modelo de una proteina

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G. lucidum enriched with trace elements . . .

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dChemistry

Recent studies have demonstrated that G. lucidum can be suc-

cessfully enriched with selenium (Se), but also that it may biotrans-form inorganic Se salts through their integration into proteins and polysaccharides (Niedzielski and others 2014). This Þnding is important if one considers that the biological role of Se is mainlymediated by its organic form, particularly selenoproteins. For ex-ample, Se is known to be a reducing cofactor for some antiox-idantenzymes and as a catalyst for the synthesis of active thy-roid

hormone (Schomburg and Kohrle¬ 2008). It is also required for proper immune response (Hawkes and others 2001) and re- productive function (Ahsan and others 2014). Importantly, it has been demonstrated that polysaccharides (for example, SeGLP-2B-1)isolated from Se-enriched G. lucidum showed antitumor activ-itythrough inducement of apoptosis in breast cancer cells (Shang andothers 2011), whereas proteins isolated from Se-supplementedmushrooms exhibited signiÞcant immunomodulatory properties(Min-Chang and others 2014).

Although cultivation of G. lucidum supplemented with selectedelements has been a subject of previous investigations (Matute andothers 2011; Niedzielski and others 2014), no study has so farevaluated its growth and bioaccumulation when cultivated onsubstrates enriched with more than 1 element. The enrichment of amedicinal mushroom with 2 or even 3 essential minerals maysigniÞcantly increase the nutritional and pharmaceutical value of theÞnal product and broaden its application. This is particularlyimportant if one considers that mineral deÞciencies have become anincreasing nutritional issue among many human populations andmay contribute to the development of chronic diseases (Ames andWakimoto 2002). For example, the decreased status of copper (Cu)and zinc (Zn), both elements pivotal for the regulation of cellularfunctions, has been linked to an impairment of reproduc-tive andimmune system functions and to neuropathology (Kumar and others2004; Fukada and others 2011).

This study evaluated whether G. lucidum can be successfully supplemented with Se in combination with Cu and/or Zn and how such

supplementation affects the growth of this mushroom species. Ourstudy extends the body of information on the biofortiÞcation potential of G. lucidum with essential trace elements.

Materials and Methods

Experimental designThe substrate for G. lucidum was prepared from a mixture of

beech, birch, and oak sawdust (3:1:1). The mixture was supple-

mented with 25% of wheat bran, 2% of corn ßour, and 1% of CaSO4 and moistened to 60% of water content using distilled wa-ter andthen sterilized at 121 °C for 1 h. The following salts were used in the

experiment: sodium selenite (Na2SeO3 (IV)), sodium selenate

(Na2SeO4 (VI)) supplied by Acros Organics (Morris Plains, N. J.,U.S.A.), copper (II) selenate (CuSeO4·2H2O), and zinc nitrate

hexahydrate (Zn(NO3)2 6H2O) supplied by Sigma-Aldrich (St.Louis, Mo., U.S.A.). These salts were dissolved in such an amountof sterile distilled water sufÞcient to obtain appropriateconcentrations of 0.1, 0.2, 0.4, 0.6, and 0.8 mM for all elements inthe substrate after they had been added to it. Following the additionof the salt solution, the substrate water content reachedapproximately 60%. Accumulation of the 3 elements and growth ofthe mushroom fruiting bodies were determined in 5 differentsystems: (1) the reference (control - c) system without Cu, Se, andZn salts, (2) Se addition, (3) Se+ Cu addition, (4) Se+ Zn addition,and (5) Se+ Cu+ Zn addition to the substrate. The substrate was thenmixed with spawn (on sawdust) of G. lucidum GL01, which

constituted 3% in relation to the wet weight of the substrate, and placed in polypropylene bags (20 × 35 cm) with a microÞlter. Each bag contained 450 g of the substrate. Mycelium incubation wasallowed at 25 °C and a relative humidity of 80% to 85%. Once thesubstrate was totally covered with the mycelium, it was trans-ferredto the cultivation chamber in which the temperature was maintainedat 25 ûC and relative humidity of air of 85% to 90%. The cultivationwas additionally irradiated with ßuorescent light of 500 lx intensity

for 12 h a day. The growth facility was aerated in such a way as tomaintain CO2 concentration below 1000 ppm. The yield includedwhole fruiting bodies harvested successively as they matured: after50 d (control), 53 d (Se+ Cu), 58 d (Se+ Zn), or 59 d (Se+ Cu+ Zn).

ReagentsAll reagents, phosphoric acid, sodium hydroxide, disodium hy-

drophosphate, and potassium dihydrophosphate (for phosphate buffer preparation), were of analytical grade (Merck, Darm-stadt,Germany). Water was puriÞed with a Milli-Q Advantage A10WaterPuriÞcation System (Merck Millipore, Darmstadt, Ger-many).Compressed argon gas of N-5.0 purity (99.999%) was obtained fromLinde (Poznan,« Poland). For Cu, Zn, and Se spec-trometricdeterminations commercial standards (Merck) were ap-plied. Thestandard stock solutions were stored in glass bottles at 4 °C indarkness. Low concentration standards obtained by dilu-tion of thestock solutions were prepared daily. Palladium solution was prepared from commercial palladium (as nitrate) chemical modiÞers(Merck).

Mushroom sample collection and preparationMushrooms were collected when their biomass no longer

showed signs of further increase. The fruiting bodies were thenweighed, dried using an electric drier SLW 53 STD (Pol-Eko,

« ± °Wodzisław Slaski,þ Poland) at 50 2 C for 48 h, weighed again todetermine the dry weight, and then ground in a Cutting Boll Mill200 (Retsch GmbH, Haan, Germany) for 1 min.

The powdered samples were sieved through a 0.02 mm sieve,and a 1.000 ± 0.001 g sample was extracted by 1 mol/L phosphoric acid in an ultrasonic bath at an ambient temperature for30 min. Samples were then passed through Þlter paper (washedwith 200 mL water and 20 mL phosphate buffer). Sample pHwas adjusted to 6.0 to 6.5 by the addition of 10 mol/L of sodiumhydroxide solution and Þnally the samples were diluted to 20 mLwith phosphate buffer.

InstrumentsFor Cu and Zn determination ßame, atomic absorption spec-

trometry (FAAS) SpectrAA 220 FS (Varian, Australia) was ap- plied with stoichiometric ßame acetylene (2.0 L/min) and air(13.5 L/min). Hollow cathode lamps (Varian, Australia) wereused with the following parameters for Cu: wavelength 324.8nm, slit 0.5, lamp current 10 mA, and for Zn: wavelength 213.9nm, slit 1.0, lamp current 5 mA, both with background correctionwith a deuterium lamp. Calibration was provided for water-basedstan-dard solution without matrix matching using commercial

standards (Merck). The coefÞcients of variation (r 2) forcalibration curves exceeded 0.99. The determination limits were0.1 mg/kg with an uncertainty of about 5.0% (measured as RSD)for both determined elements.

For Se determination, electrothermal atomic absorption spec-trometry (ETAAS) SpectrAA 280Z (Agilent Technologies, Mul-grave, Victoria, Australia) with Zeeman background correction

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Table 1 – Content (mg/kg dry weight) of particular Se forms in G. lucidum growing on substrates with Se(IV)/Se(VI)/Cu/Zn addition.

Se(IV) Se(VI)

Elements addition (mM) Se Se+Cu Se+Zn Se+Cu+Zn Se Se+Cu Se+Zn Se+Cu+Zn b

± 0.1ab

± 0.32.8a

± 1.5ab 0.5 0.1a 0.0 0.2a

±0.1 0.2a

±0.0 0.2a

± 0.0control 0.2a 0.5ab ab 1.7 b a a a a0.1 12.6a ± 2.4 8.7 b ± 1.8 8.2 bc ± 2.7 2.2c 0.7 0.1a ± 0.0 0.1a ± 0.0 0.2a ± 0.1 0.1a ± 0.00.2 22.3a ± 1.6 11.8 b ± 2.0 9.6 b ± 2.4 3.9 b 1.4 0.2a ± 0.1 0.4a ± 0.2 0.5a ± 0.2 0.2 b ± 0.1

0.4 31.8a ± 1.2.

±. . . . .4 . . .

±. .

±. .

±.

bc ab c1.5

4.6a 4.5a 3.6a 0.7 0.5 0.1. 19.6a ± . 9.4ab ± . 12.4ab ± . 2.7 b ± 0.4

b ± .0.4

ab ± .1.1

a ±0.5

ab ±. . ± . . ± . . ± . . ± . ± . ± . ± . ± .

einorg eorgElements addition (mM) Se Se Cu Se Cu Zn Se Se Cu Se Zn Se Cu Zn

0.3 b 0.0 0.8 ab Sea+Zn ab + a 1.0 8.9a

1.9 a +a +

control a ab ± 0.4 3.0 ± 1.5 1.9 b 0.5 8.8a a ± 6.6a ± 0.4 7.9a ± 0.2ab0.1 12.7a ± 2.4 8.9 b ± 1.8 8.4 bc ± 2.8 2.3c 0.7 14.7a ± 2.7 9.2a ± 0.7 9.4a ± 1.2 11.5a ± 4.20.2 22.5a ± 1.7 12.2 b ± 2.2 10.2 b ± 2.5 4.1 b 1.4 16.9a ± 1.0 12.9a ± 1.2 12.1a ± 2.8 13.1a ± 2.7

0.4 34.6a0.5 12.7

±8.5 11.6 2.2 3.1 1.6 17.2 3.7 15.3

±1.8 16.4

± 2.5 11.4c ±2.3

1.1 14.0 ab c 1.6 a 17.5a 20.6a 0.9

0.6 24.3a ±

16.8ab ± 4.9 15.9ab ± 2.5 3.1 b ± 25.9a ± 2.4

20.9 bc ± 0.6

26.0 b ± 2.1 8.6c ±

0.8 23.4 ± 4.8 ± 4.4 14.8 ± 2.6 4.8 3.2 44.8 ± 4.3 ± 1.6 ± 2.4 15.0 ± 2.1Elements Se total Cu Znaddition (mM)

Se Se+

Cu Se+

Zn Se

+

Cu

+

Zn Se+

Cu Se

+ +

Se

+

Zn Se+

Cu

+

ZnCu Zna 9.7 a 2.3 9.6 a 1.2 9.8 a a a a acontrol 9.1a ± 1.0 ± 0.6 17.4a ± 3.3 15.1a ± 1.8 5.8a ± 1.0 5.2a ± 1.3ab ab b

0.1 27.4a ± 2.5 18.1 b ± 2.4 17.8 b ± 3.9 13.9 b 4.9 24.6a ± 3.2 22.7a ± 6.6 28.1a ± 5.5 29.1a ± 14.90.2 39.5a ± 2.7 25.1 b ± 2.2 22.3 b ± 5.3 17.2 b 3.7 33.7a ± 5.5 36.0a ± 5.0 34.6a ± 4.8 31.5a ± 13.40.4 48.1a ± 4.0 28.0 b ± 7.7 28.0 b ± 4.1 14.6c 3.0 25.9a ± 4.2 27.5a ± 11.1 36.0a ± 4.4 37.3a ± 12.30.6 50.1a ± 2.5 31.5 b ± 4.7 36.5 b ± 2.8 11.8c 2.5 27.2a ± 2.7 26.7a ± 15.2 51.8a ± 3.3 49.7a ± 15.50.8 68.2 ± 5.6 37.7 ± 4.0 40.8 ± 3.9 19.8 1.8 29.0 ± 4.2 31.3 ± 12.9 55.1 ± 4.9 52.5 ± 10.9

Mean values (n = 3) ± standard deviations; identical superscripts denote no signiÞcant ( P


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traceability, owing to the lack of any certiÞed reference mate-rials for determining inorganic Se species, the recovery of eachselenium species was determined by using the standard-additionmethod. A recovery of 96% to 105% of each species wasconsidered as satisfactory.

The concentrations of the organic Se fraction were calculatedas the difference between total Se concentration determined us-ing ETAAS and concentration of inorganic selenium compoundsdetermined using HPLCÐHGÐAAS.

Statistical analysis and calculationsThe results were analyzed using STATISTICA 10.0 software

(StatSoft, Tulsa, U.S.A.). Because the data met the assumption on

Gaussian distribution (analyzed with the Shapiro-WilkÕs test),comparison of element accumulation and yielded biomass be-tweencultivation models was assessed with multivariate analyses ofvariance (MANOVA) with the Tukey HSD method as a post hoctest. P


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such as Agrocybe aegerita, and Hericium erinaceus (Niedzielskiand others 2014).

The co-occurrence of equal levels of Se, Zn, and Cu may poten-tially induce various interactions between these elements and altertheir uptake by cultivated mushrooms. Although, in this study, thesimultaneous presence of Cu and Zn decreased the accumulation ofSe in the fruiting bodies, its content in every studied model was stillhigh enough to represent a signiÞcant source of this element for

human nutrition. Importantly, even though some competitivesequestration between Cu and Zn may have occurred, the con-tentof these elements in G. lucidum generally increased with itsconcentration in the substrate.

Our study supports the view that G. lucidum biotransforms inor-ganic Se into organic forms. As observed, the inorganic Se content(particularly Se(IV) form) increased with the degree of its concen-tration added to the substrate, but it was generally lower than theorganic Se share. In turn, increased inorganic Se content in thesubstrate was followed by greater organic Se content in G. lu-cidumfruiting bodies. Analyses of Se distribution in this mushroom revealed that over 50% of incorporated Se is integrated with pro-teins and over 10% with polysaccharides (Zhao and others 2004). Itwas further indicated that enrichment of G. lucidum with Se (up to100 μ g/g) enhanced polysaccharide and protein synthesis (Zhao andothers 2004). Therefore, biofortiÞcation of this mush-room specieswith Se may lead to an additionally increased level of othernutritional components. It is, however, unknown whether the co-occurrence of Cu and/or Zn in substrate may have any impact on protein and polysaccharide content. This issue requires furtherinvestigation.

An important Þnding of this study concerns the effect of supple-mentation on G. lucidum biomass. The substrate addition, partic-

ularly at higher concentrations, caused slight macroscopic changesin the fruiting bodies (thinner fruiting bodies), but no color alter-ations. The appearance of bio-fortiÞed products is usually an important feature for potential consumers and alterations may evendecrease the value of the marketed product (Nestel and others 2006).However, G. lucidum is usually used as a powder or extract, formsin which observed changes should not have any economic impact onthe Þnal product. The decrease in G. lucidum biomass with

increasing substrate element concentration highlights that inorganicSe can also exert toxic effects on mushrooms. It was previouslydemonstrated that increased environmental concentra-tions of thestudied minerals can alter the growth of higher plants throughgeneration of reactive oxygen species, lipid peroxidation, anddecline in sulfur metabolism (Hawrylak Nowak 2013). Theinvolvement of oxidative stress in the adverse response of mush-room growth to mineral supplementation is supported by a recentÞnding that accumulation of Se and Zn in P. ostreatus and P. eryn-

gii is followed by increased synthesis of phenolic compounds and ascorbic acid (Gaseckaþ and others 2015). Further research is nec-essary to fully elucidate the effects of Se, Cu, and Zn on themetabolism of cultivated mushrooms.

It is worth noting that despite the decrease in G. lucidum biomass,it remained at a satisfactory level once the substrate was supple-mented up to a level of 0.4 mM of each element. At this level, theSe+ Cu+ Zn cultivation model produced fruiting bodies contain-ingover 10 mg/kg of organic Se, over 27 mg/kg of Cu and over 37mg/kg of Zn. For adult individuals, the recommended dailyallowance values have been set at 55 μ g for Se, 900 μ g for Cu, and11 mg (for males) and 8 mg (for females) for Zn (FNB 2001; Hu andothers 2012). Even if one considers the partial loss of trace elementswhich may occur during mushroom processing, such as

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istry

Figure 2 –G. lucidum grown on substratessupplemented with different concentrations

and combinations of trace elements.

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washing or cooking (Kalac and Svoboda 2000), the G. lucidum grown on substrate supplemented with 0.4 mM of each elementrepresents a highly nutritional source of Se, Cu, and Zn. Its use invarious forms may be potentially beneÞcial in maintaining traceelement homeostasis and prevent or treat deÞciencies and relateddisorders. Moreover, considering that other compounds found in G.lucidum exhibit signiÞcant anti-inßammatory activities (Bhard-wajand others 2014) and that Se has the ability to decrease thyroid

peroxidase antibody titers (Drutel and others 2013), the consump-tion of bio-fortiÞed mushrooms may also be beneÞcial in the treat-ment of Hashimoto or GraveÕs disease Ñ a use which would needto be further investigated. Nevertheless, it should be emphasized thatthe use of bio-fortiÞed G. lucidum, just as with every other mineralsupplement, should be preceded by an evaluation of body mineralstatus to avoid overloading and its adverse consequences.

Importantly, the obtained results of biomass and accumulatedlevels of elements in fruiting bodies of G. lucidum exhibited lowvariability. This highlights that cultivation of G. lucidum for the purpose of diet supplementation with Se, Cu, and Zn enables highreproducibility and quality standardization of the Þnal prod-uct. Thisis a deÞnite advantage over the commercial production of some othernaturally-based products such as algae whose min-eral contentlargely depends on a culturing and harvesting model (Rzymski andothers 2015). Nevertheless, to ensure the quality of cultivatedspecies and the safety of the Þnal food product to hu-man health,only high-quality substrates should be used as mush-rooms areknown to take up and accumulate signiÞcant amounts of toxiccompounds if they are present in the ambient environment (Mleczekand others 2015c).

ConclusionThis study highlights for the Þrst time that G. lucidum could be

utilized to produce dietary supplements enriched with Se, Cu, andZn through a biofortiÞcation process. To maintain cultivation on asatisfactory level and to yield sufÞcient biomass, the substrate

supplementation should not exceed 0.4 mM of each element. Giventhat the beneÞcial health effects of this mushroom species have beenshown to be wide-ranging, G. lucidum grown on sub-stratesupplemented with trace elements may represent a versatile biopharmaceutical product with a broad application spectrum.

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Introducción

Durante siglos, los hongos han sido recogidos para el consumo y beneficio de la salud, este último se origina principalmente de lamedicina tradicional oriental (Ferreira y otros, 2010). Hoy en día, elinterés mundial del uso farmacéutico y dietético de ruido de fondo salasde cultivo está en aumento. Esto no solo es en gran parte debido a unnúmero creciente de estudios que proporcionen pruebas convincentesde su valor nutricional y terapéutico, sino también como resultado de lacomercialización de los métodos automatizados y relativamente baratasde setas cultivación (Valverde y otros 2015). A diferencia de las setasrecogidas, en el que la acumulación de sustancias tóxicas en las partescomestibles no puede ser controlada (Kalacÿ 2013; Mleczek y otros2015A), el cultivo puede garantizar unas condiciones controladas y dealta calidad que permitan el producto Thnal a ser estandarizada y segura para los consumidores (Chang y Wasser 2012; Cleaver y otros 2012).

Las deficiencias nutricionales son un problema en todo el mundo, nosólo conducen al desarrollo de trastornos graves de salud, sino también

generan

Significan gastos médicos (Ames y Wakimoto 2002). Hay tanta, la

necesidad de desarrollar métodos eficaces de prevención, es unanecesidad urgente. La deficiencias de Se y Cu por lo general ocurren enlas regiones donde su contenido en el suelo es extremadamente baja (Gey Yang 1993; Rayman 2009). Se estima que el 17% de la poblaciónemergente humana se encuentra actualmente en riesgo dedesarrollardeficiencia de Zn (Wessells y Brown 2012). Las setas tienenun potencial particular de prevenir deficiencies debido a: (i) querepresentan los productos naturales de uso de ancho y tradicional envarias cocinas (Kalacÿ 2013); (ii) que se ha demostrado que tomar hastavarios elementos esenciales del sustrato y de acumular aún más en sus partes comestibles (Mleczek y otros 2015b); y (iii) su cultivo comer-cial se puede hacer de costo y tiempo efectivo (Valverde y otros 2015).

G. lucidum (conocido como ÒChinese LingzhiÓ) es una de las especiesde hongos más prometedores, sus propiedades medicinales durantemucho tiempo han sido reconocidos (Bishop y otros 2015). Susextractos son conocidos por sus efectos hipoglucemiantes, elmantenimiento de la flora intestinal, la reducción de la hipertensión, yel control del nivel de colesterol (Berger y otros, 2004; Delzenne yBindels 2015; Ma y otros 2015). La actividad biológica se evidencia deGanoderma lucidum ha llevado a su uso cada vez más popular como unnutracéutico y para el establecimiento de un segmento de mercado demás de 2,5 mil millones de dólares estadounidenses (Li y otros, 2013).

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Q u í m i c a

d e

A l i m e n t o s

Resumen: El Ganoderma lucidum es una importante especie de hongo medicinal y hay un interés continuo en sus propiedades bioactivas. Este estudio evaluó si podría servir, además, como un suplemento nutricional para los oligoelementos: el selenio(Se), cobre (Cu) y zinc (Zn). Las setas se cultivan en sustratos enriquecidos con 0,1 a 0,8 mM de Se inorgánico solo o encombinación con Zn y/o Cu. La suplementación aumento de la acumulación de los elementos en cuerpos fructíferos conindependencia del modelo de cultivo utilizada. G. Lucidum demostró la capacidad de acumular cantidades significante de Seorgánico, como máximo un importe de (i) más de 44 mg / kg cuando el sustrato se complementó solamente con Se, (ii) másde 20 mg / kg en el modelo Se + Cu, ( iii) más de 25 mg / kg en el modelo Se + Zn, y (iv) 15 mg / kg en el modelo Se + Cu+ Zn. La acumulación de Cu y Zn aumentó de manera constante con su sustrato Concentra-ciones iniciales. Lasconcentraciones máximas se encuentran después de la suplementación con 0,8 mM ascendieron a más de 55 mg / kg (Se +Zn) y 52 mg / kg (Se + Cu + Zn) de Zn, y 29 mg / kg (Se + Cu) y más de 31 mg / kg (Se + Cu + Zn) de Cu. Cuanto mayor esla concentración complementado y el número de elementos complementados, menor es la biomasa de los cuerpos fructíferoslucidum G., Sin embargo, todavía sigue siendo alta cuando el sustrato se complementó hasta 0,4 mm con cada elemento.

Estos resultados ponen de manifiesto que G. lucidum puede incorporar fácilmente los elementos del sustrato y que, cuando biofortifica sus cuerpos fructíferos secas puede servir como una fuente nutricional de estos elementos esenciales.Palabras clave: cobre, Ganoderma lucidum, hongo medicinal, selenio, zinc

Aplicación Práctica: Los cuerpos fructíferos de Ganoderma lucidum biofortiÞed con los elementos esenciales, tales como Se,Cu y Zn en este estudio pueden tener un valor potencial tanto para uso alimenticio y medicinal. Como se muestra, el cultivode esta especie de hongo con sustratos enriquecidos con Se, Se y Cu, Se y Zn o Se, Cu y Zn es sencillo, barato, y conduce ala producción de biomasa relativamente alto de los cuerpos fructíferos. Teniendo en cuenta la popularidad de Ganodermalucidum, su biofortificacion con Se, Cu y Zn puede ser de interés comercial.

Potencial de hongos Ganoderma lucidum cultivadaspara la producción de suplementos Enriquecido conelementos esencialesPiotr Rzymski, Mirosław Mleczek, Przemysław Niedzielski, Marek Siwulski, and Monika Ga˛secka

MS Enviado 20151668 10/07/2015, 12/12/2015 Aceptado.

Autor Rzymsk es con el Departamento de Medicina

Ambiental, Poznan Univ. De Ciencias Médicas, Poznan,

Polonia’. Autores Mleczek y Gasecka˛ están con

Departamento de Química, Universidad de Poznan. De

Ciencias de la Vida, Poznan, 'Polonia. Autor Niedzielski es

la Facultad de Química de la Universidad Adam Mickiewicz.

En Poznan, 'Poznan,' Polonia. Autor Siwulski es con el

Departamento de Cultivos Vegetales, Poznan Univ. De

Ciencias de la Vida, Poznan, 'Polonia. Dirija sus preguntas

al autor Rzymski (E-mail: [email protected]).

D e l i n s t i t u t o d e t e c n o

l o g í a d e a l i m e n t o s

2016 Instituto de Tecnólogos de Alimentos R doi:

10.1111 1750-3.841 13212

Vol. 8, Nr. 3, 2016 Diario de Ciencia de Alimentos C587


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Ganoderma lucidum enriquecida con oligoelementos. .

Estudios recientes han demostrado que el Ganoderma lucidum puedeser enriquecida exitosamente con selenio (Se), sino también para que déBiotransformacion de sales inorgánicas de Se a través de su integraciónen proteínas y polisacáridos (Niedzielski y otros 2014). Este es importante si se considera que el papel biológico de Se está mediada principalmente por su forma orgánica, en particular selenoproteínas. Porejemplo, el Se es conocido por ser un cofactor para la reducción dealgunas enzimas Antioxtioxidante y como catalizador para la síntesis de

la hormona esteroide activa (Schomburg y Kohrle¬ 2008). También serequiere para la respuesta inmune apropiada (Hawkes y otros 2001) y re productiva función (Ahsan y otros 2014). Es importante destacar que seha demostrado que los polisacáridos (por ejemplo, SeGLP-2B-1)aisladas de Se enriquecido en G. lucidum mostraron antitumoral activ-dad a través de la inducción de la apoptosis en células de cáncer demama (Shang y otros 2011), mientras que las proteínas aisladas de setascomplementados se exhibieron significativamente propiedadesinmunomoduladoras (Min-Chang y otros, 2014).

Aunque el cultivo de Ganoderma lucidum complementado conelementos seleccionados ha sido objeto de investigaciones anteriores(Matute y otros 2011; Niedzielski y otros 2014), ningún estudio haevaluado hasta ahora su crecimiento y bioacumulación cuando secultivan en sustratos enriquecidos con más de 1 elemento. Elenriquecimiento de un hongo medicinal con 2 o incluso 3 mineralesesenciales puede aumentar significativamente el valor nutricional yfarmacéutica del Thnal y ampliar su aplicación. Esto es particularmenteimportante si se considera que deficientes minerales se han convertidoen un problema nutricional cada vez mayor entre muchas poblacioneshumanas y pueden contribuir al desarrollo de enfermedades crónicas(Ames y Wakimoto 2002). Por ejemplo, el estado de disminución decobre (Cu) y zinc (Zn), ambos elementos fundamentales para laregulación de las funciones celulares, se ha relacionado con un deteriorode las funciones reproductivas y del sistema inmunológico y deneuropatología (Kumar y otros, 2004; Fukada y otros 2011).

Este estudio evaluó si Ganoderma lucidum puede ser implementada conéxito con Se en combinación con Cu y / o Zn y cómo dicha

suplementación afecta el crecimiento de esta especie de hongo. Nuestroestudio se extiende el cuerpo de información sobre el potencial biofortificacion de Ganoderma lucidum con elementos traza esenciales.

Materiales y métodos

Diseño experimental

El sustrato para G. lucidum se preparó a partir de una mezcla de maderade haya, abedul, roble y aserrín (3: 1: 1). La mezcla se suplemento con25% de salvado de trigo, 2% de ßour maíz, y 1% de CaSO4 yhumedecido al 60% de contenido de agua usando agua destilada y luegose esterilizó a 121 ° C durante 1 h. Las siguientes sales se utilizaron enel experimento: selenito de sodio (Na2SeO3 (IV)), selenato de sodio(Na2SeO4 (VI)) suministrado por Acros Organics (Morris Plains, NJ,EE.UU.), cobre selenato (II) (CuSeO4 • 2H2O), y nitrato de cinchexahidrato (Zn (NO3) 2 · 6H2O) suministrado por Sigma-Aldrich (St.Louis, Missouri, EE.UU.). Estas sales se disolvieron en una cantidadsuficiente de agua destilada estéril para obtener las concentracionesadecuadas de 0,1, 0,2, 0,4, 0,6, y 0,8 mM para todos los elementos en elsustrato después de que se había añadido a la misma. Después de laadición de la solución de sal, el contenido de agua del sustrato alcanzóaproximadamente 60%. La acumulación de los 3 elementos y elcrecimiento de los cuerpos fructíferos de hongos se determinaron en 5sistemas diferentes: (1) la referencia (control - c) sistema sin Cu, Se, ysales de Zn, (2) la adición de Se, (3) Se + Además Cu, (4) adición Se +Zn, y (5) Se + Cu + Zn Además del sustrato. El sustrato se mezclóentonces con la freza (en serrín) de G. lucidum GL01, que constituido

3% en relación con el peso húmedo del sustrato, y se coloca en bolsasde polipropileno (20 x 35 cm). Cada bolsa contenía 450 g de sustrato.incubación micelio se dejó a 25 ° C y una humedad relativa de 80% a85%. Una vez que el sustrato estaba

totalmente cubierto con el micelio, que era transferido a la cámara decultivo en la que se mantuvo la temperatura a 25 ªC y la humedadrelativa del aire de 85% a 90%.

El cultivo se irradió con luz, además, fluorecente de 500 lux deintensidad durante 12 horas al día. El servicio para el crecimiento seaireó de una manera tal como para mantener la concentración de CO2

por debajo de 1000 ppm. El rendimiento incluye cuerpos fructíferosenteras cosechadas sucesivamente a medida que maduraban: después de50 dias (control), 53 d (Se + Cu), 58 d (Se + Zn), o 59 d (Se + Cu + Zn).

Reactivos

Todos los reactivos, ácido fosfórico, hidróxido de sodio, disodico hi-dro fosfato, y ortofosfato de potasio (para la preparación de tampón defosfato), fueron de grado analítico (Merck, Darm-stadt, Alemania). Elagua se purifico con un sistema Advantage A10Water PuriÞcationMilli-Q (Millipore Merck, Darmstadt, Ger-muchos). Gas argóncomprimido de N-5,0 pureza (99,999%) se obtuvo de Linde (Poznan,«Polonia). Para Cu, Zn y determinaciones de Se- espectrofotometría,normas comerciales (Merck) fueron IMPLÍCITA. Las soluciones dereserva estándar se almacenaron en botellas de vidrio a 4 ° C en laoscuridad. Normas de baja concentración obtenidos por Dilución de lassoluciones madre se prepararon diariamente. Solución Palladium se preparó a partir de paladio comercial (como nitrato) modifiadosquímicos (Merck).

Recogida de muestras y preparación de setas

Las setas se recogieron cuando su biomasa ya no mostraba signos deaumento adicional. Los cuerpos fructíferos se pesaron, se secaronusando un secador eléctrico SLW 53 enfermedades de transmisiónsexual (Pol-Eko,«± ° Wodzisław Slaski, Polonia þ) a 50 2 ªC durante 48h, se pesó de nuevo para determinar el peso seco, y luego se muelen enun molino de corte Boll 200 (Retsch GmbH, Haan, Alemania) durante1 minuto.

Las muestras en polvo se tamizaron a través de un tamiz de 0,02 mm, yuna muestra de 1,000 g ± 0,001 se extrajo por el ácido fosforico / L 1mol en un baño de ultrasonidos a una temperatura ambiente de 30 min.Las muestras se pasaron luego a través de papel (lavado con 200 ml deagua y tampón fosfato 20 ml). PH de la muestra se ajustó a 6,0-6,5mediante la adición de 10 mol / L de solución de hidróxido de sodio yfinalmente las muestras se diluyeron a 20 ml con tampón de fosfato.

Instrumentos

Para Cu y Zn ßame determinación, la absorción atómica espec-espectrometría (FAAS) SpectrAA 220 FS (Varian, Australia) fue ap- bandas de capas con acetileno estequiométrica ßame (2,0 l / min) y aire

(13,5 L / min). Lámparas de cátodo hueco (Varian, Australia) seutilizaron los siguientes parámetros para Cu: longitud de onda de 324,8nm, raja 0,5, lámpara de 10 mA, y para el Zn: longitud de onda de 213,9nm, raja 1.0, lámpara corriente de 5 mA, ambos con corrección de fondocon una lámpara de deuterio. La calibración se proporciona parasolución estandar a base de agua y no correspondan a la matriz usandoestándares comerciales (Merck). Los coeficientes de variación (R2) para las curvas de calibración superó 0,99. Los límites de determinaciónfueron 0,1 mg / kg con una incertidumbre de aproximadamente el 5,0%(medido como RSD) para ambos elementos determinados.

Para la determinación de Se, de absorción atómica electrotérmica espec-espectrometría (ETAAS) SpectrAA 280Z (Agilent Technologies, Mul-tumba, Victoria, Australia) con corrección de fondo Zeeman

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Quí mi c ad e

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Se aplicó. Una lámpara de cátodo hueco de selenio (longitud de onda de196,0 nm, raja 1,0 nm, y la corriente 10 mA) y se utilizó un programade temperatura se ha optimizado de la siguiente manera: el secado de 85a 120 ° C durante 55 s; calcinación a 1000 ° C durante 8 s; atomización

de 2600 ° C. Se han usado tubos de grafito pirolítico y la solución de paladio como un modificador químico (10 l de 500 mg / L para 20 l demuestra). Se proporcionó calibración de este método para la soluciónestándar a base de agua sin juego de matriz utilizando estándarescomerciales (Merck). El r2 para curvas de calibración excede 0,99. Ellímite de detección fue de 0,01 mg / kg y se obtuvo la incertidumbre delos resultados (medida como RSD) a un nivel de 5,0%.

La incertidumbre de los resultados se produce principalmente por laetapa de preparación de la muestra y, en general fue similar para FAASy ETAAS. La trazabilidad de los dos procedimientos analíticos secontroló por análisis de material de referencia certificadas (CS-M-1,Inst. De Química Nuclear y Técnica, Varsovia Polonia, distribuido porlas Normas LGC, Reino Unido) después de la extracción del ácido

fosfórico. Los valores obtenidos fueron 8,63 ± 0,45, 55,78 ± 2,34 y 1,22± 06 mg / kg para los valores certificados: 9,12 ± 0,83, 60,94 ± 4,62 y1,37 ± 0,11 mg / kg para el Cu, Zn y Se respectivamente. Lasrecuperaciones fueron del 95% para el Cu, el 92% de Zn, y el 89% deSe, y fueron similares a los obtenidos en estudios anteriores(«Gonzalvez 2009).

En el caso del análisis de las especies de Se, cromatografía líquida dealta resolución con guiones, con generación de hidruros atómicaABSORCIÓN, detección por espectrometría de sistemas (HPLC-HG-AAS) se manejaron como se describe en los documentos anteriores(Kozak 2012; Niedzielski y otros 2015) . El sistema analítico guiónconsistía en un Shimadzu (Kyoto, Japón) cromatógrafo de líquidos (LC-10A), equipado con una bomba de HPLC (LC-10AT), una

de aniones Supelco (Bellefonte, Pa., EE.UU.) LC-SAX1 (250 mm, 4,6mm de diámetro, tamaño de las partículas de resina 5 micras) contermostato por un horno de columna (CTO-10ASvp). La carrera

cromatográfico fue isocrática a 3 ml / min con un volumen de inyecciónde 200 l. Las mediciones se realizaron con un espectrómetro ModeloSpectraAA 220FS (Varian, Australia), equipado con una lámpara decátodo hueco Ultraa selenio.

Las especies de selenio Se (VI) no forma un hidruro volátil, por lo quecon el fin de recibir una señal analítica en el sistema HG-AAS, fuenecesario llevar a cabo una reducción preliminar de Se (VI) a Se (IV).La reducción se llevó a cabo en línea por calentamiento de la SAM-PLE(90 a 100 ° C) con el agente reductor: solución de tiourea / L 0,5 mol en10 mol / L de ácido clorhídrico (Kozak 2012). El eluato de la columnacromatográfica se unió a la corriente del agente (tasa ßow 1 ml / min dela bomba peristáltica) reducir a través de un acoplamiento en forma deT y se dirige al asa capilar Tygon (diámetro interno de 0,82 mm) se

calienta en un baño de agua. La salida de bucle capilar se conecta alsistema de generación de hidruros. Por lo tanto la analítica tubo detransferencia sistemas de PEEK del eluyente de la columna de LC a launidad de generación de hidruro fue insertado en un manguito deTygon. El sistema de generación de hidruros continua (modelo deVGA-77; Varian, Australia) consistía en una bomba de manguera de 4canales controlados de forma manual con tubo Tygon (0,6 mm dediámetro interno), una bobina de reacción (PTFE tubo de 0,8 mm dediámetro, 75 cm de longitud), y conectores de 3 vías. El separador gasliquido estaba hecha de vidrio y el volumen muerto interior fue de 3 ml.Para la atomización de los hidruros de selenio (detectado en 196,0 nm),un controlador de calentamiento, una manta de calefacciónelectrotérmicamente, y un tubo de cuarzo (modelo ETC-60; Varian,Australia) se calentó a 900 ° C, fueron utilizados.

Se(IV) Se(VI)

Elementos adicion (mM) Se Se+Cu Se+Zn Se+Cu+Zn Se Se+Cu Se+Zn Se+Cu+Zn b

± 0.1ab

± 0.32.8a

± 1.5ab 0.5 0.1a 0.0 0.2a

±0.1 0.2a

±0.0 0.2a

± 0.0control 0.2a 0.5ab ab 1.7 b a a a a0.1 12.6a ± 2.4 8.7 b ± 1.8 8.2 bc ± 2.7 2.2c 0.7 0.1a ± 0.0 0.1a ± 0.0 0.2a ± 0.1 0.1a ± 0.0

0.2 22.3a ± 1.6 11.8 b ± 2.0 9.6 b ± 2.4 3.9 b 1.4 0.2a ± 0.1 0.4a ± 0.2 0.5a ± 0.2 0.2 b ± 0.1

0.4 31.8a ± 1.29.9

±7.0 9.9 2.4 2.5 1.4 2.9 0.7 2.8

±1.5 1.7

±0.3 0.7

±0.2

bc ab c1.5

4.6a 4.5a 3.6a 0.7 0.5 0.10.6 19.6a ± 0.7 9.4ab ± 4.5 12.4ab ± 3.2 2.7 b 0.4

b ± 0.4 0.4 ab± 0.5 1.1 a

±0.5

ab ±0.8 23.0 ± 4.7 16.4 ± 4.4 13.7 ± 2.7 4.3 ±3.2 ± 0.2 ± 0.1 ± 0.3 ± 0.2

einorg

eorg

Elementos adicion(mM) Se Se Cu Se Cu Zn Se Se Cu Se Zn Se Cu Zn0.3 b 0.0 0.8 ab

+ Sea+Zn+

ab + a 1.0 8.9a+

1.9 a+ +a +

contro a ab ± . 3.0 ± . 1.9 b . 8.8a a ± 6.6a ± . 7.9a ± 0.2ab0.1 12.7a ± 2.4 8.9 b ± 1.8 8.4 bc ± 2.8 2.3c 0.7 14.7a ± 2.7 9.2a ± 0.7 9.4a ± 1.2 11.5a ± 4.20.2 22.5a ± 1.7 12.2 b ± 2.2 10.2 b ± 2.5 4.1 b 1.4 16.9a ± 1.0 12.9a ± 1.2 12.1a ± 2.8 13.1a ± 2.7

0.4 34.6a0.5 12.7

±8.5 11.6 2.2 3.1 1.6 17.2 3.7 15.3

±1.8 16.4

± 2.5 11.4c ±2.3

1.1 14.0 ab c 1.6 a 17.5a 20.6a 0.9

0.6 24.3a ±

16.8ab ± 4.9 15.9ab ± 2.5 3.1 b ± 25.9a ± 2.4

20.9 bc ± 0.6

26.0 b ± 2.1 8.6c ±

0.8 23.4 ± 4.8 ± 4.4 14.8 ± 2.6 4.8 3.2 44.8 ± 4.3 ± 1.6 ± 2.4 15.0 ± 2.1Elementos Se total Cu Znadicion (mM)

Se Se+

Cu Se+

Zn Se

+

Cu

+

Zn Se+

Cu Se

+ +

Se

+

Zn Se+

Cu

+

ZnCu Zna

9.7

a

2.3 9.6

a1.2

9.8

a a a a a

control 9.1a ± 1.0 ± 0.6 17.4a ± 3.3 15.1a ± 1.8 5.8a ± 1.0 5.2a ± 1.3ab ab b

0.1 27.4a ± 2.5 18.1 b ± 2.4 17.8 b ± 3.9 13.9 b 4.9 24.6a ± 3.2 22.7a ± 6.6 28.1a ± 5.5 29.1a ± 14.90.2 39.5a ± 2.7 25.1 b ± 2.2 22.3 b ± 5.3 17.2 b 3.7 33.7a ± 5.5 36.0a ± 5.0 34.6a ± 4.8 31.5a ± 13.40.4 48.1a ± 4.0 28.0 b ± 7.7 28.0 b ± 4.1 14.6c 3.0 25.9a ± 4.2 27.5a ± 11.1 36.0a ± 4.4 37.3a ± 12.30.6 50.1a ± 2.5 31.5 b ± 4.7 36.5 b ± 2.8 11.8c 2.5 27.2a ± 2.7 26.7a ± 15.2 51.8a ± 3.3 49.7a ± 15.50.8 68.2 ± 5.6 37.7 ± 4.0 40.8 ± 3.9 19.8 1.8 29.0 ± 4.2 31.3 ± 12.9 55.1 ± 4.9 52.5 ± 10.9

Tabla 1-Contenido (mg / kg de peso seco) de determinadas formas de Se en G. lucidum que crece en sustratos con Si (VI) / Se (VI) / adición deCu / Zn.

Los valores medios (n = 3) ± desviaciones estándar; superíndices idénticas designan sin significancia de diferencia (P


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Se determinó un número de parámetros de validación que caracterizanel método analitico. La calibración se proporcionan para solución a basede agua estándar preparada en el laboratorio a partir de sales de seleniosólidos: selenito de sodio (Na2SeO3) y selenato de sodio (Na2SeO4) para Se (IV) y Se (VI), respectivamente (Merck). El r2 para curvas decalibración excede 0,99. Se obtuvieron límites de detección de 0,01 mg/ kg tanto para Se (IV) y Se (VI) y la incertidumbre de los resultados

(medida como desviación estándar relativa) a un nivel de 10% paraambas formas de selenio. Como era imposible calcular la medición detrazabilidad, debido a la falta de cualquier referencia certificación demateriales para la determinación de las especies de Se inorgánicos, larecuperación de cada especie de selenio se determinó utilizando elmétodo estándar de adición. Una recuperación de 96% a 105% de cadaespecie se consideró como satisfactoria.

Figura 1-La biomasa (media ± DE) de Ganoderma lucidum cultivadoen Se, Se + Cu, Se + Zn y modelos Se + Cu + Zn (n = 3). Idénticossuper-

guiones denotan diferencias significativas (P


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Discusión

Hay un creciente interés en la investigación de la biofortificaion de setascultivadas con oligoelementos. Generalmente, el sustrato utilizado parael cultivo solamente se complementa con un elemento a la vez. En talescondiciones, diversas especies de hongos, incluyendo Pleurotus eryngii,Pleurotus ostreatus, y nameko Pholiota

(Niedzielski y otros 2015), han demostrado tener significancia yacumular Se en sus partes comestibles. Por otra parte, nuestro estudio piloto ha demostrado que el Ganoderma lucidum puede tardar hastadecididamente mayores concentraciones de Se que otras especies dehongos medicinales tales como: Agrocybe aegerita, y erinaceusHericium (Niedzielski y otros 2014).

La coocurrencia de los mismos niveles de Se, Zn, Cu y puede poten-cialmente inducir diversas interacciones entre estos elementos y alterarsu absorción por hongos cultivados. Aunque, en este estudio, la presencia simultánea de Cu y Zn disminuyó la acumulación de Se en loscuerpos fructíferos, su contenido en cada modelo estudiado era todavíasuficientemente alta como para representar una fuente significante deeste elemento para la nutrición humana. Es importante destacar que, a

pesar de que algunos de secuestro de competencia entre Cu y Zn puedehaber ocurrido, en contienda de campaña de estos elementos en G.lucidum generalmente aumenta con la concentración en el sustrato.

Nuestro estudio apoya la opinión de que G. lucidum biotrans organicade Se en formas orgánicas. Como se observa, el contenido de Seinorgánico (particularmente Se (IV) forma) aumentó con el grado de suconcentración añadió al sustrato, pero era generalmente más baja que la proporción orgánica Se. A su vez, el aumento de contenido de Seinorgánico en el sustrato fue seguido por un mayor contenido de Seorgánico en cuerpos fructíferos lucidum G.. Los análisis de ladistribución de Se en este hongo revelaron que más del 50% de Seincorporado está integrado con los pro-proteínas y más del 10% de polisacáridos (Zhao y otros, 2004). Se indicó además que elenriquecimiento de Ganoderma lucidum con Se (hasta 100 mg / g) elaumento de la síntesis de proteínas y polisacáridos (Zhao y otros, 2004).Por lo tanto, biofortifiacion de esta especie papilla de estar con Se puedellevar a un aumento adicional del nivel de otros componentesnutricionales. Es, sin embargo, se desconoce si la co-ocurrencia de Cuy / o Zn en el sustrato puede tener cualquier impacto en el contenido de proteínas y polisacáridos. Este problema requiere más investigación.

Un importante de este estudio se refiere al efecto de suavementación dela biomasa lucidum G.. La adición de sustrato, particialmente enconcentraciones más altas, causó leves cambios macroscópicos en loscuerpos fructíferos (cuerpos fructíferos) más delgados, pero no haycolor alteraciones. La aparición de productos biofortificados suele seruna característica importante para los consumidores potenciales yalteraciones incluso puede disminuir el valor del producto

comercializado (Nestel y otros, 2006). Sin embargo, Ganodermalucidum se utiliza por lo general como un polvo o extracto, formas enlas que los cambios observados no deberían tener ningún impactoeconómico sobre el producto Thnal. La disminución de la biomasaGanoderma lucidum con el aumento de concentración de elementosdestacados sustrato que inorgánica Se también puede ejercer efectostóxicos sobre las setas. Se demostró previamente que el aumento deConcentraciones ambientales de los minerales estudiados puede alterarel crecimiento de las plantas superiores a través de la generación deespecies reactivas del oxígeno, la peroxidación de lípidos, y ladisminución en el metabolismo de azufre (Hawrylak Nowak 2013). Laimplicación del estrés oxidativo en la respuesta adversa de crecimiento, papilla piezas a la suplementación mineral es apoyada por una recienteÞnding que la acumulación de Se y Zn en P. ostreatus y P. GII es seguido por aumento de la síntesis de compuestos fenólicos y ácido ascórbico

(Gaseckaþ y otros 2015). La investigación adicional es NEC paradilucidar plenamente los efectos de Se, Cu, Zn y en el metabolismo delos hongos cultivados.

Vale la pena señalar que a pesar de la disminución de la biomasalucidum G., se mantuvo a un nivel satisfactorio una vez que el sustratoera flexiblementado hasta un nivel de 0,4 mM de cada elemento. En estenivel, los cuerpos fructíferos Se + Cu + Zn modelo de cultivo producidas con una concentracion superior a 10 mg / kg de Se orgánico,más de 27 mg / kg de Cu y más de 37 mg / kg de Zn. Para las personasadultas, los valores de la cantidad diaria recomendada se han fijado en55 mg de Se, 900 g de Cu y 11 mg (para los hombres) y 8 mg (para lasmujeres) de Zn (FNB 2001; Hu y otros, 2012). Incluso si se tiene encuenta la pérdida parcial de elementos traza que pueden ocurrir durante

el procesamiento de hongos, tales como


Figura 2-G. lucidumcrecido en sustratos

suplementado condiferentes concentraciones

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lavado o cocción (Kalac y Svoboda 2000), el G. lucidum crecido en elsustrato suplementado con 0,4 mM de cada elemento representa unafuente altamente nutricional de Se, Cu y Zn. Su uso en diversas formas puede ser potencialmente beneficas en el mantenimiento de lahomeostasis de elementos traza y prevenir o tratar deficiencias ytrastornos relacionados. Por otra parte, teniendo en cuenta que otroscompuestos que se encuentran en G. lucidum exhiben significantes

actividades anti-inflamatorias (bHard-waj y otros 2014) y que el Setiene la capacidad de disminuir los títulos de anticuerpos contra la peroxidasa tiroidea (Drutel y otros 2013), el consumo de setasfortificadas también pueden ser beneficas en el tratamiento unificaciónde Hashimoto o enfermedad GraveÕs Ñ un uso que tendría que serinvestigado más a fondo. Sin embargo, hay que destacar que el uso de bio-fortificacion de Ganoderma lucidum, al igual que con cualquier otrosuplemento mineral, debe ir precedida de una evaluación de lacondición del mineral hacia el cuerpo para evitar la sobrecarga y susconsecuencias adversas.

Es importante destacar que los resultados obtenidos de la biomasa y losniveles acumulados de los elementos de los cuerpos fructíferos deGanoderma lucidum exhibieron una baja variabilidad. Esto pone demanifiesto que el cultivo de G. lucidum para el propósito de lasuplementación de la dieta con Se, Cu, Zn y permite una altareproducibilidad y normalización de la calidad de la Thnal . Esta es unaventaja que define sobre la producción comercial de algunos otros productos a base de forma natural, tales como las algas cuya mineralcontenido depende en gran medida en un modelo de cultivo y cosecha(Rzymski y otros 2015). Sin embargo, para asegurar la calidad de lasespecies cultivadas y la seguridad del producto alimenticio Thnal parala salud humana, sólo sustratos de alta calidad deben utilizarse comoruido de fondo, en habitaciones son conocidos para captar y acumularcantidades significante de compuestos tóxicos si son presente en elentorno ambiente (Mleczek y otros 2015c).

Conclusión

Este estudio pone de manifiesto por el tiempo que Þrst G. lucidum podría ser utilizado para producir suplementos alimenticiosenriquecidos con Se, Cu, Zn y a través de un proceso de biofortificacion.Para mantener el cultivo en un nivel satisfactorio y para producir biomasa sufÞcient, la administración de suplementos de sustrato nodebe exceder de 0.4 mM de cada elemento. Dado que los efectos en lasalud beneficial de esta especie de hongos han demostrado ser de granalcance, G. lucidum cultiva en el suplementado con elementos traza puede representar un producto biofarmacéutico versátil con un amplioespectro de aplicación.

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