Manual de Tecnicas de Estudio de Fauna

7/26/2019 Manual de Tecnicas de Estudio de Fauna

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2015SoniaGallina Tessaro

Editora

MANUALde tcnicas del

estudio faunade la


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MANUALde deltcnicas

estudio faunade la


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Primera edicin, 2015

D.R. por Instituto de Ecologa, A.C.Carretera antigua a Coatepec No. 351,

El Haya, Xalapa 91070, Veracruz, Mxico

ISBN 978-607-7579-45-8, primera edicin

Ttulo: Manual de tcnicas del estudio de la faunaEditora: Dra. Sonia Gallina Tessaro

Impreso en Mxico ~ Printed in Mexico

Publicacin en lnea:

http://www.inecol.edu.mx/inecol/libros/Manual_de_ tcni-cas_del estudio_de_la_fauna.pdf

Forma sugerida para citar este libro:Gallina, S. (ed.) 2015.Manual de tcnicas del estudio de la

fauna. Instituto de Ecologa, A.C. Xalapa, Veracruz, Mxico.

Revisin de estilo, diseo y formacin editorial: InstitutoLiterario de Veracruz, S.C.

Fotografas de Alberto Gonzlez Gallina con excepcin delvenado temazate que es de Alejandro Gonzlez Gallina

D.R. Ninguna parte de esta publicacin, incluyendo el diseo de lacubierta, puede ser reproducida, traducida, almacenada o transmitida

en manera alguna ni por ningn medio, ya sea elctrico, qumico,mecnico, ptico de grabacin o de fotocopia, sin permiso previo del

editor. Prrafos pequeos o figuras aisladas pueden reproducirse,dentro de lo estipulado en la Ley Federal del Derecho de Autor y el

Convenio de Berna, o previa autorizacin por escrito de la editorial.


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Sonia Gallina TessaroEditora

2015

MANUALde tcnicas del

estudio faunade la


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PhD. Martn Ramn Aluja Schuneman HoferDIRECTOR GENERAL

L.A. Rubey Baza RomnDIRECTOR ADMINISTRATIVO

Dr. Guillermo ngeles lvarez

SECRETARIO ACADMICO

M.C. Alberto Rsquez ValdepeaSECRETARIO TCNICO


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ndice de Cuadros

ndice de Figuras

Introduccin

Lista de Participantes

Captulo 1.Tcnica de colecta, manejo y envo de muestras biolgicas de

fauna silvestre. Luis M Garca Feria, Arturo BarbachanoGuerrero y

Antonio A. Vsquez Aguilar.

Captulo 2. Tcnicas de campo y laboratorio para el estudio de parsitos.

Diego Santiago - Alarcon.

Captulo 3. Aplicaciones del anlisis de istopos estables para el manejo y

conservacin de fauna silvestre. Eduardo Njera Hillman.

Captulo 4. Mtodos estadsticos aplicados al estudio de vertebrados.

Dante Alfredo Hernndez Silva y Gerardo Snchez Rojas.

Captulo 5. Evaluacin de la diversidad de especies en ensamblajes de ver-

tebrados: un primer acercamiento midiendo y comparando la riqueza

de especies. Eduardo Pineda y Claudia E. Moreno.

Captulo 6.Anlisis de viabilidad poblacional aplicado al manejo de fauna.

Salvador Mandujano.

Captulo 7.Tcnicas para estimar la capacidad de carga para herbvoros.Salvador Mandujano y Sonia Gallina.

Captulo 8.Tcnicas para el estudio de murcilagos. Areli Rizo - Aguilar,

Luis Gerardo vila - Torresagatn, Liliana Fuentes Vargas, Ana Cristel

Nuez Lara, Gabriela I. Flores Nuez, Sergio Albino Miranda.

Captulo 9.Mtodos de investigacin social: fundamentos, tcnicas y apor-

taciones para el entendimiento de las relaciones sociedad - vida silves-

tre. Alicia Castillo y Juan L. Pea - Mondragn.

ndice


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Captulo 1

Cuadro 1.1.Muestras adecuadas en funcin del sitio anatmico de estudio.

Cuadro 1.2.Requerimiento de conservacin en funcin del mtodo diag-

nstico a utilizar.

Cuadro 1.3.Ejemplos de algunos sistemas de transporte de muestra y su

uso final.

Captulo 4

Cuadro 4.1.Cuatro tipos de diseos y pruebas estadsticas univariadas.

Captulo 9

Recuadro 9.1.Acceso a campo.

Recuadro 9.2.Observacin participante.

Recuadro 9.3.Qu incluir en las notas de campo?

Recuadro 9.4.Preparacin y conduccin de entrevistas individuales.

Recuadro 9.5.Preparacin y conduccin de grupos focales.

Recuadro 9.6.Preparacin y levantamiento de encuestas.Recuadro 9.7.Preparacin y facilitacin de talleres (participativos y otros).

ndice de cuadros


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Captulo 1

Figura 1.1. Sistemas comerciales para el transporte de muestras.

Captulo 2

Figura 2.1. Poste para sostener la red y tensores de la red que se colocan en

el poste

Figura 2.2. Pasos para colocar una red de niebla.

Figura 2.3. Manera correcta de sostener un ave en la mano.

Figura 2.4. Ave en posicin para tomar muestra de sangre de la vena del

ala y puncin de la vena braquial.

Figura 2.5a. Obtencin de la sangre usando un tubo microcapilar con hepa-

rina.

Figura 2.5b. Material necesario para guardar la muestra de sangre y prepa-

rar los frotis sanguneos.

Figura 2.5c.Estacin de trabajo de campo.

Figura 2.6. Preparacin de frotis sanguneos.

Figura 2.7. Cajas para guardar porta objetos con capacidad para 24 mues-

tras (estas se utilizan en el campo, figura izquierda) y para 100 mues-

tras (figura derecha).Figura 2.8.Mtodo alternativo para guardar los porta objetos utilizando

papel.

Figura 2.9.Colorante Giemsa disuelto en buffer salino listo para ser verti-

do en cajas o contenedores Coplin.

Figura 2.10.Bandeja de secado.

Figura 2.11.Foto de un microscopio ptico.

ndice de figuras


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Figura 2.12.Parsitos del Orden Haemosporida que infectan a las aves.

Figura 2.13.Diagrama general de medidas morfolgicas de longitud (arri-

ba) y ancho (abajo) que son usados para la descripcin de especies de

parsitos haemosporideos.Figura 2.14.Fotos de clulas blancas tomadas de frotis sanguneos de perico.

Captulo 3

Figura 3.1. Reaccin metablica simplificada mostrando el fracciona-

miento isotpico.

Figura 3.2.Estructura de isotpica de carbono y nitrgeno de un sistema

con plantas C3 (arbustos) y C4 (pastos), consumidas por herbvorosramoneadores y pastadores.

Figura 3.3.Determinacin de la proporcin de individuos provenientes de

localidades de origen geogrfica e isotpicamente distintas.

Captulo 4

Figura 4.1.La indagacin cientfica se realiza mediante un ciclo dinmico,

de dos componentes que estn ligados.

Figura 4.2.Distribucin de la frecuencia de dos variables aleatorias, la

longitud total y el largo total del tamao de cuerno de los machos del

escarabajo Phaneus adonisque habita la Barranca de Metztitln.

Figura 4.3. Representacin grfica de lo que son una poblacin, una mues-

tra y una unidad de observacin, utilizando como ejemplo una pobla-

cin de patos, Anas platyrhynchos diazi.Figura 4.4. Representacin de los diferentes diseos de estudios.

Figura 4.5. rbol de decisin para escoger los mtodos estadsticos ms

adecuados en los diseos de estadstica univariada ms comunes.


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Captulo 5

Figura 5.1. Ejemplo de un diseo de muestreo considerando un esfuerzo

de colecta similar, en cada ambiente y en cada fragmento o parcela

que conforman a ese ambiente.Figura 5.2.Cobertura de la muestra y dficit de la muestra determinadas

en funcin de las abundancias relativas del conjunto de especies que

forman el ensamblaje.

Figura 5.3.Ejemplo del formato y arreglo de los valores para calcular la

cobertura de la muestra en una hoja de clculo.

Figura 5.4. Formatos de bases de datos que pueden ser usados como

archivos de entrada en el programa EstimateS v. 9.1 para generar cur-vas de acumulacin.

Figura 5.5.Curvas de acumulacin de especies de dos ensambles en fun-

cin del nmero de individuos registrados.

Figura 5.6. Comparacin de la riqueza de especies de ocho ensambles.

Captulo 6

Figura 6.1.Cambios de la abundancia (N) de una poblacin a travs del tiempo.

Figura 6.2. El efecto vrtice o vortex.

Figura 6.3. Componentes o pasos generales de un proceso de anlisis de

viabilidad poblacional.

Figura 6.4. Cambio en la probabilidad de extincin (Pe) o de persistencia (1

Pe) conforme el porcentaje de decline de la poblacin cambia.

Captulo 7

Figura 7.1.Clasificacin de las tres diferentes aproximaciones y mtodos

para estimar la capacidad de carga (K).

Figura 7.2.Relacin hipottica entre la densidad de venados, comporta-

miento productivo individual, peso corporal y produccin/unidad de

rea.


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Figura 7.3. Modelo de cambio en la capacidad de carga (K) en funcin de la

cantidad o superficie de hbitat y de la calidad del hbitat medida a

travs de algn ndice.

Captulo 8

Figura 8.1.Partes de una red de niebla.

Figura 8.2.Colocacin de redes de niebla en pasos de vuelo y en cuerpos

de agua.

Figura 8.3.Equipo necesario para hacer uso de redes de niebla.

Figura 8.4.Oscilograma y espectrograma de los pulsos, de una especie de

la familia Molossidae.Figura 8.5.Interfaz de Sonobat mostrando una secuencia de una especie

de la familia Vespertilionadae.

Figura 8.6. Interfaz de Echo Meter Touch con sonogramas de la familia

Vespertilionidae.

Figura 8.7.Mtodo directo de estimacin de murcilagos (A. jamaicensis)

en un refugio caverncola.

Figura 8.8.Sistema de iluminacin, grabacin de video y deteccin acsti-

ca simultneo en un refugio caverncola.

Figura 8.9.Toma de muestra de sangre.

Figura 8.10.Transportadora de murcilagos.


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Sergio Albino Miranda.Facultad de Ciencias Biolgicas, Universidad Autno-

ma del Estado de Morelos ([email protected]).

Luis Gerardo vila-Torresagatn. Facultad de Ciencias Biolgicas, Universi-

dad Autnoma del Estado de Morelos ([email protected]).

Arturo Barbachano-Guerrero. Laboratorio de Medicina de Conservacin,

Seccin de Estudios de Posgrado e Investigacin, Escuela Superior de

Medicina, Instituto Politcnico Nacional ([email protected]).

Alicia Castillo lvarez .Instituto de Investigaciones en Ecosistemas y Susten-

tabilidad, UNAM-Campus Morelia ([email protected]).

Gabriela I. Flores Nez. Facultad de Ciencias Biolgicas, Universidad Aut-

noma del Estado de Morelos ([email protected]).

Liliana Fuentes Vargas. Facultad de Ciencias Biolgicas, Universidad Aut-


Sonia Gallina Tessaro. Red de Biologa y Conservacin de Vertebrados, Insti-

tuto de Ecologa, A.C., Carretera antigua a Coatepec No. 351, El Haya,

C.P. 91070, Xalapa, Ver., Mxico ([email protected]).Luis M Garca Feria. Red de Biologa y Conservacin de Vertebrados, Instituto

de Ecologa, A.C., Carretera antigua a Coatepec No. 351, El Haya, C.P.

91070, Xalapa, Ver., Mxico ([email protected]).Salvador Mandujano Rodrguez.Red de Biologa y Conservacin de Verte-

brados, Instituto de Ecologa, A.C., Carretera antigua a Coatepec No.

351, El Haya, C.P. 91070, Xalapa, Ver., Mxico (salvador.manduja-

[email protected])

Claudia E. Moreno.Centro de Investigaciones Biolgicas, Universidad Aut-

noma del Estado de Hidalgo. Pachuca, Hidalgo, Mxico (cmore-

[email protected])..

lista de participantes


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Eduardo Njera Hillman. COSTASALVAJE A.C. Blvd. las Dunas 160-203,

Fracc. Playa Ensenada, C.P. 22880, Ensenada, Baja California, Mxico.

Institucin donde se llev a cabo la investigacin: Red de Biologa y

Conservacin de Vertebrados, Instituto de Ecologa, A.C., Carreteraantigua a Coatepec No. 351, El Haya, C.P. 91070, Xalapa, Ver., Mxico

([email protected]).

Ana Cristel Lara Nez. Facultad de Ciencias Biolgicas, Universidad Aut-


Juan L. Pea-Mondragn.Instituto de Investigaciones en Ecosistemas y Sus-

tentabilidad, UNAM-Campus Morelia ([email protected]).

Eduardo Pineda Arredondo. Red de Biologa y Conservacin de Vertebrados,Instituto de Ecologa, A.C. Xalapa, Veracruz, Mxico (eduardo.pine-

[email protected]).

Areli Rizo-Aguilar. Facultad de Ciencias Biolgicas, Secretara de Investiga-

cin, Universidad Autnoma del Estado de Morelos (areli.ri-

[email protected]).

Gerardo Snchez Rojas. Laboratorio de Conservacin Biolgica, rea Acad-

mica de Biologa, Instituto de Ciencias Bsica e Ingeniera, Universidad

Autnoma del Estado de Hidalgo ([email protected])

Diego Santiago Alarcn. Red de Biologa y Conservacin de Vertebrados,

Instituto de Ecologa, A.C., Carretera antigua a Coatepec No. 351, El

Haya, C.P. 91070, Xalapa, Ver., Mxico ([email protected]).

Dante Alfredo Hernndez Silva. Laboratorio de Conservacin Biolgica, rea

Acadmica de Biologa, Instituto de Ciencias Bsica e Ingeniera, Uni-versidad Autnoma del Estado de Hidalgo ([email protected]).

Antonio A Vsquez Aguilar.Red de Biologa Evolutiva, Instituto de Ecologa, A.C.

([email protected]).

Apoyo Editorial:Rolando Gonzlez Trpaga. Red de Biologa y Conservacin

de Vertebrados, Instituto de Ecologa, A.C., Carretera antigua a Coate-

pec No. 351, El Haya, C.P. 91070, Xalapa, Ver., Mxico (rolando.gonza-

[email protected])


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agradecimientos

Agradecemos el apoyo econmico brindado por el Instituto de Ecologa, A.C. a

travs de la Secretara Acadmica con el Dr. Guillermo Angeles para hacerposible la publicacin electrnica de este manual. Adems por el apoyo del

Director General, Dr. Martn Aluja Schuneman para realizar el Retiro Acadmi-

co de la Red de Biologa y Conservacin de Vertebrados en septiembre del

2014 (Proyecto 20035-30844), durante cuya estancia se aprovech para que

dos rbitros revisaran cada captulo, por lo tanto agradecemos a los investiga-

dores y tcnicos de la red, as como a los estudiantes de posgrado que partici-

paron: Salvador Mandujano Rodrguez, Eduardo Pineda Arredondo, Diego

Santiago Alarcn, Luis Garca Feria, Fernando Gonzlez Garca, Rolando Gon-

zlez Trpaga, Adriana Sandoval Comte, Pilar Carb Ramrez, Carolina Her-

nndez Lara, Eva Lpez Tello Mera, y en especial a nuestra asistente Roco

Rodrguez por su ayuda en la logstica.


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El proceso de la edicin de un libro, podemos afirmar que es un camino

tortuoso que hay que recorrer para llegar a un final satisfactorio

cuando se tiene el producto final. Por qu digo que es un camino

tortuoso? Porque en un inicio uno concibe la idea a raz de notar una

necesidad de comunicacin de la informacin que se genera a lo largo

de aos de experiencia, de difundir hacia un pblico determinado que le

pueda servir de ayuda y le sea de provecho. Luego entonces sigue un

proceso de reunir, con diversos autores, la informacin pertinente. Para

el proceso de seguimiento, el editor se convierte en una especie de

capataz, por as decirlo, ya que debe estar persiguiendo a los autores.

Esta persecucin es la que lleva ms tiempo, as por ejemplo, para este

manual llev ms de tres aos, aunque parezca mentira, y en el camino

uno piensa que nunca va a lograr ver el final.

Este manual de tcnicas que incluye nueve captulos, fue concebido para

estudiantes, tcnicos e investigadores que quieren incursionar en este

interesante campo de la ecologa, y es un complemento del anterior

Manual de tcnicas para el estudio de la Fauna Silvestreeditado por S.

Gallina y Carlos Lpez-Gonzlez, publicado tambin de forma

electrnica en el 2011 por el INECOL y la Universidad Autnoma de

Quertaro y una segunda edicin con el Instituto Nacional de Ecologa y

Cambio Climtico (INECC) de SEMARNAT.

introduccin


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Aprovecho este espacio para hacer extensivo un agradecimiento a todos

los autores y revisores, por su paciencia y por creer en este arduo

proceso para verlo concluido. Espero que se sientan satisfechos por el

producto final, as como tambin espero que a todos los usuarios que lo

consulten les sirva de ayuda para poner en prctica lo que se plasma

aqu, ya que la finalidad ltima del manual es que sea una herramienta

til para aplicarse en el campo de la ecologa, el manejo y la

conservacin de la fauna silvestre.

Sonia Gallina


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RESUMEN

La obtencin de muestras biolgicas es una de las mayores dificultades para

la investigacin de especies silvestres. Existen varias formas de obtener mues-

tras biolgicas, tanto de manera invasiva como no invasiva; diferentes tcni-

cas han sido desarrolladas para obtener las muestras dependiendo de la espe-

cie de estudio y el objetivo del muestreo. En este captulo, a manera de manual

de campo, se describen de forma general las tcnicas de captura, toma y mane-

jo de muestras para distintas especies de vertebrados y para distintos objeti-

vos de estudio, desde el muestreo para estudios epidemiolgicos infecciosos

(macro y microparsitos) como para estudios en aspectos de gentica de

poblaciones, a partir de animales vivos como de cadveres.

INTRODUCCIN

El trmino medicina de la conservacin fue acuado por Kosch, con la premisa

de que la salud conecta a todas las especies del planeta, al contemplar elaspecto ecolgico de la salud que involucra la degradacin ambiental, el decli-

ne de la biodiversidad y las enfermedades emergentes en humanos y animales

(Kosch 1996). En la medicina de la conservacin, el trabajo multidisciplinario

es lo ms factible para obtener excelentes resultados en los planes de control y

monitoreo de enfermedades, as como el manejo y la conservacin de las espe-

cies (Meffe 1999, Osofsky et al.2000, Spear 2000, Deem et al.2001, Mainka

2001, Norris 2001, Aguirre et al.2002, Karesh et al.2005).

Luis M. Garca Feria, Arturo Barbachano-Guerreroy Antonio A. Vsquez Aguilar

captulo unoTcnicas de colecta, manejo y envo demuestras biolgicas de fauna silvestre


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Las enfermedades tienen un papel importante en la regulacin del tamao, la

densidad, distribucin y estructura de las poblaciones, con efectos sutiles y

consecuencias visibles a largo plazo (Hamilton y Zuk 1982, May 1983, Robin-

son y Bolen 1989, Hudson et al.1992,Zuk et al.1998); no obstante, debido a

que las poblaciones no pueden estar libres de enfermedades, se intenta reali-

zar la diminucin de los riesgos que les producen, as como la transmisin

inter e intraespecie. Para la evaluacin de dichos riesgos, es necesario conocer

a la enfermedad desde un punto de vista de patogenia y ecolgico, realizar su

vigilancia sanitaria y epidemiolgica ya que as se podr detectar la presencia,

recurrencia, emergencia o dispersin de la enfermedad estudiada (Mrneret

al.2002), adems de las caractersticas propias del agente etiolgico.

Recientemente, la necesidad de estudiar las interacciones de las enfermedades

en un contexto ecolgico ha llevado a magnificar el esfuerzo de estas tcnicas

hacia la toma de muestras de animales silvestres terrestres, arborcolas, acuti-

cos, voladores, etc. considerando tambin el agente etiolgico de estudio: infec-

ciosos (macroparsitos: metazoarios; microparsitos: virus, bacterias, proto-

zoarios y hongos), alteradores fisiolgicos (endocrinos y toxinas) o genticos.

La toma de muestras para el diagnstico de patgenos u otros agentes no

infecciosos que producen daos y alteraciones en la fisiologa y la reproduc-

cin (salud) de los seres vivos, en muchos casos, ha sido una de las limitantes

cuando se trata de fauna silvestre. Desde hace mucho tiempo se han realizado

diferentes tcnicas de colecta de muestras, adaptando los mtodos desarro-

llados a partir de las tcnicas de muestreo en humanos, animales domsticos

o de animales de zoolgicos.

Las tcnicas de muestreo se pueden clasificar principalmente en dos tipos, las

no invasivas y las invasivas. Las tcnicas no invasivas son aquellas que no

requieren de la contencin del animal, mientras que para las muestras invasi-

vas, por el contrario, requieren de la contencin del individuo y son las tcni-

cas mayormente usadas para un buen muestreo.

CAPTULO UNO

Manual de tcnicas del estudio de la fauna / Sonia Gallina Tessaro


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La obtencin de muestras pueden realizarse para diferentes objetivos, entre

los cuales tenemos el monitoreo de enfermedadescon el fin de contribuir al

conocimiento de la salud ecolgica y evaluar el impacto de las actividades

humanas en el ecosistema respecto a la aparicin de enfermedades emergen-

tes (enfermedades que aumentan su incidencia o aumentan su rango de distri-

bucin en un lapso de tiempo corto y actual). Para esto, se debe vigilar la inci-

dencia y prevalencia de la enfermedad en la poblacin silvestre, determina-

cin de rango de posibles vectores (si es que la enfermedad lo requiere) y dis-

tribucin y densidad poblacional de estos, el riesgo sobre los animales de pro-

duccin y viceversa, as como el posible riesgo en la salud humana (zoonosis).

En el caso de sospecha de que una enfermedad infecciosa pueda estar cau-sando mortalidad o morbilidad en animales de vida silvestre, es importante

conocer los procedimientos para lograr un muestreo adecuado y representa-

tivo. Estos procedimientos deben dirigirse a anlisis especializados y encon-

trar informacin epidemiolgicamente relevante, sin que exista una desvia-

cin o error que nos pudiera llevar a las conclusiones incorrectas y, peor an,

tomar decisiones errneas en funcin de informacin confusa o no conclu-

yente, que pudiera generar ms problemas de los que se pudieran estar pre-

sentando por la aparicin de un brote infeccioso. Otro factor que debemos

tener en cuenta, es la diferencia entre asociacin y causalidad; la presencia de

un agente reconocido como patgeno en una muestra biolgica, no significa

definitivamente que gener una patologa en el animal de donde proviene la

muestra, pues muchas veces estn presentes como una consecuencia de algu-

na otra patologa, de manera azarosa, o simplemente no estn causando una

infeccin sintomtica.

El estudio y diagnstico de las enfermedades es una rama de investigacin

bastante profunda y requiere de aos de experiencia y tcnicas e instrumenta-

cin especializada, sin embargo el objetivo de sta seccin no es dar un entre-

namiento en diagnstico, sino adiestrar en un correcto manejo de muestras

para que se logre hacer un diagnstico adecuado. Cabe mencionar que el diag-

nstico directo del agente infeccioso consiste en generar evidencia de la pre-

sencia del patgeno, sin embargo, en muchas enfermedades tiene suficiente

Tcnicas de colecta, manejo y envio de muestras biologicas de fauna silvestre

Luis M. Garca Feria, Arturo BarbachanoGuerrero y Antonio A. Vsquez Aguilar


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24CAPTULO UNO

valor diagnstico las metodologas indirectas, como son la bsqueda de anti-

cuerpos especficos o metabolitos del patgeno, como toxinas.

Existe una gran diversidad de vertebrados silvestres con los que uno puede

tener la necesidad de tomar muestras, y la diversidad de enfermedades infec-

ciosas que pueden adquirir es igualmente grande. La variedad de agentes

infecciosos que se han reconocido como causantes de enfermedad en anima-

les (domsticos y de vida silvestre) es sumamente vasta, e incluye organismos

acelulares, como los virus, viroides y priones, y organismos celulares, estos

ltimos pudiendo dividirlos en bacterias y organismos eucariontes (hongos,

protozoarios, helmintos, etc.). El conocimiento de la historia de vida de los

patgenos, sus vectores y distribucin, adems del conocimiento y vigilanciaepidemiolgica, puede ayudar en el desarrollo de programas de recuperacin,

viabilidad y determinacin de amenazas en poblaciones de especies silves-

tres, as como la planeacin de reservas y manejo de poblaciones.

Por otro lado, el crecimiento de la poblacin humana ha llevado a una deman-

da energtica mayor, a la necesidad de produccin de ms alimento y al con-

trol de plagas, y estas necesidades conllevan el uso de sustancias para hacer

ms eficiente la produccin. El uso indiscriminado de pesticidas (herbicidas,

fungicidas e insecticidas y otros qumicos), tambin llamados alteradores

fisiolgicos, afecta las funciones metablicas de muchos organismos, inclu-

yendo al humano, y han sido dispersadas en el aire y en el agua por ms de 50

aos. Por ejemplo, contaminantes inorgnicos en tortuga marinas (Barcel-

Vera 2004); contaminantes orgnicos persistentes (COPs) y su relacin con

hormonas sexuales (Gonzlez-Juregui 2008). Adems de los qumicos que

causan toxicidad en el sistema endocrino, tambin son considerados altera-dores a aquellos que causan dao en el ADN con efectos en el desarrollo. Ade-

ms del monitoreo de la salud del sistema endocrino en la poblacin, determi-

nando los niveles de diferentes hormonas, es necesaria la evaluacin del siste-

ma inmunitario, ya que la presencia de individuos adultos reproductores y

jvenes saludables no necesariamente reflejan la salud de la poblacin.



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Los cambios en el hbitat, como la prdida de continuidad o fragmentacin, la

consecuente fragmentacin de las poblaciones, la disminucin de los tama-

os poblacionales, efectos climticos y catstrofes naturales, han resultado

en la prdida de la variabilidad gentica de las poblaciones de fauna silvestre.

La disminucin de la variabilidad gentica puede estar reflejada en la adapta-

cin y respuesta a la exposicin a patgenos, esto es, a la disminucin en la

respuesta inmunolgica de los individuos, llegando a un potencial epidmico

inminente que puede exterminar a una especie local o regionalmente, o en el

peor de los casos la extincin definitiva. Bajo este esquema, es de suma impor-

tancia verificar y tener un monitoreo de la salud genticade las poblaciones

silvestres.

Para cada tipo de agente etiolgico existen condiciones ptimas de toma, trans-

porte y conservacin de muestras, de manera que no existe una tcnica univer-

sal, pero s existen patrones bsicos que nos ayudarn a que la valiosa muestra

que obtengamos mantenga su viabilidad para el diagnstico de una enferme-

dad, desequilibrio metablico u otra etiologa. Otro problema con el que nos

podemos encontrar, es la dificultad de hacer un diagnstico presuntivo en cam-

po, por lo que no siempre sabremos cul es el tipo y manejo ptimo de la mues-

tra. En este captulo hacemos la descripcin de la teora y las tcnicas bsicas

de manejo de muestras en campo para un exitoso diagnstico, monitoreo de

enfermedades infecciosas, alteradores fisiolgicos y estudios genticos, as

como algunas tcnicas de diagnstico que pueden realizarse en campo.

Eleccin de la muestra

La eleccin de la muestra depender de dos factores principales: la sospecha o

diagnstico presuntivo del agente etiolgico, y el conocimiento de la patog-nesis de la enfermedad que se buscar. Para el primer factor, es necesario reco-

nocer algn sndrome, comportamiento, diferencia temporal de una prevalen-

cia, hospedero especfico o un signo patolgico observable que pudiera ser

patognomnico o fuertemente asociado con una enfermedad, como por ejem-

plo: la coloracin verdosa de la mucosa del estmago muscular es un signo

caracterstico de intoxicacin por plomo en aves acuticas; la aparicin de

lceras en encas y pezuas de bovinos, nos genera la sospecha de fiebre afto-


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26CAPTULO UNO

sa, y podramos dirigir el muestreo para diagnosticar la presencia del agente

que la provoca. Para el segundo factor, requiere conocimientos ms especiali-

zados sobre los rganos o zonas anatmicas que afecta el agente sospechoso,

como en el caso de rabia, sabiendo que el virus slo se replica levemente en

tejido muscular (al comienzo de la infeccin por inoculacin por una mordida)

y fuertemente en tejido nervioso, sera incorrecto tomar una muestra de san-

gre, pues lo ms probable es que no se encuentre una carga viral detectable en

ese tipo de muestra, a diferencia de una muestra de tejido de la herida fresca o

el encfalo de un animal que ha comenzado a presentar sndrome por rabia. En

caso de no sospechar de una enfermedad especfica o considerar varios agen-

tes etiolgicos como posibles causantes de la patologa presentada, es reco-

mendable tomar muestras dirigidas a mltiples enfermedades, de manera quese abarque un espectro amplio sin generar una sobrecarga a la institucin

encargada del diagnstico y los costos no sean demasiado elevados.

Mtodos de colecta de muestras

Los mtodos de colecta de muestras varan de acuerdo a la especie animal de

estudio y de las muestras requeridas como se puntualiz anteriormente. Las

tcnicas que describiremos contemplan la toma de muestras de sangre, mues-

tras de excretas, hisopados (rectal, vagina, oral y nasal), raspado cutneo y

para colecta de ADN.

Colecta de sangre

Aves

En las aves, los sitios de colecta de sangre cambian de acuerdo al tamao ytipo de ave. En general, se consideran las venas radiales y la yugular derecha y

en ocasiones, la vena tarsal en aves acuticas. En aves de tamao pequeo,

como Paseriformes y Trochilinae, es difcil la puncin y la obtencin de vol-

menes suficientes para realizar una biometra hemtica (Ritchie et al.1994);

se considera que entre el uno y el tres por ciento del volumen total de sangre

en animales sanos se pueden colectar a partir del volumen calculado con la1.02ecuacin alomtrica 65(W ), es decir, si un ave pesa 500 g, tiene un volumenkg



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total calculado de 32.05 ml de sangre y se puede obtener una muestra de entre

0.32 y 0.96 ml de sangre (Sedgwick y Martin 1994). Una regla general, para

prevenir el riesgo de hipotensin y falla cardiaca asociada, es que la muestra

de sangre nunca deber exceder de 1 ml por 100 g de peso corporal por mes

(Ancrenaz et al.2003).

Mamferos

Las tcnicas de muestreo en los mamferos, se ajustan principalmente al tama-

o del animal, por ejemplo, en mamferos pequeos, como algunos roedores,

se debe exponer la zona ventral del animal y lograr la extraccin de sangre de

manera intracardiaca. La aguja debe ser insertada en el 4 o 5 espacio inter-

costal, al lado izquierdo inmediato del esternn. La succin debe ser lenta, yaque por el tamao del corazn la presin negativa de la aguja puede colapsar

el rgano. Tambin en mamferos pequeos, la obtencin de sangre puede ser

de la vena caudal en la zona ventral de la base de la cola; en esta tcnica el volu-

men de sangre comnmente es bajo, pero fcilmente se pueden llenar tubos

capilares. Con sta misma tcnica se puede colectar una pequea cantidad de

sangre de murcilagos, pero de la vena superficial radial.

En mamferos de tamao mediano, la venopuncin se realiza prioritariamente

en venas yugulares, radiales, femorales, safenas y/o caudales, sin embargo,

cualquier vaso de calibre suficiente para obtener la cantidad de sangre reque-

rida es buena opcin. En animales de mayor tamao se facilita an ms por el

calibre de los vasos.

Reptiles

Pequeas cantidades de sangre pueden ser colectadas en lagartijas de tamaopequeo a partir de la amputacin de alguna de las uas o de las falanges. Tam-

bin puede puncionarse la vena coccgea ventral, no obstante, se debe tener cuida-

do, ya que en muchas ocasiones las lagartijas pueden auto-amputarse la cola como

reflejo en defensa a la depredacin. La opcin de puncin intracardiaca tambin es

viable, pero slo se deber usar en casos de que no haya otra opcin. Las venas

yugulares son preferidas, al igual que la vena abdominal ventral, en sta ltima, si

no se efecta cuidadosamente, se pueden desarrollar hemorragias serias.


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En serpientes es de eleccin la puncin cardaca, buscando el corazn en el

primer tercio del cuerpo del animal. En serpientes venenosas se debe contener

de manera segura antes de realizar le tcnica. Es recomendada en individuos

mayores a los 300 gramos. Otra opcin de menor riesgo es el seno venoso coc-

cgeo ventral, se debe tener cuidado de no afectar los hemipenes. En animales

sedados, principalmente animales venenosos, pueden puncionarse en las

venas palatinas y las sublinguales.

La tcnica de obtencin de sangre en cocodrilos y tortugas marinas bsica-

mente es la misma; la puncin se hace cerca de la insercin del crneo y las

vrtebras cervicales, en el plexo venoso post-occipital, se pueden obtener un

buen volumen de muestra pero puede mezclarse con linfa. En tortugas semia-cuticas, la obtencin de muestras sanguneas de buen volumen se puede

hacer en la vena yugular, localizada caudodorsal a la membrana timpnica; las

metatarsales, en el plexo venoso braquial; venas ceflicas, en la vena femoral o

en la vena dorsal caudal. En ocasiones es de buena eleccin la puncin carda-

ca, introduciendo la aguja entre las placas pectorales y abdominales del plas-

trn sobre la lnea media (Mautino y Page 1993). Sin embargo, se debe conside-

rar tranquilizar qumicamente al animal.

En tortugas terrestres, se ha considerado las mismas vas que en las semiacuti-

cas; no obstante, se deben anestesiar a los individuos debido a la gran fuerza que

tienen cuando se protegen dentro del caparazn. Por otro lado, pequeas cantida-

des de sangre para microhematocrito o para anlisis genticos pueden obtenerse

de la puncin de los vasos sanguneos de las falanges (GarcaFeriaet al.2015).

AnfibiosEl mtodo de obtencin de sangre en animales del orden Anura, se dirige a la

puncin intracardiaca, la vena abdominal central (Raphael 1993) y al plexo

sublingual (Heatley y Johnson 2009); en salamandras es considerada la vena

caudal y la puncin cardiaca. En especies de gran tamao se pueden puncio-

nar los vasos visibles de las extremidades. Dependiendo del tamao del ani-

mal, es seguro colectar sangre correspondiente a aproximadamente el uno

por ciento del peso corporal en animales sanos (Heatley y Johnson 2009).



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Para todos los vertebrados, las muestras sanguneas podrn servir para obte-

ner slidos totales, niveles de hematocrito, conteo de total y diferencial para

leucocitos. Estos valores variarn dependiendo de la especie, edad, sexo y

temperatura. Adems, las muestras sanguneas se pueden usar para el diag-

nstico de diversas enfermedades, por ejemplo, al separar el suero se podrn

hacer distintas pruebas serolgicas como inmunoensayos enzimticos

(ELISA) o pruebas de aglutinacin, para la deteccin de anticuerpos de enfer-

medades como fiebre del Oeste del Nilo o toxoplasmosis, entre otras. Este tipo

de diagnstico es fcil de realizar in situ, siempre y cuando se cuente con un

lector de ELISA o un microscopio, ya que venden diversos kits comerciales de

diagnstico rpido para una gran gama de enfermedades.

Obtencin de Suero

Para obtener el suero se necesita colocar la muestra de sangre en tubo sin anti-

coagulantes; estos tubos regularmente se diferencian de los dems por tener

un tapn color rojo. Una vez que se tenga la muestra hay dos formas de sepa-

rar el suero del paquete celular, una es por centrifugacin a aproximadamente

4000 rpm con la ayuda de una centrifuga, y la otra es dejando reposar las

tubos para que el paquete celular se sedimente. Es recomendable hacerlo lo

ms pronto posible, pues as se evita la lisis celular y por consecuente la conta-

minacin del suero con compuestos intracelulares. Una vez que se sedimente

el paquete celular, se podr obtener el suero para realizar las pruebas serol-

gicas in situy el resto del suero se podr congelar para ser trasportado al labo-

ratorio de destino y realizar pruebas posteriores.

Obtencin de plasma

Para la obtencin de plasma se recomienda el uso de heparina, ya que puedeprevenir la hemlisis. Para el almacenaje, existen tubos que se caracterizan

por tener un tapn color verde. La heparina se usa a razn de 0.1 a 0.2 mg/ml

de sangre total, evitando as la coagulacin por neutralizacin de la trombina;

sin embargo, no resulta satisfactoria para recuentos de leucocitos o cuando

han de prepararse extensiones de sangre, porque en ste segundo caso, pro-

duce un fondo azul en las preparaciones teidas con el colorante de Wright;

no obstante, no afecta el hematocrito ni el tamao corpuscular. Es importante


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la eleccin del agente anticoagulante, pues algunos mtodos moleculares o

inmunolgicos se ven afectados por ellos.

Una vez obtenida, la muestra es centrifugada o los tubos se mantienen en repo-

so para que el paquete celular sedimente; posteriormente, se puede medir el

hematocrito. Debido al anticoagulante, es factible volver a mezclar el plasma

con el paquete celular y se puede tomar muestras de sangre para realizar

microhematocrito o frotis sanguneos, aunque hay que tomar en cuenta las

desventajas que se tiene con la tincin de Wright.

Pruebas bioqumicas

Cuando se requiere realizar pruebas qumicas de la sangre, se necesita utilizarEDTA como anticoagulante, a menos que se vayan a cuantificar iones de calcio

o magnesio; el tubo a utilizar se caracteriza por tener un tapn de color mora-

do. El EDTA evita la coagulacin por eliminacin del calcio libre de la sangre.

La sangre tratada se puede utilizar para preparar extensiones hasta dos horas

despus de su extraccin, para esto, hay que mezclar minuciosamente la san-

gre si la concentracin de EDTA es superior a 2 mg/ml de sangre total. La san-

gre puede ser almacenada a 4C durante 24 horas sin efecto aparente sobre la

hemoglobina, el hematocrito, el nmero de leucocitos y de hemates; si por lo

contrario la sangre se almacena durante 4 horas a temperatura ambiente, apa-

rece un valor de hematocrito elevado an sin afectar los parmetros restantes.

Tcnica de colecta y manejo de excretas

La colecta y el manejo de las excretas es bsicamente la misma para todas las

especies, sin embargo, hay especificaciones dependiendo de la calidad de la

muestra. Por ejemplo, cuando se tiene la oportunidad de manipular al animal,se pueden obtener muestras frescas de heces. Las muestras frescas para anli-

sis parasitoscpico, en caso de no ser estudiadas inmediatamente, pueden ser

preservadas en formol al 4%, etanol al 70% o mantenerse en refrigeracin a 4C

(Friend y Franson 1999,Marks y Houston 2009). Nunca deben ser congeladas

debido a la posible destruccin de componentes diagnsticos, como el estalla-

miento de los huevos y oocitos de parsitos entricos.



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Tcnicas de muestreo cutneo

El raspado es la tcnica de exploracin que ms se utiliza para la piel. Cuando

se sospecha de dermatofitos (hongos o tias) es necesario cortar el pelo de la

zona afectada, ya sea con tijeras o con mquina. Despus se debe limpiar la

zona con una gasa limpia humedecida en alcohol 70% o agua estril, para reti-

rar detritus y los fragmentos de pelo cortado. Posteriormente, el pelo de la

periferia de la zona afectada es arrancado con pinzas y colocado en el por-

taobjetos y con una hoja de bistur se deben raspar los mrgenes de la lesin.

La muestra obtenida del raspado es colocada en un portaobjetos y protegida

con un cubreobjetos (Mueller 2000,Scott et al.2001).

Cuando se sospecha de acariasis (sarnas), despus de que se hace una limpie-za de la zona afectada como en la tcnica de colecta de dermatofitos, se pelliz-

ca la piel para extraer a los caros. Despus se coloca una o dos gotas de aceite

mineral sobre la piel que no escapen los caros y colectar fcilmente el raspa-

do con la hoja de bistur tan profundo hasta que salgan pequeas gotas de

sangre de la piel. El material recogido es colocado en un portaobjetos exten-

dindolo en una capa delgada y homognea, luego proteger con un cubreobje-

tos (Mueller 2000,Ballweber 2001,Scott et al.2001).

Tcnicas para colecta para estudios fisiolgicos

Actualmente existen varios tipos de tcnicas de deteccin de toxinas y otros

elementos que causan alteracin fisiolgica en los animales. El factor comn

para el diagnstico es mantener la muestra colectada en refrigeracin o conge-

lacin, a partir de animales muertos u otros elementos (p. ej., sedimentos, agua,

granos, etc.) (Friend y Franson 1999). Sin embargo, para el diagnstico in vivode

estos agentes etiolgicos y/o la alteracin fisiolgica producida, es necesario lacolecta de muestras de suero (Friend y Franson 1999), heces y orina (Hodges y

Heistermann 2003,Caney 2010).

La obtencin de suero para estos estudios se realiza a partir de sangre com-

pleta en tubos sin anticoagulante. Posteriormente es centrifugada a 4000 rpm

o se deja reposar para que se separe el paquete celular en dado caso de no con-

tar con una centrfuga (ver detalles en la seccin de obtencin de suero). El


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suero puede mantenerse en refrigeracin por periodos cortos, pero es reco-

mendable mantenerlo en congelacin.

La orina puede ser colectada en campo con el uso de bandejas, en el caso de

especies arborcolas; aspiracin con jeringa o pipeta, en el caso de encontrar

orina estancada o salpicada en las hojas; o por absorcin con papel filtro (Hod-

ges y Heistermann 2003). Si se captura al animal y se mantiene anestesiado, la

orina puede obtenerse por cistocentesis (Caney 2010).

Muchas hormonas son relativamente estables a temperatura ambiente por

varios das, las formas conjugadas de las hormonas son menos estables, lo

ideal es mantener la muestra de orina en refrigeracin para traslados cortos yposteriormente congelarla (


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gre completa por cada 5 ml de solucin. Otra opcin es la sustancia amorti-

guadora y preservadora de RNA, principalmente el RNAlater(Applied Biosy-

stemsLife Technologies, Van Allen Way, Carlsbad, California), con el cual se

pueden mantener las muestras a temperatura ambiente (25C) por una sema-

na o a 37C por 24 horas, pudindose utilizar tambin para preservar ADN.

Cuando el origen del ADN son plumas, las muestras frescas pueden mante-

nerse secas a temperatura ambiente durante dos semanas o hasta por un mes

a 4C y obtenerse ADN de alta calidad (Bello et al.2001). Tambin se pueden

almacenar en gel de silica y mantenerse secas a temperatura ambiente para no

degradar el ADN (Taberlet et al.1999,Balkiz et al.2007) o preservarse en eta-

nol al 70% (Balkiz et al.2007).

Las muestras de pelo deben tener el folculo y pueden obtenerse de manera no

invasiva que arranquen el pelo completo, tomando mayor importancia el

folculo piloso (Valderrama et al.1999,Zielinski et al.2006,Garca-Feria 2008,

Amndola-Pimienta et al.2009). El almacenamiento puede ser de la misma

manera que para las plumas. Se recomienda que el pelo sea almacenado en

bolsas de papel y mantenidas secas (Grossens et al.1998,Woods et al.1999,

Sloane et al.2000). El uso del gel de silica o la congelacin para el almacenaje

de muestras de pelo es la mejor opcin, siendo ms ventajosa la congelacin a

-20C (Roon et al.2003).

Las muestras fecales para estudios de ADN muchas veces no se pueden obte-

ner frescas. Las heces pueden utilizarse tanto frescas (Hoss et al.1992) como

secas (Wasser et al.1997,Daln et al.2004) para obtener las clulas epiteliales

del intestino presentes dentro y en la superficie de la excreta. No obstante, laaccin de las nucleasas presentes en la excreta puede degradar el ADN. Para

minimizar la degradacin por la interferencia de la enzima, se pueden usar

diferentes mtodos de preservacin como la deshidratacin por aire seco, alma-

cenamiento en etanol al 70%, congelacin a -20C, o el uso de sustancias amor-

tiguadoras que contengan altas concentraciones de sales (p. ej., DET,Frantzen

et al.1998). Distintas formas de colecta de ADN de manera no invasiva son des-

critas en Piggot y Taylor (2003). Una forma sencilla es la colecta de la excreta, su


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secado en papel absorbente y su almacenamiento en viales con gel de silica.

Con esta tcnica, la muestra puede tener una duracin de entre 3 das hasta 4

aos a temperatura ambiente antes de la extraccin del ADN (Regnaut et al.

2006). Si se cuenta con algn preservador y protector de cidos nucleicos (p.ej.,

RNAlater) la excreta fresca es la mejor eleccin (Vigilant y Guschanski 2009).

Para todas las muestras realizadas para la extraccin de ADN, hay que consi-

derar que deben ser protegidas de la humedad y de la exposicin a la luz ultra-

violeta para que no sea degradado el ADN (Lindahl 1993).

Consideraciones para el muestreo de agentes infecciosos

A continuacin se presenta un cuadro donde se enlistan de manera general lasmuestras adecuadas en funcin del sitio anatmico donde se replica el agente

etiolgico del que se sospecha.

La muestra puede ser transferida a un medio de transporte, siempre y cuan-

do tenga las caractersticas para conservar organismos anaerobios.

La muestra tomada debe ser representativa y tener un volumen suficiente

para el anlisis; es necesario tomar en cuenta la cantidad y el tipo de anlisis

que se realizarn. Las tcnicas de biologa molecular normalmente requieren

volmenes pequeos para proceder a la extraccin de cidos nucleicos, 1 ml

como mximo; para proceder al aislamiento de bacterias, hongos o virus, se

recomienda tomar una muestra de 3-5 ml en el caso de que sea lquida, frag-

mentos de 2 por 2 cm en el caso de que sean fragmentos de tejido, o un hisopa-

do que haya sido presionado contra la zona afectada o donde se espera encon-

trar el microorganismo y depositarlo en un medio de transporte. Cuando serealizan necropsias, es recomendable para estudios bacteriolgicos, seccio-

nar partes de los rganos afectados de manera que al arribar la muestra al

laboratorio, se pueda volver a seccionar para exponer zonas del tejido que no

han estado en contacto directo con el medio ambiente. Al recolectar heces, es

preferible que la muestra no entre en contacto con fuentes de contaminacin

natural como es el suelo o agua del medio ambiente, sino que sea depositada

en un contenedor estril. En todos los casos se debe proceder a tomar una



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Cuadro 1.1 Muestras adecuadas en funcin del sitio anatmico de estudio.

SITIO ANATMICO

Vas respiratorias altas

Vas respiratorias inferiores

Tracto urinario

Tracto genital

Heridas superficialesHeridas profundas

Piel

Tracto gastrointestinal

Sistema circulatorioSistema nervioso

Cavidad tica, ocular o bucal

MUESTRA ADECUADA

Hisopado farngeo, secreciones

Aspirados, biopsia

Orina (chorro medio, cateterizacino aspirado), hisopado uretral, biopsiade rin o vejiga

Hisopado uretral (macho)o vaginal (hembra)

Aspirados de pus o secrecionesAspirados, biopsia de tejido necrosado

Biopsia de piel, secreciones

Hisopado rectal, heces, biopsia de

tejido intestinal, hgado, estmago

Sangre, biopsia de corazn, bazo,lquido cefalorraqudeo, biopsia deencfalo, mdula espinal

Hisopado tico, ocular, bucal,aspirado de secreciones

EJEMPLO DE AGENTE ETIOLGICO

Virus de Influenza, Bordetella pertussis

Virus de Newcastle, Streptococcus pneumonia

Leptospiraspp., Enterococcusspp.

Brucellaspp., Citomegalovirus

Staphylococcus aureus,Clostridiumspp.

Erysipelothrix rhusiopathiae

Salmonellaspp., Strongyloidesspp.

Brucellaspp., virus DengueVirus de la Rabia, virus del Oeste del Nilo

Adenovirus, Herpesvirus, Candidaspp.

muestra lo ms limpia posible, es decir, que tenga una baja posibilidad de

contaminarse con agentes microbianos que se encuentran en el medio

ambiente, evitando de esa manera la obtencin de resultados falsos positivos;

de igual manera no se deben tomar muestras de animales o tejidos en descom-

posicin, pues la microbiota saprfaga puede enmascarar al patgeno que

pudo haber sido responsable de la mortalidad.


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Conservacin de la muestra

Uno de los factores clave para tener xito en un procedimiento diagnstico, es

la conservacin de la muestra, es decir, evitar la degradacin del sustrato a

agente que servir como detectable por un mtodo determinado; la eleccin

de un mtodo de conservacin depender principalmente del tipo de estudio

que se realizar.

La variedad de mtodos diagnsticos de enfermedades infecciosas es grande

y aumenta continuamente con el desarrollo y el uso de nuevas tecnologas, en

especial en las ltimas dcadas con la aparicin de tcnicas moleculares cada

vez de mayor sensibilidad; sin embargo, existen metodologas sencillas utili-

zadas desde hace muchos aos que siguen siendo la mejor opcin, pues com-binan caractersticas adecuadas en cuanto a sensibilidad, precio, facilidad en

anlisis y conservacin de muestras y representatividad epidemiolgica. Los

mtodos diagnsticos se podran dividir en funcin del mtodo requerido de

conservacin de la muestra (Cuadro 1.2).

La refrigeracin o congelacin de muestras en campo no siempre ser posible,

debido a que en muchas ocasiones no se contar con el instrumental suficien-

te, sin embargo se pueden hacer recomendaciones bsicas. Para mantener

refrigerada una muestra en campo, se recomienda usar refrigerantes en gel

contenidos en bolsas selladas, en el caso de no contar con ellas, se puede usar

hielo, teniendo cuidado de no generar una acumulacin exagerada de agua en

el contenedor de las muestras, que puede mermar su conservacin. Las mues-

tras que se requieren congelar, debern mantenerse en un contenedor con

hielo seco el mayor tiempo posible; es necesario recordar que el hielo seco

pasa a estado gaseoso continuamente y no deber ser almacenado en contene-dores sellados hermticamente.

A su vez, el mtodo de conservacin ser diferente dependiendo de la naturale-

za del patgeno que se requiere conservar, es decir, virus, bacteria, hongo, pro-

tozoario o helminto. Cada uno de ellos tiene diferentes niveles de susceptibili-

dad a factores del medio ambiente, por lo que existen sistemas ptimos para

cada uno de ellos, algunos factores bsicos a considerar son los siguientes:



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Cuadro 1.2Requerimiento de conservacin en funcin del mtodo diagnstico a utilizar.

REQUERIMIENTODE CONSERVACIN

Conservar viabilidaddel organismo

Conservar estructuradel organismo

Conservar estructurasubcelular del organismo

Conservar metabolitos

MTODOSDIAGNSTICOS

Aislamiento o cultivodel organismo patgeno,deteccin de actividadfenotpica

Observacin directa enbusca del agente

Deteccin de cidosnucleicos,protenas o lpidos

Deteccin de toxinas

o anticuerpos

ESTRATEGIADE CONSERVACIN

Refrigeracin en medioque evite proliferacin

Depsito de la muestraen solucin que evite

descomposicin y noafecte estructura

Congelacin de lamuestra en una solucinque detenga actividadbioqumica de degradacin

Congelacin sin diluir

EJEMPLOSDE CONSERVACIN

Hisopado en mediode transporteStuart en refrigeracin

Heces en solucin deformol al 10%

Hisopado farngeo enmedio de transporte viralen congelacin

Suero congelado

Cuando la muestra para hacer diagnstico viral es lquida, normalmente no

requerir usar medios de transporte, pero cuando sean hisopados o fragmen-

tos de tejido, es necesario sumergirlos en un medio de transporte que los pro-

teja. La resistencia de los virus depender de la complejidad de su estructura;

las muestras deben ser mantenidas a temperatura de refrigeracin, pero si el

transporte de la muestra tomar ms de 24 horas, se recomienda congelar enhielo seco. Los medios para transporte de virus en general contienen un regu-

lador de pH, protenas para estabilizar los virus y antibiticos para prevenir el

desarrollo de microbiota acompaante.

Las bacterias son un conjunto de organismos con capacidades metablicas

muy diversas, entre ellas podemos encontrar bacterias acidfilas y alcalfilas,

aerobias y anaerobias, psicroflicas y termoflicas; esta gran variedad hace


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difcil la eleccin del sistema de conservacin. En todos los casos requieren un

soporte que permita su viabilidad celular, proteja su maquinaria enzimtica

para poder metabolizar rpidamente sustratos en el laboratorio y no permita

la proliferacin de bacterias. Existen hoy en da muchos sistemas comerciales

para conservar bacterias segn sea el tipo: medios para bacterias anaerobias,

aerobias, esporulados y exigentes. No se deben congelar las muestras, pues la

clula bacteriana se ve muy afectada con los cristales de agua que se forman al

disminuir la temperatura.

Muchos hongos se caracterizan por tener estructuras de reproduccin resis-

tentes al medioambiente, sin embargo, algunos son muy sensibles a cambios

de temperatura y pierden viabilidad rpidamente, por lo que se recomiendatransportar las muestras a temperatura ambiente. Cuando las muestras no

sern entregadas para el procedimiento diagnstico en menos de 24 horas se

recomienda refrigerar, para evitar el crecimiento de bacterias acompaantes,

a menos que se use un medio con agentes antibacterianos. Los hongos son

microorganismos aerobios, por lo que no deben ser transportados o almace-

nados en contenedores que favorezcan las condiciones reductoras o sean

especializados en organismos anaerobios.

Los protozoarios y helmintos normalmente no son diagnosticados por mto-

dos de aislamiento o proliferacin, sino que se busca identificar estructuras

patognomnicas o movilidad caracterstica. En el caso de preservar las estruc-

turas se recomienda una solucin fijadora, como lo puede ser el formol en

solucin salina; las muestras que se encuentren en el agente fijador, no

requieren ser refrigeradas, pues en esa solucin no hay actividad metablica.

Cuando se busquen hemoparsitos, es recomendable hacer in situun frotis yfijarlo, de manera que se pueda hacer una tcnica de tincin en el laboratorio.

Medios de transporte para la muestra

Un medio de transporte se puede definir como un sistema en el cual se conser-

varn caractersticas seleccionadas de una muestra por un tiempo determina-

do. La complejidad de estos sistemas depender de las caractersticas de la

muestra que se requiera conservar; en el caso de requerir conservar la estruc-



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tura celular o pluricelular de un organismo para observacin microscpica,

como es el caso de quistes o huevos de algn protozoario o helminto intesti-

nal, se puede adicionar a la muestra un agente que detenga toda actividad

metablica y de degradacin de la muestra, sin que modifique la estructura

que buscaremos, como puede ser el formol al 10%, sin embargo, esa muestra

no ser til para el aislamiento de bacterias entricas. En el caso de requerir

conservar la viabilidad de un agente infeccioso para su aislamiento y amplifi-

cacin, como el aislamiento de un virus en un sistema de cultivo celular, se

requiere conservar la capacidad del organismo de multiplicarse, sin que haya

proliferacin del agente buscado ni otros organismos que pudieran enmasca-

rar su presencia. Si la metodologa que se usar para el diagnstico es cuanti-

tativa, es estrictamente necesario que la concentracin del sustrato a cuantifi-car no vare desde la toma de muestra hasta el anlisis, como pudiera ser la

cuenta viable de bacterias enteropatgenas en heces.

En el caso de ser un medio para transportar muestras cuyo diagnstico no

requerir la viabilidad del organismo, como es el caso de identificacin de

estructuras de resistencia (quistes) o de transmisin (huevos), tendrn compo-

nentes que eviten la degradacin de la muestra y no afecten la estructura que

se identificar, por ejemplo, una solucin de formol al 10% conservar de mane-

ra adecuada una muestra fecal para la identificacin de quistes de protozoa-

rios entricos. Si se espera observar movilidad microscpica de flagelados ent-

ricos, es necesario que la muestra de heces sea fresca y se analice lo ms pronto

posible o se mantenga en una solucin isotnica, como solucin salina al 0.8%.

Cuando el mtodo diagnstico se base en el aislamiento y crecimiento del

agente infeccioso, es de suma importancia mantener la muestra de maneraque no se pierda la viabilidad del organismo. La congelacin de una muestra

sin un adecuado crioprotector, afecta de manera significativa la cantidad de

clulas que permanecern viables al descongelar la muestra, por lo que es

recomendable mantener la muestra en refrigeracin a 4C.

En casos cuando se pretende diagnosticar a un patgeno que se encuentra en

bajas concentraciones en la muestra, se pueden usar medios de enriquecimien-


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SISTEMA DE TRANSPORTE

Tejido congelado

Tejido fresco (refrigerado)

Tejido en formol 10%

Heces frescas/ en solucin salina 0.8%, (refrigerado)

Heces en formol 10%

Hisopado en medio de transporte Amies*

(refrigerado)

Hisopado en medio de transporte Stuart*

(refrigerado)

Hisopado en medio Caldo Tetrationato*

Hisopado en medio de transporte viral

Exudado recolectado en jeringa (refrigerado)

Exudado recolectado en frasco (refrigerado)

APLICACIN

Inmunohistopatologa,

tcnicas de biologa molecular

Aislamiento de bacterias u hongos

Histopatologa

Observacin de patgenos entricos mviles

Observacin de quistes entricos

Aislamiento de bacterias anaerobias

Aislamiento de bacterias aerobias y hongos

Enriquecimiento para deteccin de Salmonellaspp.

Aislamiento y deteccin de virus

Aislamiento de bacterias anaerobias

Aislamiento de bacterias aerobias y hongos

Cuadro 1.3Ejemplos de algunos sistemas de transporte de muestra y su uso final.

CAPTULO UNO

* Ver Apndice II



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to para disminuir la cantidad de agentes acompaantes y promover el desarro-llo de algn agente etiolgico especfico. Como ejemplo, la inoculacin de un

hisopado rectal en el medio de enriquecimiento Caldo Tetrationato para enri-

quecer la muestra y lograr la identificacin de algunas baterias del gnero Sal-

monella.

Actualmente existen diferentes fabricantes de medios de transporte especia-

lizados para un gran tipo de muestras y de agentes infecciosos, entre ellas

podemos encontrar los sistemas: AssayAssure, Copan y BD (Fig. 1.1).

El contacto con el laboratorio diagnstico

Al recolectar la muestra es necesario tomar todos los datos que pudiera

requerir el laboratorio que realizar el diagnstico, como son: especie del ani-

mal del que se recolect la muestra, sexo, signos observados, tipo de muestra

recolectado, fecha de toma y envo de muestra, administracin previa de anti-

biticos, tipo de conservacin que se us y medio de transporte utilizado. Se



Figura 1.1.Sistemas comerciales para el transporte de muestras. A) sistema AssayAssure; B)

sistema de hisopados bacteriolgicos Copan; C) sistema de transporte viral de BD.


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42CAPTULO UNO

debern incluir todos los datos en un documento en donde se enliste la canti-

dad de muestras que se envan, los diagnstico(s) que se solicita(n), nmero

de identificacin de cada muestra, zona geogrfica donde se recolect y el

nombre y procedencia del personal encargado de la toma, transporte y envo

de las muestras.

Bioseguridad

Cuando se presenta una mortalidad o morbilidad en animales, al tomar la

muestra es necesario considerarla como potencialmente infecciosa, pues exis-

ten muchos patgenos de animales que pueden causar patologas en los huma-

nos, algunas de ellas muy graves. Se recomienda tomar la mayor cantidad de

precauciones posibles que se puedan aplicar en el campo; entre los requeri-mientos bsicos estn: guantes de ltex, cubre bocas, lentes de seguridad y, de

ser posible, el uso de batas desechables; el sitio donde se toma y maneja la

muestra deber ser desinfectado antes y despus de su uso con una solucin

de cloro al 5%. Es muy importante que el personal o instrumentacin utilizada

en el muestreo no se conviertan en fmites que pudieran diseminar la enfer-

medad infecciosa a otras regiones geogrficas, esto se evitar si se utiliza ropa

exclusiva para el muestreo y se desecha cada vez que se usa. Las muestras

deben recolectarse en contenedores resistentes al transporte y envo, y ade-

ms, embalarse de manera que no representen riesgo al personal que las

transporta y recibe. Deben ser etiquetadas o marcadas con tal seguridad de

que durante la conservacin o el envo no se pierda el control sobre la identi-

dad de cada una de las muestras.



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43

APNDICE ITipo de muestra dependiendo del anlisis requerido

y su posibilidad de realizarlo en campo.

MUESTRA

Sangre completa

Plasma

Suero

ANLISIS

Hematologa

Patgenos

Toxicologa

Inmunologa

Gentica

Qumica

Qumica

Endocrinologa

Inmunologa

Toxicologa

OBJETIVO DEL DIAGNSTICO

Conteo eritrocitos y leucocitos

Hematocrito

Tasa de sedimentacin eritroctica

Frotis para conteo celularFrotis para bacterias

Frotis para hemoparsitos

Aislamiento bacteriano

Pesticidas

Anticuerpos

Extraccin ADN

Vitaminas, minerales y metales

Enzimas, electrolitos

Hormonas

Globulinas, anticuerpos

Pesticidas

ANLISIS

IN SITU

Posible

S

S

SS

S

No

No

No

No

No

Posible

No

No

No




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APNDICE IIMEDIOS Y REACTIVOS

Formol 4 y 10%Reactivos para un litroFormol 4 o 10 mlAgua destilada

96 o 90 ml

Lysis buffer(Longmire et al.1997)ReactivosTrisHCl 2 M, pH 8.0 50 ml

EDTA 0.5 M, pH 8.0

200 mlNaCl 5 M 2 mlAgua bidestilada 975 mlSDS 20% (peso/volumen). 25 ml

Solucin salina fisiolgica al 0.9 %ReactivosCloruro de sodio 0.9 gAgua destilada c.s.p. 100 ml

Procedimiento: Mezclar el cloruro de sodio en el agua destilada, una vezlista la solucin, guardar en frasco en un lugar fresco.

Colorante de WrightReactivosColorante de Wright 0.3 gMetanol (CH3 OH) 100 mlGlicerol 3.0 mlProcedimiento: Disolver en un mortero el colorante con el glicerol, unavez disuelto se adiciona el metanol trasvasndolo a un frasco mbar.Posteriormente se debe de agitar y filtrar antes de usar.

Caldo TetrationatoReactivosPeptona Proteosa 2.5 g/LCasena Pancretica Digerida 2.5 g/LOxgall 1 g/L

CAPTULO UNO



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45

Tiosulfato de Sodio 30 g/LCarbonato de Calcio 10 g/LPreparacin: Disolver los componentes en agua desionizada y hervir,enfriar a 60C. Agregar 2 ml de solucin de iodo (6 g de cristales de iodo

y 5 g de ioduro de potasio en 20 ml de agua desionizada) por cada 100ml de medio. No recalentar o esterilizar en autoclave. Usar inmediata-mente. pH final 8.4 0.2. Usar controles microbiolgicos para evaluar elcorrecto funcionamiento.

Medio de transporte AmiesReactivosCloruro de Sodio

3 g/LCloruro de Potasio

0.2 g/L

Cloruro de Calcio

0.1 g/LCloruro de Magnesio

0.1 g/LFosfato de Potasio Monobsico

0.2 g/LFosfato de Sodio Dibsico

1.15 g/LCarbn Vegetal

10 g/LAgar

4 g/LPreparacin: Disolver los componentes en agua desionizada, hervir ydistribuir en tubos con tapn de rosca. Esterilizar a 121C por 15 minu-

tos; pH final 7.3 0.2. Usar controles microbiolgicos para evaluar elcorrecto funcionamiento.

Medio de transporte StuartReactivosTioglicolato de Sodio 1 g/LGlicerofosfato de Sodio 10 g/LCloruro de Calcio 0.1 g/LAzul de Metileno 2 mg/L

Agar

3 g/LPreparacin: Disolver los componentes en agua desionizada, hervir ydistribuir en tubos con tapn de rosca. Esterilizar a 121C por 10 minu-tos; pH final 7.3 0.2. Usar controles microbiolgicos para evaluar elcorrecto funcionamiento.

RNAlater

Tissue Collection: RNA Stabilization Solution. Ambion, Inc.Applied Biosystem, Referencia: AM7020, AM7024, AM7021, AM7022,




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46

AM7023Qiagen. Referencia 76104, 76106.SigmaAldrich. Referencia R0901.

Algunos sistemas de transporte de muestrasThermo Scientific, Sistema AssayAssure(http://www.thermoscientific.com/ecomm/servlet/productscaralog_11152_L11023_97173_1_4)

Copan(http://www.copanusa.com/index.php)

BectonDickinson

(http://www.bd.com/ds/productCenter/CT.asp)

CAPTULO UNO



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APNDICE III

ALGUNOS LABORATORIOS DE DIAGNSTICO EPIDEMIOLGICO EN MXICO.

Laboratorio de Medicina de ConservacinEscuela Superior de Medicina. Instituto Politcnico Nacional. Plan de San Luisy Daz Mirn s/n, Col. Casco de Santo Toms, Del. Miguel Hidalgo, C.P. 11340,Mxico DF, Mxico. Tel.: 57296000 ext. 62753.Correo electrnico: [email protected].

Departamento de Microbiologa e InmunologaFacultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Universidad Nacional Autno-

ma de Mxico. Servicio de diagnstico: tels.: 01 (55) 56 22 59 00 / 01 / 03, Fax:01 (55) 56 22 59 71.http://www.fmvz.unam.mx/fmvz/servicios/s_microbiologia.html

Instituto de Diagnstico y Referencia Epidemiolgica, Secretara de SaludFederalBenjamn Franklin #132 Col. Escandn Del. Miguel Hidalgo, C.P. 11800. Mxi-co, DF.Tels.: 2614 6892 al 96http://www.cenavece.salud.gob.mx/indre/interior/servicios.html

Comisin MxicoEstados Unidos para la Prevencin de la Fiebre Aftosa yOtras Enfermedades Exticas de los AnimalesSAGARPACPA. Km. 15.5 Carretera MxicoToluca, Col. Palo Alto, DelegacinCuajimalpa, C.P. 05110, Mxico D.F.

Laboratorio de Entomologa Mdica

Universidad Autnoma de Nuevo Len. Pedro de Alba s/n, Ciudad Universita-ria. C.P. 66451. San Nicols de los Garza, Nuevo Len. Mxico.

Centro de Investigaciones Regionales Hideyo Noguchi. Universidad Aut-noma de Yucatn. Unidad Itzes. Avenida Itzas # 490 x Calle 59. Colonia Cen-tro C.P. 97000 Mrida, Yucatn, Mxico. Tels.: (999) 9245809,9245755, Fax:(999) 9236120. Email: [email protected]




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BIBLIOGRAFAAguirre, A., R.S. Ostfeld, G.M.Tabor, C. House y M.C. Pearl (eds.). 2002. ConservationMedicine. Ecological health in practice. Oxford University Press. Oxford, UK.

AmndolaPimienta, M., L. GarcaFeria, J.C. SerioSilva y V. RicoGray. 2009.Noninvasive collection of fresh hairs from freeranging Howler monkeys for DNAextraction. American Journal of Primatology70:15.

Ancrenaz, M., J.M. Setchell y D.J. Curtis. 2003. Handling, anaesthesia, health evaluationand biological sampling. Pp. 122139. En: Setchell, J.M. y D.J. Curtis(eds.). Field andlaboratory methods in primatology: A practical guide. Cambridge University Press.

Balkiz, ., S. Dano, C. Barbraud, S. Tekin, U. zesmi, M., Dndar y A. Bchet. 2007.Sexing Great flamingo chicks from feathers bulb DNA. Waterbirds30:450453.

Ballweber, L.R. 2001.Veterinary parasitology. ButterworthHeinemann, Woburn, MA. U.S.A.

BarcelVera, L. 2004. Evaluacin de contaminantes inorgnicos en tortugas blancas(Chelonia mydas) protegidas por el centro ecolgico Akumal en el estado de QuintanaRoo. Tesis de Licenciatura, Prctica Profesional Supervisada: Produccin Acucola.Facultad de Medicnia Veterinaria y Zootecnia, UNAM. Mxico.

Bello, N., O. Francino, A. Snchez. 2001. Isolation of genomic DNA from feathers.Journal of Veterinary Diagnostic Investigation13:162164.

Caney, S.M.A. 2010. Feline urine sample collection and inhouse urinalysis. IrishVeterinary Journal9:578582.

Daln, L., A. Gtherstrm y A. Angerbjrn. 2004. Identifying species from pieces offeces. Conservation Genetics5:109111.

Deem, S.L., W.R. Karesh y W. Weisman. 2001. Putting theory into practice: wildlifehealth in conservation.Conservation Biology15:12241233.

Frantzen, M.A.J, J.B. Silk, J.W.H. Ferguson, R.K. Wayne y M.H. Kohn. 1998. Empiricalevaluation of preservation methods for faecal DNA. Molecular Ecology7:14231428.

Friend, M. y C. Franson. 1999. Field manual of wildlife diseases. General field proceduresand diseases for birds. U.S. Department of the Interior, U.S. Geological Survey, USGSBiological Resources Division, National Wildlife Health Center, Madison, WI, U.S.A.

GarcaFeria, L.M. 2008. Remote sampling of hair for genetic analysis of wildmammals.Revista de Ecologa Latino Americana13:13.

GarcaFeria, L.M., C.A. UreaAranda y A. Espinosa de los Monteros. 2015. Minimallyinvasive blood sampling method for genetic studies on Gopherustortoises. AnimalBiodiversity and Conservation 38:3135.

CAPTULO UNO



49/212

49

GonzlezJuregui, M. 2008. Relacin de las concentraciones residuales de una mezclade plaguicidas organoclorados y policlorobifenilos con la concentracin de hormonassexuales de dos poblaciones de Crocodylus moreletti. Tesis de Maestra en Ciencias.Instituto de Ecologa, A.C. Xalapa, Ver.

Grossens, B., L.P. Waits y P. Taberlet. 1998. Plucked hair samples as a source of DNA:reliability of dinucloitide microsatellite genotyping.Molecular Ecology7:12371241.

Hamilton, W.D. y M. Zuk. 1982. Heritable true fitness and bright birds: a role forparasites? Science218:384387.

Heatley, J.J. y M. Johnson. 2009. Clinical technique: amphibian hematology, apractitioner's guide.Journal of Exotic Pet Medicine18:1419.

Hodges, J.K. y M. Heistermann. 2003. Field endocrinology: monitoring hormonalchanges in freeranging primates. Pp. 282294. En: Setchell, J.M. y D.J. Curtis (eds.).

Field and laboratory methods in primatology: a practical guide. Cambridge UniversityPress. Cambridge, UK.

Hoss, M., M. Kohn, S. Paabo, F. Knauer y W. Schroder. 1992. Excrement analysis by PCR.Nature359:199.

Hudson, P.J., D. Newborn y A.P. Dobson. 1992. Regulation and stability of afreeranging hostparasite system: Trichostrongylus tenuisin red grouse. I.Monitoring and parasite reduction experiments.Journal of Animal Ecology61:477486.

Karesh, W.R., R. Cook, E.L. Bennet y J. Newcomb. 2005. Wildlife trade and global diseaseemergence.Emerging Infectious Diseases11:10001002.

Kosch, M. 1996. Wildlife, people, and development. Tropical Animal Health andProduction28:6880.

Lindahl, T. 1993. Instability and decay of the primary structure of DNA. Nature362:709715.

Longmire, J.L., M. Maltbie y R.J. Baker. 1997. Use of Lysis buffer in DNA isolation andits implication for museum collections. Occasional Papers, Museum Texas Tech

University163:13.Mainka, S.A. 2001. The veterinarian's role in biodiversity conservation.Journal of Zooand Wildlife Medicine32:165167.

Marks, S. y R. Houston. 2009. Parsitos intestinales en perros y gatos. Veterinary Focus19:4648.

Mautino, M. y C.D. Page. 1993. Biology and medicine of turtles and tortoises. Exotic petmedicine I, Veterinary Clinics of North America: Small Animal Practice23:12511269.




50/212

50

May, R.M. 1983. Parasitic infections as regulators of animal populations. AmericanScientist71:3645

Meffe, G.K. 1999. Conservation Medicine.Conservation Biology13:953954.

Mrner, T., D.L. Obendorf, M.Artois y M.H. Woodford. 2002. Surveillance andmonitoring of wildlife diseases. Reveu Scientifique et Technique(International Officeof Epizootics) 21:6776.

Mueller, R.S. 2000. Dermatology for the small animal practitioner. Teton NewMedia,Jackson, WY U.S.A.

Norris, S. 2001. A new voice in conservation. BioScience51:712.

Osofsky, S.A., W.R. Karesh y S.L. Deem. 2000. Conservation Medicine: a veterinaryperspective.Conservation Biology14:336337.

Piggot, M.P. y A.C. Taylor. 2003. Remote collection of animal DNA and its applicationsin conservation management and understanding the population biology of rare andcryptic species. Wildlife Research30:113.

Raphael, B.L. 1993. Amphibians. Exotic pet medicine I, Veterinary Clinics of NorthAmerica: Small Animal Practice23:12711286.

Regnaut, S., F.R. Lucas y L. Fumagalli. 2006. DNA degradation in avian faecal samplesand feasibility of noninvasive genetic studies of threatened capercaillie populations.Conservation Genetics7:449453.

Ritchie, B.W., G.J. Harrison y L.R. Harrison. 1994. Avian medicine: principles andapplication. Wingers Publishing, Inc. Lake Worth, FLA U.S.A.

Robinson, W.L. y E.G. Bolen. 1989.Wildlife ecology and management. MacmillianPublishing Co. New York.

Roon, D.A., L.P. Waite y K.C. Kendall. 2003. A quantitative evaluation of twomethods for preserving hair samples. Molecular Ecology Notes3:163166.

Scott, D.W., W.T. Miller, Jr. y C.E. Griffin. 2001. Muller and Kirk's Small AnimalsDermatology. W.B. Saunders, U.S.A.

Sedgwick, C.J. y J.C. Martin. 1994. Concepts of veterinary practice in wild mammals.Exotic pet medicine II, Veterinary Clinics of North America24:175185.

Sloane, M.A., P. Sunnucks, D. Alpers, L.B. Beheregaray y A.C. Taylor. 2000. Highlyreliable genetic identification of individual northern hairynosed wombat fromremotely collected hairs: a feasible censusing method. Molecular Ecology 9:12331240.

Spear, J.R. 2000. Conservation medicine: the changing view of biodiversity.Conservation Biology14:19131917.

CAPTULO UNO



51/212

51

Taberlet, P., L.P. Waits y G. Luikart. 1999. Noninvasive genetic sampling: look beforeyou leap. Trends in Ecology and Evolution14: 323327.

Mrner, T., D.L. Obendorf y M.H. Woodford. 2002. Surveillance and monitoring ofwildlife diseases. Revue Scientifique et Tecnique. Off. Int. Epiz. 21: 6776.

Valderrama, X., W.B. Karech, D.E. Wildman y D.J. Melnick. 1999. Noninvasive methodsfor collecting fresh hair tissue. Molecular Ecology8:17491752.

Vigilant, L. y K. Guschanski. 2009. Using genetic to understand the dynamics of wildprimates populations. Primates50:105120.

Wasser, S.K., C.S. Houston, G.M. Koehler, G.G. Cadd y S.R. Fain. 1997. Techinques forapplication of faecal DNA methods to field studies of Ursids. Molecular Ecology6:10911097.

Woods, J.G., D. Paetkau, D. Lewis, B.N. McLellan, M. Proctor y C. Strobeck. 1999. Genetictagging of freeranging black and brown bears. Wildlife Society Bulletin27:616627.

Ziegler, T.E., J.K. Hodges, P. Winkler y M. Heistermann. 2000. Hormonal correlates ofreproductive seasonality in wild females Hanuman langurs (Presbytis entellus).American Journal of Primatology51:119134

Zielinski, W.J., F.V. Schlexer, K.L. Pilgrim y M.K. Schwartz. 2006. The efficacy of wireand glue hair snares in identifyinh Mesocarnivores. Wildlife Society Bulletin34:11521161.

Zuk, M., T. Kin, S.I. Robinson y T.S. Johnsen. 1998. Parasites influence social rank andmorphology, but not mate choice, in female red junglefowl, Gallus gallus. AnimalBehaviour56:493499.




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INTRODUCCIN

Los parsitos representan el tipo de vida ms exitoso en la Tierra, dado que se

estima que ms del 50% de los organismos son parsitos, y esta cifra vara

dependiendo de la definicin de parsito que se use (Poulin y Morand 2000,

Poulin 2007). El parasitismoen trminos generales se define como una rela-

cin o simbiosis en la cual uno de los participantes, el parsito, daa a su hus-

ped o vive a expensas de l (Schmidt y Janovy 2009). Normalmente una rela-

cin parasitaria se representa con los smbolos +/, que indican que un orga-

nismo, el parsito, se beneficia (+) y otro, el husped, es perjudicado ( -)

(Schmidt y Janovy 2009). En los animales el parasitismo ha evolucionado o

aparecido al menos 60 veces de manera independiente (Poulin y Morand 2000).

Cuando un parsito vive sobre la superficie del husped se le conoce como

ectoparsitoy si vive dentro del husped se le llama endoparsito (Schmidt y

Janovy 2009). La mayora de los parsitos son parsitos obligados, es decir,estos no pueden completar su ciclo de vida sin pasar al menos parte de su vida

infectando a un husped. Existen parsitos facultativos, los cuales no son

normalmente parasticos pero pueden convertirse en parsitos cuando acci-

dentalmente son comidos o entran en una herida u otra cavidad del husped.

Cuando un parsito entra o se adhiere a una especie de husped que es dife-

rente a la de su husped normal, entonces se le conoce como un parsito acci-

dentalo incidental. Algunos parsitos viven todo el tiempo dentro o sobre su

captulo dosTcnicas de campo y laboratorio para el estudio de parsitos

sanguneos del orden haemosporida en aves terrestresDiego Santiago-Alarcon


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54

husped, a estos se les llama parsitos permanentes (p. ej. piojos, parsitos

de malaria), mientras que un parsito temporalo intermitente (p. ej. mosqui-

to, chinche) nicamente se alimenta del husped y luego se retira. Los parasi-

toides son insectos como avispas (Hymenoptera) o moscas (Diptera) que

inyectan sus huevos en un husped, el cual es por lo regular otro insecto ms

pequeo, y donde se desarrollan las etapas inmaduras de la avispa o mosca y

finalmente matan al husped cuando emergen. Los parsitos protoleanos

son aquellos insectos en los cuales solo las etapas inmaduras son parasticas.

Finalmente, muchos parsitos son huspedes de otros parsitos, a esta condi-

cin se le conoce como hiperparasitismo(p. ej. un caro sobre un mosquito,

Schmidt y Janovy 2009).

Los parasitlogos definen varios tipos de husped, dependiendo del papel

que el husped juega en el ciclo de vida del parsito. El husped definitivoes

aquel organismo en donde el parsito alcanza su madurez sexual. Algunos

estudios han mostrado que no existe reproduccin sexual en algunos parsi-

tos (p. ej. amebas y muchos trypanosomas), en estos casos el husped definiti-

vo se define de manera subjetiva, como aquel que es ms importante para los

humanos. El husped intermedioes aquel que se requiere para llevar a cabo

una etapa de desarrollo del parsito, pero no se alcanza la madurez sexual en

dicho husped. Un husped paratnicoo de transporte es aquel en el cual el

parsito no lleva a cabo ningn tipo de desarrollo, pero se mantiene vivo y

puede infectar a otro husped. Cualquier animal que trae consigo un agente

infeccioso que puede ser transmitido al humano se le conoce como husped

reservorioo simplemente reservorio, an cuando dicho animal sea un hus-

ped normal para el parsito, es decir un reservorio puede ser un husped defi-

nitivo, intermedio, o paratnico (Schmidt y Janovy 2009).

En una relacin parasitaria puede haber ms de un husped, lo cual depende

del parsito que se estudie. Los ciclos de vida de los parsitos pueden ser sim-

ples o complejos. Por ejemplo, los piojos (Insecta: Phthiraptera) tienen un ciclo

de vida simple, en donde el parsito pone sus huevecillos sobre el husped, los

cuales pasan por varias etapas de desarrollo (ninfas) sobre el mismo husped

hasta llegar al adulto, y se repite nuevamente el ciclo (Schmidt y Janovy 2009).

CAPTULO DOS



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Su modo de transmisin es principalmente vertical (de padres a hijos), aunque

tambin puede presentarse transmisin horizontal (entre individuos de una

misma poblacin o de diferentes especies) (Whiteman et al.2004). Por el con-

trario, los gusanos nemtodos (Phylum: Nematoda) han evolucionado ciclos de

vida complejos, en donde interviene ms de un husped (Poulin 2007). Por

ejemplo, el gusano Gnathostoma spinigerum(Nematoda: Gnathostomatidae)

tiene un husped definitivo (p. ej. gato), de dos a tres hospederos intermedios

(coppodo, anfibio o pez), y varios hospederos paratnicos (humanos, cerdos,

aves o vboras) (Schmidt y Janovy 2009). La complejidad del ciclo de vida de un

parsito tiene fuertes implicaciones para su control mdico. Si no se conoce

con certeza las diferentes etapas del ciclo de vida existe una alta probabilidad

de que los intentos por controlar una epidemia fallen; o en el mejor de loscasos, se puede gastar ms dinero del que se debera debido a que no se est

atacando la etapa del ciclo de vida del parsito que es ms susceptible, y que

producira la mayor reduccin en el tamao poblacional del parsito.

La diversidad de los parsitos

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