Identification of Deleterious Mutations in Myostatin Gene of Rohu ...
Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer
Transcript of Myostatin Gene Inactivation Prevents Skeletal Muscle Wasting in Cancer
Published OnlineFirst October 21, 2014.Cancer Res Yann Simon Gallot, Anne-Cécile Durieux, Josiane Castells, et al. cancerMyostatin gene inactivation prevents skeletal muscle wasting
Updated version
10.1158/0008-5472.CAN-14-0057doi:
Access the most recent version of this article at:
Material
Supplementary
http://cancerres.aacrjournals.org/content/suppl/2014/10/21/0008-5472.CAN-14-0057.DC1.html
Access the most recent supplemental material at:
Manuscript
Authoredited. Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been
E-mail alerts related to this article or journal.Sign up to receive free email-alerts
Subscriptions
Reprints and
To order reprints of this article or to subscribe to the journal, contact the AACR Publications
Permissions
To request permission to re-use all or part of this article, contact the AACR Publications
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
� �
Myostatin gene inactivation prevents skeletal muscle wasting
cancer
�
����� ���� ���� ��� ������������ �������
���������� ��� ����
��� ������� ����� ���������
���
�������� �����!�� "��� #��� �����
��� ������� $���
%�� ������� &������ '� ��'�(�
��� & ������
"�)��*�� ����+��� �����,�
%�� ������� -�.
*�� "����� � ��'��))��
/�� ����� ������
!� ����
�������������0��1����� ��
�
�"���� �������#'1�����������2&���������3��,���� �����"1���0�*!4!%����� �& �������0������
!5-$��3�$�677��1���+��������������� ��� ��������0�%*474��� 8��������0������
%5-$��3�$��4�9��3�� �����-� �� ���:�������0�7%444������ �0��������0������
*5-�&$�� 3�474�� 5-$�� 3���!%/�� �����-� "���� �1�� 3��,���� �� ��� "1��� 0�79744�
;��������0������
/�-$�� 3�$� /!%9�� "���� ���� ��� ������� ����������� ��� ��� ��������� &���� -�����
��8�����������"1���0�7944<�"1���0������
�
�����8�������� '�=� ������0��1����� �
� � � � "���� �������#'1�����������>&��������
� � � � 0���� ����������������/������������#����
� � � � *!4!%����� �& ������������!��0������
� � � � ?��=�4%%�*�<<�*!��*�<<�
� � � � 0��=�4%%�*�<<�*!��*�<6�
� � � � &����=������@)��1����� A���,�� �� �����@)��
�
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
� !
������������ ��������������������������
�
-�8 �� ������)��� ��)��� ���� �B������������@�
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
� %
��������
�
���'����� ��� �� ������ B�� ���� �1����� '� � �� ���� ��� �����)���� �1� � ����� 1� ����
� ��� 1�)���1�8� ��� ��B� '���,�������������@�:B�,���� �� ��� ��������� ����� �'B�
'����,��������)��(��� ����������'���� ���.���� '������� ��������@�5�� '�������� �� ��1��B��
�� ��� '�� '18 '����� '� � '�� ������ 8� ���� 1� � ��� ��� ��,�,��� ��� ���� ���� '��
8� '�������� )� ���'������������� ������ B�� ���� ��� ����������� ���@�Myostatin� �����
���� �,� ���8��,�� ��� '����,��������)��(��� ���������������������������������) ���B� '�
"�B��� ����� �������� C""�D� ������ �� ���ApcMin/+� ����� ��� �� �����'������� )� ����� ���
��������������'����@����'���� �����1��1� � �������� ���� ��� '���� �,� ���)�������)�����
8� ��1 ��� 8� 'B�1�� �1� ��'��� ���� '�� ��8������� )� � �8'1����� ��� ������� ��$0�� ����
��0��E� �������������B� '��� 8'��1����� ��������@�- ���1��1� � ������������8�����
'����B '�)�""�� ����� '������������ '����.��)��� �� �����8�18�����ApcMin/+������ '���
� ����1� ����������� ���,�,��� ��� � '� ����@� ����� ��8������� ����1���� ��� '�� ""�� ����
�'B��� '���8'�� 18�� ���������� ���B� '�����������8�������)���������,�,������ ���
� ��������� �,�������������������88 ���@�?�(��� �� '������� ����� �� ��,������������ ����
���� )��1� � ��� ��� '�� 8� '�������� )� ������� ���'����� ���� ���(� '��� ���� ��� � ���
��B '��B� '��8���� ����)��)�� '������������ �������)��������������1� �����������@�
�
�
�
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
� *
������������
�
������� ���'����� ��� �� B�� ���� �1����� �'���� ���.��� �1� '�� ���� ������ ���� )� ��1�
B���' � '� ������ ��)����8�� ���)����8��� �����������(��� ����������B'���� '�����������
8� ���� �8�� �� � ��� ���� �,��1� 8�����,��� C�D@� ?���� ���� '� �����,��� )�� ��� �������
���'���������8� �64F�)�8� ��� ��B� '���,���������������8�� �������1����8������ ���������� ����
��������C!D@�����������'���������� ��)��!4F�)������������ ������ '��C%D���������� �����1�
�� ���� ��� ����������+���� 1�)���)�������������� ���� 1�)���'� '���81����������������
���,�,���)��������8� ��� ��C*D@�
��))���� � � �� ������'�,���������,��8��� � ��� � ������� ���'������ �� ���'� �� ���� � '���
����� ��, ��� � '�� '���8�� ��� 8 �� ���� )� ��'��� ���� 18��55� �� �,��� ����8 �� C�� $55D�
���� ��� ���������� ��������� �1� �� �,���� ���� 1� � ��� C�� �D� C��,��B��� ��� /D@� �� �� ��� ��
'��'�1������,��������)� '�� ����)�������B '� )�� ��G� ��8��)���1������1������ ���
)�� �(��� ��� ������ )������ C7D@��� �� �� �� ��� ��� �� �����E8��������� ������ �1� �������� �
�� $55�������� $55���B'��'� '��������� ������� �,� �� 18��5��� �,�������8 ��������(�B�����
�� �,�������8 ����(��(������C��(D�*�����/@�?'������� ������������8'�8'�1�� ���)����!�����
���%�� '�� ������ ���B� '� ���*� �� � �� ���!E%E*� �8�����B'��'� '��� �� ���� �� � '��
�������� � ������������ �������8 ��@�
�� ��������� ��������� ��)��(��� ������������@�Mstn���������� �,� ������������(��� ���
������ '18�� �8'1� C7�� <D��B'������ )�����,����8������� )��� �� �������� �(��� ���������
� �8'1� C6��4D@� ��� ��������� ��� �� �� ��8������� ��� '�� �������� ����� ���� )� �� �8���
���� ���� �������� � �(��� ��� ������ B�� ���� C/D�� ���������� ������� ���'����� C����7D@� 5��
���� ����� )� ������� ���'������ ������ �� ��� )� �� ������� )�� )� �� $55�� 8�����,���
�(��� �������������C�*���/D����� ����������� ���� '�C�/���7D��������������� ��)��8���C�/D@�
:B�,���� �� �'� ����� )� ���� ���� �� $55�� �������� '��� ����� '�� ��))���� 1� ���
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
� /
��������� ���� '�����8�� �,���))�� ��)��� �������� �,����C�/D��B'�����8���������������8�
������ ��������1��� ��������������� � ����������(��1��� ���� ��� � '��B�� �����1�����C/D@�
5�� '��� � ��1��B�� �� �� � �D� ��� ������ '������������'�������1�B'��'�Mstn� �����
���� �,� ��� �1� �� ��� '�� ������ )� ������� ���'������ ���� ��D� � ������� '�� 8�������
'���8�� ��� �8�� �)�Mstn� ����� ���� �,� ��@������B� '������� ���)� '�� '��������)� '��
Mstn� ����� B���� ����� ��� !� ��))���� � ������ ����� )� ������� ���'������ '�� "�B��� �����
��������C""�D� ������������������� '��ApcMin/+������������)������ ��� �������
�������'�����C�<���6D@�
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
� 7
�������������������
�
��������
������8����� ��B��������� ����������������B� '� '��&��8�������� 1������������
)�� '���������������)������ �1��������)������� �)���8��8���@���� � � �,���/<�"E7�Mstn�
(��(�� � CMstn-/-D� ���� B���� 8��,����1� ���������� ����� �
HEH� ���� C<D@� ?'�� )�����Mstn�
������� CB'���� '�� '��������)� '��Mstn������ ��� )���(���B� '���8����)� ��#��� ��D�'��������
���� ����1� ������� �1���8���������������������� � '��.1� ��� ���@��/<�"E7�ApcMin/+�����
����B���� 8���'����� )�� ���(���"���� �1@� ?� ������ ��ApcMin/+EMstn-/-
����� ApcMin/+�
�����B����)��� �� ��� �Mstn-/-�)�����@�ApcMin/+Mstn+/-
����������)�� '��8����1�B����
'���� ��� �Mstn-/-�)�����@�ApcMin/+Mstn+/+
��ApcMin/+Mstn+/-�����ApcMin/+Mstn-/-
�����B����
���� �)�����1���� 18������1���@�
�
������������� ������!�"��"������"�������#����"��������
"�B��� ������������� C""�D������� C��������?18����� ��������� ��D�B������� ����� ���
��&����88���� ���B� '��4F�)� ����,��������������F�8����������� ��8 1����� �%<I��
����/F��;!�������@�Mstn-/-�C�*@/*�J�4@64�� '�K��L��D�����B���� 18��C�*@74�J�4@9/�� '�K�
�L�!D���������B��������� ������1������� ���B� '�/����47�""������������/4�M��)�� ������
�#��@��� ���Mstn-/-�C�*@7<�J��@�%�� '�K��L6D�����B���� 18��C�*@77�J�4@9/�� '�K��L9D�
���� ���� �����,��� � ������ �#��@� ����� B���� ���B��� )�� ���� B� ��� ad� libitum@� ��1�
B���' ��)���� �(������ �����.��B����������������1@�
�
���$�$��������
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
� <
���,�,����� ��B����� ����������B���� 18��C�/@47�J�4@7!�� '�K��L!4D�����Mstn-/-�C�/@�/�
J�4@�7�� '�K��L�<D����������� ���B� '�""�������@���1�B���' ��)���� �(������ ���
��.��B����������������1��� ������ '@�
���,�,��� �� � B��� ���� �� ������� ���ApcMin/+Mstn+/+C�L%4D��ApcMin/+Mstn+/-
� C�L�/D� ����
ApcMin/+Mstn-/-� C�L�!D����� ���@�ApcMin/+Mstn+/+
� B���� ����� �� ��� ��� '@� ���,�,��� �� ��� )�
ApcMin/+Mstn+/-�����ApcMin/+Mstn-/-
�����B������ ��������� ��� '������)�*/�B��(�@�
�
���$��������������
�����B�������� '� �.���C�@8@���N�� ���)�94��@(����(� ����������4��@(�
����1��.���D�%/�
��1���) ��� '�������� ���)�""�������@�Extensor digitorum longus��gastrocnemius��soleus�����
tibialis anterior������������B������� �������,�����������8��� �������B������8���1���������
����B���'��@������B���� '���(�������1����,����������� ��@�
�
�������������"�#���$���
#�����C!/4�M�D�B���'����.������/4�O��)����)�����1������������ ���C�������� '����
B� '� '���1��� ��4@/��D� '� �'���8��,����1��8�� ��1��,�8�� ��@�-���������B���������
�������� ������� ������@���8����B���������� ���������)���/����������� ��)������ ��4�444���
� �*I��)���/���@�?'����8���� �� �C!44�O�D�B��� '����������B� '��44�O��)�4@������ '���
��� � �� ��))��� C8:� L� !@!D@� ���� ����� ����� �� ���� B���� �� ������� �1� ������'�����
�'�� ���8'1�C���?�(�5�� ���� ���@$@"@D�������8� ����������,� ���B� '����'1����@�
�
���%����� ��
? ��� $-�� B��� ����� ��� )�� gastrocnemius� ������ ���� ��� ������ �1� ������ '��
$-���1�0������?�����������P� �CQ�����D@�$-��C*44���D�B�����,����� ����������������� '��
�����8 ���-���1� '�����(� �C���$��D@�?'������� ���)�B����������,�����8�������+�����������
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
� 6
��� ��������88���� ��1�?������@�$���� ���#�$�B���8��)���������!4�M��)�����,����������
'�� ��0�� � &,������� ��8��� ��� C���$��D@� 0����������� �� ���� 1� B��� �������� ������ ��
�0R97�$����?���#�$��� �� ��� �1� �� C���$��D@��� ��B���� ����1.��� ������ '��HH�?�
� '�� )� ����1���@� $�)������� ������ C'18��� '���� �������� 8'�8'����1�� ����)�������
������� 8� ���� ������ #4� ���� S� ������D�B���� ����� � �����.�� '�� ��8������� ��,���� )�
������)��� ���� �C6D@�
�
��������&���"�����
Gastrocnemius������������ ��� �������B����'����.���C�=!4����� ���B =,�D�������
�������� /4���?����:�����))��� C8:�<@*D� �� ��������44���-����� !���&�?���!���
&�?���/4���G���1���8'�8'� ���/4��������)������������������ ',����� ���
�!4����(�����������������F�?�� ��R��44������ '������ ��)������ ��!�444���)���4����� �
*I�@�#� ��������� �� ���)� '����8���� �� �B����� �������� �</4���C���$��D@��
�
�����������'����
0��"����������1����� )�������� ���8 ��������������8���� ��� ������������ ��������� �
5T��S��5T��S���%!E���%7
�����8<4�7P?'�*!�E���*!*
�C���$��D�B���������� ���)��!�'����B� '�/4�M��
)� 8� ���� )��� ���� C�=�4� ���� ��� ,�=,�D� ��� 97�B���� 8�� ��@� ��8���� B���� '��� B��'����
������ ��� B� '� �� ��1�� ��� �� ������� )�� %4� ���� )��B��� �1� '�� ������ ��� B� '� ��
� ��8 �,����U8'1���1 '���� ��� ��� )�� �4� ��@� ?'�� ����1���� ����� ��� )� �� ������������
)����������� �� �� ���� B'��'� ���B��� ���� ������ ���� �)��� ��� )� '�� ���� � 8� ����
'���'� '�� ���� )����������� ������� ������� )� '�� ����� ���� +��� �)��� ��� )� '�� ���� �
8� ���� '���'� '�� )����������� �� ���� 1� )� 8'1���1 '���@� 0����������� �� ���� ���� B����
���������������#���V�!44��1� ����� ���� �C���$��D@��� ��B��������1.������������
#�������������) B���@�
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
� 9
0��B�� ������ �����1�����/4�M��)�8� �����B��������,������!@/F�����8�1���1������
������ '����� ���� �4@*/�M��� ������������������C�&�:��� '�����"�)����������D������
������ ��� ,�����' � B� '� '�� �88�8��� �� �� ���1@� �� ������� ������ � *&��#�� C�=/44�
,�E,�D�� -0�T�� 87/� C�=744D�� -0�T�� 87/���/%7
� C�=!44D�� ������� 8� ���� C�8D� �7� C�=744D��
�8�7���!%/E!%7
� C�=644D�� ���!E%� C�=/44D� ���� ���!���*7/E*7<
E%���*!%E*!/
� C�=!44D�B���� )�������
����������?��'���1@��� ������������� �����C�=��444D���������!�C�=644D�B����)����� ��
���.��� ��'���1@��� ������������� �� �/�� ��!��8����C�=644D��0�;%����!/%
�C�=/44D��
"�%��C�=644D�����S� �������C�=!�444D�B����)�������������'@�5����� ���B� '�'��������'�
8�����������N��� ����������1��� ���1�C��(D����B��� '���'����������� ��� �� ���)�
����8������ C�&� :��� '����� "�)�� ��������D@� "������� B�� ���� �� �� B���� +��� �)����
������ 5����� �) B��������1���� C-� ����� 5�� � � ���)�:��� 'D@�S� ������� ����� ��B����
����� ��'��(�)���+����8� ����������@�
���8����%� ��.1�� �� �,� 1� B��� )���� ������1� CW���� L� %64� �� ���� W���� L� *74� �D�
�� ������� �� ��� 8� ���� �� ��� �� �1� ������ ��� 1����8����� �����8�<�����*�
� '1��������C���'�D������)�������� ����� �� ��C�9D@�
�
��������������������(��'(�����ApcMin/+Mstn+/+���#�ApcMin/+Mstn-/-���"��
?'�� ����� �� �� ���� B��� ����)���1� ������ ��� ��� ���1� � '�� � ��'� ���� 8������ � '��
����������B����� ��� �%��+������� ����C�88���������������B����� �� ���D@�?'������B���
���� ��,��@����� ��� ����B���� )���'���B� '�#����8����� ���� �������1����� )����� ����4F�
8���)�����'1���)��!*�'��@���� ����B���� '����������B� '�#���C%����!�'���D������ ������
���4@�F�� '1���������� )�� %�'��@�#�18��B���� ��� ��������� �������� ���������8�� ����
B������ ����.������X������!���!�%������Y%������ ��@�
�
��������"��
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
� �4
� � �� ������8�������B��������������������� �8������� ������������ B�B�1�����1����
)� ,��������� B� '� '�� � ���� �-�B���P����� post� hoc� �� � ����� � ���� �)1� �8���)���
��))���������� B���������C���8'#���#����/@4%D@�� ���� >�� � �� �B��������)���8�������
�� B���� B����� ���@���))�������������,�,����� ���B����� ��������1� '���'���+����� �� @�
?� ����� � )�� ��))�������� ��� ���B���' � � � ��� '� �� B����B���� 18�� ����Mstn-/-� ���
������������� ��� ����1����)� �,��������B���8��)���� C��8���-; �K������������8 �D@�
?'��S���,���)������)�������B����� �� �4@4/�)�������8������@��� ������8����� �����������J�
�&@�
� �
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
� ��
������
�
Mstn�!�������"��$������(��$��������������)����������"��������������������%*�����!���"��
��1������)� ������gastrocnemius���������������8� ������ �� �B���������������������
B���� 18�� ���������������C0��@�����D@��1��� ��� ���� ������� ���� ��� '��������������
��1����� C0��@� ��D�� )� ����� C0��@� ��D�� ���� �8�� ��1�8��,�� ��� ���� )� �(��� ���������
���� C0��@� ��D� ���� 8� ���� �� �� � C0��@� ��D@� #� �� ��� ������ �������B�� ���� ���Mstn-/-�
����������� ���� B��� ���� ����� �� ��� �1� '�� 8�����,� ��� )� 8����� ���� �����
����� �� ��� C0��@� �&� ������88���� ��1�0��@� �D@�#��,�� ���)� �(��� ������������� ����
B�����������,����� extensor�digitorum�longus��tibialis�anterior�����soleus��������)�Mstn-/-�
����������� ���� C��88���� ��1� 0��@� !D@� 58� �� �1�� ������� �� �(�� B��� � � ��))���� �
�� B���� ���8�� C��88���� ��1� 0��@� %D@��� �� ���� '��� 8� �� �� '���� ���� �(��� ���������
������ �� �8'1������������������'����@�
�
Mstn�!�������"��$������#�"�����������������!�� �+�
?�����B '�B�������,�������44F�)�������� � ���B���' �B��������)���� �1��B������
Mstn-/-������8����� �B���� 18������C0��@�!�D@�58� �� �1���� ��per se������ ��� ��� '��
in vitro�8���)��� �,���'���� ���� ����)�""�������� C��88���� ��1�0��@�*���D@�&�8�������)�
������������ ���� ����������� ��(���� B��� '���)��� �� ������� ��� ��� �����@� $-��
��,����)�,����������� '��������B '�)�� ��C &�0D�������N�����,���)� ���������������
���� ��B '� C!4D�� ������� ����8� ��� �� C�"3?�D�� '�� 8������� � ������� ����8� ��� ���
��1� 18��� )� ������� ������ C!�D�� ���� '18�������������� )�� �� C:50D��S�� �� �������8 �����
�� �,� �� )� &�0� ���� �"3?�� ����� ��8������� C!!D�� B���� �����)���� �1� �B����� ��� '��
���� )�Mstn-/-� ���� C0��@� !�D@� ?���� ���� �� �,��� ���������� '��� ����� �1� ����� �'B�� �
��'��� ����������������� �����������C!%D@��� �,��������'����'� ���������8� �����)�
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
� �!
,������G������� ���)�����)������ ������ �,�����,G��G�D���� �,������CG�EG�D������� �,���
�� CG�EG�D� C!*D@� 5�� '�� 8����� � � ��1�� $-�� ��,���� )� � '� G�� ���� G�� ������ �� B����
�����)���� �1� �B��� ��� '�� ���� )� Mstn-/-� ���� C0��@� !�D@� &�8������� )� � '� 18�� 55�
C�� $55�D����� 18��5�C��(*D�����8 ����B'��'� ����������� �,����������C!*D�B���������B�����
��� '�� ����)�Mstn-/-�����C0��@�!�D@�
?'��8������� 1� '� ��� �������������� �����B '��1�������������88 ����)� ���������
B������� ��,�� ��� ��@������ �� �B� '� '���'18 '������$-����,���)�?Z&�P�������������
)� �88 ���� C!/D�� ���� 8� ���� �� �� �� ���� �����!� 8� ���� �� �� ���� ���8����%� ��.1��
�� �,� 1�B����'��'��� ��� '�� ����)�Mstn-/-����� C0��@�!����������88���� ��1�0��@�*�D@�
�� �� '���� '��������� �������� �� '� ��� ��������8������� '����8�������)���������,�,������
���������������� ���������������������������88 ���@�
�
Mstn� !���� ���"��$������ ����������� �+�� �"��$������ ��� (������'��"� (��+ �'�� ��� �)�������
���"���������������%*�����!���"��
�� ����������8��,�� �������B�� �����1������� ���� '������������ B����8� �����1� '�����
���E�� ������� ��@� Z�� )��� � ��8����� '�� ������ ��� )� '�� �( E������� ���� � )�
��8�1���� C?;$D�8� 'B�1������������ ������ ��)� �(��� ���������8� �����1� '�����B'���
�� �,� ��� 8��,�� �� ������ � �8'1� in vivo� C!7�� !<D@� :B�,���� 8'�8'�1�� ��� ��,���� )�
�B�� �����))�� ���)� '��8� 'B�1�� ����������8<4�7P�� �8�7����� '�� ������ ��� ��8������
*&���������#� ����C*&��#D����B�������������)���� �1�����������������8���� � �����B '�
��� '��gastrocnemius�������)�� '�B���� 18������Mstn-/-�����C0��@�%D@
Z�� ��� � ��,�� ��� ��� B'� '����� �� ���� ��� ����������� ���� B��� ������ ��� B� '� ���
��'��� ���)� '�����+�� ���8� �����8� 'B�1@�5����������� '����8�������)��������8���)���
&%� ���+�� ��� �������� C��0��E� ������� ���� ��$0�D� �������� �1� ��� ��B '� ��� '��
gastrocnemius� ������ )� B���� 18�� ���� B��� �8�� ��1� ���� ��� ���Mstn-/-� �����������
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
� �%
���� C0��@� *���D@� ?�������8 � ��,��� )� )�('���� ��� ;� C0�;D� %�� �� �������8 ��� )�� ��
��,�,��� ��� '�� ��8������� )���0��E� ������� ������$0�� C!6�� !9D�� B��� ���� ��(���1�
�������� ���Mstn-/-� ����������� ���� C0��@� *�D@� :B�,���� 0�;%� 8'�8'�1�� ��� ��,���
�����������'������C0��@�*�D@��� �,��8'�8'�1�� ���)��)�87/������� � ��� �)�-0��
�������8 ���)�� ����,�,������ '����8�������)���$0��C%4D��B�������%�)����B������Mstn-
/-� ����������� ���� �8����� B� '� B���� 18�� ����������� ���� C0��@� *&D@�
#'�8'�1�� ��� )� 5T�S� �� ���%!� ���� ���%7�� ���B�� '�� �������� )�-0�T�� �1� 5T�S@� 5T�S�
8'�8'�1�� ���� B'��'� B��� ��(���1� ���������� ��� '�� gastrocnemius� ������ )� B���� 18��
���� ��� ���8���� � �����B '�� �����������'������ ���Mstn-/-� ��������������� C0��@�
*0D@����������1�� �������8 ���,����)�?Z&�P�����(��� ���������B�� �����1 (����C%�D������
?$�07�����&%����+�� �����������������8 � ��8� ������+������)�� '���� �,� ���)�-0�����
���8���� �?Z&�P�C%!D��B�����B�������� ������Mstn-/-� ���������������C0��@�*��:D@�
Z�������� ���� '����8�������)��� 8'��1����� ��������� C%%��%*D@��1 8����������
������������ )��� )� ��� ������������ ��� 8� ���� ���' � �'���� %� C"�%D� ��� ��
8� 18�������(���)��� 8'��1�C%/D��B���������)���� �1��������������gastrocnemius�������
)�B���� 18�� ��������������@�-�,���� ���B��� ����,��� ���Mstn-/-� ���������������
C0��@�/�D@�3�(��$-����,�������� �/�� ��!�8� �����8����B�������� �B����� ���Mstn-/-�
����������8���� � �����B '��8����� �B���� 18������C0��@�/���D@������ �,��1������
'���� )�������� ������ �� '� � �� �� ���� � ���� ��� '�� �� �,� ��� )� 8� ��1 ��� 8� 'B�1�� ���
�(��� ��������������������������'����@�
�
����-�"��$�����!�����!�����)����������"���������������%*�����!���"��
&��,� ��� ��8������� )� �� �,���� 8� ���������B�� ���� ���� ���'����� �1� �8������� ����
'����8�������)���0��E� �������C%7D�������� �,� ���)��� �,����������������������� ��������
���������� ���'����� C/�� %<D@� Z�� '���)��� �� ������� B'� '��� �� �� ���� 8�����1� �� �����
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
� �*
�� �,������������@����8�������1���� �� �������8 ���,��������������'���������B���� 18�� ���
�������� ���� C0��@� 7�D@� ?�������8 � ��,���� )� �� �,��� G�� ���� �� $55�� B���� ���������� ���
���8���� � �����B '�� '����B���� 18������Mstn-/-�����C0��@�7���D���� � �������8 ���,����
)� ��(*� ���� ��(/� B���� �������� ��� Mstn-/-� ���� �1� ��� ��B '� C0��@� 7��&D@� 0�����1��
���!E%�8'�8'�1�� ����������!E%�8� ������ �� �B��������������B���� 18������Mstn-/-�
��������������������'������������8���� � �����B '�C0��@�70D@�?'���)������ ������
���� � � ���� � ��(���1� �� ��� �� �E�� �,��� ���������� ��� �(��� ��� ������ %/� ��1�� �) ���
������ ���)�""�������@�
�
Mstn�!�������"��$������#������"���'�(�����!�����$�$���������������%*�����!���"����#�
ApcMin/+���"��
""�� ����������� ���� ���)�� ��� �� �� '��� B�� ���� �1����� �'���� ���.��� �1�
8�������,��B���' �����C0��@���D�������� '�C0��@�<�D@�- ���1���� ������B��������� ���B� '�
�������)���� �8����� ���)����������,�,���C0��@�<�D@�Z�� '���)����������� '���))����1�)�
Mstn���������� �,� ������ApcMin/+����������� �����'�������)������ ����������C�<��%6D�
���� ���'����� C�6D� '� � �������� �� � � ��� ��� '�� adenomatous polyposis coli� CApcD� �����
�������� � �� �8��� �� �� ����� ��8������ C���D� C�<D@� 5�� '������ � � ��� ��� Apc� ����� ���
���8������� )�� '�� ��� �� ��� ���� ��,��8�� � )� )������� ����� ��� 8�18���� C%6D�� ���
�� ���� ����� � ��'��� ��� �������� �'���� ���.��� �1� ������� )� '�� ������ �� �� ���@� ?'��
��,�� ���� )�ApcMin/+ ���� ��� '�� �������� 8��������� )� ��� ��B '� ����������B�� ����
C�6D� '� � ������ �����1� ���� ��� � '����������� ���'������ �8����� � '�� ������ ���)�
��� ������� B'��'� �������� �� ����1� )�� � ��� ��B '� ���� ������ B�� ���@� ;��
'� ��.1���� Mstn+/-� ���� '.1���� Mstn-/-
� ���� ��� ���(�������� ���,�,��� )� ApcMin/+�
����B�������(���1�8�������C0��@�<�D@�Z'����44F�)�ApcMin/+Mstn+/+�����'��������!9�
B��(���) ������ '����� �94F�)�ApcMin/+Mstn+/-�����ApcMin/+Mstn-/-
�����B����� �������,�@�;)�
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
� �/
� ���B���� 18������Mstn-/-�����'������������)��8������������������ ����C��88���� ��1�
0��@�/�D@�5����������� '�����,�,����� ��)�ApcMin/+Mstn-/-�����B��������� ���B� '�������� ���
��� '�� ������ ���� ��.�� )� �� �� ����� 8�18�� C0��@� <���� ���� ��88���� ��1� 0��@� /�D@�
��,��8�� � )� 8�18���� ��� ������1� ������ ��� B� '� ������ ���� ���1� )����� C�<D@�
��������� � )� '�� ��� � ��� '���)��� �� ��� ��� ����� � ������� '�� '��� '� � � ��� )� '��
������@� Z'������ '�� ��� � B��� ����8���� ��� ApcMin/+Mstn+/+� ����� � � B��� �8�� ��1�
8�����,��� ���ApcMin/+Mstn-/-����� C0��@� <&D@� 0�����1���� �� ���� �� '��ApcMin/+
� ���(������
� ���� ��� '����������������1�����C0��@�<0D�������8�� ��1�8��,�� ��� '������)��(��� ���
����������C0��@�<�D@�
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
� �7
�����������
�
������������� ������'������������ �)�� �������,�� � �����1����� '� ����������� ���� 1�
)�� �'� '���81�� ���������� ������1� ���(�� �������� 8'1������ 8��)������ ���� 8� ��� >��
+���� 1� )� ��)��� ���� �� �� ��1� ���������� ���,�,��� ��� ������� 8� ��� �� C*D@� �� '��'� ������
B�� ����� '��(�1�)�� ����)�������������� ������'������ ��� ������.��������)�� �����8�������
)�� '�� ��� '� )� ��1� ������� 8� ��� �� C%D�� � � ������� �� 8��1� ������ �� 8������ B'���
����������'������������1����������� ������@�?'��8����� �� ��1�������1������� ��� '� �
���� ���� �� �� ��� ��� �))�� �,�� � �� ��1� � 8��,�� � �(��� ��� ������ B�� ����� � ��B� ���
��B '������ �������������,�,����� �����""�� �������������������ApcMin/+ ���@�
���'���� �����1���� ������8� ���������� �������1���8��������8� �����1� '�����C9��
%9D� ���� ����������� 8� ���� ������� ��� C%9D@� ;��� )�������� �'B���� '� �Mstn� ���� ���� � �
� ���� �� '�� ��'��� ��� )� �( E?;$� 8� 'B�1� �������� �1� ��� ��B '�� �� � ���� �����1�
� ���� ��� '�� �� �,� ��� )� 8� ��1 ��� 8� 'B�1��� ������1� ������ �� '� � �� �� ���� 8�,�����
8� �� ��������� ����������������������B�� �����1���8�������� '���� �,� ���)�8� ��1 ���
8� 'B�1�@� :B�,���� B�� ���� � �������� '�� 8������� 1� '� � 8� ���� �1� '����� ����� ���
������ ��� ��))���� �1� �������� ������� '�� ��� ������ )� ������� ���'����@� ?'�� ��'������
���������� '�� ���'�� ��� � � �� '�,�� ����� �� �,�������� �� � ������� ���'����� ��� ���������� �
����� �� � � ���� � ��� 8�� �� )�� �� ���� ���� �� B���� '�� '� � ���� '�� ��� '���'� '��
8���� ���)� ���� ����'� �����,��� ���'�� ��� )�� ��� C!D@� 5�� '��8����� � � ��1�� �������8 �
��,����)�?Z&�P����8B��)����(��� ���������B�� �����1 (����C%�D������ '� �)�?$�07��� ��
�B�� �����))�� ��C%!D��B������(���1�������������(��� ���������)�Mstn-/-� �����������
���@�0�� '������B����������,��� '� �������� ������,����)��� �������1 (����������B�����
���Mstn-/-������8����� �B���� 18��������������������� ����C��88���� ��1�0��@�7D@�
?'���)������ �� ���� ������� ���� �� )�,����1� � ������ ���� '�� ��,���)����'�� ��� )�� ��@�
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
� �<
:B�,�������� �������,�� ��� ����B���������������1� �������1��� ������ '������)��� �����
'�������� ���)� '��8���� ���)����'�� ���)�� ��@�
�1� � ��������� �,������������1��������� ��� $55�������� $55���B'��'� '��������� ������
�� �,� ��� 18��5� �� �,��� ����8 ���� ��(� *� ���� /@� -�� '��� �������8 � ��,���� )� �� �,��� G���
�� $55�����(*�������(/��������!E%�8'�8'�1�� ����B��������� �� �1������� ������B����
18������Mstn-/-�����������8���� � �����B '�������� ���� '� �1� � ��E�� �,�������������
B��� � � �8������ %/� ��1�� �) ��� ������ ��� )� ""�� �����@� :B�,���� � � ��� 8������� '� �
1� � ��E�� �,��������������B�����))���� ����1� ������ ����� B����B���� 18������Mstn-/-�����
�������� ������� '�� ��� ������ )� ��� ��B '@� 5�� ��88� � )� '��� ����8 ���� 1� � ���
��8������� ���� �������� ���'������ ��� �(��� ��� ������ )� B���� 18�� ���� ��� ���8���� �
��� ��B '� � � ��1� %/�� ��� ����,� ���B'��'� �� ��� ��B� '� ���� '�� � ������ '� ���������
1� � ��� ��8������� ��� ���8���� � ��� ��B '�� �� � � � �������� ��� 8�� �� C����7D@�
?'���)������� ���� ���)�1� � ��E�� �,����������������B���� 18������������������������
������� '�� ���������)� �����B '@�0�����1�������������,���)�����!E%�8'�8'�1�� ���
B�������,����� B����B���� 18������Mstn-/-������ ���1�%/�������� ���� '� � '�������������
��)���������1����� ���� ���� �1��))�� ��� '���8� 'B�1����Mstn-/-����@�
#�����,� ��� )� �(��� ��� ������ ���� ���Mstn-/-� ����������� ���� ���� ApcMin/+Mstn-/-
�
���������������B� '�� �������'B���� '� ���+��� �� ���)��� ������������� �,���������� ���1�
������ �� ���)��� ������� )��)��� $55������ ���� ���� �������))�� �� ������������)�
����������'����� C�/�� �7D@� :B�,���� ��� � ��1� �� ����� '���� ����,� ���� �1� �'B���� '� �
�� ��per se��������� ������� ������ �)�����������'�� ����������������������'����@�;���
�1� +��� ��� B'� '��� '�� �������������� 8'�� 18�� )� Mstn-/-� ���� ��� '�� ������ )��
8� �� ��� ������ � ������ B�� ���@� #��,���� � ������ '�,�� ������1� ���� �� ��� '� � '��
���(���� )� �� $55�� ���������� � � '�� ��� )� ��� ��,��8�� � ��� ���� ���� 8�,�����
8� �� ��� ������ � ������� ���'����� C�/�� �7D@� �� '��'� '�� � �� ��1� ����� ��� '���� � ������
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
� �6
��'��� �� � '� �� �� ���� �� �,��� ����������� '���� �� �� � ����1� ������ � '� � �� �� ��'��� ���
��)���� ����� ����� � �(��� ��� ������ � �8'1@� ?'��� ���� ������� '�� +��� ��� )� B'� '���
���(���� �� �,����1� 8�,���� ���� ����� 8� �� ��� ������ � ������� ���'����@���� ��������� ���
�� �,��� ��,��� '��� ����� ��8� ��� ��� ��1� �� ������ � � ���� ���������� ������� ���'����� C/D@�
5����������������� ������,���)��� �,����������������8� ���������B�� ���������))�� � '� �
���� ���8����� ����� ������������C%7D@�0�� '��������'��� ���)��� $55������������������
�������'18�� �8'1�� '����B���� 18������Mstn-/-�����C*4D@������������� ��'�,�����������
� ������ �1� ������ ��� �� ���� $55� �� ���1� C*�D@� ?�� '���� '���� �� �� ��88� � ��� �8� �� �
����)��� �,������� '�������� ���)��(��� �����������������������'����@�:B�,�����������
�� $55� ���� ���� ��� �� ���� � )�� '��� ��������� ���'� ��� ���� �8'���� ��� 8� ����� C*!D��
B'��� 8�� �,�� �� ��� �� �(��� ��������� '�� ����� '��� ����� ����� �1� ���� �� ��� C*%��
**D@�?'���)���� '������)������ �))�� �)� ��'��� ����� '��� �������� �,���� '���'������ $55�
���(��������������� ������������1� '����'��� ���)������8'���� ���8� ����@��8���)���
��'��� ���)��� ������ �,���� ��� '���� �� �)�����������'������'�������B���������� ����
�� B���� '�����8�� �,���))�� ��)��� �������� �,���@
;��� � ��(���� )������� )� '�� 8����� � � ��1� B��� '�� ����� ��� ��� ��� ��B '� ���Mstn-/-�
���������))�� � '� ��������� ���� ��� ��������������� ���� ���������������������������
��� ��������� ��� �88 ���@�?��� ��B '�B��� ������(���1� ��B��� ���ApcMin/+Mstn-/-������
�� '���B� '���8�����,� ���)���1�B���' ������(��� ������������@��� '��'�������� ���
��� ��� ��B '� '��� � � ����� �1� �� �����1� ����,��� C�*�� �/D�� '�� ������ � )�������� ����
����� �� � B� '� �� 8��,���� � ��1� ���� �� ���� '� � ������ �� ��� )� �� ������� �� $55��
��B���""�� �����B '��������C�7D@�;����� ����������)�� '�����88� ����1����� ��������
8'����������� � ������ �'B���� '� � ����� ��E��'��� ��� )��� $55� ���������� ��B�� ���
��,��8�� � ��� ������ C*/�*6D@� ?�(��� �� '���� ��� ����� �� ���� �)1� �� �� ��� �� 8 �� ����
��B '�8� ����)�� ������� �� ����� ���8��������@�?'���)���� '�������� �)��������'�,��
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
� �9
�8���� ���� ��� '�� ������� )� ��B� ������ ���� � �� ������ )�� '�� ��� �� � )� ���� )� '��
�� �� ������������������@�
5 ����������� '� ��8� �!4F�)������������ ���� ��� �����1�����,��)�����'������� '���
'�������� � ���������� C!D@�:�����B��������1��'B� '� 8��,�� ���)�������B�� ��������
����� ��� ��� ��� ��B '� ���Mstn-/-�����B��� ������ ���B� '� ��� ��������� ��� ���,�,��� �� �@�
?'������� ������ �����B '�8�����1��� ���� ��� ������������ '�����,�,����� ��)�Mstn-/-�
����������� ���@� :B�,���� '��� �� �� ��������� �))�� � ����� ���� � � ��8����� '��
8������� ���,�,��� )� ""�� ����������� ���=� B'��� �� �,�������� ����1���� B��� ����� �
����� �)����))����������� ���B���' �����,�,����� ��B���� ���������)���� �1��������������Mstn-
/-� ��������������@���������� ����� B����8�����,� ���)��(��� ������������������� ���
��� ��� ��B '� ���� ��� ��������� ��� ���,�,��� �� �� ���� � � 8�,�� ������� 1�� �� ���'���� ���
���(���� B���� '����)�� ����������������1�8������@��(��� ������������ � � �������8� �� �
�����,���)����������@���������������� '��������� ����8��)���������������� ��������,��
�(��� ��������� 8� ���� ������� �����1� ��������� '�� �,�������� 1� )� ������� 8��������� )��
��,������������������������ �� ��1�8�,���������1�����������)��)�� ���� ������
C*9D@��� ���� �,��1�� ��� �� ���8��� �1� )������� ��� �� )��+��� � )� ��� �,�� � ��� ������� 8� ��� �� C!D@
#�����,� ��� )� ������ ���� ���� )��� ��� B���� '���)��� ��� ����)������ �1� ��� �������
���8��� �1� ������ )��� ��� ���� ����� '��� �� ���� �� � 8�������� ��)��8��@� 0�����1��
8�����,� ���)��(��� ����������������������� ����� ���� � '��������������8'1�������� �,� 1�
'� � ������ B� '� '�� 8��������� )� '�� ��������� ���� �� �� ��1� � ����1� B'��� ��1�
������ �����@�
?'��8����� �� ��1������� ��� '� �8�����,�����(��� ��������������'����������)� '�������
)� �� ��,�� ���� ����� � � 8�������� ���,�,��� ��� 8� ��� ��B� '� ��,������ �������@�:B�,����
)�� '���� ������B���������������1� �8�������1��� ������ '���� �� ���������)��� ���)��� ��
��'��� ��@� Z�� ���� ����� ��� ��)�� ��� ��� � '�� ������� ���� ��,��� )� �� �� ���� '���
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
� !4
�� $55���������C�� �,�������'������������8'���� ���8� ����D�����������8� ��� �@�#�������
��))����������� '����8�������)��� ������ '����� $55����������� B����������� 18����'����
��������� ������@�0�����1�����'��������� ���1������ ������������������ ���������������
����������������������8������'�����'��� �)��������������)��������8�����1�����������8�������
�����.� ������������������ �8'1@�?'���� '����,��8�� �)�(�B����������� �� ������
)�� '�� ��� �� �)�����������'������1���������88�������� � '���8� '������� �� �� ����
������ ���B� '�������B�� ���������������,���� �����������@�
� �
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
� !�
��.��/��0�����
�
?'�� �� '��� '��(� ��,��� ������� )�� '��� '��8� ��� ������ ��� 18���@� ?'��� � ��1� B���
��88� ��� �1� ���� �� )�� '�� "����� �� ��� ��� ������� ���� '�� 5�� � � � -� ����� ��� �������
C5-��D@�
� �
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
� !!
�����
�
�@� 0�����P��� �������0����(�������������� 5���������&��0����������$"�� � � ��@���)��� ��� ����
������)��� ���)�����������'����=������ ���� �������������@�"���� �;���@�!4��K�!=*69�9/@�
!@� ?���������@����'������)�����������'����@�#'1����$�,@�!449K69=%6��*�4@�
%@� ?���������@�����������'����@������;8������ ��� ���@�!4�4K!7=�*7�/�@�
*@� ?���������@����'���������������8� ��� �@�-� �$�,�������@�!44!K!=67!�<�@�
/@� :��� :Q�� ['�� R�� �� �'� Z&�� �������� �"@� �1� � ��E�� �,��� 8� 'B�1� �� �����=�
������������������� '���8�� ���8 �� ���@�5� ������'����������@�!4�%K*/=!%%%�*<@�
7@� ��#'���������"�B��������"�����@�$����� ���)� �(��� ������������� ��������1�����B�
?�0��� ����8��)���1�����@�-� ���@��99<K%6<=6%�94@�
<@� ���� �"��#�� ������0������0��#����� ����$1�"������B�������� ���@������ �����(��� ���
������ ���� �1� 8� �� ���� �������8���)��� ���� �,� ��� )� '�� 1� � ��� ����@� �������@�
!44%K%/=!!<�%6@�
6@� �����������������'��������.� ����P������-������)1�$��#������8����� ���@�&� 8���
��8�������)�1� � ������������ �8'1�)����� ��(��� ����������1�����������������������
��8������@�&��������1@�!44<K�*6=%�*4�<@�
9@� �����'��������������������.� � ���P������-������)1�$������ ���� � � ��@��B��
������ ���)��( E������� ���� �)���8�1��������������8� 'B�1�������8���� �1� � ���
,����8�����������(��� ��������@�&��������1@�!449K�/4=!67�9*@�
�4@� [����� ?��� ��,���� � �� P������� "��� :�1���� #�� &�+����� �0�� ?(����� P-�� � � ��@�
5���� ��� )� ���'����� ��� ���� �1� �1� ������1� ������ ����� 1� � ��@� �������@�
!44!K!97=�*67�6@�
��@� �� �����#��������� ��������� ����#�����0��$�))�#������������ ���@��������1� � ���
����������������'�����������8����� �������������'����@�&����������5�,�� @�!446K%6=/%��6@�
�!@� "������������[��"����Z��Z����$��?����#�������$��� ���@��1� � ����� �������$-������ ���
��������B '�����������������������'��������@������?'��@�!446K�/=�//�74@�
�%@� ��� � ��� #����� 0�� ������ ��� $�))� #�� ������� ��� ������� 0��� � � ��@� ����� 1�����
��'��� ��� ���� �� '�� 1� � ��E)���� � ��� ����� B� '� � �8�,���� ���'����� ��� ���
�����������@������������������?���� �@�!449K9=746��7@�
�*@� ����1� P���(� �&�� �1����� ?�� "��(� ���� #��� ��� P������� "��� [����� ?�@� ��� ��
��'��� ���)�1� � ���)���1�8� �����8�����,����(��� ���������������������)��������
���'����@����'����8'1��$������@�!4�4K%9�=�/*6�/*@�
�/@� ['��R��Z�����"��"������������PB�(�P�������Q��� ���@�$�,������)�����������'���������
������B�� �����1��� $55���� ������������ �8����������,�,��@�����@�!4�4K�*!=/%��*%@�
�7@� ���+�� �����?�������;�8��������������#� �������8��,����&��� ���@��1� � ������(����
������ �� $55�� �� ������ ��� ���� �������� '�� "�B��� ����� �������� ����� �� ��� '��
�8�,��� � )�������B�� ���� ���� 8'1������ 8��)�����@� �����'���������8�����������@�
!4�!K%=%<�*%@�
�<@� ������$��#� �:����,��Z0@�������� �� � ��� '� �8�����8���� ��� �8����� �� �����
��8��������� '�����@��������@��994K!*<=%!!�*@�
�6@� ��� ���,��� P��� ������� 0��� #�������� ��,��� ��������� ���� ������ ��@� 5� �����(���7� ����
���'���������8����E\����@�����#'1����$�����5� �����8�#'1���@�!446K!9*=$%9%�*4�@�
�9@� ��� '�� #�� �����.� ��� 0�,���� 0��� �����'�� ��� 0������ "�� ��� "�� � � ��@� $����� ��� )�
���+�� ���8� ����� �1� ��� ���8���� ��.1�� �� �,� ����� ���� �� ����������� 8� �������� ��� �� �
������������������8���� ���������@�#)����������'@�!44<K*/*=7!/�%%@�
!4@� $�8������������������@�$���)� '�� &�0E &�0$��������������������1����� '���81@���,�
�������$��@�!4�!K��*=!%<�7<@�
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
� !%
!�@� ���'�����"��$����� ������ � ��@���������� ���� ��������� ������ ��� )� ������� ����8� ���
C�"3?D�8� ��������������@��������#'1���@�!44/K!4!=7/*�7!@�
!!@� ����.���"@�:1���1�� ��� )�:50��=� �1���� �������� � � '���������� ��,��@� #'1����1@�
!44*K�9=�<7�6!@�
!%@� :��"B�������'���&��['����"��Z� ���P����������#��"�88���#��� ���@�?���� ������ �,���
����8 ����(��(����������'��� ������������������ ����������� '���'�����'�����)��� ���
�8���� ��1� ��� �� &�0� '���8���@��������$��@�!4��K<�=�%7!�<%@�
!*@� �� ��)��,�����Z������ �@� ?'�� ����' � ���� '�� ���(� ������ )� �� �,��� ��� B���� '������� ����
������@�����������@�!4�!K�!/=%9!9�%<@�
!/@� �'��'�8� ��'�����������#$��R��:��:��������� �:��:���������� ���@�?Z&�P������B�
����� ��� ������� ��� '�� ��� �������� )�� �� )���1� '� � B��(�1� �������� �88 ���@� �� ����
�'�@��99<K!<!=%!*4���4@�
!7@� $��������������������(������$�����$��-���.�"��� � �?-��� ���@������ ���)�5�0���
�������� �(��� ��� 1 ���� '18�� �8'1� �1� #5C%DPE�( E?;$� ���� #5C%DPE�( E��P%�
8� 'B�1�@�-� ���������@�!44�K%=�449��%@�
!<@� ������ ���� � � � ?-�� ��.���.���� P�����Z;�� � ,��� �"�� ���������� $�� � � ��@� �( E?;$�
8� 'B�1�������������������� ��)��(��� ���������'18�� �8'1���������8��,�� �������� �8'1�
���,�,@�-� ���������@�!44�K%=�4�*�9@�
!6@� �������������������������� �����(��(�������������&��#���������� ���@�0�� �������8 ���)�� ���
������� '��� �8'1����� ������+�� ����������� ������������������(��� ���������� �8'1@�����@�
!44*K��<=%99�*�!@�
!9@� � � � ?-�� ���N��� ��� ����(�� ���� #����� 0�� ?�)�1,�� ��� P����� Z;�� � � ��@� ?'�� 5�0�
�E#5%PE�( � 8� 'B�1� 8��,�� �� ��8������� )� ������ � �8'1��������� ���+�� ��� �������� �1�
��'��� ����0;R;� �������8 ���)�� ��@��������@�!44*K�*=%9/�*4%@�
%4@� �������0��� .�����?�B��-&����@���������.�#���;'�����"��,�:���� ���@�5PP�� �E-0�(�88���
�� �,� ������������,����������B�� ����������@�����@�!44*K��9=!6/�96@�
%�@� �� �������'� ������ ���P������� "��'�?��)����))�&��Z�� ���� ���"��:�� � � ��@� ?'��?Z&�P�
0��*��1� ���������� ����������� ��)������,� ������������(��� ���������� �8'1�������@���
��������@�!4�4K�66=6%%�*9@�
%!@� #����#P����8 ���P���'� ���������#����������P�������1������'������ ���@�?���� ������� ���
)�?$�07���'��� ���(��� ���������B�� ����������@�����������@�!4�4K�9�=�%9/�*��@�
%%@� ��������������������$������ ���������&��$���)�$������#�����#�� � � ��@� 0�;%�
�� ������ 8'��1�����(��� ������������,�,@�������� ��@�!44<K7=*/6�<�@�
%*@� ['�� ��� ����� � ���� ��'���� ��� ��� #�� ������� ��� ��'��))��� ��� � � ��@� 0�;%� ������ ��1�
�� �,� ��� 8� ���� ������� ��� �1� '�� �� 8'����E�1����� ���� 8� ������ 8� 'B�1�� ���
� �8'1���������������@�������� ��@�!44<K7=*<!�6%@�
%/@� P����(1�������������0��������,��'�:������'��$?�����,�����.�������������P��� ���@�
����������� )�� '�� ���� ���� �� ��8�� � ��� )� ����1�� )�� �� ����� �� 8'��1@� �� 8'��1@�
!4�!K6=**/�/**@�
%7@� �'����"��Z�� ��P"��Z�����(���&�����8'1�P?��?'���$&����(��N������ ���@�&��,� ���
��8�������)��� �,����8� ���������B�� �����������'����@�0��&���@�!4�*K!6=�<���!%@�
%<@� �� .�(�����0������������� '����#��P�����"��"��:��������1��@���,��8�� �)��������
���'�������(���1����������������� ���������'�������)����� ����@�#���-� �����������3���
�@��99*K9�=66�<�!�@�
%6@� ���������?'��,����������B� .�Z������������������ �"������� ����:��� ���@�5��� �)��� ���
�����'���� ���.� ���)� '��)������������ ���8�18������������@�����@��99�K77=/69�744@�
%9@� "(�����1� ������1� �� �� ������B��� ��� ����(��� #��� �'������� P������� $�� � � ��@�
�1� � ��� 8� ��� '��B�� ���� )� '����1���� � ��� ����� '���'� 8� ���� ���+�� ���
8� ����� 8� 'B�1����� ��� ���� )� ��������� 8� ����@� �� �� #'1���� ����� #'1���@�
!4��K%4�=��%�7�!*@�
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
� !*
*4@� "�������$����"�����,����� ���������� '���������&��?(�����P-��� ���@�$����� ���)�
��������B '��1��� �8��������������������� '���'��� �,��� 18��55�����8 ��@�#���-� �������
����3����@�!44/K�4!=�6��<�!!@�
*�@� "��'�?��)����))� &������ �� ���� �'�88���� P�� 5�����N� ��� 0����� �-�� :�� ���� ��� � � ��@� ���
�� ���1� ���(���� �� �,��� 18�� 55� ����8 ��� �������� � ���� �(��� ��������� '18�� �8'1� ����
8� �� ��)��� �8'1@������������@�!4�*K%*=747��6@�
*!@� ��.�� ?��� �'��� R�� ��� ��� ��,�� #�� ['���� ��� :���� ���� � � ��@� #� ���� ���� �)��� ��� ����
)��� ����� ,����� ��� )� �� �,���� ���� ���� �8'���� ��� 8� ���� ��� ��� ������� �� �,���
���������������� ��@����&�������@�!446K!!=!769�<4!@�
*%@� ��� ���$����'��B���&�������B������ ���.�����['�����&�.�&��� ���@���#������������� ����
���������@�-� ����� @�!4�%K*/=�%49��6@�
**@� Z�����(�� �&�� �'��� �"�� Q���� :�� "��� ��� �������� ���� ��1��� ��� � � ��@� ?'�� ����
�8'���� ��� 8� ���� ����� ��� �� 8�� �,�� ������ �� )� �(��� ��� ������ ���@� �� ����� ���@�
!4�%K!4%=%*/�/<@�
*/@� ��8����������'���"��P����?$���� .�(���@�0���� � ������������ ��)�������� ���
8��������� ���� '�� �� �,����������� B�� ���� �1����� ��� ��'�������)����� � ���@�
&��������1@�!444K�*�=!%�9�!<@�
*7@� ���,��� P��� Z���))� ?P�� 0������� ���� �� '��� ��� ������1� ��� �� .�(� ��@� �� �,���
���������� '���'� �� �,��� ����8 �� 18�� 55� ������� '�� ���'�������(�� �18 �� ��� ��'�����
��)����� ����@����&�������@��997K�4=/%*�*%@�
*<@� "��Q��P����$��3����B��P��;2������&��",������P"�����'�������� ���@�#��,�� ���)�
���'�������(���1�������,��8�� ���������� ���)� ���8��������������'�������)����� �
����)��B���������� �� ���)����'�������� �,�������8 �� 18��55�������0��8� ���@����
:��$�8��@�!44<K�%=7</�6%@�
*6@� P���� ?$�� #���8� �� ��� Z���� #�� Z���))� ?P�� ���� 5�� �1���� ���� � � ��@� ?����������
����� � � ��1� ���� �8��� )��� ��=� '�� ���� )� )�������� ���� ���� '���� ��� �������
��B '����� ����������@����&�������@��999K�%=6/��7/@�
*9@� �������� ���� "8�.������� 0�@� ?'�� �����1� � � �� )� ����������� �� �@� �� ���� �'�@�
�99�K!77=!9<6�6!@�
�
� �
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
� !/
��0���0����
�
��!����12�Mstn�!�������"��$������(��$��������������)����������"����������������%*�����!�
��"�2�����'�����������1�B���' �������� '��������)�����������'����@����,��������)� ����@�
��� gastrocnemius� ������ ���@� ��� gastrocnemius� ������ 8� ���� �� �� @� &�� 8�����
����� �� ���)� ��� ���� �����@�Z���� 18�� ����Mstn�E������B���� ������ ���B� '�"�B���
����� �������� C""�D� ������ �� �����,��� �#��@� ?������� B���� ��,��� %/� ��1�� �) ��� '��
������ ���)�""�������@��� �����������J��&�C�L6��!E���8D@�]�#�X�4@4/��]]�#�X�4@4������
]]]�#�X�4@44�@�
�
��!����32�Mstn�!�������"��$��������#�"���������!�� �+���#��&(�����������!�������$��$�#�
�������������*��������#���!��!������4��"��$�����!�����!4� +������"������!��(�(�����2����
���B���' @���� &�0�����"3?������:50��S� �������8 � ��,���� ��� '�� ����)�B���� 18��
����Mstn�E�����@������ �,���G����� �,���G����� $55��������(*� �������8 ���,������� '�� ����
)�B���� 18�� ����Mstn�E�� ���@� ��� ?Z&�P� �������8 � ��,��� ��� '�� ���� )�B���� 18�� ����
Mstn�E�� ���@� &� ���� 0�� ����� � ����1���� )� ���� 8� ���� �� �� � C&D� ���� ���� �����!�
8� ������ ��C0D���� '�� ����)�B���� 18������Mstn�E�����@����)���� ������������ ��)�
���8����%���.1���� �,� 1���� '�� ����)�B���� 18������Mstn�E�����@�Z���� 18������Mstn�E��
����B���������� ���B� '�"�B����������������C""�D������@�?�������B������,���%/���1��
�) ��� '�������� ���)�""�������@��� �����������J��&�C�L6��!E���8D@�]�#�X�4@4/��]]�#�X�
4@4������]]]�#�X�4@44�@�
�
��!���� 52� �)�-���� (��+ �'� ��� ��+�*���#� ��� gastrocnemius ���"��� ��� ��#%�'(�� ��#�
Mstn%-%���"��#����!�"��"���"�"+�&��2��������� �����1����)�*&��#��8'�8'�1�� �����
?'�%<�����?'�*7@����"����������1����)�8<4�7P�8'�8'�1�� �����?'�*!���������*!*@����
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
� !7
����� � ����1���� )� �8�7� 8'�8'�1�� ��� �� ���!%/� ���� ���!%7� ���� �8�7� 8� ����
�� �� @�Z���� 18������Mstn�E������B���������� ���B� '�"�B����������������C""�D�������
�������,����#��@�?�������B������,���%/���1���) ��� '�������� ���)�""�������@��� ������
�����J��&�C�L6��!E���8D@�]�#�X�4@4/��]]�#�X�4@4������]]]�#�X�4@44�@�
�
��!���� 62� Mstn� !���� ���"��$������ ����������� �+�� �"��$������ ��� �*�7�����%(����������
(��+ �'� ��#� ��%� (��+ �'� ��� gastrocnemius� ���"��� #����!� "��"��� "�"+�&��2� �����
�������8 � ��,���� )� ��0��E� ������� C�D�� ��$0�� C�D� ���� 0�;%� C�D@� ��� ����� �
����1���� )� 0�;%� 8'�8'�1�� ��� �� ���!/%@� &�� ����� � ����1���� )� -0�� 87/�
8'�8'�1�� ��� �� ���/%7� ���� -0�� 87/� 8� ���� �� �� @� 0�� "������ ����1���� )� 5T�S
8'�8'�1�� ��������%!��������%7�����5T�S�8� ������ �� @�������:�� �������8 ���,����)�
?Z&�P�C�D�����?$�07�C:D@�Z���� 18������Mstn�E������B���� ������ ���B� '�"�B��� �����
��������C""�D��������������,����#��@�?�������B������,���%/���1���) ��� '�������� ���
)�""�� �����@��� �� ���������J��&� C�L6��!E���8D@� ]� #�X� 4@4/�� ]]�#�X� 4@4�� ���� ]]]�#�X�
4@44�@�
�
��!���� 82� Mstn� !���� ���"��$������ ����������� �+�� �"��$������ ��� ����(+�!'%�'�������
(��+ �'� ��� gastrocnemius� ���"��� #����!� "��"��� "�"+�&��2� ��� ����� � ����1���� )�
"�%��5� ���� "�%��55� 8� ���� �� �� @� ��� 3�(�� �������8 � ��,��@� ��� ����� � ����1���� )�
� �/�� ��!� 8� ���� �8���@�Z���� 18�� ����Mstn�E������B���� ������ ���B� '�"�B��� �����
��������C""�D��������������,����#��@�?�������B������,���%/���1���) ��� '�������� ���
)�""�� �����@��� �� ���������J��&� C�L6��!E���8D@� ]� #�X� 4@4/�� ]]�#�X� 4@4�� ���� ]]]�#�X�
4@44�@�
�
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
� !<
��!���� 92� ����-�"��$��� ��!�����!� ��� gastrocnemius� ���"��� #����!� "��"��� "�"+�&��2� ���
�� �� �������8 � ��,��@� ��&�� �������8 � ��,���� )� �� �,��� G�� C�D���� $55�� C�D����(*� C�D� ����
��(/�C&D@�0������� �����1����)����!E%�8'�8'�1�� ��������*7/E*7<��������*!%E*!/�
�������!E%� 8� ���� �� �� @�Z���� 18�� ����Mstn�E������B���� ������ ���B� '�"�B��� �����
��������C""�D��������������,����#��@�?�������B������,���%/���1���) ��� '�������� ���
)�""�� �����@��� �� ���������J��&� C�L6��!E���8D@� ]� #�X� 4@4/�� ]]�#�X� 4@4�� ���� ]]]�#�X�
4@44�@�
��!���� :� Mstn� !���� ���"��$������ (�����!�� �����(��� ��� ���� �����%*�����!� ��"�� ��#�
ApcMin/+���"�2�������,�,����� ��)�B���� 18������Mstn-/-� ��������������@����P�8����������
8� � �'B���� '� �Mstn� ����� ���� �,� ��� ���� �����1� 8������ ��)��8��� )�ApcMin/+Mstn+/-�
���� �pcMin/+Mstn-/-� ���@� ��� ��8����� � �,�� ���� ������� ��� ���� )� �� �� ���� � ������ B� '�
� '1�����������'B������ �8����� �� �����8�18�����ApcMin/+Mstn+/+@���� '��������������.��
)��� �� �����8�18�����������������ApcMin/+Mstn-/-����@�&��'�� ��� ����ApcMin/+Mstn+/+
�����
ApcMin/+Mstn-/-����@�0��Mstn���������� �,� ���8��,�� ����1�B���' ��������ApcMin/+
����@����
8��,�� ���)� �(��� ���������B�� ���� ���ApcMin/+Mstn-/-����@������B����!%@%�J�4@9�B��(��
��� � � '�� ��� )� ����1���@��� �� ��������� J� �&� C�L*�<E���8D@� ]]�#�X� 4@4�� ���� ]]]�#�X�
4@44�@�
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057
Research. on October 21, 2014. © 2014 American Association for Cancercancerres.aacrjournals.org Downloaded from
Author manuscripts have been peer reviewed and accepted for publication but have not yet been edited. Author Manuscript Published OnlineFirst on October 21, 2014; DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-14-0057