**@� Z�����(�� �&�� �'��� �"�� Q���� :�� "��� ��� �������� ���� ��1��� ��� � � ��@� ?'�� ����

�8'���� ��� 8� ���� ����� ��� �� 8�� �,�� ������ �� )� �(��� ��� ������ ���@� �� ����� ���@�

!4�%K!4%=%*/�/<@�

*/@� ��8����������'���"��P����?$���� .�(���@�0���� � ������������ ��)�������� ���

8��������� ���� '�� �� �,����������� B�� ���� �1����� ��� ��'�������)����� � ���@�

&��������1@�!444K�*�=!%�9�!<@�

*7@� ���,��� P��� Z���))� ?P�� 0������� ���� �� '��� ��� ������1� ��� �� .�(� ��@� �� �,���

���������� '���'� �� �,��� ����8 �� 18�� 55� ������� '�� ���'�������(�� �18 �� ��� ��'�����

��)����� ����@����&�������@��997K�4=/%*�*%@�

*<@� "��Q��P����$��3����B��P��;2������&��",������P"�����'�������� ���@�#��,�� ���)�

���'�������(���1�������,��8�� ���������� ���)� ���8��������������'�������)����� �

����)��B���������� �� ���)����'�������� �,�������8 �� 18��55�������0��8� ���@����

:��$�8��@�!44<K�%=7</�6%@�

*6@� P���� ?$�� #���8� �� ��� Z���� #�� Z���))� ?P�� ���� 5�� �1���� ���� � � ��@� ?����������

����� � � ��1� ���� �8��� )��� ��=� '�� ���� )� )�������� ���� ���� '���� ��� �������

��B '����� ����������@����&�������@��999K�%=6/��7/@�

*9@� �������� ���� "8�.������� 0�@� ?'�� �����1� � � �� )� ����������� �� �@� �� ���� �'�@�

�99�K!77=!9<6�6!@�

� �

Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from

Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057

Page 26: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer

� !/

��0���0����

��!����12�Mstn�!�������"��$������(��$��������������)����������"����������������%*�����!�

��"�2�����'�����������1�B���' �������� '��������)�����������'����@����,��������)� ����@�

��� gastrocnemius� ������ ���@� ��� gastrocnemius� ������ 8� ���� �� �� @� &�� 8�����

����� �� ���)� ��� ���� �����@�Z���� 18�� ����Mstn�E������B���� ������ ���B� '�"�B���

����� �������� C""�D� ������ �� �����,��� �#��@� ?������� B���� ��,��� %/� ��1�� �) ��� '��

������ ���)�""�������@��� �����������J��&�C�L6��!E���8D@�]�#�X�4@4/��]]�#�X�4@4������

]]]�#�X�4@44�@�

��!����32�Mstn�!�������"��$��������#�"���������!�� �+���#��&(�����������!�������$��$�#�

�������������*��������#���!��!������4��"��$�����!�����!4� +������"������!��(�(�����2����

���B���' @���� &�0�����"3?������:50��S� �������8 � ��,���� ��� '�� ����)�B���� 18��

����Mstn�E�����@������ �,���G����� �,���G����� $55��������(*� �������8 ���,������� '�� ����

)�B���� 18�� ����Mstn�E�� ���@� ��� ?Z&�P� �������8 � ��,��� ��� '�� ���� )�B���� 18�� ����

Mstn�E�� ���@� &� ���� 0�� ����� � ����1���� )� ���� 8� ���� �� �� � C&D� ���� ���� �����!�

8� ������ ��C0D���� '�� ����)�B���� 18������Mstn�E�����@����)���� ������������ ��)�

���8����%���.1���� �,� 1���� '�� ����)�B���� 18������Mstn�E�����@�Z���� 18������Mstn�E��

����B���������� ���B� '�"�B����������������C""�D������@�?�������B������,���%/���1��

�) ��� '�������� ���)�""�������@��� �����������J��&�C�L6��!E���8D@�]�#�X�4@4/��]]�#�X�

4@4������]]]�#�X�4@44�@�

��!���� 52� �)�-���� (��+ �'� ��� ��+�*���#� ��� gastrocnemius ���"��� ��� ��#%�'(�� ��#�

Mstn%-%���"��#����!�"��"���"�"+�&��2��������� �����1����)�*&��#��8'�8'�1�� �����

?'�%<�����?'�*7@����"����������1����)�8<4�7P�8'�8'�1�� �����?'�*!���������*!*@����

Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from

Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057

Page 27: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer

� !7

����� � ����1���� )� �8�7� 8'�8'�1�� ��� �� ���!%/� ���� ���!%7� ���� �8�7� 8� ����

�� �� @�Z���� 18������Mstn�E������B���������� ���B� '�"�B����������������C""�D�������

�������,����#��@�?�������B������,���%/���1���) ��� '�������� ���)�""�������@��� ������

�����J��&�C�L6��!E���8D@�]�#�X�4@4/��]]�#�X�4@4������]]]�#�X�4@44�@�

��!���� 62� Mstn� !���� ���"��$������ ����������� �+�� �"��$������ ��� �*�7�����%(����������

(��+ �'� ��#� ��%� (��+ �'� ��� gastrocnemius� ���"��� #����!� "��"��� "�"+�&��2� �����

�������8 � ��,���� )� ��0��E� ������� C�D�� ��$0�� C�D� ���� 0�;%� C�D@� ��� ����� �

����1���� )� 0�;%� 8'�8'�1�� ��� �� ���!/%@� &�� ����� � ����1���� )� -0�� 87/�

8'�8'�1�� ��� �� ���/%7� ���� -0�� 87/� 8� ���� �� �� @� 0�� "������ ����1���� )� 5T�S

8'�8'�1�� ��������%!��������%7�����5T�S�8� ������ �� @�������:�� �������8 ���,����)�

?Z&�P�C�D�����?$�07�C:D@�Z���� 18������Mstn�E������B���� ������ ���B� '�"�B��� �����

��������C""�D��������������,����#��@�?�������B������,���%/���1���) ��� '�������� ���

)�""�� �����@��� �� ���������J��&� C�L6��!E���8D@� ]� #�X� 4@4/�� ]]�#�X� 4@4�� ���� ]]]�#�X�

4@44�@�

��!���� 82� Mstn� !���� ���"��$������ ����������� �+�� �"��$������ ��� ����(+�!'%�'�������

(��+ �'� ��� gastrocnemius� ���"��� #����!� "��"��� "�"+�&��2� ��� ����� � ����1���� )�

"�%��5� ���� "�%��55� 8� ���� �� �� @� ��� 3�(�� �������8 � ��,��@� ��� ����� � ����1���� )�

� �/�� ��!� 8� ���� �8���@�Z���� 18�� ����Mstn�E������B���� ������ ���B� '�"�B��� �����

��������C""�D��������������,����#��@�?�������B������,���%/���1���) ��� '�������� ���

)�""�� �����@��� �� ���������J��&� C�L6��!E���8D@� ]� #�X� 4@4/�� ]]�#�X� 4@4�� ���� ]]]�#�X�

4@44�@�

Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from

Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057

Page 28: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer

� !<

��!���� 92� ����-�"��$��� ��!�����!� ��� gastrocnemius� ���"��� #����!� "��"��� "�"+�&��2� ���

�� �� �������8 � ��,��@� ��&�� �������8 � ��,���� )� �� �,��� G�� C�D���� $55�� C�D����(*� C�D� ����

��(/�C&D@�0������� �����1����)����!E%�8'�8'�1�� ��������*7/E*7<��������*!%E*!/�

�������!E%� 8� ���� �� �� @�Z���� 18�� ����Mstn�E������B���� ������ ���B� '�"�B��� �����

��������C""�D��������������,����#��@�?�������B������,���%/���1���) ��� '�������� ���

)�""�� �����@��� �� ���������J��&� C�L6��!E���8D@� ]� #�X� 4@4/�� ]]�#�X� 4@4�� ���� ]]]�#�X�

4@44�@�

��!���� :� Mstn� !���� ���"��$������ (�����!�� �����(��� ��� ���� �����%*�����!� ��"�� ��#�

ApcMin/+���"�2�������,�,����� ��)�B���� 18������Mstn-/-� ��������������@����P�8����������

8� � �'B���� '� �Mstn� ����� ���� �,� ��� ���� �����1� 8������ ��)��8��� )�ApcMin/+Mstn+/-�

���� �pcMin/+Mstn-/-� ���@� ��� ��8����� � �,�� ���� ������� ��� ���� )� �� �� ���� � ������ B� '�

� '1�����������'B������ �8����� �� �����8�18�����ApcMin/+Mstn+/+@���� '��������������.��

)��� �� �����8�18�����������������ApcMin/+Mstn-/-����@�&��'�� ��� ����ApcMin/+Mstn+/+

�����

ApcMin/+Mstn-/-����@�0��Mstn���������� �,� ���8��,�� ����1�B���' ��������ApcMin/+

����@����

8��,�� ���)� �(��� ���������B�� ���� ���ApcMin/+Mstn-/-����@������B����!%@%�J�4@9�B��(��

��� � � '�� ��� )� ����1���@��� �� ��������� J� �&� C�L*�<E���8D@� ]]�#�X� 4@4�� ���� ]]]�#�X�

4@44�@�

Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from

Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057

Page 29: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer

Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from

Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057

Page 30: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer

Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from

Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057

Page 31: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer

Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from

Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057

Page 32: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer

Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from

Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057

Page 33: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer

Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from

Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057

Page 34: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer

Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from

Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057

Page 35: Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer

Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from

Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057