MANTEQLABORATORIO.pdf

8/20/2019 MANTEQLABORATORIO.pdf

1/208

MANUAL DE MANTENIMIENTO PARAEQUIPO DE LABORATORIO

Área de Tecno lo gía y Prest ación de Servicio s de Salud

Un idad de M edicament os Esenciales, Vacunas

y Tecno logías en Salud


2/208


3/208

MANUAL DEMANTENIMIENTO

PARA EQUIPO DELABORATORIO

Washington D. C., 2005

Tecno log ía y Prest a ció n d e Servicios de Sa lud (THS)Medicamentos Esenciales, Vacunas y Tecnologías en Salud (EV)


4/208

Biblioteca Sede OPS - Catalogación en la fuenteOrga nización Pa na merican a d e la Salud. Área de Tecnolog ía y Presta ción d e Servicios de Salud. Unidad de Med icam en-to s Esenciales, Va cuna s y Tecno log ías en Sa lud.

Manua l de Mant enimiento pa ra Equipo de Lab orat orioWa shing to n, D. C.: OPS, © 2005.(Docum en t o s Técn icos. Tecn o log ía s Esen cia les de Sa lud . THS/EV-2005/007)

ISBN 92 75 32590 1

I Títu lo II. Se rieIII. Ga ba stou, Jea n-Marc, Coo rd.

1. EQUIPO DE LABORATORIO2. MANTENIMIENTO DE EQUIPO3. LABORATORIOS - o rg a niza ción y a d ministra ción4. MANUALES

NLM WX 147

• Analiza do r de ELISA• Anal izado r de pH• B a la n z a s• Ba ño d e Ma ría• Cabina de segurida d biológica• Cent r ífuga• Dest i lado r de agua• Diluidor• D ispensado r• Espect rofotó metro• Autoclave• Estufa de secado• Incubado ra• Lava do r de ELISA• Microscopio• P ipe t a s• P la to ca l iente con a g i t ador• Re fr igerador

Reda cción/Ada pt a ción : Jorg e Enriq ue Villam il

Revisión: Jean -Ma rc Ga ba stouAnto nio Fernánd ez

Diseño d e po rt a d a : na ra nha us® diseño

Dia gra ma ció n/Impresió n: Nuevo Art e

Co rrecció n d e est ilo : Pa ulina Ro d ríg uez Ruiz

Fo t o g ra f ía : Ma rg a rit a Ca ña r


5/208


6/208


7/208


8/208

Capítulo quintoBaño d e M aría

Esq uema b año de Ma ríaPrincipios de ope raciónCont roles bañ os de MaríaOperación d el ba ño d e MaríaDefiniciones bá sica sBibliografía

Capítulo sextoCab ina d e segu r i d ad b i o lóg i ca

Ilustración cabina de seguridad biológicaPropósitos del equipoPrincipios de ope raciónSeg urida d biológ icaServicios requeridosUso de la cabina

Rutinas de ma nten imientoEvaluación funcional (alternativa)Definiciones bá sica sBibliografía

Capítulo séptimoCent ríf u g a

Foto graf ía y esq uemaPropósito de la centrí fugaPrincipios de op era ciónCompo nent es de la centrífug aServicios requeridosRutinas de ma nten imientoRecomenda ciones de conserva ción y ma nejo a decuad oDefiniciones bá sica sBibliografía

Capítulo octavoDest i l a do r de agua

Esquema del desti lador de aguaPropósito del destila do r de a guaPrincipios de ope raciónServicios requeridos

Definiciones bá sica sBibliografía

Capítulo novenoD i l u i d o r

Esquema del diluidorPropósito del diluidorPrincipios de ope raciónServicios requeridosRutinas de ma nten imientoDefiniciones bá sica s

Bibliografía

5555555657576060

6161616161646465

66697172

7373737374757677778183

858585858687

9192

9393939393959698

100


9/208

Capítulo décimoDispensado r

Esquema y fotografía del dispensadorPropósito del dispensadorServicios requeridosRutinas de ma nten imientoDefiniciones básicasBibliografía

Capítulo undécimoEspec t r o f o tóme t r o

Fotografías del espectrofotómetroPropó sito del eq uipoPrincipios de ope raciónComponentes del espectrofotómetroServicios requeridosMantenimiento del espectrofotómetro

Buenas práctica s de uso de l espectrofot ómet roDefiniciones básicasBibliografía

Capítulo duodécimoAu t o c l a v e

Fotografía del autoclavePropó sito del a uto clavePrincipios de ope raciónFunciona miento del a uto cla veServicios requeridosRutinas de ma nten imientoMant enimiento de compo nent es especial iza do sDefiniciones básicasBibliografía

Capítulo decimoterceroEst u f a d e secado

Fotografías de estufa de secadoPropó sito de la e stuf aPrincipios de ope raciónServicios requeridosOperación de la e stuf a

Cont rol de la estuf aCont rol de cal ida dRutinas de ma nten imientoDefiniciones básicasBibliografía

Capítulo decimocuartoI n cubado r a

Foto graf ías de incuba dorasPrincipios de ope raciónCont roles de la incubad ora

Servicios requeridosRutinas de ma nten imiento y uso d e la incubad oraDefiniciones básicasBibliografía

101101101102104104105106

107107107107107110112112

116118120

121121121121122125129131133135137

139139139139139141141

141143143146147

149149149150152

153153156157


10/208

Capítulo decimoquintoMic roscop io

Otros nomb res del eq uipoFotografías de microscopiosPropósito del eq uipoPrincipios de op era ciónDia gra ma del eq uipo (isomét rico y corte)Servicios requeridosDescripción de fallas potenciales por componentesMantenimiento general del microscopioDefiniciones bá sica sBibliografía

Capítulo decimosextoPipe tas

Foto graf ía y esq uema de pipetasPropósito de la pipeta

Principios de op era ción de la pipetaServicios requeridosUso de la pipetaRutinas de ma nten imientoDefiniciones bá sica sBibliografía

Capítulo decimoséptimoPla t o ca l i e n t e con ag i t ado r

Foto graf ía del pla t o cal iente con a gi tad orPrincipios de ope raciónCont roles del pla to ca liente con a gita do rServicios requeridosOperación del plato cal iente con agitadorRutinas de ma nten imientoDefiniciones bá sica sBibliografía

Capítulo decimoctavoRe f r i g e r ado r

Fotografía del refrigeradorPropósito del refrige rad orPrincipios de op era ción

Servicios requeridosCircuito de control refrigeradorOperación del refrige rad or IRutinas de ma nten imientoOperación del refrigerador IIEncendido del refrigera do rRutinas de ma nten imientoDefiniciones bá sica sBibliografía

159159159159160160162163164167174176

177177177177

177179179181186187

189189189189189190190191192193

195195195195196

198199200201203204205206207


11/208

Ilustración 1: Con junt o de eq uipos pa ra prueb a s ELISAIlustración 2: Lavador de ELISA

Ilustra ció n 3: Pe rfiles de lo s poz o s, técnica de ELISA

Ilustración 4: Esq uema de un a na liza do r de p H

Ilustración 5: Clases de electrodos

Ilustración 6: Circuito d e cont rol an a liza do r de pH

Ilustración 7: Balanza de resorte

Ilustración 8: Balanza de pesa deslizante

Ilustración 9: Ba lanz a a na lítica

Ilustración 10: Balanza de plato superior

Ilustración 11: Ba lanz a de sustituciónIlustración 12: Element os de las ba la nza s electrón ica s

Ilustración 13: Principio fue rza de compen sa ción

Ilustración 14: Clasifica ción de ba lanz a s por g rupos de exactitud

Ilustración 15: Con tro l bala nza a na lítica

Ilustración 16: Ba ño de Ma ría

Ilustra ció n 17: Resistencias d e inme rsión y exte rna

Ilustración 18: Control de baño de María

Ilustración 19: Ca bina de seg urida d b iológ ica

Ilustración 20: Concepto de fuerza centrífuga

Ilustración 21: Destilado r de a g uaIlustración 22: Esquema diluidor

Ilustración 23: Control del diluidor

Ilustración 24: Jering a y dispensad or

Ilustración 25: Dispensador

Ilustración 26: Elementos dispensadores

Ilustración 27: Int era cción d e la luz con la ma te ria

Ilustración 28: Fenó men o d e a bsorba ncia

Ilustración 29: Componentes del espectrofotómetro

Ilustración 30: Reflexión de la luz

Ilustra ció n 31: Rejilla de dif ra cciónIlustración 32: Circuito de vapo r de l aut oclave

Ilustración 33: Espacios requeridos por el autoclave

Ilustración 34: Acometida aire comprimido

Ilustración 35: Acomet ida de vapo r

Ilustración 36: Generador de vapor

Ilustración 37: Cont rol electró nico de la e stuf a

Ilustración 38: Circuito eléctrico de la estufa

Ilustración 39: Forma s de t ran sferen cia de calor

Ilustración 40: Cont rol de incuba do ra

Ilustración 41: Lente positivo (convergente)

Ilustración 42: Funcion a miento de l lent e

Ilustra ció n 43: Cort e d el microscopio

Ilustración 44: Clases de pipetas

1624

25

33

34

34

44

44

44

45

4546

47

48

48

55

56

57

61

74

8593

94

95

101

103

108

109

110

119

120123

130

130

130

133

142

142

151

152

160

161

162

178

TABLA DE ILUSTRACIONES


12/208

12

Ilustración 45: Fases del uso de la pipeta

Ilustra ción 46: Desensam ble d e un a pipeta

Ilustración 47: Control plato caliente con agitador

Ilustración 48: Motor de inducción

Ilustración 49: Circuito de refrigeración

Ilustra ción 50: Circuito de cont rol del refrige rad orIlustra ción 51: Con tro l Ba nco d e san g re

Ilustra ción 52: Control refrig erad or ultrab a ja tempe ratura

180

182

190

192

196

199200

204


13/208

Este manual ha sido desarrollado con el finde a poyar a l persona l que labora en los lab o-rat orios de salud, sean clínicos o d e investiga -ción , en los campo s de la salud púb lica, saludanimal , salud ambiental , control de al imen-tos y control de medicamentos, en la com-prensión de los requerimientos técnicos rela-cionados con la instalación, uso y manteni-miento de un grupo d e eq uipos que resulta nde g ran importa ncia pa ra la real iza ción d e la s

actividades diagnósticas o de investigación.

No se pretende que los lineamientos inclui-dos en este manual conviertan a quien loconsulta en un experto capaz de solucionarcualquier problema que pueda presentarseen el equipamiento del laboratorio. El desa-rrollo a lca nza do a n ivel tecno lógico y científi-co ha incorporado en los equipos infinidadde funciones y mod os particula res de opera -ción, que necesariamente conllevan a imple-

mentar programas que permitan aportar losrecursos para mantener dicho equipamientoen la s mejores cond iciones de o pera ción .

Por la diversida d d e o ríge nes, ma rcas y mod e-los, solo es posible presentar unas recomen-da ciones gen erales, da do q ue las particula resse encuentra n d esa rrolla da s en los manua lesde uso, mant enimiento e insta lación elab ora-do s por los fa brica nt es y que de ben ser solici-tados y exigidos en los procesos de adquisi-ción por las dependencias y profesionalesque t ienen bajo su responsabil idad la incor-pora ción y la a dq uisición d e tecnolog ía en lasdiversas institu cion es.

En su desarrollo, el manual ha tomado encuenta los siguiente s a specto s:

1. Ca da clase o fa milia de equipo incluida ha si-do desarrollada en un capítulo diferente,que se ha organizado en orden alfabético,de acuerdo con el nomb re q ue los ident ifica .

2. Aba rca 18 fa milia s de eq uipo que ha n si-do se lecc ionadas , t ra t ando de cubr i r

aq uella s de ma yor utiliza ción en lab orat o-rios de b aja o media complejida d técnica .

3. Busca apo ya r a los respon sa bles de la gestióntécnica en la implementación de los progra-ma s de ma ntenimiento y de g estión de cali-da d en pro d e la salud de la pob lación.

4. Cada equipo ha sido identi ficado con elnomb re que má s común ment e se lo cono-

ce. Ta mb ién se ha n incluido ot ros nom -bres alternos.

5. Se han introd ucido f ot og raf ía s o i lustra -ciones o una combinación de ambas paraidentificar, sin lugar a equivocaciones, elt ipo de equipo que se está considerando.

6. Dad as la s gra ndes diferencias en la com-plejidad técnica de las marcas y modelosexistent es, ca da tema ha sido desarrolla do

pensando en eq uipos bá sicos, pero, ha stadonde ha sido posible, incluyen tecnolo-gía de desarrollo reciente.

7. Present a un a b reve explica ción sobre losprincipa les usos o a plicacion es de l eq uipoen el laboratorio.

8. Cont iene una d escripción b ás ica de losprincipios con los q ue o pera n los distinto seq uipos. En consecuencia, h a y explicacio-nes basadas en principios o leyes físicasy/o q uímicas qu e el lecto r int eresad o pue-de o debería profundizar por su cuenta.

9. Se incluye una de scripción de los servicios oinstalaciones que requieren los distintoseq uipos para po der funciona r, poniendo én-fasis en los aspectos eléctricos y en los requi-sitos que en cada am biente pod ría n fa cilita rsu correcta insta la ción y ope ración.

10. Describe las rutina s bá sica s de m a nt eni-

miento requeridas por los equipos, q ue sehan clasificado según la frecuencia conque deben real izarse: diarias, semanales,

INTRODUCCIÓN

13


14/208

mensuales, semestrales, anuales y even-tuales. Dichas rutinas se han numerado yse presentan siguiendo un orden que tra-ta de ajustarse a la real idad. Mayor pro-fundidad y especificidad se pueden en-contrar en los manuales editados por losfabricantes.

11. Para cada eq uipo se ha desarrollad o unatabla que procura condensar los proble-mas que con mayor frecuencia lo afectan,identificando sus posibles causas y las ac-ciones q ue d eberían rea liza rse pa ra solu-ciona r el prob lema .

12. En cad a ca pítulo se ha introd ucido una lis-

ta de definiciones básicas que ayuda a

comprend er el sign ifica do de algun os tér-minos ut iliza do s.

13. Al final se ha incluido la b ibliogra fía utili-za da pa ra d esarrolla r los dist intos tema s.

Ta mb ién, en e l ca so d e a lguno s equ ipos, seha n introd ucido tema s adiciona les relaciona -do s con la calibra ción , el cont rol de calida d ola forma en que se encuentran diseñados ypresentados los controles.

El presente manual ha sido desarrollado porla Organización Panamericana de la Salud,para apo yar los prog rama s de mejoramientode la cal idad que promueve en los laborato-

rios de la Región.

14


15/208

15

ANALIZADOR DE ELISA

El a na liza do r de ELISA es un espectrof ot óm e-tro especial izado, diseñado para efectuar lalectura de los resultados de una técnica quese uti liza pa ra d ete rmina r la p resencia d e a n-ticuerpos o antígenos específicos presentes

en una muestra. La técnica se basa en la de-tección de un antígeno inmovil izado sobreuna fase sól ida , mediante ant icuerpos que,d i rec t a o ind i rec t amente , producen unareacción cuyo producto puede ser leído porel espectrofotómetro. Se le conoce tambiéncon el nomb re de Lect o r de ELISA . La pa la braELISA es el acrónimo de las palabras en len-gua inglesa Enzyme-Linked Immuno sorbent Assay .

FOTOGRAFÍA DE ANALIZADOR DE ELISA

PROPÓSITO DEL ANALIZADOR DE ELISA

El analizador de ELISA se utiliza para leer el re-sulta do de las prueba s efectua da s, utiliza ndo laté cnica de ELISA, la cual t iene a plicación d irectaen inmunología y en serología; permite confir-ma r la presencia en el org an ismo de an ticuerposo antígenos de un agente infeccioso, vacunal oautoanticuerpos –artritis reumatoide, por ejem-plo–, ent re o tra s aplicacion es.

PRINCIPIOS DE OPERACIÓN

El an a liza do r de ELISA es un espectrof ot óm e-tro especializado. A diferencia de los espec-trofotómetros convencionales que permitenefectua r lecturas en un ran go a mplio d e lon-gitude s de o nda , este d ispone de f iltros o re-

jillas de difracción que limitan el rango delong itud es de o nda a a q uella s q ue se uti liza nen la técnica ELISA, la cual generalmente sereal iza con long itud es de on da comprend ida sentre los 400 y los 750 nm –nanómetros–. Al-guno s anal izad ores operan en e l rang o ult ra-violeta y pueden efectuar análisis entre los340 y los 700 nm. El sistema óptico utilizadopor muchos fa bricantes uti liza la fibra ópt icapa ra l levar la luz ha sta los pozos de la placa,donde se encuentra la muestra bajo análisis .La luz q ue a tra viesa la muestra t iene un diá-

metro q ue varía en tre 1 y 3 mm. Un sistemade detección recibe la energía lumínica, pro-veniente de la muestra, la a mplifica, det ermi-na la ab sorba ncia y, a t ravés de un sistema delectura, la convierte en datos que permiteninterpreta r el resulta do de la prue ba . Ta m-bién hay analizadores de ELISA que empleansistem a s lumínicos de do ble ha z. La s muestra sdel ensayo de ELISA se colocan en placas dediseño especial, la s cua les dispon en d e un nú-mero d efinido de pozo s o vasos, en los cua les

se l leva a cabo el procedimiento o ensayo.Son comune s la s pla cas de 8 columna s por 12filas, con un t ot a l de 96 poz o s. Ta mb ién exis-ten placas con un mayor número de pozos.Las hay de 384 pozos y la tendencia actualbusca aumentar el número de pozos, y redu-cir la cantidad de reactivos y el volumen delas muestras requeridas. La ubicación de lossensores ópt icos en el a na liza do r de ELISA va -ría dependiendo de los fabricantes. Algunoslos colocan sobre la placa portamuestras,mientras que otros los ponen directamenteba jo los pozos de la placa.

CAPÍTULO 1

Ana lizad or de ELISACódigo (s) ECRI

16-979

Den om inación (e s) ECRI

Lectores de microplacas fotom étricos


16/208

16

En la actualidad, los analizadores de ELISAdisponen de controles regulados por micro-procesadores, interfases de conexión a siste-ma s de informa ción, prog rama s de control deprocesos y cont rol de cal ida d q ue, a tra vés delcomputador , permi ten l a au tomat i zac ióncompleta de los ensayos requeridos.

Equ i po s r equ e r i dos pa r a e f e ct ua r ensa -

yo s de ELISA

Para desarrollar la técnica de ELISA se requieredispon er a l meno s de los sig uientes eq uipos:

1. Un analizador de ELISA.

2. Un lavador de ELISA (capítulo 2).

3. Un sistema dispensado r de líq uido s. (Pue-de n usarse pipet a s multica na l).

4. Una incubad ora especia liza da pa ra las pla cas.

La ilustración que se presenta a continuaciónda una idea de la fo rma en q ue se encuentraninte rrela cion a do s los eq uipos mencion a do s.

I l u s t r ac ión 1 : Con jun t o de equip os para pr uebas ELISA

Fases m ecáni cas de un ensayo ut i l i zando

l a técn i ca d e ELISA

Uso de equipos

Cuando se realiza una prueba de ELISA, ge-neralmente se siguen estos pasos:

1. Utiliza nd o el la vad or de ELISA o microplaca s,

se efectúa un primer la vado de la placa.

2. Mediant e el dispensado r de l íq uido s o la s

pipetas multicanal, se llenan los vasos opo zo s de las placa s con las solucion es pre-pa rad a s pa ra ser uti liza da s en el ensa yo.

3. A continua ción , se coloca la placa e n la incu-ba dora do nde, a temperatura controlad a, selleva a cabo un conjunto de reacciones.

La s eta pa s 1, 2 y 3 se pu ede n repe tir varias ve-

ces depen diendo d el ensayo, ha sta q ue se lo-gre que las muestras colocadas en las placasha yan terminad o sus rea cciones.


17/208

Ana lizador de ELISA

17

4. Fina lment e, cua ndo se ha n completa do lasreacciones químicas, se lleva la placa ala na liza do r de ELISA y se e fectú a n la s lectu-ras que permiten emitir un d iag nóstico.

Fases q uím icas d e l a técn i ca d e ELISA

Se presenta a cont inua ción un b reve resumende cómo funciona la técnica de ELISA, desdeel punto de vista químico 1.

1. Se recubren los pozo s de una pla ca con a n-ticuerpos o a ntígeno s.

2. Se añaden las muestras, controles y están-

da res a los pozos de la placa y se incuba na temperaturas que osci lan entre la tem-perat ura a mbiente y 37 ° C, por un períod ode t iempo determinado, según caracterís-ticas de la prueba. Durante la incubación,una parte del ant ígeno de la muestra seune a l ant icuerpo del recubrimiento de laplaca, o el anticuerpo de la muestra se unecon el antígeno ubicado en el recubri-miento de la placa, en función de su pre-sencia y cantidad en la muestra analizada.

3. Después de la incuba ción , la s ent ida de s nounidas –antígenos o anticuerpos– se lavany se retiran d e la placa, ut iliza ndo el la va-do r de ELISA q ue u tiliza un buf fe r de lava-do adecuado .

4. A cont inua ción, se a ña de un a nticuerpo se-cundario, denominado el conjugado , elcua l t iene una en zima q ue reacciona rá conun sustrato para producir un cambio decolor.

5. Se inicia entonces un segundo período deincubación, durante el cual el conjugadose unirá al complejo antígeno-anticuerpoen los pozo s de la placa .

6. Después de la incubación, se realiza un nue-vo la vado para retirar de los pozo s de la pla-ca cualq uier vestigio del conjuga do no unido.

7. Se añade un sustrato. La enzima reaccio-

nará con el sustrato y causará un cambio

de color en la solución, b rinda ndo un me-dio para medir la cant idad de conjugadoque a la vez dirá cuánto complejo antíge-no-an ticuerpo e stá presente. Otro pe ríod ode incubación permitirá q ue esta reacciónteng a lugar.

8. Cumplido e l tiempo d e incuba ción , se añ a -de un reactivo para detener la reacciónsustrat o-enz ima y p revenir camb ios a dicio-na les de color. Gene ralmen te e ste rea ctivoes un ácido diluido.

9. Finalment e, se efe ctúa la lectura de la pla-ca e n e l an a liza do r de ELISA. Los va lores delos resulta do s se usan pa ra d eterminar las

cant ida des de a nt ígeno o ant icuerpo espe-cíficos presentes en la mu estra.

Alguno s de los pozo s en la placa se de stina n pa -ra colocar están da res y con troles. Los está nd a respermiten definir los puntos de corte (cut off ).Los controles son cantidades conocidas que seusan para medir el éxito del ensa yo, evaluandolos dat os recibido s con tra la s con centra cion es es-tablecidas para cada control. El proceso antesdescrito es común, aun q ue muchas prueba s de

ELISA tienen variantes.

SERVICIOS REQUERIDOS

Para q ue el an a liza do r de ELISA ope re correc-tamente, es necesario verificar los siguientespuntos:

1. Un amb iente l impio, libre de polvo.

2. Una mesa d e t raba jo esta ble. Lo recomen-

dable es que la misma esté alejada deequipos que generen vibraciones –centrí-fugas , ag i tadores–, que tenga un tamañoadecuado que permita ubicar , a l l ado delanalizador de ELISA, los equipos comple-ment arios reque rido s pa ra ef ectuar la téc-nica en mención: lavadores, incubadora,dispensador y computador con periféricos.

3. Una f uente d e suministro eléctrico d e a cuer-do con las normas y estándares implemen-

tados en el país. En los países americanos se

1 Explicaciones más detalladas deben ser consultadas en literatura especializada.


18/208

18

utilizan por lo general voltajes de 110 V yfrecuencias de 60 Hz.

Cal ib rac ión de l an a l izado r de ELISA

La calibración de un analizador de ELISA esun proceso especial izado que debe real izarun t écnico o ingeniero debidament e ent rena-do, siguiendo las instrucciones que para ele fecto brinda cada fabricante . Para e fectuarla calibra ción se req uiere dispon er de un jue-go de filtros grises, los cuales se encuentranmonta dos en una placa de igual geomet ría alas utilizad a s para efe ctua r los a ná lisis. Los fa -bricantes suministran dichos filtros y pueden

ser utilizados para realizar calibraciones acualq uier long itud de o nda de las que ut ilizael equipo.

Los filtros de calibración disponen de al me-nos tres valores de d ensida d ópt ica, preesta -blecidos dentro de los rangos de medición;uno ba jo, uno medio y el últ imo, un valor al-to . Para efe ctua r la ca libra ción se realiza el si-gu iente proceso:

1. Colocar el filtro d e calibración en el eq uipo.

2. Efectua r una lectura completa con el filtrode calibración. Verificar si se presentan di-ferencias en las lecturas obtenidas de ca-na l a ca na l. Si es a sí, invert ir el filtro (180° )y repetir nuevamente la lectura para des-cartar que las diferencias puedan ser atri-buibles al filtro en sí. Por lo general, seacepta que el instrumento no requiere ca-l ibración, si se encuentra ajustado en doslong itudes de onda .

3. Verificar si el lecto r está de scalibra do . Si esasí, proceder a la calibración, siguiendo larutina def inida por el fa brica nte, verifica n-do especialmente que la l ineal idad de laslecturas se ma nten ga lo má s rig urosam en-te posible.

4. Si no se dispone d e fi ltro d e cal ibra ción,verificar la misma colocando una soluciónde color en los pozos de una placa y efec-

tuando en seguida una lectura completa .Lueg o invertir la placa 180° y efectua r unanueva lectura. Si ambas lecturas presentan

valores promedio idént icos en cad a fi la , elanalizador se encuentra cal ibrado.

5. Verifica r si el despla za miento d e la pla ca seencuentra calibrado, columna por columna.Colocar una placa vacía y efectuar las lectu-ras. Si no se observan diferencias medias en-tre las lecturas de columna a columna de laprimera a la última, podría asumirse que ela vance se encuentra calibrad o.

RUTINAS DE MANTENIMIENTO

La s rutina s q ue se describe n a cont inuación es-tá n enfo cada s exclusivament e al ana liza do r de

ELISA. El mantenimiento del lavador de ELISAestá tra ta do en el ca pítulo correspond iente .

M antenimiento básicoFrecuen cia : Diaria

1. Revisa r q ue los sensores ópticos de cad acana l estén limpios. Si se d ete cta sucied a d,limpiar con un pincel la superficie de lasventanas de los emisores de luz y de los

sensores.

2. Conf irmar q ue el sistema de i luminaciónesté limpio.

3. Verificar q ue la cal ibración d el an aliza do res adecuada. Cuando se inicien las opera-ciones diarias, permitir que el analizadorse caliente durante 30 minutos. A conti-nuación, real izar una lectura en blanco yluego leer un módulo l leno de sustrato.Las lecturas deben ser idénticas. Si no lo

son , invertir el mó du lo y repe tir la lectura ,a fin de determinar si la desviación se ori-g ina en el mód ulo o en el lector.

4. Examinar e l avance auto mát ico de la pla-ca. El mismo de be ser sua ve y con sta nt e.

M antenimiento preventivoFrecue ncia : Trimest ra l

1. Verificar la estab ilida d d e la lámpa ra. Usarel filtro d e calibra ción , efectua nd o lectura scon intervalos de 30 minut os o un a misma


19/208


19

placa. Comparar las lecturas. No debenexistir diferencias.

2. Limpiar los siste ma s óp ticos de los det ecto -res y los sistemas de iluminación.

3. Limpiar el meca nismo d e a vance de la pla ca.

4. Verifica r la alineación de cad a po zo con lossistem a s emisores y d ete ctores de luz.

Tab la d e so lu ción de p rob lem as

El analizador brinda lecturas sin sentido. Lámpara de i luminación fuera deservicio.

Reemplazar la lámpara por o tra de las mismascaracterísticas que la original.

El analizador presenta absorbanciasaltas.

Reactivos usados y/o preparados deforma incorrecta.

Revisar que el TMB sea incoloro y la prepara-ción adecuada.

Contam inación con o t ras muest ras. Repet i r el ensayo ver i fi cando la marcación , e llavado y la forma de usar la pipeta.

Fi l t ro de longi tud de onda incorrecto. Ver i f icar la longi tud de onda recomendadapara el ensayo. Ajusta r si es del caso.

La va do in su f ici en t e o in ef i ci en t e. Co nf ir mar e l m ét od o d e la va do u t il iza do. Em -plear un ensayo de control de calidad ap ropiado.

Tiempo de incubación muy largo otemperatura muy alta.

Revisar tiempos y temp eratura de incubación.

Dilución de muestras mal procesada. Revisar proceso de di lución de muestras.

Falta algún react ivo. Verificar que el ensayo se realiza de acuerdo alprocedimiento establecido.

Las lecturas del analizad or varían de fi-la en f i la.

Sensores ópt icos sucios. Lim piar los sensores.

Lentes o elementos del sistema de ilu-minación sucios. Limpiar lentes del sistema de i lum inación.

Falta de cal ibración de uno o máscanales.

Verificar la calibración de cada uno de loscanales.

Pro blem as co n lo s b lan co s. Ef ect uar un a lect ura en vacío y co mp ararlacontra la lectura del blanco. Si el sistema leebien, deberá encontrarse una lectura de den-sidad óptica similar. Caso cont rario, el anal iza-dor está descalibrado.

El analizador presenta absorbanciasbajas.

Tiempo de incubación muy corto otemperatura muy baja.

Revisar temperaturas y tiemp os de incubación.

Los reactivos no se encuentran a latemperatura ambiente.

Comprobar que los reactivos estabilicen sutemperatura con la del ambient e.

La vad o ex cesi vo de l a p laca . A ju st ar el p ro ceso d e l ava do a lo i nd ica do p orel fabricante del ensayo.

Fi l t ro de longi tud de onda incorrecto. Ver i f icar el f i lt ro de longi tud de onda seleccio-nado. Uti l izar el recomendado para el ensayo.

Reactivos usados o preparados de for-ma incorrecta.

Revisar los reactivos utilizados. Compro bar lasdiluciones.

Falta algún react ivo. Verif icar que el ensayo se realiza de acuerdoal procedimiento establecido.

La placa presenta rayaduras en el fon-do de los pozos.

Preparar una nueva placa y repetir el ensayo.

PROBLEM A CAUSA PROBABLE REM EDIO


20/208

2

Clase de placa mal seleccionada o pla-ca sucia.

Verif icar el t ipo de placa uti l izada. Prepararuna placa nueva y repetir el ensayo.

El anal izador presenta var iac ionesinesperadas en las lecturas de densi-dad óptica.

La lámpara del anal izador en situacióninestable.

Reemplazar la lámpara por otra de las mismascaracterísticas que la original.

Lecturas de densidad óptica mu y bajascomparadas con los criterios de la eva-

luación ópt ica del operador.

La lectu ra se está realizando con l uz delongitud de onda diferente a la reque-

rida por el ensayo.

Verif icar con qué longitud de onda se estáefectuando la lectura. Si es del caso, ajustar la

longitud de onda y repetir la lectura.Verificar que se ha seleccionado el filtro delongitud de onda recomendado.

A lta absorbancia del b lanco. Sust rato contam inado. Revisar que el TM B sea incoloro y la prepara-ción adecuada.

La va do i n su f ici en t e o i n ef ici en t e. Re ti ra r e l b u ff er d esp u és d el la va d o. Re vi sa rque los pozos sean llenados y aspirados demanera unifo rme cuando se lavan.

La lectura del analizador presenta unaumento gradual o un decremento decolumna en columna.

Calibración inadecuada del motor deavance de la placa.

Calibrar el avance para que en cada paso lospozos queden exactamente al ineados con elsistema emisor de luz.

Los datos no son transferidos entre ellector y el microprocesador.

El lector y el microprocesador tienendefinidos diferentes caracteres.

Verificar códig os seleccionad os.

Tasas de transferencia de información(Baud) diferentes.

Confirmar tasas de transferencia seleccionadas.

Configuración de las clavijas de trans-misión/recepción mal seleccionada.

Revisar la configuración de las clavi jas. Debeestar configurada según parámetros definidospor el fabricante.

Se han secado los pozos de la p laca . Cambiar l a fo rma de lavar la p laca.

Placa mal colocada en el lector o malsentada.

Revisar la colocación de la placa. Repetir lalectura.

Humedad o h uellas digitales en el fon-do exterior de la placa.

Verificar que el fondo exterior de los pozos seencuentre l impio.

Cantidades residuales del buffer de lavadoen los pozos antes de añadir el sustrato.

Confirmar la remoción completa del buffer delavado.

Las tabletas del sustrato no se encuen-tran comp letamente disueltas.

Verificar que las tabletas se disuelvancorrectamente.

La tableta del sustrato ha sido conta-minada por humedad o pinzas metál i-cas o no se encuentra completa.

Evidenciar integridad y m anejo de las tabletasdel sustrato.

La posición del pozo blanco p odría ha-ber sido cambiada y una cantidad in co-rrecta ha sido restada a cada lectura.

Verificar la carga correcta de la placa.


Baja reproducib i lidad. Hom ogeneidad de la m uest ra. M ezclar los reactivos antes de usarlos. Permit irque se equilibren con la temperatura ambiente.

Procedimiento erróneo en el uso de lapipeta.

Comprobar que las puntas de la pipeta soncambiadas entre las muestras y que es remo-vido el exceso de líquido en el exterior.

Lector descalibrado. Revisar la calibración. Usar un juego de con-trol de cal idad apropiado.

Lector utilizado sin suficiente

calentamiento.

Esperar a que el lecto r se haya estab ilizado en

su temperatura de op eración.React ivos vencidos. Verif icar las fechas de vencim iento de los

reactivos.


21/208


21

Falla en la interfase del programa decomunicaciones.

Llamar al servicio t écnico especializado.

Haz de luz desalineado. El analizador t rasladado o m ovido sinlas debida s precauciones.


La fuente de luz –lámpara– ha sidocambiada y su reemplazo no ha sidoinstalado y al ineado correctamente.

Verif icar montaje y al ineación de la fuente deluz.

El comput ador fal la al ind icar los códi-gos de erro r.

El programa que controla la activaciónde las alarmas y los mensajes de adver-tencia presenta fallas o no está valida-do po r el productor.


El analizador presenta fallas en la de-tección de erro res.

Diversos componentes del sistema pre-sentan fal las, como el sistema de de-tección del nivel de líquidos.


Cable de conexión lector-microproce-

sador mal ajustado.

Revisar conexiones.Ajustar conexiones.

Ident i f icación incorrecta de la muestra. Placa cargada de forma inadecuada. Revisar proceso de ident i f icación de las mues-tras. Repetir lectura efectuando los ajustes.

Identi f icación incorrecta de la m uestraregistrada en el analizador.


DEFINICIONES BÁSICAS

ELISA. Técnica desarrollad a para efectua ranálisis que permiten determinar si una sus-ta ncia se encuentra presente e n una muestra.Se utiliza principalmente en el área de inmu-nología. La palabra ELISA es el acrónimo delas palab ras en leng ua ing lesa Enzyme-Linked Imm unosorb ent Assay.

Enzima. Proteína que sirve de catalizador enuna reacción q uímica, a celera ndo la s rea ccion es.

Fluoróforo. Moléculas que absorben luz auna d eterminad a longi tud de ond a y emitenluz de una long itud d e onda mayor.

Lavador de ELISA. Eq uipo q ue se utiliza pa -ra lavar las placas durante las etapas de unaprueb a de ELISA, con el fin de rem over a q ue-llos compo nent es q ue no se han unido en las

reacciones. El lavador de ELISA utiliza buffersespeciales en los procesos de lava do .

Lector de microplacas. Nombre da do a losanalizadores de ELISA.

Placa de ELISA. Elemento de consumo que seha esta nda riza do para efectuar los an álisis me-dia nt e la té cnica de ELISA. La s pla cas tiene n engeneral 96 pozos en una configuración típicade 8 fila s po r 12 column a s. Ta mb ién ha y placa sde ELISA de 384 y recient eme nt e se ha n ven idoimponiendo microplacas de h a sta 1 536 poz os,

en centros de alta demanda, debido a las eco-no mías log rad a s en insumos y rea ctivos.

Quimioluminiscencia. Emisión de luz queaparece durante una reacción química.

TMB. Sustrato usado con la enzima HRP.


22/208

22

Bib l i o g ra f ía

ELISA Au t om atio n , Hudson Con tro l Group, AB104A, 2002. (w w w .hud son cont rol.com )

Solid Phase Guide, NUNC™ , Bran d Produ cts, Int rod uction t o Solid Pha se Techniqu es.(ht t p://w w w .nu ncb ra nd .com /PDF/Gu ide s%20an d %20Ma nu a ls/Guid e%20to %20So lid %20Phase .pdf)

Universa l Med ica l Device Nome nclat ure Syste m™ (UMDNS), Produ ct Cat ego ries Thesaur us ,ECRI, 5200 Butler Pike, Plymouth Meeting, PA, USA, 2000.

Zoon, Kathryn, Recommendat ion s t o u sers of medical devices t hat t est f or in f ect iou s dis- ease marker s by en zyme immun oassay (EIA) t est syst ems, Division of Blood Applications,Bet he sda , MD. (ht t p://w w w .f d a .g o v/cbe r/b ldm em /122094.t xt)


23/208

LAVADOR DE ELISA

Está d i señado para e fec tuar l as operac io-nes de l avado que se requieren cuando seuti l iza la técnica de ELISA. El equipo efec-t ú a e l l a va d o d e l o s p o zo s qu e c o n t i e n e nlas placas de ELISA, durante las di ferentes

e t a p a s d e la t é c n ica .

FOTOGRAFÍA DE LAVADOR DE ELISA1

PROPÓSITO DEL LAVADOR DE ELISA

El lavador ha sido diseñado para proporcio-nar, de forma controlada, los buf fe rs de lim-pieza q ue se req uieren al desarrolla r un aná -lisis utilizando la técnica de ELISA. Asimismo,el equipo cumple la f unción de ret irar de ca -da uno d e los pozo s la s susta ncia s q ue no pa r-ticipa ron en la reacción. Depend iendo de lasvariantes que presente la técnica, el lavador

pod ría lleg a r a intervenir por lo ge neral entreuna y cuatro veces, suministrando buf fe r d elavad o, a g i tand o y extrayendo , una vez cum-plidos los tiempos programados, los com-puestos que no participaron en las reaccio-nes2. El lavador dispone de dos depósitos; enuno de ellos, se coloca el buf fe r de l avado ,

mientra s q ue en e l ot ro, se recolecta n las sus-ta ncia s que se d esecha n en la t écnica d e ELISA.


El lavador de ELISA ha sido diseñado parareal iza r las opera ciones de lavad o q ue se en-cuentra n involucra da s en la té cnica de ELISA.El equipo dispone de al menos los siguientessubsistema s que varía n en diseño depen dien-do del fabricant e :

• Subsistem a de control . Por lo general, escontrolado por microprocesadores y permiteprogram ar y controlar las activida des que de-be realizar el lavador como el número de ci-clos de lavado requeridos3 (1-5), los tiemposde e spera, las presion es de suministro y de e x-tracción, el tipo de placa utilizada (96 - 384poz os); a justa la fun ción de succión seg ún laforma del pozo 4 –fon do plan o, fo ndo en V,fon do redond o o tiras utilizad a s–; regula los

volúme ne s dispensa do s y/o a spira do s, lostiempos de remojo y ag ita ción, ent re otros.

• Subsistem a de suministro . Por lo gene-ral , está compuesto por un de pósito pa ra lasolución de lavado, una o varias bombas,usualmente de desplazamiento posit ivo t i-po jeringa y una cabeza dispensadora que

CAPÍTULO 2

Lavador de ELISACódigo (s) ECRI

17-489

Código (s) ECRI

Lavador d e m icroplacas

1 ht tp ://w w w.mt xlsi.com/ima g es/Finstrume nt sWa sherFloa t.jpg2

Ver explicación breve de la técnica de ELISA en el capítulo 1, Analizad or de ELISA .3 El número de o peraciones de lavad o req uerida s depende exacta mente de la t écnica qu e se utilice, aspecto que se encuen-tra explicado en las instrucciones de cada prueba que suministra el fabricante.

4 Si el fon do es plan o, la a guja d e succión es colocada muy cerca a una de las caras del pozo; si es redond ead o o en V, se co-loca la a guja d e succión en el centro del pozo .

23

1


24/208

24

suministra, a través de agujas, la soluciónde lava do a los diferentes pozo s. La cab ezasuele contar con ocho pares de agujas paralavar y aspirar los pozos de una misma filade la placa de f orma simultá nea –en la cabe-za confluyen los subsistemas de suministro yde extracción –. Ta mbién h a y mo delos q uedisponen de doce pares de agujas y existenversione s q ue ef ectúa n el proceso d e lavad ode ma nera simultá nea en to dos los pozos dela placa. Algunos lavadores brindan la posi-bilidad de trabajar con diversas solucionesde limpieza, efectuando los cambios de so-lución según programe el operador.

• Subsistema de extracción . Requiere de

un mecan ismo de va cío y d e un sistema dealma cena miento pa ra recolectar los fluido sy desechos retirad os de los poz os de las pla -cas. El vacío puede ser proporcionado porbombas externas o internas. La extracciónse real iza mediante un conjunto de agujasmont a da s en la cab eza lava do ra/aspirad o-ra. El número de agujas varía entre uno ytres, seg ún el fa brica nte y el modelo.

Si se usa una sola a g uja , la s ope racion es de la-

vado y extracción se hacen a través de esta

única aguja. Si se utilizan dos agujas, una seusa pa ra el suministro d e la solución de la vad oy la otra para la extracción. Si se utilizan tres,la primera es para el suministro de la soluciónde lavado, la segunda para la extracción y latercera para controlar –extraer– cualquier ex-ceso d e volumen d entro d el pozo.

En g eneral la long itud de la a guja de extrac-ción es mayor q ue la long itud d e la ag uja d esuministro, con el fin de que pueda avanzar–verticalmente– hasta una altura que oscilaentre 0,3 y 0,5 mm del fondo del pozo.

• Subsistema de avance . Está compuestopor un mecanismo que desplaza horizon-

ta lment e la cab eza de suministro y extrac-ción, para poder l legar en la placa de ELI-SA a cada uno d e los pozo s; cua ndo se haefectuado e l desplazamiento horizonta l ala siguiente fi la , se real iza un movimientovertical hacia los pozos, con el fin de dis-pensar y/o e xtraer la solución de lavad o.Hay lavadores que efectúan es tas opera-ciones de f orma simul tánea .

Se presenta a cont inua ción una ilustra ción en la

que se muestran los subsistemas mencionados.

I l u s t r ac ión 2 : Lavador de ELISA


25/208

25

Lavado r de ELISA 2

Proceso de lavad o

El la vado es una d e las etapa s que se deb e reali-zar cuando se efectúan análisis, utilizando latécnica de ELISA. Se emplean para el efecto so-luciones especiales. Entre las más usadas se en-cuentra la solución buffer fosfa ta da o PBS. La so-lución buffer fosfata da tiene una estabilida d de

2 meses, si se la conserva a 4 °C. Se estima quepara el lava do de una microplaca se req uiere en-tre 1 y 3 litro s de solución . Se estima q ue en ca-da pozo se utiliza n 300 µl de solución de lavadopor ciclo. El lavad o e s una o pera ción q ue se pue-de realizar manualmente, pero si se tienen de-mandas altas y si se trabaja con sustancias po-ten cia lment e conta minad a s, es mejor utiliza r unequipo de lavado automatizado.

Entre los procesos de lavado se destacan lossiguientes:

• Aspiración de arriba hacia abajo . Cua n-do se inicia la fa se de a spira ción , la s a g uja sse desplazan verticalmente y la aspiraciónse inicia de inme dia to ; esta s ent ran en el lí-quido; el proceso continúa hasta que lasagujas alcanzan la posición máxima infe-rior, muy cerca d el fond o d e los poz os, mo-mento en e l que se det ienen para evi tarsuccionar aire que fluiría necesariamentesob re la s pa rede s lat era les interiores de los

pozos. Este tipo de aspiración previeneque corrientes de aire sequen la proteínaunida sob re la superficie de los pozo s.

• Aspiración y dispensación simultá-neas. En este tipo de lavado los sistemasde lavado y aspiración funcionan simultá-neamente , generando una turbulenc i acontrolada dentro del pozo que remuevelas sustancias no unidas durante los tiem-pos estimados de reacción.

• Aspiración desde el fondo de los po-zos. En este sistema, la aspiración delf luido contenido en los pozos se e fectúaposicionando inic ia lmente las agujas deaspiración en una posición muy cercanaa l fo ndo , iniciand o en seg uida un ciclo desucción que generalmente es controladopor t iempo. Este s is tema puede l legar aa spirar a ire si ha y dife rencia s en los nive-les de l lena do de los tan q ues .

Ca l ib r ación de l lavado r

El la vad or d e ELISA resulta crítico pa ra g a ran -tiza r q ue la t écnica d e ELISA fun cion a de fo r-ma apropiada. Se presentan a continuaciónlos l ineamientos a tener en cuenta para queel equipo f uncione a decuada mente .

• Posición de las agujas (cabeza de sumi-nistro y aspiración). Se d ebe verifica r concuida do el ajuste d e la p osición h orizon ta l y

vertical respecto de los poz os. Si la placa tie-ne pozo s de f ond o plano , se deb e verificar q uela ag uja de a spiración se encuentre ub icad a

La siguiente ilustra ción muestra la s forma s depozo má s comun es encontra da s en las pla cas

de ELISA. Cada forma de pozo es adecuadapa ra un t ipo d e prueba en pa rticula r.

I l u s t r ac ión 3 : Per f il es de los pozos, técnica de ELISA


26/208

26

muy cerca a la pared del pozo; si el fond o esredo nd o o en V, se de be verifica r qu e laaguja de succión se encuentre en el centrodel pozo y, cua ndo se ef ectúa el movimien-to vertical , se mantenga una distancia agu-ja-fo ndo del pozo , comprend ida entre 0,3 y0,5 mm. Nunca se debe permitir que lasag ujas toq uen el fondo de los pozos , paraevita r interferencias d e t ipo mecánico entrela punta de la ag uja y e l fondo d el pozo d u-rant e la fun ción de a spiración.

• Tiempo de aspiración. Ajustar el tiempode a spiración d e fo rma q ue resulte a decua-do , pa ra q ue la película de solución a dheri-da a la pared del pozo pueda f luir hasta e l

fo ndo del mismo. Evita r t iempos dema siad olargo s pa ra imped ir q ue se seq ue el recubri-miento de los pozos. Verificar que las agu-jas del sistema de succión se encuentrenlimp ias (libres d e ob struccione s).

• Volumen dispensado. Verificar que el vo-lumen d ispensa do esté lo má s cerca posibledel volumen máximo del pozo; confirmarq ue to do s los pozos se llenen d e fo rma ho -mog énea –al mismo nivel–. Comprob ar q ue

las a g uja s dispensa do ras se encuent ren lim-pias (libres de ob struccione s).

• Vacío. El sistema de succión debe estar gra-dua do d e fo rma a decuada . Si el vacío es muyalto, pued e a lterarse la prueba , pues pod ríansecarse los pozos y debilitar considerable-mente la activida d d e la enzima en los pozo s,alterando por completo el resultado de laprueba. La mayoría de los lavadores funcio-na n b ien con u n va cío q ue o scila ent re el 60 y70 % de la presión atmosférica. En algunos

lavadores, el vacío se produce en una bombaexterna q ue opera como un a ccesorio del la-vador y su operación es controlada desde ellavador, lo que implica que la bomba de va-cío opera únicamente cuan do se req uiere.

Ver i f i cación de l p roceso d e lavado

Para verificar si el proceso de lavado se realizade a cuerdo con la s especifica cion es exigidas po r

la técnica de ELISA, los fabricantes de pruebas

de ELISA han desarrolla do procedimient os q uedebe n ser efectua do s de f orma reg ular. Uno delos controles5 se b a sa en la u tiliza ción del reac-tivo Peroxidasa, el cual se dispensa medianteuna pipeta en los poz os de la placa pa ra ser leí-do a 405, 450 y 492 nm. En seguida los pozosse lavan y se les añade un sustrato incoloro(TMB/H2O2 - Tet ra me tilben zidina /Peró xid ode hidrógeno ). Cualq uier residuo conjuga dohidrol izará la enzima y e l cromógeno cam-biará a color azul . Después de detener larea cción co n á cido , el TMB se vue lve a ma ri-l lo. La intensidad del color resultante estádirectamente relacionada con la eficienciadel proceso d e lavad o.


Para que el lavador de ELISA opere correcta-mente, se necesita disponer de los siguientesservicios:

1. Un a mb iente limpio, libre de po lvo.

2. Una mesa de trabajo estable. Se aconsejaque la misma esté alejada de equipos que

g eneren vibra ciones –centrífug a s, ag ita do -res–, que tenga un tama ño ad ecuad o paraque permita ubicar, al lado del lavador deELISA, los equipos complementarios re-queridos para efectuar la técnica en men-ción: anal izador, incubadora, dispensadory computador con periféricos.

3. Una toma eléctrica con polo a t ierra enbuen es tado, conectada a una acometidaque cumpla con las normas y estándareseléctricos implemen ta do s en el país o el la -

boratorio. En los países americanos se uti-liza n g ene ralment e volta jes de 110 V y fre-cuencias de 60 Hz.

RUTINAS DE M ANTENIM IENTO

La s rutina s que se d escriben a continua ción es-tán enfocadas exclusivamente al lavador deELISA. El ma nt enimient o de l an a liza do r d e ELI-SA está t rat a do en el ca pítulo correspon diente .

5 Procedimiento desa rrolla do por PANBIO, ELISA Check Plus , Ca t . Nº E-ECP01T.


27/208

27

Lavado r de ELISA 2

Man t en im ien t o básico

Frecuencia: Diaria

1. Verifica r el volumen dispensado .

2. Comprob a r la uniformidad del llena do .

3. Verificar la eficiencia del subsistema deaspiración.

4. Confirmar la limpieza de las agujas de su-ministro y extracción.

5. Limpiar el la vado r con a gua destila da des-pués de haberlo uti l izado, para removercualquier vestigio de sal en los conductos

de los subsistemas de suministro y extrac-ción. Las agujas pueden mantenerse su-mergida s en a gua dest ilad a .

6. Verificar la limpieza del cuerpo del lava-dor. Si es del caso, limpiar las superficiesexteriores con una pieza de tela humede-cida , con un d eterg ente suave.

Man t e n im i e n t o p r ev e n t i v o

Frecuencia: Trimestral

1. Desensa mb lar y limpia r los con ducto s y co-necto res. Verificar la int eg rida d de los mis-mos. Si de detectan fugas o vestigios decorrosión, a justa r y/o ree mp laz a r.

2. Verifica r la inte g rida d de los compo nen tesmecá nicos. Lubrica r de a cuerdo con la s ins-trucciones del fabricante.

3. Comprobar el ajuste de cada uno de lossubsistemas. Calibrar de acuerdo a las re-comen da ciones del fab rica nte.

4. Confirmar la integridad del conector eléc-trico y el cab le de inte rcon exión .

5. Verifica r la integ rida d d el fusible, y q ue suspunto s de conta cto estén limpios.

Tab la d e so lu ción de p rob lem as

Al terminar el lavado quedan residuosde la solución utilizada en los pozos.

El sistema de extracción del lavadorpresenta fallas.

Verificar si el sistema de vacío funciona a lapresión adecuada.

Los cond uctos del sistema d e vacío sonde diámetro diferente al recomendado.

Comprobar el diámetro de los conductos querecomienda el fabricante.

La línea de succión presenta obstruc-ciones.

Verificar que las líneas de vacío se encuent renlimpias.

El recipiente para almacenar el desper-

dicio se encuentra lleno.

Confirmar el nivel del recipiente de desperdicio.

El filtro de la línea se encuentra húme-do o bloqueado.

Verificar el estado e integridad del filtro del sis-tema de succión.

La punta de la pipeta n o está colocaday no l lega hasta el fond o de los pozos.

Examinar la colocación de las puntas en lapipeta.

Se uti l izó una microplaca diferente enel ensayo.

Verificar el tipo d e placa que requ iere el ensayo.

El lavador no ha sido purgado adecua-damente.

Revisar el pro ceso de p urga.

El operador no ha seguido las instruc-ciones del fabricante correctamente.

Examinar el proceso recomendado por el fa-bricant e. Efectua r los ajustes requerido s.

Se colocó la placa en el lavador, sin laalineación correcta.

Revisar la colocación de la pl aca en el lavado r.


Nota: Personal técnico debidamente ca-pacitado debe real izar el mantenimientode siste ma de con tro l. Si se req uiere, debella ma rse a l fa bricante o representa nte.


28/208

28


Bomba de desplazamiento positivo. Dis-posit ivo conformado por un émbolo que sede splaza a lo la rgo de u n cilind ro. El meca nis-mo es similar a l q ue presenta una jering a . Es-tá dotado de un conjunto de válvulas paracontrolar los flujos hacia y desde la b omb a.

Bu f f e r . Solución q ue ma ntiene un valor cons-tante y conocido de pH a una temperaturad a d a .

PBS. Una de las soluciones que se utiliza pa-ra efectuar las operaciones de lavado en las

pruebas de ELISA. PBS es el acrónimo dePho sphate Buff er Solu t ion . Está compuestopor las siguientes sustancias: NaCl, KCl, NaH - PO 4 2H 2 O y KH 2 SO 4 . La s ca sa s produ ctora s su-ministran los boletines técnicos que indicanla s proporcion es e instrucciones de cómo pre-pararse. En general se mezcla una parte dePBS, con 19 partes de a gua desionizad a.

Placa (de ELISA). Dispositivo de dimensionesesta nda riza da s diseña do para colocar las mues-tras que requieren ser analizadas mediante latécnica de ELISA. En general existen disposicio-nes de 96, 384 y 1 536 pozos. Se fabrican enplásticos como poliestireno y polipropileno.

El ciclo de lavado se desarrolla de for-ma inadecuada.

Se agotó la reserva de la solución delavado.

Examinar el recipiente de almacenamiento dela solución de l impieza. Reponer el volumenfaltante.

El recipiente de lavado presenta creci-miento de hongos o b acterias.

El sistema no se usa frecuentemente.

No se uti l iza un procedimiento de con-trol adecuado (desinfección).

Revisar los procedimientos usados para impe-dir el crecimiento de hongos o bacterias.

Los tubos y conectores no se cambiancon la frecuencia requerida.

Verificar la frecuencia de cambio sugerida porel fabricante y/o por el departamento técnico.

La solución de lavado se ha contaminado. Confirmar los procedimientos ut i l izados en lapreparación y manejo d e la solución de lava-do, a f in de determinar la causa de la contami-nación y el iminarla.

No se ha efectuado el mantenimientode acuerdo a la programación.

Revisar las fechas previstas para efectuar elmant enimiento. Informar a los responsables.

El lavador no fue purgado adecuada-mente al inicio del ciclo de trabajo.

Limpiar adecuadamente para homogeneizarla humedad en cada uno de sus componentesy que se eliminen las burbujas de aire.

El volum en dispensado d e solución de la-vado ha sido programado erróneamente.

Verificar los volú menes de solució n requerido spara cada t ipo de prueba y cada t ipo de placa.

La placa fue colocada de forma inco-rrecta en el lavad or.

Comprobar la correcta instalación de la placaen el lavad or.

La altura de trabajo fue mal seleccionada. Revisar la alt ura de t rabajo recomendada pa-ra cada t ipo d e placa.

Las placas utilizadas son diferentes alas recomendadas por el fabricante.

Verificar que las placas utilizadas sean com-pletamente compatibles con el lavador.

No se mantienen los niveles de f luidoadecuado en los pozos.

El tub o de suministro d e la solución delavado no es del diámetro n i del espe-sor definido por el fabricante.

Revisar las especificaciones del fabricant e. Co-rregir si es del caso.

La presión es insuficiente para ent regarla cantidad adecuada de solución delavado.

Revisar el sistema de suministro y los conduc-tos de suministro. Puede haber una obstruc-ción en la l ínea de l lenado.



29/208

29

Lavado r de ELISA 2

Existen ta mbién placas que ha n recibido tra -tamientos especiales para facilitar la realiza-ción de prueba s.

TMB/H2O2. (Tet ra me tilben zidina /Peró xido dehidrógeno ). Rea ctivo q ue se emplea pa ra ve-rifica r la calida d d el la vad o d e los po zo s utili-za do s en la té cnica ELISA.

Bib l i o g r af ía

ELISA Check Plu s , Pa nb io, Ca t . Nº E-ECP01T, Brisba ne , 2004.(ht t p://w w w .pa nb io.co m.a u/pro d inf o /E-ECP01T.pd f )

Good techniq ue f or ELISA A ssay , GTI, Inc.(ht t p://w w w .g t idia g no stics.com /fo rms %26do cs/g o o d _elisa _t echn iq ue s_062304.pd f )

Solid Pha se Guide , NUNC™ , Bra nd Produ cts, Introduction to Solid Phase Techniques .(ht t p://w w w .nu ncb ra nd .com /PDF/Gu ide s%20an d %20Ma nu a ls/Gu ide %20to %20So lid %20P-hase .pdf)

Universa l Med ica l Device Nome nclat ure Syste m™ (UMDNS), Pro du ct Cat ego ries Thesaur us,ECRI, 5200 Butler Pike, Plymouth Meeting, PA, USA, 2000.

Zoon, Kathryn, Recommendat ion s t o u sers of medical devices t hat t est f or in f ect iou s disea- se marker s by en zyme immun oassay (EIA) t est syst ems , Division of Blood Applications, Bet-he sda , MD. (ht t p://w w w .fd a .g o v/cbe r/b ldm em /122094.t xt)


30/208

3


31/208

31

ANALIZADOR DE pH

El a na lizad or de pH se utiliza pa ra d ete rmina r laconcentración de iones del gas hidrógeno [H+ ]en una disolución. Este equipo permite realizarmed icion es de la a cidez de un a solución a cuosa ,siempre que el mismo sea utilizado de forma

cuidadosa y se ajuste a procedimientos plena-mente comprobados. A los analizadores de pHse les deno mina, a demá s, pHmetros, monit ores de pH o pot enciómetros .

PROPÓSITO DEL EQUIPO

El analizador de pH es un instrumento de usocomún en cualqu ier campo de la ciencia rela cio-na do con solucion es acuosas. Se ut iliza en á reascomo la agricultura, el tratamiento y purifica-

ción de agua, en procesos industriales como lospetroquímicos, fabricación de papel, alimentos,meta lmecánica, fa rmacia e investiga ción y de sa -rrollo, ent re ot ros. En el la bo rat orio de salud, lasaplicaciones del instrumento están relacionadascon el control de medios de cult ivo, contro-la r y/o med ir la a lcalinida d o a cide z de caldo s ybuffer . En eq uipos especia liza do s de dia g nó sticode laboratorio, se usan los mismos principios uti-lizando microelectrodos para medir la acidez oalcalinidad de los componentes líquidos de la

sa ng re, en dond e la susta ncia má s importa nte esel agua que contiene gran cantidad de sales ysustancias orgánicas disueltas. El pH del plasmasanguíneo es una de las características que per-mite eva luar y det ermina r el esta do de salud deun paciente; su valor varía normalmente –en elplasma– entre 7,35 y 7,45. Dicho valor está rela-cionado con el metabolismo del paciente, pro-ceso en el cual ocurre multitud de reaccionesque resultan inherentes al proceso vital, en lascuales se producen y eliminan ácidos y basesque, en condiciones normales, se mantienen eneq uilibrio. Los ácidos liberan constan tem ent e io-nes [H+ ] que el organismo neutraliza o equilibramediant e la liberación d e iones de b ica rbona to

[HCO3–]. El organismo mantiene el equilibrio

acido-básico a través de los riñones, órganos enlos cua les se elimina cualq uier exceso q ue se pre-sent e. –Es una de las ca racterística s que varía d e-pendiendo d e fa ctores como la eda d o el esta dode sa lud del paciente–. Se presenta n a cont inua -ción los va lores típicos de pH d e a lg uno s fluidos

corporales.

Tabla 1: Valores de pH de algu nos f luidos orgánicos

FOTOGRAFÍAS Y ELEM ENTOS DELANALIZADOR DE pH

CAPÍTULO 3

Analizador de pHCódigo (s) ECRI

15-164

Den om inación (e s) ECRI

Medidores de pH

FLUIDO VALOR DE pH

Bilis 7,8 – 8,6

Saliva 6,4 – 6,8

Orina 5,5 – 7,0

Jugo gást rico 1,5 – 1,8

Sangre 7,35 – 7,45

Fotografía

Elemento

Analizador de pH con brazo port aelectrodo y electrodo

1. Brazo portaelectrodo y electrodo2.Transformador3. Contro l a juste temperatura

4. Controles de cal ibración Cal 1 y Cal 25. Control selector de funciones Stand by, mV, pH


32/208

32


El ana liza do r de pH mide la concentra ción deiones [H+ ], utilizando un electrodo sensible alos iones. En condiciones ideales dicho elec-trod o de bería responder a nte la presencia d eun único t ipo de ión, pero en la real idadsiempre se presentan interacciones o interfe-rencia s con iones de ot ras cla ses present es en

la solución. Un electrodo de pH es general-ment e un electrod o combina do , en el cua l seencuentran integrados un electrodo de refe-rencia y un electro do de vidrio, en u na mismasonda. La parte inferior de la sonda terminaen un bulbo redondo de vidrio delgado. Eltub o interior cont iene cloruro d e po ta sio sa-turado (KCl), invariable y una solución 0,1 Mde á cido clo rhídrico (HCl). Ta mb ién, d ent ro

del tubo interior, está el extremo del cát od odel electrod o de referencia . El extremo an ó-dico se e nvuelve a sí mismo en e l exterior d eltub o interno y t ermina con el mismo t ipo d eelectrodo de referencia como el del tubo in-terno. Ambos tubos, el interior y el exterior,contienen una solución de referencia, peroúnicamente el tubo exterior t iene contactocon la solución d el la do externo d el electrod ode pH, a t ravés de un t apó n poroso q ue actúacomo un puent e salino.

Dicho dispositivo se comporta como una cel-da g alvánica . El electrodo de referencia es eltubo interno de la sonda ana lizad ora de pH,el cua l no p ued e perd er ion es por int era cción

con el amb iente q ue lo rod ea , pues como re-ferencia debe permanecer estát ico –invaria-ble– durante la real ización de la medida. Eltubo exterior de la sonda contiene el medioa l q ue se le permite me zcla rse con el am bien-te externo. Como resulta do de lo an terior, es-te tub o d ebe ser llena do pe riód ica ment e conuna solución de cloruro de pot a sio (KCl) parareponer la capa cida d d el electrodo q ue se in-hibe por pérdida de iones y por evapo ración.

El bulbo de vidrio en la parte inferior dele lectrodo de pH que actúa como elementode me dición está recubierto, ta nto en el exte-rior como en el interior, con una ca pa de ge lhidrat a do . Los cat iones met á licos [Na + ] se di-funden en el gel hidratado fuera del vidrio ydent ro de la solución, m ientra s que los iones[H+ ] de la solución se d ifund en d entro del ge lhidratado. El gel hidratado es el que haceque el electrodo de pH sea un electrodo se-lectivo de iones. El ión [H + ] no cruza a travésde la membrana de vidrio del electrodo de

pH, es el ión sod io [Na + ] el qu e cruza y permi-te un cambio de la energía l ibre. Cuando unión se difunde de una región de actividad aotra, se presenta un cambio en la energía l i-bre y esto es lo q ue mide el a na liza do r de pH.Una breve explicación de la teoría sobre lacua l se b a sa el funciona miento de los electro-do s se incluye en el a nexo ub ica do a l fina l de lcapítulo.

Fotografía

Elemento

Electrodo de pH y brazo po rtaelectrodo

http://www.umd.umich.edu/casl/natsci/slc/slconline/PHM/select.html


33/208

33

Analizador de pH 3

COMPONENTES

Un analizador de pH dispone generalmentede los siguientes componentes:

1. Un instrumento que contiene los cir-cuitos, los controles, los conectores y laspan ta lla s o esca las de medición. Dent ro delos componentes más importantes del mis-mo , se encuen tra n los sig uientes:

a ) Un interrup to r de encendido /apagado.No t od os los ana liza do res de pH disponen

de un interruptor de encendido y apaga-do. Algunos simplemente disponen de uncable con un enchufe que permite conec-ta rlo a una t oma eléctr ica ad ecuad a.

b ) Cont ro l de temp eratura. Este controlpermite realizar los ajustes relacionadoscon la temperatura de la disolución a lacual se rea liza la me dición d el pH.

c) Con t roles de calibración. Dependiendodel diseño, los ana liza do res de pH puedendisponer de un o o d os boto nes o d iales decalibración. Normalmente se identifican

con la s let ras Cal 1 y Cal 2. Si el ana liza do rde pH se calibra con una sola solución, seutiliza el dial Cal 1 previendo que el dialCal 2 se encuentre graduado al 100 %. Sie l ana liza do r de pH permite e l uso d e ca-l ibra cion es de d os punt os , se d eb erá dis-pon er de d os solucion es de pH con ocidoqu e a ba rqu e n e l r a n g o d e p H qu e s e rámedido. En es te caso se ut i l i zan los doscontroles (Cal 1 y Cal 2). En casos espe-cia les deberán efectuarse cal ibracionesde t res punt os (ut i li zand o t res solucion esde pH con ocido ).

d ) Selecto r de fu ncion es. Las funciones in-cluidas en el control en mención, general-mente, son:

I. Modo Stand by (0). En esta posición loselectrodos se encuentran protegidos de co-rrientes eléctricas. Es la posición utilizada pa-ra ma ntener almacenado el eq uipo.II. Mod o pH. En e sta po sición el eq uipo es-tá en capa cida d d e real iza r la s medicionesde pH, previas a los procedimientos de ca-libración requeridos.III. Mo d o m ilivoltio s mV. En e sta po sició n e l

I l u s t r ac ión 4 : Esquem a de un analizado r de pH

ESQUEM A DE UN ANALIZADOR DE pH


34/208

34

I l u s t r ac ión 6 : Circuit o de cont rol analizador de pH

eq uipo está e n capa cida d d e real iza r lectu-ras de milivoltios.IV. Mod o ATC. Mo do de a juste a ut o má ticode la temperatura cuando se mide el pHen soluciones cuyas temperaturas varían.Esta función requiere el uso d e una sond aespecial. No todos los analizadores de pHdisponen de este cont rol.

2. Un electrodo de combinación. Este dis-posit ivo debe ser almacenado en aguadesti lada y permanecer conectado al ins-trument o de medición o metro. El electro-do de comb ina ción d ispone d e un electro-do de referencia –cono cido ta mbién comoelectro do calomel o calomelanos – y unelectrod o a ctivo, integ rado s sob re un mis-mo cuerpo. El diseño del mismo varía de-pendiendo del fa bricant e .

I l u s t r ac ión 5 : Clases de electr od os

CIRCUITO TÍPICO

A continuación, se incluye un circuito típicode los que conforman el sistema de control

de un analizador de pH. Cada fabricante dis-pon e d e sus propios diseño s y variant es.


35/208

35

Analizador de pH 3


El ana liza do r de pH funciona mediant e corrien-te eléctrica de las siguientes características:

Energ í a t ipo : monofá sicaVo lta je: 110 V o 220 VFrecue ncia : 60 Hz

Ta mb ién existen a na lizad ores de p H de t ipoportát i l que funcionan con baterías.

PROCEDIM IENTO GENERALDE CALIBRACIÓN

Los analizadores de pH normalmente debenser ca libra do s a nt es de ser utilizad os, a fin de

ga rant iza r la calida d y exactitud de las lectu-ras. Los procedimientos que se realizan sonlos siguientes:

1. Calibración de un pun to . Se rea liza en con-diciones de funciona miento y uso norma l.Utiliza una solución de referencia de pHconocido.

2. Calibración de d os pu nt os. Se realiza si serequiere efectuar mediciones muy preci-sa s. Utiliza d os solucion es de ref erencia depH conocido. Igualmente, si el instrumen-to se uti l iza de forma esporádica y si elma nten imiento q ue recibe es eventual .

Tabla 2: Descripción elemento s circuito de cont rol

Al imentación y rect i f icación eléct r ica Transformador 110 V/12 V AC Disposi t ivo para conver t i r e l vol ta je de red110 V a 1 2 V AC

Sección de salida Volt ím et ro DC de bajo costo Perm ite la lectura en m ilivolt ios. El voltaje leí-do es 10 veces el voltaje de la celda, permi-t iendo un a resolución de 0,1 m il ivolt ios.

La lectura se realiza mediante la utilización deelectrodos de carbono/Quinhidrona.

M edición de pH y m ilivolt ios A mplif icador dual de modo no invert i-do TL081

Resistencia (R1) 9,09 K Ω (ohm ) Circuito m il ivolt ios

Resistencia (R2) 1 K Ω (ohm ) Circuito m il ivolt ios

Resistencia (R3) 560 K Ω (ohm ) Circuito pH

Resistencia variabl e (R4) 10 K Ω (o hm ) Ci rcu it o p H

Resistencia (R5) 30 K Ω (ohm ) Resistencia a t ierra

La ganancia del circuito está gobernada me-diante la siguiente ecuación:Ganancia = 1+ (R3+ PxR4)/R5+ (1–P)xR4.

Di od os rect if ica do res 1 N4 00 2 Dio do pa ra co nt ro la r la f orm a d e la o nd a y g a-rantizar que la m isma es posit iva

Condensadores electrolíticos 3 300 mi-crofaradios (µfd) (2)

Condensadores para amort iguar el voltaje DCobtenido por los diodos

Reguladores de tres terminales (7812,7912)

Dispositivo para regular el voltaje resultante de lainteracción entre diod os y condensadores

Condensadores electrolíticos de 0,1 mi-crofaradios (µfd) (2)

Dispositivos usados para log rar estabilidad en al-ta frecuencia

Lám para de señ al 12 V DC Lám para que indica si el equipo está prendido

SISTEM A ELEM ENTO DESCRIPCIÓN


36/208

36

Descripción del procesoFrecuen cia : D iaria

1 . Ca l i b r a r e l ana l i z ado r de pH u t i l i zando

un a so l u ción d e pH conoc i do ( ca l i b r a -

ci ó n de un pun t o ) .

1.1. Conectar e l equipo a una toma eléctr icaad ecuada a l volta je del mismo.

1.2. Ajusta r el selecto r de t emperat ura a latemperatura ambiente .

1.3. Ajusta r el metro.

1.4. Retirar los electrodo s del recipiente d e

almacenamiento. Los electrodos debe-rán es tar s iempre a lmacenados en unasolución adecuada. Algunos se mantie-nen en agua dest i lada , pero otros enuna solución diferente que recomiendael fabricante del electrodo 1. Si por algu-na circunstancia el electrodo se seca, esnecesa rio d eja rlo e n remo jo a l menos 24hora s ant es de volverlo a uti liza r.

1.5. Enjua ga r el electrod o con a g ua de sti la-

da , sob re un vaso de precipita do vacío.

1.6. Secar el electrodo con un elemento q ueabsorba la humedad residual superficial,pero que no impregne el electrodo. Nofrot a r el electrod o. Este procedimiento d e-berá realiza rse siempre q ue los electrodo sse u tilicen en varia s solucion es, pa ra dismi-nuir la posibilida d d e conta minación .

2 . Co l o ca r l o s e l e ct r o do s en l a so l u c ión

de ca l i b r ac ión .

2.1. Sumergir el electrodo en la solución deestandarización, de forma que la parteinferior del mismo no to q ue el fo ndo delvaso de precipitados. Esto disminuirá elriesgo de q ue el electrodo se rompa con-tra el fondo del recipiente. Si el ensayorequiere que la solución se mant eng a en

movimiento mediante el uso de un agi-ta dor ma gnét ico , cuida r que la b arra deagitación no golpee el electrodo, puespodría romperlo. Una solución buf fe r seusa como solución de ca libración , deb idoa q ue su pH es cono cido y a sí se ma nten -drá aun en el caso de que se presenteuna pequeña contaminación. Por lo ge-neral, se utiliza para este propósito unasolución de pH = 72.

3 . G i r a r e l se l e ct o r de f unc i ones de l a po -

si c ión St and by a la po sic ión p H.

3.1. Esta acción conecta, en el analizador de

pH, el electrodo a la escala de medida depH para q ue la lectura pued a ser realizad a.

3.2. Ajusta r el met ro pa ra leer el pH de la so-lución de calibra ción , utilizan do el bo tó nmarcado Cal 1 , de forma que se puedaleer el pH de la solución de calibra ción .

Por ejemplo: pH = 7. La aguja podría osci-la r lige ramen te en unida des de 0,1 pH; enpromedio la lectura debería ser de 7. Mi-

rar el metro –la escala de lectura– de fo r-ma perpendicular, para evitar o eliminarerrores de paralelaje –errores de lecturaproducidos por la sombra de la aguja delmetro, visible en el espejo de la escala delectura –. El a na liza do r de pH se encuent raentonces listo –calibrado–, para efectuarlectura s correcta s del pH.

3.3. Colocar el selecto r de f uncion es en la po -sición St and b y .

4 . Med i r e l pH de una so l u c i ón

4.1. Ret i rar e l e lectrod o d e la solución decal ibración.

4.2. Enjuag ar el electrodo con a gua destila day secarlo con un elemento secante .

1 Verificar el tipo de solución buf fer que recomienda el fabricant e del electrodo .2 Verificar el tipo de de solución de calibración que recomienda el fabricante del electrodo.


37/208

37

Analizador de pH 3

4.3. Colocar el electro do en la solución de pHdesconocido.

4.4. Girar el selector d e f uncion es de la posi-ción Stand by a la posición pH.

4.5. Lee r el pH de la solución b a jo a ná lisis, enla escala d el metro o la pa nta lla d el a na -l izador de pH. Registrar la lectura obte-nida en la ho ja d e cont rol.

4.6. G ira r de n uevo e l selecto r de f uncion es ala posición St and b y .

Si se req uiere medir el pH de má s de una solu-ción, repetir los procedimientos anteriormen-

te descritos. Cuando son numerosas las solu-ciones a las cuales se les mide el pH, se debeca libra r el an aliza do r de pH de forma frecuen-te, siguiendo los lineamientos presentados.

5 . Apaga r e l an a l i zado r d e pH .

5.1. Remover el electrodo de la última solu-ción ana lizad a .

5.2. Enjua ga r el electrod o con a gua destilad ay secarlo con un elemento secante queno lo impregn e.

5.3. Colocar el electrodo en el recipiente dealmacenamiento .

5.4. Verificar que el selector de funciones es-té en la p osición St and b y .

5.5. Acciona r el interrupto r de ap ag a do odesconectar el cable de alimentación, si

carece de este control.

5.6. Limpia r el á rea d e tra ba jo.

M ANTENIM IENTO GENERAL DELANALIZADOR DE pH

Los an aliza do res de pH disponen de do s pro-cedimiento s generales de ma nten imiento : los

dirig idos al cuerpo de l ana liza do r y los dirig i-do s a la sond a det ectora d e pH (electrod os).

Proced im ien t o s gene r a l e s de man ten i -

m ien t o a l cue r po d e l ana l i zado r de pH

Frecuencia: Cada seis meses

1. Exam ina r el exterior del eq uipo y eva luar sucondición física general. Verificar la limpiezade las cubiertas y el ajuste de las mismas.

2. Proba r el ca ble de conexión y su sistema dea coples. Comprob a r que se encuentra n enbuenas condiciones y que están limpios.

3. Examinar los controles del equipo. Verifi-car que se encuentran en buen es tado yq ue se puede n a cciona r sin d ificulta d.

4. Verifica r que el metro se encuentra enbuen estado. Para esta verificación el ins-trument o deb e esta r desconecta do d e la l í-nea de alimentación eléctrica. Ajustar laaguja indicadora a cero (0), uti l izando eltornillo de grad uación q ue g eneralmentese encuentra b a jo el pivote d e la a guja in-dica do ra. Si el equipo d ispone de pan ta llaindica do ra, comproba r su funciona mientonormal.

5. Confi rmar q ue e l indicad or de encendido–bo mbillo o diodo – opere no rmalmente.

6. Verif icar e l esta do de brazo portaelectro-do. Examinar el mecanismo de montaje yfi ja ción del electrodo, a fin de prever q ueel electrodo no se suelte. Comprobar queel ajuste de al turas opere correcta ment e.

7. Revisa r la s ba te ría s –si aplica–; ca mb iar sies necesario.

8. Efectuar una prueba de funciona mientomidiendo el pH de una solución conocida.

9. Inspecciona r la s corrientes de f uga y la co-nexión a t ierra.

MANTENIM IENTO BÁSICO DEL ELECTRODO

Frecuencia: Cada cuatro meses

El e lec t rodo de tec tor requiere manteni -miento periódico de la solución conductora,para que pueda obtener lecturas precisas .


38/208

38

Los procesos recomendados para reponer lasolución electrolítica son los siguientes:

1. Ret ira r el electro do de te ctor de la soluciónbuf fe r de a lmacenamiento .

2. Enjuagar el electrodo detector con abun-dante ag ua dest ilada .

3. Retirar la cubierta superior del electrododetector.

4. Llenar el electrodo detector con una solu-ción saturada de cloruro de potasio (KCl).Uti liza r la jering a o a plica do r que a compa -ña la solución d e KCl. El llenad o se e fectú a

a t ravés del conducto q ue protege la ta pasuperior del electrodo. Verificar que lapunta de la jering a no to q ue el interior delelectrodo.

5. Envolver una peq ueña pa rte de la t ap a su-perior d el electrodo pa ra cubrir la ap ertu-ra superior de l mismo .

6. Usa r la punt a d e la a gu ja d e la jering a pa -ra perforar e l área de la ta pa q ue cubre la

abertura, a fin de permitir que exista unequilibrio de presiones entre el interior yel exterior del electrodo.

7. Enjua ga r el electrod o con ag ua d esti la da .

8. Mantener el electrodo dentro de la solu-ción buf fe r de almacenamiento, siempreq ue no esté en uso.

Limp i e za de l e l e ct r o do

La cla se d e limpieza req uerida por el electro -do d epende del t ipo de conta minant e q ue lohaya podido afectar. Se resumen a continua-ción los procedimiento s más com unes.

9. Limpieza general. Remo ja r el electro do depH en un a solución 0,1 M de á cido clorhí-drico (HCl) o 0,1 M de HNO3, durante 20minuto s. Enjua ga r con a gua corriente an -tes de usar.

10. Remoción d e depósit os y bacter ias. Remo-jar el electrodo de pH en una disolución1:10 de blanquedor doméstico, durante10 minutos. Enjuagar con agua abundan-te a ntes de usar.

11. Limp ieza de aceit e y grasa. Enjuagar elelectrodo d e pH con un de terg ente med ioo con meti l alcohol . Enjuagar con aguaan tes de usa r.

12. Limp ieza de depósit os de p ro t eínas . Re-mojar el electrodo de pH en pepsina a l 1 %en ácido clorhídrico 0,1 M, durante 5 mi-nuto s. Enjuag ar con ag ua a ntes de usa r.

Después de realizar cualquier operación delimpieza, es conveniente enjuagar con aguadesionizada y rel lenar el electrodo de refe-rencia antes de usar.

Ot r o s cu i d ados

13. No g olpear el electrodo. Da do q ue su es-tructura gen eralmente e s de vidrio y estema terial es muy frá gi l –se rompe an tes deque se deforme–, es necesario manipular-lo de f orma cuida dosa , evita ndo q ue sufrago lpes, choq ues o caída s.

14. Recordar q ue el electrod o es un elemento d econsumo y q ue tiene una vida útil limita da .

15.Mientras no esté en uso, mantener elelectrod o d ent ro de la solución buf fe r d ealmacenamiento .


39/208

39

Analizador de pH 3


Buffer . Solución que ma ntiene un va lor consta n-te y conocido d e pH a una temperatura da da .

pH. Medida de la concentración del ión hi-drógeno (H+ ) dada en moles (M) por litro enuna disolución. El concepto de pH fue pro-puesto por Sørensen y Lindstrøm-Lang en1909, con el fin de facilitar el manejo de laexpresión de concentraciones de iones queresulta n muy ba ja s. Se d efine med ia nte la si-guiente ecuación:

pH = –Log [H+ ] ó [H+ ] = 10–pH

Es una medida de la acidez de la disolución.Ejemplo: en e l ag ua la concentra ción de [H+ ] es1,0 x 10–7 M, siendo en con secuencia el pH = 7.Esto permitió expresar el rango de concen-traciones de 1 a 10–14 M, simplemente comode cero (0) a 14. Existen diversos siste ma s pa -ra m edir la a cidez de una solución. Un a sus-tancia es ácida cuando, disuel ta en agua, l amisma es capaz de producir iones H + ; unasusta ncia es bá sica cua ndo , disuelta en a gu a ,es ca pa z d e pro du cir ion es [OH–] (hidróxidos).

Una sustancia ácida t iene una mayor canti-da d d e iones [H+ ] q ue la q ue presenta e l aguapura; una sustancia básica presenta mayorcantida d de iones [OH–] q ue los que presentael ag ua pura. La concentra ción de las susta n-cia s se e xpresa e n m oles (M).

En el ag ua pura se sab e q ue la concentra ciónde iones [H+ ] y [OH–] es de 1,0 x 10–7 M, por loq ue la m isma se considera una susta ncia neu-tra. En realidad es un electrolito débil que sedisocia según la ecuación:

H2O [H+ ] [OH–]

En t od a disolución a cuosa existe un e q uilibrioq ue pued e expresarse como :

Si la disolución es diluida, la concentracióndel agua no disociada puede considerarseconsta nte y por el lo,

[H+ ] [OH–] = [H2O]K = Ka

Tab la d e so lu ción d e p ro b lem as

El analizador de pH presenta lecturasinestables.

Burbu jas de ai re en e l e lect rodo. Remojar e l e lect rodo para e lim inar las burbu jas.

La resp uest a d el elect ro do es len ta. Elect ro do su cio o g raso so. Lim piar el elect ro do y recalib rar.

La pantal la presenta mensaje de error. Operación incorrecta o selección erró-nea del modo d e operación.

Verificar mo do de operación seleccionado. Se-leccionar un a operación vál ida.

Anal izador de pH encendido, pero nohay señal en la pantal la (* ).

Baterías m al instaladas. Verif icar polaridad de las baterías.

Baterías agotadas. Reem plazar baterías.

La pantalla presenta mensaje de cali-bración o error.

Error de cal ibración. Recalibrar analizador de pH.

Indicador de baterías centel lea (* ). Baterías agotadas. Reem plazar baterías.

(* ) Causa probable en equipos que funcionan con baterías.

Valor de buffer erróneo en la calibración. Verif icar los valores del buffer uti l izado.

Elect rodo sucio. Lim piar elect rodo y calibrar.

Elect rodo sucio. Lim piar el elect rodo y recalibrar.

Elect rodo roto. Reem plazar el elect rodo.

Elect rodo muy superf icial. Verif icar que la muest ra cubre perfect am ent ela punt a del electrodo.


[H+ ] [OH–]= K

H2O


40/208

4

La nueva constant e Ka se deno mina consta n-te de d isocia ción o pro ducto iónico d el ag uay su valor es 1,0x10–14, a 25 ° C.

[H+ ] [OH–] = 1,0 x 10-14

X x X = 1,0 x 10-14

X2 = 1,0 x 10-14

X = 1,0 x 10-7

En el agua pura las concentraciones de H+ y OH–

son de 1,0 x 10–7 M, concentración que es muypeq ueña , si se tiene en cuenta q ue la concentra-ción mo lar d el ag ua es de 55,4 mo l/litro .

Disociación. Fenómeno por el cual se pre-senta un romp imiento de la s molécula s como

resultado de la disolución de una sustanciaen otra y que produce part ículas cargadaseléctricamente (iones).

Disolución. Mezcla homogénea –de propie-da de s unifo rmes– de d os o má s susta ncia s. Secara cteriza por n o e xistir int era cción q uímicaentre los componentes de la mezcla. El com-ponente que existe en mayor proporción yque generalmente se encuentra en estado l í-q uido se deno mina disolvente y el que se en-

cuentra en menor cant ida d, soluto .

Electrodo sensitivo a los iones. Dispositivoq ue produce una d iferencia d e pot encial que e sproporciona l a la concentración de un a na lito .

Electrodo calomel. Electrodo de referen-cia q ue se ut i liza , junto con e l e lectrod o a c-t ivo , en la d ete rmina ción d el pH de un a so-lución. Dicho e lectrodo es tá construido conbase en mercurio (Hg), una capa de dimer-curio (Hg 2Cl2) y una disolución de cloruro de

po ta sio (KCl) de con centra ción 0,1 M. Se re-presenta así : Cl2[Hg 2Cl2, KCl]Hg.

Electrolito. Soluto s q ue prod ucen solucion esconductoras tales como el NaCl –cloruro desodio– y el NH4OH.

Gel. Tipo d e me zcla en la cua l un líq uido seencuentra disperso a través de un sólido.Ejemplos: jaleas, gelatinas.

Ión. Cuando un á to mo neut ro g ana o p ie rdeun electrón, forma una partícula a la que seconoce con el nombre de ión . Si el átomopierde un electrón, se convierte en un ión decarga posit iva y se le denomina catión . Si el

á tomo gana o captura un e lectrón, se con-vierte en un ión d e carga neg a tiva y se le de-nomina anión .

Mol. Cantidad de cualquier sustancia cuyamasa, expresada en gramos, es numéricamen-te igua l a la ma sa at ómica de d icha susta ncia.

Molaridad. Como el número de moles (M)de una sustan cia en u n litro de solución . (Nú-mero d e mo les de soluto en un litro (l) de so-

lución). El paréntesis cuadrado alrededor delsímbolo del ión indica que se trata de unaconcentración molar.

Solución. Mezcla físicamente homogéneade d os o má s susta ncia s, cuya s pa rtes son muypequeñas para diferenciarlas a simple vista oa un con el microscopio. La compo sición y d e-más propiedades de la solución son igualesen t od as sus partes.


41/208

41

Analizador de pH 3

Bib l i o g r af ía

Aston, R., Principles of Biom edical Instrument ation and M easurement , Merrill Publishing

Compa ny, 1990.

Basic Ph Meter PH-20, Operat ion Manual , Sartorius, Publication Nº WPB6001-e00062.(www.sartorius.com)

Castellanos, J., M edidor de pH en sangre , Fon do Na cion a l Hospita lario, División d e Inge nie-r

MANTEQLABORATORIO.pdf

Documents

Transcript of MANTEQLABORATORIO.pdf